Name: nucleofection and in vivo propagation of chicken eimeria parasites
Uploaded: 2020-02-14T12:00:00
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この研究は、中国国家主要研究開発計画(2017YFD0501200)と中国自然科学財団(31572507、31772728、31873007)によって支援されました。

すべての動物実験のための鶏は、中国農業大学の施設動物ケアと使用委員会のガイドラインに従って収容され、維持され、動物を含む生物医学研究のための国際指導原則に従った。実験は実験動物の北京管理委員会によって承認された。
1.エイメリア属のスポロゾイン物の抽出と精製(例えば、E.テネラ)
<ol><li>スポロシストの放出<ol>
<li>遠心分離機 1 x 10...

<ol>
	<li>Suo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+and+economic+benefits+of+Supercox,+a+live+anticoccidial+vaccine+in+a+commercial+trial+in+broiler+chickens+in+China.">The efficacy and economic benefits of Supercox, a live anticoccidial vaccine in a commercial trial in broiler chickens in China.</a> Veterinary Parasitology. 142 (1-2), 63-70 (2006).</li><li>Kim, K., Soldati, D., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+replacement+in+Toxoplasma+gondii+with+chloramphenicol+acetyltransferase+as+selectable+marker.">Gene replacement in Toxoplasma gondii with chloramphenicol acetyltransferase as selectable marker.</a> Science. 262 (5135), 911-914 (1993).</li><li>Sibley, L. D., Messina, M., Niesman, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+DNA+transformation+in+the+obligate+intracellular+parasite+Toxoplasma+gondii+by+complementation+of+tryptophan+auxotrophy.">Stable DNA transformation in the obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii by complementation of tryptophan auxotrophy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (12), 5508-5512 (1994).</li><li>Donald, R. G., Roos, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+molecular+transformation+of+Toxoplasma+gondii:+a+selectable+dihydrofolate+reductase-thymidylate+synthase+marker+based+on+drug-resistance+mutations+in+malaria.">Stable molecular transformation of Toxoplasma gondii: a selectable dihydrofolate reductase-thymidylate synthase marker based on drug-resistance mutations in malaria.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (24), 11703-11707 (1993).</li><li>Soldati, D., Boothroyd, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+transfection+and+expression+in+the+obligate+intracellular+parasite+Toxoplasma+gondii.">Transient transfection and expression in the obligate intracellular parasite Toxoplasma gondii.</a> Science. 260 (5106), 349-352 (1993).</li><li>Goonewardene, R., Daily, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfection+of+the+malaria+parasite+and+expression+of+firefly+luciferase.">Transfection of the malaria parasite and expression of firefly luciferase.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 90 (11), 5234-5236 (1993).</li><li>Kelleher, M., Tomley, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+expression+of+beta-galactosidase+in+differentiating+sporozoites+of+Eimeria+tenella.">Transient expression of beta-galactosidase in differentiating sporozoites of Eimeria tenella.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. 97 (1-2), 21-31 (1998).</li><li>Clark, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+toolbox+facilitating+stable+transfection+of+Eimeria+species.">A toolbox facilitating stable transfection of Eimeria species.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. 162 (1), 77-86 (2008).</li><li>Yan, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+transfection+of+Eimeria+tenella:+Constitutive+expression+of+the+YFP-YFP+molecule+throughout+the+life+cycle.">Stable transfection of Eimeria tenella: Constitutive expression of the YFP-YFP molecule throughout the life cycle.</a> International Journal for Parasitology. 39 (1), 109-117 (2009).</li><li>Qin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfection+of+Eimeria+mitis+with+Yellow+Fluorescent+Protein+as+Reporter+and+the+Endogenous+Development+of+the+Transgenic+Parasite.">Transfection of Eimeria mitis with Yellow Fluorescent Protein as Reporter and the Endogenous Development of the Transgenic Parasite.</a> PloS One. 9 (12), e114188 (2014).</li><li>Duan, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+transfection+of+Eimeria+necatrix+through+nucleofection+of+second+generation+merozoites.">Stable transfection of Eimeria necatrix through nucleofection of second generation merozoites.</a> Molecular and Biochemical Parasitology. , 1-5 (2019).</li><li>Li, Z. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Eimeria+mitis+expressing+chicken+interleukin+2+stimulated+higher+cellular+immune+response+in+chickens+compared+with+the+wild-type+parasites.">Transgenic Eimeria mitis expressing chicken interleukin 2 stimulated higher cellular immune response in chickens compared with the wild-type parasites.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 533 (2015).</li><li>Clark, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eimeria+species+parasites+as+novel+vaccine+delivery+vectors:+anti-Campylobacter+jejuni+protective+immunity+induced+by+Eimeria+tenella-delivered+CjaA.">Eimeria species parasites as novel vaccine delivery vectors: anti-Campylobacter jejuni protective immunity induced by Eimeria tenella-delivered CjaA.</a> Vaccine. 30 (16), 2683-2688 (2012).</li><li>Eckert, J., Braun, R., Shirley, M. W., Coudert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eimeria+species+and+strains+of+chickens.">Eimeria species and strains of chickens.</a> Biotechnology: Guidelines on techniques in coccidiosis research. Part. I: Eimeria and Isospora, 1-24 (1995).</li><li>Kurth, M., Entzeroth, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reporter+gene+expression+in+cell+culture+stages+and+oocysts+of+Eimeria+nieschulzi+(Coccidia,+Apicomplexa).">Reporter gene expression in cell culture stages and oocysts of Eimeria nieschulzi (Coccidia, Apicomplexa).</a> Parasitology Research. 104 (2), 303-310 (2009).</li><li>Tao, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Eimeria+magna+Perard,+1925+Displays+Similar+Parasitological+Properties+to+the+Wild-type+Strain+and+Induces+an+Exogenous+Protein-Specific+Immune+Response+in+Rabbits+(Oryctolagus+cuniculus+L.).">Transgenic Eimeria magna Perard, 1925 Displays Similar Parasitological Properties to the Wild-type Strain and Induces an Exogenous Protein-Specific Immune Response in Rabbits (Oryctolagus cuniculus L.).</a> Frontiers in Immunology. 8, 2 (2017).</li><li>Shi, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+Transfection+of+Eimeria+intestinalis+and+Investigation+of+Its+Life+Cycle,+Reproduction+and+Immunogenicity.">Stable Transfection of Eimeria intestinalis and Investigation of Its Life Cycle, Reproduction and Immunogenicity.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 807 (2016).</li><li>Wang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+telomerase-interacting+OTU+protein+of+Eimeria+tenella+and+its+telomerase-regulating+activity.">A novel telomerase-interacting OTU protein of Eimeria tenella and its telomerase-regulating activity.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 49 (8), 744-745 (2017).</li><li>Li, J. N., Zou, J., Yin, G. W., Liu, X. Y., Suo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmid+DNA+could+be+delivered+into+Eimeria+maxima+unsporulated+oocyst+with+gene+gun+system.">Plasmid DNA could be delivered into Eimeria maxima unsporulated oocyst with gene gun system.</a> Acta Polytechnica Hungarica. 60 (4), 431-440 (2012).</li></ol>

