Name: identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter
Uploaded: 2020-03-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

היינו רוצים להודות לאמילי נורטון ומיקילן קוקצ'רי-סטלירוס על כך שהיא עזרה בהכנת וקטורים מרין. עבודה זו היתה נתמכת בחלקו על ידי המענק סוזן G. Komen Catalyst הוענק J.M.L. (#CCR17477184).

הערה: סיכום סכמטי של פרוטוקול זה מוצג באיור 1.
1. הכנה לספרייה וקטורית לגבי הנגיף
הערה: המסך הפגינו השתמשו בספריית מסודר שניתן לרכוש כמלאי גליצרול ב-96-צלחות, אך ניתן גם להרכיב ספריות באופן ידני על פי רשימת מועמדים. יש לשקול ולכלול פקדים מתאימים בס...

במחקר זה, אנו מדגימים גישה עבור הקרנת תפוקה בינונית של ספריות ויראליות מסודר בשילוב עם שיטת dual-לוציפראז מבוססי הכתב המבוסס שניתן להשתמש כדי לזהות ולבדוק הרגולטורים הרומן של גורמים שעתוק. זה קריטי לאפיין ולייעל את מערכת הכתב עבור כל קו תא לפני כל מסך. יש לעשות ניסויים כדי לוודא כי העיתונאי ?...

מטרת השיטה היא להשתמש בספריות ויראליות לזיהוי הרגולטורים של גורמי שעתוק בצורה מהירה וזולה יחסית. הפעילות החריגה מזוהה עם סרטן גרורות1,2,3,4,5,6, כך המיקוד גורמים שעתוק בתאים סרטניים היא גישה טיפולית מבטיחה. עם זאת, גורמים שעתוק הם לעתים קרובות קשה למקד את היעד של השימוש ב-פרמקואובולוגית7 ורבים נדרשים עבור פונקציה סלולרית נורמלית ברקמות למבוגרים8,9,10. מיקוד המסלולים הקשורים לסרטן, כי בדרך מאוד להפעיל גורמי תמלול כדי לנהוג במחלה היא גישה אפשרית יותר עם פוטנציאל יש תופעות לוואי חמורות פחות. הזמינות המסחרית של מערך מסודר ונגיפי RNAi, CRISPR/CAS9, cDNA, או ORF ספריות מאפשר לחוקרים לבדוק את החשיבות של גנים רבים בניסוי אחד. עם זאת, נדרש בדיקה אמינה לפעילות הטרנסדפורמציה ששונתה.
כאן, אנו מתארים את השימוש בשיטת הכתב המבוסס על כפול-לוציפראזה ובספריות מבוססות-ויראליות כדי לזהות חלבונים המסדירים את גורמי התמלול בתאי הסרטן. בתוך מעשה זה, משרין כי היעד הקשורים לסרטן הגנים מועברים לתאי סרטן היונקים באמצעות התמרה ויראלי תאים נבחרים עבור אינטגרציה יציבה באמצעות puromycin. התאים הם הטרנסג הבאה עם מבנה עיתונאי המבטא גחלילית לוציפראז מונע על ידי יזם ספציפי לגורם שעתוק כי הוא נחקר מבנה שליטה המבטא Renilla לוציפראז מיזם פעיל באופן מכונן שאינו מגיב לגורם שעתוק נחקר. אנו מדגימים גישה זו עם מסך הוכחה של קונספט עבור הרגולטורים של לנבוח ו TAZ, המטה הקריטי העריקים של מסלול היפו8,10,11. פעילות חריגה של לנבוח ו TAZ מקדמת מספר שלבים של אשד גרורתי11 והוא נצפה בסרטן רבים11,12,13. עם זאת, כיצד להפוך את באופן מאוד מתאים ל-, מפעיל בתאי סרטן לא מובנים עדיין. במקום זאת, לא לקשור את ה-DNA, אלא מגויס ליזמים על ידי שעתוק אחרים. חברים בתחום התה (TEAD) המשפחה של גורמי שעתוק הם שותפי האיגוד העיקריים ל-לנבוח ו-TAZ, והם קריטיים עבור רוב הפונקציות מתלוות ו TAZ. העיתונאי שלנו לבנות מביע מבטא גחלילית לוציפראז מתוך מיזם לנבוח/TAZ-tead תגובה ומחקרים קודמים הפגינו כי הוא בנאמנות מזהה שינויים ב-2לנבוח-tead ו TAZ-tead פעילותמעבר 2,14,15.
הגישה שלנו היא מהירה, תפוקה בינונית, ואינו דורש מתקני הקרנה, רובוטים אוטומטיים או רצף עמוק של ספריות במאגר. העלויות נמוכות יחסית וקיימות ספריות מסחריות זמינות רבות לבחירה. הציוד הנדרש והריאגנטים הינם גם סטנדרטיים יחסית ברוב המעבדות. זה יכול לשמש למסך עבור הרגולטורים כמעט כל גורם שעתוק אם העיתונאי מבוסס לוציפראז קיים או נוצר. אנו משתמשים בגישה זו כדי להקרין מרין בתאים סרטניים, אבל כל קו תא שניתן לשנות עם יעילות סבירה יכול לשמש עם כל סוג של ספריית מסודר.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.0 ml 96-well deep well polypropylene plate</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1896-2000</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin - 2.50%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090-046</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well flat bottom white assay plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3922</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin - 100 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-10835242001-EA</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto-tryptone - powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>95039</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual-luciferase reporter assay system, which include LAR II reagent (reagent A), Stop &#38; Glo substrate (reagent B substrate) and Stop &#38; Glo buffer (reagent B buffer) - Kit</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E1960</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline w/o calcium, magnesium and phenol red - 9.6 g/L</td>
			<td>Himedia</td>
			<td>TS1006</td>
			<td>For PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA - 0.5 M</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-406</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol - 100%</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97068-085</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexadimethrine bromide (Polybrene) - 8 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-H9268</td>
			<td>For virus infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone DMEM/High glucose - 4 mM L-Glutamine; 4500 mg/L glucose; sodium pyruvate</td>
			<td>GE Healthcare life sciences</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I3-P/i3 Multi-Mode Microplate/EA</td>
			<td>Molecular devices</td>
			<td></td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine - 200 mM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 (Transfection Reagent 2) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Biology Water - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>02-0201-0500</td>
			<td>For dilution of shRNA vector for virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl - powder</td>
			<td>BDH</td>
			<td>BDH9286</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
			<td>For measuring vector DNA concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM (Transfection Buffer) - 100%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985-062</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin - 10,000 Unit/ml (Penicillin); 10,000 &#181;g/ml (Streptomycin)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PureLink Quick Plasmid Miniprep Kit - Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>K210010</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin - 2.5 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-P7255</td>
			<td>For antibiotic selection after infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC20 automated cell counter</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td>For cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE 9 DNA transfection reagent (Transfection Reagent 1) - 100%</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6365787001</td>
			<td>For virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract - powder</td>
			<td>VWR</td>
			<td>J850</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P3000 (Transfection Reagent 3) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter

