Name: microinjection of dna into eyebuds in xenopus laevis embryos and imaging of gfp expressing optic axonal arbors in intact, living xenopus tadpoles
Uploaded: 2019-09-04T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microinjection of DNA into Eyebuds in Xenopus laevis Embryos and Imaging of GFP Expressing Optic Axonal Arbors in Intact, Living Xenopus Tadpoles at JoVE.com

Nous remercions le Touro University California College of Osteopathic Medicine d'avoir soutenu notre recherche. Nous rendons hommage aux anciens étudiants du laboratoire (Esther Wu, Gregory Peng, Taegun Jin, John Lim) qui ont participé à la mise en œuvre de cette technique de microinjection dans notre laboratoire. Nous sommes reconnaissants à la Dre Christine Holt, dont le laboratoire a développé cette technique de microinjection/lipofection de l'ADN chez les embryons Xenopus.

Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d'utilisation des animaux (IACUC) de l'Université De Touro en Californie (Protocole - TUCA003TE01X).
1. Obtenir X. laevis Embryons
<ol><li>Obtenir des embryons x. laevis par accouplement naturel de paires de grenouilles adultes mâles et femelles apprêtées à la gonadotropine chorionique humaine (HCG), par fécondation in vitro d'ovules prélevés sur des grenouilles adulte...

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	<li>Gibson, D. A., Ma, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+axon+branching+in+the+vertebrate+nervous+system.">Developmental regulation of axon branching in the vertebrate nervous system.</a> Development. 138 (2), 183-195 (2011).</li><li>Alsina, B., Vu, T., Cohen-Cory, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+synapse+formation+in+arborizing+optic+axons+in+vivo:+dynamics+and+modulation+by+BDNF.">Visualizing synapse formation in arborizing optic axons in vivo: dynamics and modulation by BDNF.</a> Nature Neuroscience. 4 (11), 1093-1101 (2001).</li><li>Harris, W. A., Holt, C. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+from+in+vivo+imaging+that+synaptogenesis+guides+the+growth+and+branching+of+axonal+arbors+by+two+distinct+mechanisms.">Evidence from in vivo imaging that synaptogenesis guides the growth and branching of axonal arbors by two distinct mechanisms.</a> Journal of Neuroscience. 26 (13), 3604-3614 (2006).</li><li>Li, X., Monckton, E. A., Godbout, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopic+expression+of+transcription+factor+AP-2&#948;+in+developing+retina:+effect+on+PSA-NCAM+and+axon+routing.">Ectopic expression of transcription factor AP-2&#948; in developing retina: effect on PSA-NCAM and axon routing.</a> Journal of Neurochemistry. 129 (1), 72-84 (2014).</li><li>Haas, K., Jensen, K., Sin, W. C., Foa, L., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+electroporation+in+Xenopus+tadpoles+in+vivo-from+single+cells+to+the+entire+brain.">Targeted electroporation in Xenopus tadpoles in vivo-from single cells to the entire brain.</a> Differentiation. 70 (4-5), 148-154 (2002).</li><li>Falk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+of+cDNA/Morpholinos+to+targeted+areas+of+embryonic+CNS+in+Xenopus.">Electroporation of cDNA/Morpholinos to targeted areas of embryonic CNS in Xenopus.</a> BMC Developmental Biology. 7, 107 (2007).</li><li>Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. 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E., Piper, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NF-Protocadherin+Regulates+Retinal+Ganglion+Cell+Axon+Behaviour+in+the+Developing+Visual+System.">NF-Protocadherin Regulates Retinal Ganglion Cell Axon Behaviour in the Developing Visual System.</a> PLOS One. 10 (10), e0141290 (2015).</li><li>Lee, P. C., He, H. Y., Lin, C. Y., Ching, Y. T., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computer+aided+alignment+and+quantitative+4D+structural+plasticity+analysis+of+neurons.">Computer aided alignment and quantitative 4D structural plasticity analysis of neurons.</a> Neuroinformatics. 11 (2), 249-257 (2013).</li></ol>

Dans cet article, nous démontrons comment exprimer les constructions exogènes d'ADN dans un nombre simple ou petit de neurones optiques et comment imager les GFP individuels exprimant les arborescences axonales optiques avec la signalisation moléculaire normale et modifiée dans intact, têtards vivants de la grenouille X . laevis. Nous expliquons également comment reconstruire et quantifier la morphologie de GFP exprimant des arborescences axonales optiques à partir d'images capturées in vivo. Pour exprim...

