Name: identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter
Uploaded: 2020-03-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

We willen Emily Norton en Mikaelan Cucciarre-Stuligross bedanken voor hun hulp bij de voorbereiding van shRNA-vectoren. Dit werk werd mede ondersteund door een Susan G. Komen Career Catalyst Grant die werd toegekend aan J.M.L. (#CCR17477184).

OPMERKING: Een schematische samenvatting van dit protocol wordt weergegeven in figuur 1.
1. Voorbereiding van de lentivirale vectorbibliotheek
OPMERKING: Het gedemonstreerde scherm gebruikte een arrayed shRNA-bibliotheek gekocht als glycerol-bestanden in 96-putplaten, maar bibliotheken kunnen ook handmatig worden samengesteld op basis van een lijst met kandidaten. Passende besturingselementen moeten in elke bibliotheek worden overwogen en...

In deze studie tonen we een aanpak voor medium-throughput screening van arrayed virale bibliotheken in combinatie met een dual-luciferase-gebaseerde transcriptie reporter test die kan worden gebruikt om te identificeren en testen van nieuwe toezichthouders van transcriptie factoren. Het is van cruciaal belang om het reportersysteem voor elke cellijn voorafgaand aan een scherm te karakteriseren en te optimaliseren. Experimenten moeten worden gedaan om te bevestigen dat de melder reageert op veranderde activiteit van de tr...

Het doel van deze test is om virale bibliotheken te gebruiken om regelgevers van transcriptiefactoren op een relatief snelle en goedkope manier te identificeren. Afwijkende transcriptieactiviteit wordt geassocieerd met kanker en metastase1,,2,3,4,5,6, dus gericht op transcriptiefactoren in kankercellen is een veelbelovende therapeutische benadering. Echter, transcriptie factoren zijn vaak moeilijk te richten farmacologisch7 en velen zijn nodig voor de normale cellulaire functie in volwassen weefsels8,9,10. Gericht op de kanker-geassocieerde trajecten die aberrantly activeren transcriptie factoren om ziekte te rijden is een meer haalbare aanpak met het potentieel om minder ernstige bijwerkingen hebben. De commerciële beschikbaarheid van arrayed lentivirale en retrovirale RNAi, CRISPR/CAS9, cDNA, of ORF bibliotheken stelt onderzoekers in staat om het belang van talrijke genen te testen in een enkel experiment. Er is echter een betrouwbare uitlezing voor gewijzigde transcriptieactiviteit vereist.
Hier beschrijven we het gebruik van een dual-luciferase-gebaseerde transcriptie reporter test en arrayed lentivirale bibliotheken om eiwitten die transcriptie factoren in kankercellen te reguleren identificeren. In deze test worden shRNAs die zich richten op kanker-geassocieerde genen geleverd aan zoogdierkankercellen via lentivirale transductie en cellen worden geselecteerd voor stabiele integratie met behulp van puromycine. De cellen worden vervolgens getransfecteerd met een verslaggever constructie die firefly luciferase gedreven door een promotor die specifiek is voor de transcriptie factor die wordt onderzocht en een controle constructie die Renilla luciferase uitdrukt van een constitutief actieve promotor die niet reageert op de transcriptie factor wordt onderzocht. We demonstreren deze aanpak met een proof-of-concept scherm voor regelgevers van YAP en TAZ, de kritische downstream-effectors van het Hippo-pad8,10,11. Abnormale activiteit van YAP en TAZ bevordert verschillende stappen van de uitgezaaide cascade11 en wordt waargenomen bij veel vormen van kanker11,12,13. Echter, hoe YAP en TAZ worden aberrantly geactiveerd in sommige kankercellen is nog niet volledig begrepen. YAP en TAZ binden geen DNA, maar worden in plaats daarvan aangeworven om promotors door andere transcriptiefactoren. Leden van de TEA-domein (TEAD)-familie van transcriptiefactoren zijn de belangrijkste bindende partners voor YAP en TAZ en zijn van cruciaal belang voor de meeste YAP- en TAZ-afhankelijke functies. Onze verslaggever constructie drukt firefly luciferase van een YAP / TAZ-TEAD-responsieve promotor en eerdere studies hebben aangetoond dat het getrouw veranderingen in YAP-TEAD en TAZ-TEAD transcriptie activiteit2,14,15detecteert .15
Onze aanpak is snel, medium-throughput, en vereist geen screening faciliteiten, geautomatiseerde robots, of diepe volgorde van gepoolde bibliotheken. De kosten zijn relatief laag en er zijn tal van commercieel beschikbare bibliotheken om uit te kiezen. De benodigde apparatuur en reagentia zijn ook relatief standaard in de meeste laboratoria. Het kan worden gebruikt om te screenen voor regelgevers van vrijwel elke transcriptie factor als een luciferase-gebaseerde verslaggever bestaat of wordt gegenereerd. We gebruiken deze benadering om shRNAs in kankercellen te screenen, maar elke cellijn die met redelijke efficiëntie kan worden getransfecteerd, kan worden gebruikt met elk type arrayed-bibliotheek.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.0 ml 96-well deep well polypropylene plate</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1896-2000</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin - 2.50%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090-046</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well flat bottom white assay plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3922</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin - 100 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-10835242001-EA</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto-tryptone - powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>95039</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual-luciferase reporter assay system, which include LAR II reagent (reagent A), Stop &#38; Glo substrate (reagent B substrate) and Stop &#38; Glo buffer (reagent B buffer) - Kit</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E1960</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline w/o calcium, magnesium and phenol red - 9.6 g/L</td>
			<td>Himedia</td>
			<td>TS1006</td>
			<td>For PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA - 0.5 M</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-406</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol - 100%</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97068-085</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexadimethrine bromide (Polybrene) - 8 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-H9268</td>
			<td>For virus infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone DMEM/High glucose - 4 mM L-Glutamine; 4500 mg/L glucose; sodium pyruvate</td>
			<td>GE Healthcare life sciences</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I3-P/i3 Multi-Mode Microplate/EA</td>
			<td>Molecular devices</td>
			<td></td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine - 200 mM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 (Transfection Reagent 2) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Biology Water - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>02-0201-0500</td>
			<td>For dilution of shRNA vector for virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl - powder</td>
			<td>BDH</td>
			<td>BDH9286</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
			<td>For measuring vector DNA concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM (Transfection Buffer) - 100%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985-062</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin - 10,000 Unit/ml (Penicillin); 10,000 &#181;g/ml (Streptomycin)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PureLink Quick Plasmid Miniprep Kit - Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>K210010</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin - 2.5 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-P7255</td>
			<td>For antibiotic selection after infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC20 automated cell counter</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td>For cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE 9 DNA transfection reagent (Transfection Reagent 1) - 100%</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6365787001</td>
			<td>For virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract - powder</td>
			<td>VWR</td>
			<td>J850</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P3000 (Transfection Reagent 3) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter

Transcriptie factoren kunnen veranderen de expressie van tal van doelgenen die een verscheidenheid van downstream processen waardoor ze goede doelen voor anti-kanker therapieën beïnvloeden. Echter, direct gericht transcriptie factoren is vaak moeilijk en kan leiden tot nadelige bijwerkingen als de transcriptie factor nodig is in een of meer volwassen weefsels. Het identificeren van upstream regulatoren die afwijkend activeren transcriptie factoren in kankercellen biedt een meer haalbaar alternatief, vooral als deze eiwitten zijn gemakkelijk te drogeren. Hier beschrijven we een protocol dat kan worden gebruikt om arrayed medium-scale lentivirale bibliotheken en een dual-luciferase-gebaseerde transcriptie verslaggever assay te combineren om nieuwe regelgevers van transcriptie factoren in kankercellen te identificeren. Onze aanpak biedt een snelle, eenvoudige en goedkope manier om honderden genen in één experiment te testen. Om het gebruik van deze aanpak aan te tonen, hebben we een scherm uitgevoerd van een arrayed lentivirale RNAi-bibliotheek met verschillende regelgevers van Ja-geassocieerdeiwit (YAP) en transcriptieco-activator met PDZ-bindend motief (TAZ), twee transcriptieco-activators die de downstream-effectoren van het Hippo-pad zijn. Deze benadering kan echter worden aangepast om te screenen op regelgevers van vrijwel elke transcriptiefactor of cofactor en kan ook worden gebruikt om CRISPR/CAS9-, cDNA- of ORF-bibliotheken te screenen.