גורמים שעתוק יכול לשנות את הביטוי של גנים היעד רבים המשפיעים על מגוון של תהליכים במורד הופך אותם מטרות טובות נגד סרטן טיפולים. עם זאת, מיקוד ישירות גורמי שעתוק הוא לעתים קרובות קשה יכול לגרום לתופעות לוואי שליליות אם גורם שעתוק הוא הכרחי ברקמות אחת או יותר מבוגר. זיהוי במעלה והרגולטורים כי באופן מיוחד להפעיל את גורמי התמלול בתאים סרטניים מציע חלופה אפשרית יותר, במיוחד אם אלה חלבונים הם קלים לתרופה. כאן, אנו מתארים פרוטוקול שניתן להשתמש בו כדי לשלב ספריות ויראליות בקנה מידה בינוני ומבוסס כפול-לluciferase מבוססי הכתב לזהות הרגולטורים הרומן של גורמי שעתוק בתאים סרטניים. הגישה שלנו מציעה דרך מהירה, קלה וזולה לבחון מאות גנים בניסוי אחד. כדי להדגים את השימוש בגישה זו, ביצעת מסך של ספריית RNAi ויראלי מסודר המכיל מספר הרגולטורים של חלבון הקשורים כן (לצ) ו transcript co-activator עם מוטיב PDZ-כריכה (TAZ), שני ההמרה שיתוף מפעילי כי הם הזרם המורד של מסלול היפו. עם זאת, גישה זו יכול להיות שונה למסך עבור הרגולטורים של כמעט כל גורם שעתוק או שיתוף פקטור והוא יכול לשמש גם למסך CRISPR/CAS9, cDNA, או ORF ספריות.