Pendant le développement du système nerveux, les axones des neurones presynaptiques naviguent à travers diverses régions du cerveau pour atteindre leurs zones cibles. Lorsque les axones envahissent leurs tissus cibles, ils établissent des connexions synaptiques avec les neurones cibles postsynaptiques. Dans de nombreux types de neurones, les axones augmentent le nombre et l'étendue spatiale des connexions synaptiques qu'ils peuvent faire en élaborant des réseaux de branches terminales ou d'arborescences1. La projection rétino-tectale des têtards de la grenouille aquatique Xenopus laevis est un puissant modèle vertébré pour l'examen des mécanismes sous-jacents à l'arboriculture terminale axon et à la connectivité synaptique2,3,4 . GFP individuel exprimant des arborescences axonales optiques avec la signalisation moléculaire normale et altérée peut être observé directement dans intact, vivant tadpoles de Xenopus 5,6,7,8. Pour exprimer GFP seul ou avec des versions pleine longueur ou tronquées de gènes dans un petit nombre de neurones optiques, nous utilisons une technique impliquant la microinjection / lipofection de l'ADN dans les bourgeons oculaires d'un jour vieux embryons Xenopus 9, 10. Cette technique a été développée à l'origine pour étudier des mécanismes de releveur optique d'axone dans de jeunes têtards de Xenopus, et a depuis été appliquée par nous et d'autres pour déterminer les mécanismes moléculaires cellulaires-autonomes sous-jacents à l'axon optique arborisation dans les têtards Xenopus 5,6,7,8,9,10.
D'autres techniques d'expression des gènes exogènes dans un petit nombre de neurones optiques ont été développées chez d'autres espèces modèles, ainsi que chez X. laevis. Cependant, chacune de ces approches présente des défis et des limitations par rapport à la microinjection de réagent d'ADN/lipofection dans les oculaires des embryons de Xenopus. Chez la souris, la transgenèse peut être utilisée pour exprimer des gènes dans un petit nombre de neurones optiques, mais la génération de souris transgéniques est coûteuse et longue et les souris transgéniques présentent souvent des effets secondaires indésirables11. Le poisson zèbre transgénique qui exprime des gènes exogènes dans les neurones optiques peut également être créé en injectant des plasmides dans les embryons de stade de clivage précoce12. Cependant, ce processus exige le clonage d'un promoteur spécifique pour exprimer des gènes dans un modèle de mosaïque dans les neurones optiques dans les larves de poissons zèbres12. La fréquence d'expression de l'ADN exogène dans les neurones optiques chez le poisson zèbre transgénique est également un peu plus faible (lt;30%) par rapport aux têtards Xenopus qui ont été microinjectés avec de l'ADN/réactif liposomal (30 à 60 %)12. Dans ovo électroporation a également été utilisé pour exprimer les gènes dans un petit nombre de neurones optiques chez les poussins13. Cependant, cette procédure n'a pas réussi à caractériser complètement les mécanismes qui établissent des projections optiques parce que l'arboriculture d'axone optique ne peut pas être imagedans intact, embryons de poussins vivants. Enfin, plusieurs laboratoires ont utilisé l'électroporation pour transfect gènes dans un petit nombre de neurones optiques dans les têtards Xenopus 14,15. Pourtant, l'électroporation nécessite l'optimisation de l'équipement et des protocoles (stimulateur, électrodes, schémas spatiaux et temporels des impulsions d'ondes) au-delà de celui utilisé pour la microinjection d'ADN/réagent de lipofection dans les oculaires des embryons xenopus.
Nous et d'autres précédemment utilisé la technique de microinjection / lipofection de l'ADN dans les bourgeons oculaires des embryons Xenopus pour déterminer les mécanismes de signalisation autonome scellule qui établissent l'arboriculture d'axone optique5,6, 7 Annonces , 8. Nous avons d'abord utilisé cette approche pour disséquer les fonctions de la protéine d'adaptateur Cadherin et Wnt- caténine dans l'arboriculture axonale optique dans les têtards Xenopus 5,6. Dans une étude, nous avons montré que la liaison de la caténine à la caténine et à la PDZ est nécessaire, respectivement, pour lancer et façonner des arbres axonaux optiques in vivo5. Dans un deuxième rapport, nous avons démontré que les domaines de liaison de la caténine pour la caténine et gsk-3 modulent en contrepartie les modèles de projection des arborescences axonales optiques ventrales6. Plus récemment, nous avons identifié des rôles pour le facteur Wnt, adénomatous poliposis coli (APC), dans la régulation des caractéristiques morphologiques des arborescences axonales optiques dans les têtards Xenopus 7. En co-exprimant les domaines N-terminal et central d'APC qui modulent la stabilité et l'organisation de la caténine et de la microtubule avec GFP dans les neurones optiques individuels, nous avons déterminé des rôles partagés et distincts pour ces domaines d'interaction APC sur le nombre de succursales, longueur, et l'angle dans les arborescences axonales optiques in vivo7. Un autre laboratoire a utilisé la technique de microinjection/lipofection pour déterminer les rôles autonomes cellulaires pour la signalisation par le récepteur BDNF, TrkB, dans les arborescences axonales optiques dans les têtards Xenopus 8. Ce groupe a montré que l'expression d'une branchement et de maturation synaptique perturbée par trkB dominant-négatif dans les arborescences individuelles d'axone optique in vivo8. Dans l'ensemble, la technique de lipofection dans Xenopus a déjà illuminé les rôles spécifiques de différents gènes dans la ramification d'axone optique dans l'environnement indigène.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3.5&#34; Micropipettes</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>3-000-203 - G/X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#956;-manager software (Version )</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>www.micro-manager.org</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CCD camera</td>
			<td>Scion Corporation</td>
			<td>CFW-1312 M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chorulon (Human Chorionic Gonadotropin)</td>
			<td>AtoZ Vet Supply</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cysteine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>168149-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DOTAP</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11202375001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Forceps #5</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11250-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse E800 epifluoresence microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td>Objectives: Nikon Plan Apo 20X/0.75, Nikon Plan Fluor 40/0.75</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GNU Image Manipulation Program (Version 2.10.10)</td>
			<td>GIMP</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illustrator (2017 Creative Cloud)</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J (Version 1.46r)</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfil</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>MF 34G-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator with universal adaptor and support base</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>3-000-024-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3-000-025-SB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3-000-024-A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette Puller</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>P-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Miniprep Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>27104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Motorized z-stage</td>
			<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
			<td>MFC-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanoject II injector</td>
			<td>Drummond Scientific</td>
			<td>3-000-204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powerpoint (Version 15.31)</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xenopus laevis embryos</td>
			<td>Nasco</td>
			<td>LM00490</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microinjection of dna into eyebuds in xenopus laevis embryos and imaging of gfp expressing optic axonal arbors in intact, living xenopus tadpoles