Onze YAP/TAZ-TEAD reporter construct (pGL3-5xMCAT (SV)-492,14,15) bevat een minimale SV-49 promotor met 5 herhalingen van het canonieke TEAD binding element (MCAT)15 die het firefly luciferase gen aandrijft ( Figuur1). Het wordt samen met de PRL-TK-controlevector (Promega) in cellen omgezet, die Renilla luciferase uitdrukt van de cons...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

Om nieuwe regelgevers van transcriptiefactoren te identificeren, ontwikkelden we een benadering om arrayed lentivirale of retrovirale RNAi-bibliotheken te screenen met behulp van een dual-luciferase-gebaseerde transcriptie-verslaggever test. Deze aanpak biedt een snelle en relatief goedkope manier om honderden kandidaten in één experiment te screenen.

Identificatie van Transcription Factor Regulators met behulp van Medium-Throughput Screening van arrayed bibliotheken en een Dual-Luciferase-Based Reporter

Transcription factors can alter the expression of numerous target genes that influence a variety of downstream processes making them good targets for ...

Dit protocol kan worden gebruikt om arrayed lentiviral of retroviral test bibliotheken te screenen om nieuwe regelgevers van transcriptiefactoren in kankercellen te identificeren. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat het snel, medium doorvoer, en goedkoop, en dat het gebruik maakt van apparatuur en reagentia algemeen toegankelijk voor de meeste onderzoekers. Om elke lentivirale vector in de bibliotheek uit te breiden en te zuiveren, voeg u eerst 1,3 milliliter Luria-bouillon toe, aangevuld met 100 microgram per milliliter ampicilline aan elke put van een 96-put diepe putplaat.Inenting elk goed met twee microliters van glycerol voorraad voor een nachtelijke incubatie bij 37 graden Celsius en 225 omwentelingen per minuut. De volgende dag, breng elke bacterie cultuur in individuele 1,5 milliliter microcentrifuge buizen voor centrifugatie. Zuiver elke vector met een geschikte bacteriële miniprep kit volgens de instructies van de fabrikant.Voor elke vector in de voorbereide bibliotheek, zaad een put van een 24-put plaat met een keer 10 tot de vijfde 293FT cellen en incubeer de cellen op 37 graden Celsius en 5% kooldioxide gedurende 24 uur. Om een transfectiemengsel te bereiden dat voor elke vector in de bibliotheek zal worden opgezet, ontwijkt u eerst elke lentivirale vector tot een uiteindelijke concentratie van 50 nanogram per microliter met nuclease-vrij water. Breng vijf microliter van elke verdunning over in individuele putten van een 96-put PCR-plaat.Maak een transfectie super mix door het mengen van 1,25 microliter keer x van transfection reagens een met 23,75 microliter tijden x van voorverwarmde transfectie buffer. Incubeer de transfectie super mix op kamertemperatuur gedurende vijf minuten. Voeg vervolgens 125 nanogram x psPAX2 en 125 nanogram keer x VSVG toe aan de supermix met zachte pipetting.Onmiddellijk aliquot de super mix in elke buis van een PCR strip en gebruik een multichannel pipet om 25 microliters van het mengsel over te brengen in elke put van verdunde virale vector. Na een incubatie van 20 minuten bij kamertemperatuur, gebruik een multichannel pipet om 30 microliter van elk transfectiemengsel van elke put over te brengen naar een overeenkomstige put van 293FT cellen in de eerder voorbereide 24-put plaat. Broed de cellen gedurende 24 uur voordat u het medium in elke put vervangt door 500 microliters van vers volledig groeimedium voor nog eens 24-uurs incubatie in de celkweek incubator.De volgende dag, gebruik maken van een multichannel pipet om de virale supernatant te verzamelen van elke put en aliquot 220 microliters van elke supernatant in twee putten in een nieuwe 96-put plaat om een arrayed virale supernatant plaat te genereren. Om A375 cellen voor te bereiden op infectie, zaad een keer 10 tot de vijfde cellen in een 24-put plaat in 0,5 milliliter van volledige groei medium per put voor elke virale vector in de bibliotheek. Inclusief een extra put die niet zal worden besmet om te dienen als een controle voor de selectie van geneesmiddelen.Na een 24-uurs incubatie in de celkweek incubator, ontdooien de bevroren arrayed lentivirale supernatant ingesteld op kamertemperatuur voor het vervangen van de groeimedium van elke put van de voorbereide celkweekplaat met 200 microliters van groeimedium aangevuld met 20 microgram per milliliter polybrene. Met behulp van een multichannel pipet, overdracht 200 microliter van virale supernatant van elke 96 goed naar elke put van de 24-put plaat. Breng de cellen 24 tot 48 uur terug naar de celkweek incubator.Vervang aan het einde van de incubatie het medium in elke put door 500 microliters groeimedium aangevuld met puromycine en breng de cellen nog 48 uur terug naar de celkweek incubator. Na de 48-uurs puromycine selectie, sorteer de cellen in drie of vier groepen zodanig dat alle putten in een enkele groep hebben een vergelijkbare celdichtheid en voeg 200 microliter trypsin-EDTA aan een representatieve goed van elke groep voor een vijf minuten incubatie bij 37 graden Celsius. Zodra de