שלנו מבנה הכתב שלנו, שלנו (pGL3-5xmcat (SV)-492,14,15) מכיל מינייזם sv-49 מינימלי עם 5 חוזר של אלמנט האיגוד הקאנוני (mcat)15 המניע את הגנים גחלילית לוציפראז (איור 1). זה שיתוף מעורב לתוך תאים יחד עם PRL-TK שליטה וקטו...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

כדי לזהות והרגולטורים הרומן של גורמי שעתוק, פיתחנו גישה למסך מסודר או לספריות RNAi ויראלי באמצעות שימוש כפול-לוציפראז מבוסס מבוססת הכתב. גישה זו מציעה דרך מהירה וזולה יחסית להקרין מאות מועמדים בניסוי אחד.

זיהוי של שעתוק מקדם ווסת באמצעות הקרנת תפוקה בינונית של ספריות מסודר וכתבת המבוססת על כפול-לוציפראז

Transcription factors can alter the expression of numerous target genes that influence a variety of downstream processes making them good targets for ...

פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לסנן ספריות lentiviral או רטרו-ויראלי כדי לזהות וסתים חדשים של גורמי שעתוק בתאים סרטניים. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא מהירה, תפוקה בינונית וזולה, והיא משתמשת בציוד ובריגנטים הנגישים לרוב החוקרים. כדי להרחיב ולטהר כל וקטור lentiviral בספרייה, תחילה להוסיף 1.3 מיליליטר של מרק לוריא בתוספת 100 מיקרוגרם למיליליטר של אמפיצילין לכל באר של צלחת באר עמוקה 96 היטב.לחסן כל באר עם שני microliters של מלאי גליצרול עבור דגירה לילה ב 37 מעלות צלזיוס ו 225 מהפכות לדקה. למחרת, להעביר כל תרבות חיידקים לתוך צינורות מיקרוצנטריפוגה בודדים 1.5 מיליליטר עבור צנטריפוגה. לטהר כל וקטור עם ערכת miniprep חיידקי מתאים על פי הוראות היצרן.עבור כל וקטור בספרייה המוכנה, זרע באר אחת של צלחת 24 באר עם אחד 10 עד החמישי 293FT תאים דגירה התאים ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני במשך 24 שעות. כדי להכין תערובת transfection אשר יוגדר עבור כל וקטור בספרייה, תחילה לרחף כל וקטור lentiviral לריכוז סופי של 50 ננוגרם למיקרוליטר עם מים ללא גרעין. העבר חמישה מיקרוליטרים של כל דילול לתוך בארות בודדות של צלחת PCR 96 היטב.הפוך תערובת סופר transfection על ידי ערבוב 1.25 microliters פעמים x של reagent transfection אחד עם 23.75 microliters פעמים x של מאגר transfection מחומם מראש. דגירה סופר transfection לערבב בטמפרטורת החדר במשך חמש דקות. לאחר מכן להוסיף 125 ננוגרם פעמים x של psPAX2 ו 125 ננוגרם פעמים x של VSVG לתערובת סופר עם צינורות עדינים.מיד aliquot את תערובת סופר לתוך כל צינור של רצועת PCR ולהשתמש פיפטה רב ערוצית להעביר 25 microliters של התערובת לתוך כל באר של וקטור ויראלי מדולל. לאחר דגירה של 20 דקות בטמפרטורת החדר, השתמשו בפיפטה רב-ערוצית כדי להעביר 30 מיקרוליטרים של כל תערובת החלפה מכל באר לתוך באר תואמת של תאי 293FT בצלחת 24 הבאר שהוכנה בעבר. להחגירה את התאים במשך 24 שעות לפני החלפת המדיום בכל באר עם 500 microliters של מדיום צמיחה שלם טרי עבור דגירה נוספת 24 שעות ביממה באינקובטור תרבות התא.למחרת, השתמשו בפיגט רב-ערוצי כדי לאסוף את העל-טבעי הוויראלי מכל באר ו-220 מיקרוליטרים של כל על-טבעי לשתי בארות בצלחת חדשה של 96 בארות כדי ליצור צלחת על-טבעית ויראלית ערוך. כדי להכין תאים A375 לזיהום, זרע פעם אחת 10 לתאים החמישיים בצלחת 24 באר ב 0.5 מיליליטר של מדיום צמיחה מלאה לגם עבור כל וקטור ויראלי בספרייה. כלול באר נוספת שלא תהיה נגועה כדי לשמש שליטה לבחירת תרופות.