La projection visuelle primaire des têtards de la grenouille aquatique Xenopus laevis sert d'excellent système modèle pour étudier les mécanismes qui régulent le développement de la connectivité neuronale. Pendant l'établissement de la projection rétino-tectal, les axones optiques s'étendent de l'oeil et naviguent par des régions distinctes du cerveau pour atteindre leur tissu cible, le tectum optique. Une fois que les axones optiques entrent dans le tectum, ils élaborent des arborescences terminales qui fonctionnent pour augmenter le nombre de connexions synaptiques qu'ils peuvent faire avec les interneurons cibles dans le tectum. Ici, nous décrivons une méthode pour exprimer l'ADN codant la protéine fluorescente verte (GFP), et le gain- et la perte-de-fonction des constructions de gène, dans les neurones optiques (cellules de ganglion rétinien) dans les embryons de Xenopus. Nous expliquons comment microinjecter un réagent combiné d'ADN/lipofection dans des bourgeons oculaires des embryons d'un jour de sorte que les gènes exogènes soient exprimés dans un nombre simple ou petit de neurones optiques. En étiquetant les gènes avec GFP ou en co-injectant avec un plasmique GFP, les arborescences axonales terminales des neurones optiques individuels avec la signalisation moléculaire altérée peuvent être représentés directement dans les cerveaux des têtards Xenopus intacts et vivants plusieurs jours plus tard, et leur morphologie peut être quantifiée. Ce protocole permet de déterminer les mécanismes moléculaires autonomes des cellules qui sous-tendent le développement de l'arborescence optique des axones in vivo.