cellen zijn losgemaakt, neutraliseren de trypsine met 400 microliters van de groei medium aangevuld met puromycine en tellen het aantal cellen van elke trypsinized goed.Verdun elke celsuspensie tot een twee keer 10 tot de vijfde cel per milliliterconcentratie met groeimedium aangevuld met puromycine en zaad 500 microliters van cellen van elk goed in dezelfde put positie in een nieuwe 24-well plaat. Na het gebruik van de tellingen van elke representatieve put om het celnummer in elke resterende goed in elke groep te schatten, voeg het juiste volume van trypsin-EDTA toe aan elke put om een een keer 10 tot de zesde cellen per milliliterconcentratie te bereiken. Gebruik tijdens de trypsinisatie een multichannel pipet om 400 microliter groeimedium aangevuld met puromycine toe te voegen aan de juiste overeenkomstige putten in de nieuwe 24-putplaat.Zodra de cellen zijn losgemaakt, voorzichtig meng de inhoud van elke put en breng 100 microliter van elke cel suspensie naar de juiste overeenkomstige goed in de nieuwe 24-put plaat. Breng de cellen vervolgens 24 uur terug naar de celkweek incubator. Om de cellen te transfecteren met de dual-luciferase reporter constructs, bereid het transfectie verdunningsmengsel zoals aangegeven in de tabel.Om het verdunningsmengsel van de verslaggever voor te bereiden, mengt u de volumes van elk reagens vermenigvuldigd met het totale aantal transfecties plus enkele extra volumes. Meng vervolgens het transfectieverdunningsmengsel met het verdunningsmengsel van de verslaggever en ontcubeer de resulterende oplossing 15 minuten bij kamertemperatuur om het transfectiemengsel te produceren. Spoel tijdens de incubatie elke put van de celkweekplaat met 250 microliter PBS en voeg 447 microliters van vers volledig groeimedium toe aan elke put.Gebruik vervolgens een multichannel pipet om 53 microliters van transfectie mix te distribueren naar elke put van de celcultuurplaat. Plaats de plaat op 37 graden Celsius en 5% kooldioxide gedurende 24 uur. Om de luciferase-activiteit te meten, verdunt u de 5X-passieflysebuffer uit de luciferase-activiteitskit bij een één-op-vijf-verdunning met gedeïoniseerd water en ontdooi de benodigde volumes reagens A en reagens B-buffer uit de kit.Wanneer de reagentia klaar zijn, vervang de supernatant in elke put met 75 microliters van passieve lyse buffer en incubeer de plaat gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur met af en toe schudden. Verdun tijdens de incubatie het 50X reagens B-substraat van de kit tot een één-tot-50-concentratie met ontdooide reagens B-buffer. Voeg aan het einde van de incubatie 30 microliter passieve lysebuffer toe aan vier blanco controleputten en breng 30 microliter lysaat van elke put over naar dubbele putten van een 96-put platte witte bodemtestplaat.Wanneer alle lysaat is verguld, gebruik dan een multichannel pipet om 50 microliter reagens A toe te voegen aan elke put en lees de vuurvlieg luciferase signaal met een plaatlezer. Gebruik vervolgens een multichannel pipet om 50 microliter reagens B toe te voegen aan elke put en lees het Renilla luciferase signaal met een plaatlezer. Zoals verwacht verhoogt YAP2SA de activiteit van firefly luciferase, maar niet de activiteit van Renilla luciferase in vergelijking met de controlevector.Yap2SA S94A daarentegen verhoogt de activiteit van firefly luciferase niet. Belangrijk is dat YAP2SA de activiteit van een minimale promotorconstructie die de MCAT TEAD-bindingselementen mist, niet wijzigt. In cellen die met de YAP-TAZ-TEAD reporter construct zijn doorgescheurd, hebben de tandem YAP en TAZ korte haarspeldbochten het vuurvliegniveau aanzienlijk verminderd, maar de controle korte haarspeldloze controle niet.In tegenstelling, in cellen doorgescheurd met de minimale reporter constructie, de YAP-TAZ korte haarspeld RNA niet significant veranderen firefly luciferase niveaus. De Renilla signaal in elke put is ook niet significant veranderd door de korte haarspeld niet-targeting controle of de YAP-TAZ korte haarspeld RNA. Zoals verwacht vermindert korte haarspeldbo's die zich richten op YAP en TAZ, SARC of PI3 kinase de YAP-TAZ-TEAD-activiteit aanzienlijk.Korte haarspeldbo's gericht op ATM, CDH1, CSK, ERBB2 en gelsolin verhoogden elk genormaliseerde firefly luciferase niveaus in overeenstemming met gepubliceerde studies waaruit blijkt dat deze eiwitten YAP en/of TAZ waren. Ondanks gevestigde rollen voor ATR, CCNE2 en ERBB4 in andere celtypen, veranderen korte haarspeldbochten die zich richten op deze genen niet significant genormaliseerd vuurvlieggehalte in A375-cellen. Na dit scherm moeten het identificeren van regelgevers worden gevalideerd met behulp van andere uitlezingen voor hun transcriptiefactoractiviteit.Effectieve knockdown van de geïdentificeerde regulator door de test moet ook worden bevestigd. Vergeet niet voorzichtig te zijn en veiligheidsrichtlijnen te volgen bij het werken met besmettelijke lentivirussen, vooral als de virussen menselijk besmettelijk zijn.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Sectie Mammary Gland Whole Mounts voor Lesion Identificatie