1990年代には、アピコンプレックス寄生虫に対するトランスフェクションシステムが開発され、それが、それが、アイメリアン寄生虫の研究のために使用されました。最近、E.テネラ8、9およびE.ニエシュルジ15で安定したトランスフェクションが行われた。第二世代メロゾアイト11をトランスフェクシ...

エイメリア属は尾骨症を引き起こし、家畜や家禽産業で大きな経済的損失を引き起こします。抗コクシディアル薬、およびある程度、減価された抗コクシディアルワクチンは、尾骨症の制御のために広く使用されているが、それらの薬剤耐性、薬物残基、および毒性を取り戻すワクチン株の潜在的な拡散に関する欠点は依然として1である。分子生物学の発展に伴い、遺伝子機能の研究、新しいワクチンの開発、エイメリアの新薬標的のスクリーニングに重要なツールとなっています。
過去数十年で、トランスフェクションは、マラリア原虫やトキソプラズマ・ゴンディ2、3、4、5、6などのアピコンプレックス寄生虫に対して正常に適用されてきました。E.テネラでのトランスフェクションのレポーターとしてβ-galを用いた研究は、エイメリア7でそのような仕事を操縦した。E. テネラ8,9, E. ミツ10,及びE.アセルヴリナ(張ら,未発表データ)のトランスフェクションは、ニワトリで成功した。最近、核不同を介してE.ゼネクトリクスのメロゾアテスを用いてトランスフェクションを達成した。
研究は、異種抗原を発現するエイメリアが、カンピロバクター・ケジュニ抗原A(CjaA)またはチキンインターロイキン2(chIL-2)12、13を発現するもののような組換えワクチンとして開発される可能性を有することを示した。したがって、このプロトコルは、ニワトリにおけるエイメリア属菌の核外突起研究を記述する。この手順は、スポロゾアイトまたはメロゾアイトの精製、プラスミドDNAによる核オフェクション、クロアカル接種/静脈注射および生体内伝播を記述し、研究者がトランスジェニック・エイメリア寄生虫の研究を開始するのを助ける。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ATP-disodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A26209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellulose DE-52</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>C8350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Flow Pump</td>
			<td>SHANGHAI JINGKE INDUSTRIAL CO., LTD.</td>
			<td>HL-2B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>MACGENE</td>
			<td>CM15019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass beads</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z250473-1PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>No. V900116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Biotopped</td>
			<td>G6200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>MACGENE</td>
			<td>CC016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>No. V900041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low Speed Centrifuge</td>
			<td>BEIJING ERA BEILI CENTRIFUGE CO., LTD.</td>
			<td>DT5-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Mixer</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>MS-H280-Pro</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>449164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MoFlo cell sorter</td>
			<td>BeckMan Coulter, US</td>
			<td>201309995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>144-55-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleofection device</td>
			<td>LONZA/amaxa</td>
			<td>90900012 (Nucleofector II)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll (DG gradient stock solution)</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium taurodeoxycholate hydrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T0875</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend Micro 17 Microcentrifuge</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>75002430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The composition of DMEM: 4.5 g/L glucose with sodium pyruvate, L-glutamine, and 25 mM HEPES.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>T8150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Mixer</td>
			<td>Beijing North TZ-Biotech Develop.co.</td>
			<td>HQ-60-II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Bath Thermostat</td>
			<td>Grant Instruments (Cambridge), Ltd.</td>
			<td>GD120,GM0815010</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nucleofection and in vivo propagation of chicken eimeria parasites