Le protocole décrit dans cet article donne un taux de réussite de 30 à 60% des embryons Xenopus injectés exprimant gFP (seul ou avec une construction supplémentaire d'ADN) dans une à dix arborescences axonales optiques. Dans la figure 3, nous montrons des images confocales représentatives de GFP exprimant le contrôle et les arborescences axonales optiques mutantes dans les têtards Xenopus intacts de notre étude récemment éditée7. Pour ce...

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Microinjection of DNA into Eyebuds in Xenopus laevis Embryos and Imaging of GFP Expressing Optic Axonal Arbors in Intact, Living Xenopus Tadpoles (Video) | JoVE

Ce protocole vise à démontrer comment microinjecter un mélange ADN/DOTAP dans les œilcs d'embryons de Xenopus laevis d'un jour, et comment imager et reconstruire la protéine fluorescente verte individuelle (GFP) exprimant des arborescences axonales optiques dans les midbrains tectal de intacts, les têtards Xenopus vivants.

Microinjection d'ADN dans eyebuds in Xenopus laevis Embryos and Imaging of GFP Expressing Optic Axonal Arbors in Intact, Living Xenopus Tadpoles

The primary visual projection of tadpoles of the aquatic frog Xenopus laevis serves as an excellent model system for studying mechanisms that regulate the ...