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Flow Cytometry-based Drug Screening System for the Identification of Small Molecules That Promote Cellular Differentiation of Glioblastoma Stem Cells

Stroom Cytometry gebaseerde Drug Screening systeem voor de identificatie van kleine moleculen die bevordering van celdifferentiatie van Glioblastoma stamcellen

Glioblastoma (GBM) is the most common and most lethal primary brain tumor in adults, causing roughly 14,000 deaths each year in the U.S. alone. Median ...

Live Cell Imaging of the TGF-	&beta;/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live Cell Imaging of the TGF-	ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live cel beeldvorming van de TGF-β/Smad3 signalering traject In Vitro en In Vivo met behulp van een Adenovirus verslaggever systeem

Transforming Growth Factor &#946; (TGF-&#946;) signaling regulates many important functions required for cellular homeostasis and is commonly found ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Analyse van kanker cel invasie en anti-metastatische Drug Screening met behulp van Hydrogel Micro-kamer Array (HMCA)-op basis van platen

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

Isolatie van exosoom-verrijkte extracellulaire blaasjes met granulocyt-macrofaag koloniestimulerende factor uit embryonale stamcellen

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

Oprichting en karakterisering van de neuro-endocriene tumor Spheroids van de kleine darm

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Mapping the Structure-Function Relationships of Disordered Oncogenic Transcription Factors Using Transcriptomic Analysis

Het in kaart brengen van de structuur-functierelaties van ongeordende oncogene transcriptiefactoren met behulp van transcriptomische analyse

Many cancers are characterized by chromosomal translocations which result in the expression of oncogenic fusion transcription factors. Typically, these ...

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Identificatie van EGFR- en RAS-remmers met Caenorhabditis elegans

The changes in the plasma membrane localization of the epidermal growth factor receptor (EGFR) and its downstream effector RAS have been implicated in ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Ontdekking van gemetastaseerde regulatoren met behulp van een snel en kwantitatief intravital chick chorioallantoic membraanmodel

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

Een snelle screeningsworkflow om potentiële combinatietherapie voor GBM te identificeren met behulp van patiënt-afgeleide glioomstamcellen

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...