トランスフェクションは、DNAや二本鎖RNAなどの遺伝物質を細胞に送達して目的の遺伝子を改変する技術プロセスです。現在、トランスジェニック技術は、家禽および家畜における尾骨症の原因物質であるエイメリアの研究に不可欠なツールになりつつあります。このプロトコルは、アイメリアン寄生虫における安定したトランスフェクションの詳細な説明を提供します:スポロゾーサイトまたは第二世代メロゾサイトの精製と核形成、およびトランスフェクト寄生虫の生体内伝播。このプロトコルを使用して、我々はエイメリアのいくつかの種でトランスフェクションを達成した。一緒に、 核素子は、アイメリアン寄生虫の遺伝子操作を容易にするのに有用なツールです。

このプロトコルは、エメリアン寄生虫をトランスフェクトするために使用されています。本研究では、E.ゼネクトロスの第2世代メロントおよびメロゾイントを図2Aおよび図2Bに示したが、図2Cおよび図2Dは、密度勾?...

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Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites

ここでは、スポロゾアイトや第二世代メロゾサイトを核電化して、ニワトリエイメリア寄生虫の安定したトランスフェクションを実現する方法を提供しました。異種抗原遺伝子を発現する遺伝子組み換えアイメリアン寄生虫はワクチン送達剤として用いることができる。

ニワトリエイメリア寄生虫の核形成と生体内伝播

Transfection is a technical process through which genetic material, such as DNA and double-stranded RNA, are delivered into cells to modify the gene of ...