Dans cette vidéo, nous démontrons comment exprimer les constructions d’ADN exogène dans les neurones optiques et comment imager les tonnelles axonales optiques individuelles exprimant GFP dans des têtards Xenopus laevis intacts et vivants. Il s’agit d’une procédure simple et peu coûteuse pour la transgenèse spécifique aux cellules transitoires qui permet de déterminer la fonction du gène autonome cellulaire dans les tonnelles axonales optiques individuelles, se développant dans un système vivant de modèle vertébré. Sophia Dao, adjointe à la recherche, et Tamira Elul, chercheuse principale du laboratoire, démontreront la procédure.Pour commencer, coupez doucement la pointe d’une pipette micro capillaire en verre tiré avec des forceps fins. Remplissez la pipette en verre micro capillaire avec de l’huile minérale à l’aide d’un MICROFIL de sorte qu’une petite goutte d’huile minérale apparaît à l’extrémité coupée de la micro pipette. Remplir la pipette micro capillaire en verre à mi-chemin avec de l’huile minérale.Dans un injecteur, éjecter le piston à mi-chemin et charger la pipette micro capillaire en verre tiré dans le support d’injection. Puis étendre le piston dans toute la mesure pour confirmer que la pipette micro capillaire est fortement attaché à l’injecteur et ne se déplace pas avec l’extension du piston. Transférer une goutte de trois microlitres du mélange ADN/DOTAP sur une feuille carrée d’un pouce de papier paraffine.Sous un microscope à disséquer stéréo, déplacez la pointe de la pipette micro capillaire en verre dans la goutte d’ADN/DOTAP. Utilisez l’option de remplissage sur l’appareil d’injection, sucer lentement l’ADN / DOTAP tomber dans la pipette en verre micro capillaire. La frontière entre l’huile minérale et la solution ADN/DOTAP est visible dans la pipette micro capillaire en verre en raison de la légère opacité de la solution ADN/DOTAP.Si nécessaire, arrêtez de remplir périodiquement la pipette micro capillaire pour permettre à la pression dans la pipette micro capillaire en verre de recalibrer. Tout d’abord, dans une boîte petri de 10 millilitres remplie de 0,1 X MMR, dé-vitellinize manuellement 10 stade 20 à 24 embryons Xenopus avec des forceps fins. Saisissez l’enveloppe vitelline à la taille pour éviter de blesser les embryons.Avec des forceps dans la main gauche et droite de l’expérimentateur, pop la bulle de l’enveloppe vitelline et libérer l’embryon de l’enveloppe vitelline. Prenez soin de ne pas blesser les embryons lors de l’enlèvement de l’enveloppe vitelline. Ensuite, utilisez une pipette de transfert en plastique avec une pointe coupée pour transférer cinq à 10 embryons de stade dé-vitellinized 22 à 24 à une boîte de Petri de 10 millilitres remplie de 1X MMR.Sous un microscope stéréo, saisir l’un des embryons dé-vitellinized dans la boîte de Petri avec des forceps et organiser l’embryon de sorte que son pôle antérieur est pointé vers le haut dans le champ de vision. Orientez ensuite l’embryon de façon à ce qu’il soit couché latéralement et qu’un de ses bourgeons oculaires de gauche à droite soit orienté vers le haut. Tenez l’embryon avec les forceps dans la main non dominante de l’expérimentateur et avec la main dominante de l’expérimentateur, introduisez la pointe de la micro pipette en verre du côté ventral ou dorsal juste sous l’épiderme dans le bourgeon d’oeil.Injectez entre 70 et 210 nanolitres de la solution ADN/DOTAP. Ensuite, retournez l’embryon et effectuez la même micro-injection dans l’autre bourgeon oculaire du côté contralatéral de l’embryon. Injecter les deux bourgeons oculaires de six à 10 embryons dans chaque expérience.Après micro-injection, conserver les embryons dans une boîte de Pétri avec 1X MMR pendant environ 30 minutes pour faciliter la cicatrisation des plaies. Après 30 minutes, transférer les embryons injectés avec une pipette de transfert en plastique dans une solution 0.1X MMR avec 0.001%agent de blanchiment phenylthiocarbamide pour réduire la pigmentation. Couvrir la boîte de Pétri d’un couvercle pour la culture des embryons pendant environ cinq jours jusqu’à ce que les embryons se soient développés en têtards aux stades 46 à 47.Ce protocole donne un taux de réussite de 30 à 60% des embryons Xenopus injectés exprimant GFP dans une à 10 tonnelles axonales optiques. Des images confoccales représentatives de GFP montrent le contrôle d’expression et les tonnelles axonales optiques mutantes dans les têtards Xenopus intacts. Deux mutants de domaine d’APC, D’APCNTERM, et d’APBbeta-chat ont été clonés dans les plasmides de pCS2.Des images de la série Z du contrôle de GFP et des tonnelles axonales optiques mutantes d’APC ont été reconstruites. Des parcelles de nombre de branches, la longueur totale de la branche arboricole et la longueur moyenne des branches confirment les différences observées entre le contrôle et le mutant APC exprimant des tonnelles axonales. Des diagrammes de dispersion supplémentaires du nombre de branches par rapport à la longueur moyenne des branches avec des lignes de régression montrent une corrélation inverse entre ces paramètres et les tonnelles axonales optiques exprimant les domaines APC.La pointe de la pipette micro capillaire doit être correctement insérée très superficiellement dans le bourgeon oculaire de sorte que l’épiderme gris qui gonfle le bourgeon oculaire gonfle au cours de chaque micro injection. Cette procédure peut être utilisée à la fois pour étiqueter et modifier la fonction génétique spécifique dans les neurones optiques tout en évaluant la croissance, le ciblage et la ramification des axones de ces neurones optiques. Cette technique de micro-injection et de lipofection de l’ADN a permis aux chercheurs en neurobiologie développementale d’étudier les mécanismes moléculaires autonomes cellulaires qui régulent l’arboration de l’axon optique dans les têtards Xenopus laevis intacts et vivants.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Microinjection of DNA into Eyebuds in Xenopus laevis Embryos and Imaging of GFP Expressing Optic Axonal Arbors in Intact, Living Xenopus Tadpoles

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development (Video) | JoVE

Manipulation et<em&gt; In Vitro</em&gt; Maturation du<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; ovocytes, Suivi par injection intracytoplasmique de spermatozoïdes, pour étudier le développement embryonnaire

Amphibian eggs have been widely used to study embryonic development. Early embryonic development is driven by maternally stored factors accumulated during ...

Recherche

Biologie du développement

Genome-wide Snapshot of Chromatin Regulators and States in Xenopus Embryos by ChIP-Seq

Genome-wide Snapshot of Chromatin Regulators and States in Xenopus Embryos by ChIP-Seq (Video) | JoVE

Snapshot échelle du génome des régulateurs de la chromatine et les États dans<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryons par Chip-Seq

The recruitment of chromatin regulators and the assignment of chromatin states to specific genomic loci are pivotal to cell fate decisions and tissue and ...

Using Confocal Analysis of Xenopus laevis to Investigate Modulators of Wnt and Shh Morphogen Gradients

Using Confocal Analysis of Xenopus laevis to Investigate Modulators of Wnt and Shh Morphogen Gradients (Video) | JoVE

Utilisation de l&#39;analyse confocale<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Chargé d&#39;enquêter sur les modulateurs de Wnt et Shh morphogène Dégradés

This protocol describes a method to visualise ligands distributed across a field of cells. The ease of expressing exogenous proteins, together with the ...

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney

Technique to Target Microinjection to the Developing Xenopus Kidney (Video) | JoVE

Technique à la cible microinjection du Developing<em&gt; Xenopus</em&gt; Kidney

The embryonic kidney of Xenopus&#160;laevis (frog), the pronephros, consists of a single nephron, and can be used as a model for kidney disease. Xenopus ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis (Video) | JoVE

Visualisation et analyse quantitative de l&#39;angiogenèse embryonnaire dans<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos (Video) | JoVE

Induction de l&#39;hypoxie dans les écrevisses vivantes de grenouille et de poisson zèbre

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish (Video) | JoVE

Photoconversion cellule unique chez le poisson zèbre Intact de la vie

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Fluorescent Calcium Imaging and Subsequent In Situ Hybridization for Neuronal Precursor Characterization in Xenopus laevis

Fluorescent Calcium Imaging and Subsequent In Situ Hybridization for Neuronal Precursor Characterization in Xenopus laevis (Video) | JoVE

Imagerie de calcium fluorescent et hybridation in situ subséquente pour la caractérisation neuronale de précurseur dans Les laevis de Xenopus

Spontaneous intracellular calcium activity can be observed in a variety of cell types and is proposed to play critical roles in a variety of physiological ...

Analysis of Transforming Growth Factor &#223; Family Cleavage Products Secreted Into the Blastocoele of Xenopus laevis Embryos

Analysis of Transforming Growth Factor ÃƒÅ¸ Family Cleavage Products Secreted Into the Blastocoele of Xenopus laevis Embryos (Video) | JoVE

Analyse du facteur de croissance transformant ß Produits de clivage de la famille sécrétés en blastocoèles d’embryons xenopus laevis

The two arms of the Transforming Growth Factor &#223; (Tgf&#223;) superfamily, represented by Tgf&#223;/Nodal or Bone morphogenetic protein (Bmp) ligands, ...

Generating Retinal Degeneration to Investigate Cellular Repair Strategies in Xenopus

Generating Retinal Injury Models in Xenopus Tadpoles

Exploring Retinal Regeneration Mechanisms in the Xenopus Frog (Video) | JoVE

Génération de modèles de lésions rétiniennes chez les têtards Xénope

Retinal neurodegenerative diseases are the leading causes of blindness. Among numerous therapeutic strategies being explored, stimulating self-repair ...