エイメリア種のトランスフェクションプロトコルの確立は、遺伝子機能の研究を進め、新しいワクチンを開発し、エイメリアの新しい薬物標的をスクリーニングするのに役立ちます。この技術を用いて、我々は、エイメリアのいくつかの種のトランスフェクションを達成し、核の切除は、有腸寄生虫の遺伝子操作の適用を容易にする有用なツールである。Eimeriaの核分裂は、インビトロで培養できない他の寄生虫のトランスフェクションの参照を提供し、その遺伝子操作の研究を加速させる。このテクニックを初めて試す場合は、実験中のスクランブルを避けるために、トランスフェクションの開始前に試薬とその器具を十分に準備する必要があります。この方法の実現は、エイメリアのトランスフェクションに焦点を当てた人々がこの実験の複雑な詳細を見るのに役立ちます。スポロシストの放出から始めて、遠心分離機は2、300回gの2分間のジクロメートカリウム溶液中の7つの胞子に10回10回。PBSで3回洗います。ペレットをPBSの1ミリリットルで再懸濁し、混合物を15ミリリットルのチューブに移します。直径1ミリメートルのガラスビーズを同量に加え、渦ミキサーを使用してオーシストサスペンションを振動させ、胞子嚢胞を放出します。毎分、顕微鏡でスポロシストの放出を監視する。90%以上の卵嚢胞が壊れている場合は、渦を止める。新しい1.5ミリリットルチューブにスポロシストサスペンションを移し、遠心分離機を1,600倍gで5分間移動します。沈殿物を50%の濃度勾配溶液の1ミリリットルで再懸濁し、遠心分離機を10,000グラムで1分間再懸濁する。スポロゾイトを放出するには、排泄バッファーで沈殿物を再懸濁し、42°Cの水浴中で40〜60分間インキュベートして、スポロゾイトを放出する。除電中に5分に1回チューブを振ります。90%以上のスポロゾイトが放出されたら、インキュベートを中止する。600回gで遠心分離機を10分間。55%密度勾配溶液の1ミリリットルで沈殿を再懸濁し、10,000倍gでチューブを1分間遠心分離します。1ミリリットルのPBSで沈殿を再懸濁し、ヘモサイトメーターを用いてスポロゾアイトを数える。エイメリア・ネカトリクスの第二世代のメロゾアイトを採取するには、黄身の茎からイレオセカールオリフィスに長手持ちの鶏腸を切り、ペトリ皿でPBSまたはHBSSで3回そっと洗う。腸を粉々に切り、消化バッファー付きの円錐形フラスコに入れます。フラスコを37°Cの磁気ミキサーに置き、30〜60分間攪拌バーを置き、メロゾアイトを放出します。30分のインキュベーションの後、5分ごとに顕微鏡検査によってメロゾイトの放出を監視する。メロゾイトを精製するには、消化したメロゾイトを含む懸濁液を4層のガーゼに注ぎ、50ミリリットルのチューブにフィルターをかけ、チューブを600倍gで10分間遠心分離します。遠心分離後、腸内の破片を含む上清を捨てる。精製されたメロゾウトを用いて沈殿物を1.5ミリリットルのチューブに移します。1ミリリットルのPBSで沈殿を再中断し、ヘモサイトメーターを使用してメロゾアイトを数える。まず、スポロゾイトまたはメロゾイト懸濁液を600回gで10分間遠心する。その後、上清を捨てます。以下の順番で、85マイクロリットルの核トランスフェクションバッファー、10マイクログラムのプラスミド、および25単位の制限酵素を、スポロゾイトまたはメロゾイトを含む1.5ミリリットル管に加える。サスペンションを核トランスフェクションカップに移します。カップを核移動溝に入れます。電源ボタンを使用して核の切除装置をオンにし、トランスフェクション手順U-033を選択します。プログラムが終了したら、核のXボタンを押すと、画面がOKと表示され、核の切開が成功したことを示す。核の核のカップにダルベッコの修正されたイーグルの媒体の1ミリリットルに0.5を加えて、反応を止めます。軽く混合した後、1.5ミリリットルのチューブに懸濁液を移します。核感染した寄生虫を7日前の鶏に接種する。エイメリア・ネカトリクスのメロゾイテまたはクロースカルルートを介してエイメリア・テネラのスポロゾイテスを接種するが、静脈注射を介してエイメリア・アセルヴリナ・スポロゾイテスを接種する。便から卵子を採取した後、フルオレセイン活性化細胞選別と1キログラム当たり150ミリグラムのピリメタミンを使用して、トランスジェニック集団比を高める。このプロトコルは、アイムリア寄生虫をトランスフェクトするために使用されています。本研究では、エイメリア・ネカトリクスの第二世代のメロントとメロゾアイト、ならびに密度勾配溶液を使用した後のアイメリア・テネラの胞子嚢および胞子虫がここに示されている。核感染した胞子類に感染した後の、核感染したメロゾイトとエイメリア・テネラの卵巣に感染した後のエイメリア・ネカトリクスのオースト胞の画像は、核の欠核化に成功したことを示している。この手順を試みている間に最も重要なことは、スポロゾイトとメロゾアイトの精製が成功していることを確認し、50%密度の勾配溶液を使用してOS2を除去し、スポロシストとスポロゾアイトがより精製されていることを確認することです。この手順に従うと、このプロトコル(子宮内胞子または胞子嚢胞など)を最適化して、将来のエイメリア寄生虫のトランスフェクション手順を簡素化することができます。Eimeriaのトランスフェクションの開発に伴い、EimeriaのCRISPR-Cas9技術は、エイメリアの慎重な遺伝子操作を大幅に推進し、適切なワクチンデリバリービークルとして適用することが期待されます。

Research

JoVE Journal

Biology

Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites

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Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

ヒト胚性幹（ES）細胞の増殖

生物学

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In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

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マウス精巣の生体内マイクロインジェクションやエレクトロポレーションで

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

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走査型透過電子トモグラフィーにより太い生物学的サンプルの調製と観察

This report describes a protocol for preparing thick biological specimens for further observation using a scanning transmission electron microscope. It ...

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