לאחר אינקובציה של 24 שעות באינקובטור תרבות התא, להפשיר את על טבעי lentiviral ערוך קפוא להגדיר לטמפרטורת החדר לפני החלפת מדיום הצמיחה מכל באר של צלחת תרבות התא מוכן עם 200 microliters של מדיום צמיחה בתוספת 20 מיקרוגרם למיליליטר של פוליברין. בעזרת פיפטה רב-ערוצית, מעבירים 200 מיקרוליטרים של על-טבעי ויראלי מכל 96 בארות לכל באר של צלחת 24 בארות. מחזירים את התאים לאנקובטור תרבות התאים למשך 24 עד 48 שעות.בסוף האינקובציה, להחליף את המדיום בכל באר עם 500 microliters של מדיום צמיחה בתוספת puromycin ולהחזיר את התאים החממה תרבות התא במשך 48 שעות נוספות. לאחר בחירת puromycin 48 שעות, למיין את התאים לשלוש או ארבע קבוצות, כך שכל הבארות בקבוצה אחת יש צפיפות תא דומה ולהוסיף 200 microliters של טריפסין-EDTA לנציג אחד גם מכל קבוצה עבור דגירה של חמש דקות ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר התאים התנתקו, לנטרל את טריפסין עם 400 microliters של מדיום צמיחה בתוספת puromycin ולספור את מספר התאים מכל טריפסין היטב.לדלל כל מתלה תא פעמיים 10 לתאים החמישיים לריכוז מיליליטר עם מדיום צמיחה בתוספת puromycin וזרע 500 microliters של תאים מכל באר לתוך אותה גם מיקום בצלחת חדשה 24 באר. לאחר שימוש בספירות מכל נציג היטב כדי להעריך את מספר התא בכל באר שנותרה בכל קבוצה, הוסף את הנפח המתאים של טריפסין-EDTA לכל באר כדי להשיג 10 פעמים עד התא השישי לריכוז מיליליטר. במהלך טריפסיניזציה, להשתמש פיפטה רב ערוצית להוסיף 400 microliters של בינוני צמיחה בתוספת puromycin ל בארות המתאימות המתאימות בצלחת החדשה 24 היטב.לאחר שתאים התנתקו, מערבבים בעדינות את התוכן של כל באר ומעבירים 100 מיקרוליטרים של כל מתלה תא ל הבאר המתאימה המתאימה בצלחת החדשה של 24 בארות. ואז להחזיר את התאים לאנקובטור תרבות התא במשך 24 שעות. כדי לשנות את התאים עם מבנה הכתב כפול לוציפראז, להכין את תערובת דילול transfection כפי שצוין בטבלה.כדי להכין את תערובת דילול הכתב, מערבבים את הכרכים של כל רה"מ מוכפל במספר הכולל של transfections בתוספת מספר כרכים נוספים. לאחר מכן, מערבבים את תערובת דילול ההטרמפקט עם תערובת דילול הכתבים ומדגרים את הפתרון שנוצר בטמפרטורת החדר במשך 15 דקות כדי לייצר את תערובת ההטרנספיה. במהלך הדגירה, לשטוף כל באר של צלחת תרבות התא עם 250 microliters של PBS ולהוסיף 447 microliters של מדיום צמיחה מלאה טרי לכל באר.לאחר מכן השתמש פיפטה רב ערוצית להפיץ 53 microliters של תערובת transfection לכל באר של צלחת תרבות התא. מניחים את הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני במשך 24 שעות. כדי למדוד את פעילות luciferase, לדלל חיץ תזה פסיבי 5X מערכת פעילות luciferase בדילול של אחד עד חמישה עם מים deionized ולהפשיר את הכרכים הדרושים של חיץ ריגנט A ו reagent B מההערכה.כאשר הריאגנטים מוכנים, החלף את העל-טבעי בכל באר ב-75 מיקרוליטרים של חיץ תיזה פסיבי ודגירה של הצלחת במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר עם רעידות מזדמנות. במהלך הדגירה, לדלל את מצע 50X reagent B מהערכה לריכוז של אחד עד 50 עם חיץ ריגנט B מופשר. בסוף הדגירה, מוסיפים 30 מיקרוליטרים של מאגר תזה פסיבי לארבע בארות בקרה ריקות ומעבירים 30 מיקרוליטרים של ליאזט מכל באר לתוך בארות כפולות של צלחת בדיקה לבנה תחתונה שטוחה 96 היטב.כאשר כל הליזט כבר מצופה, להשתמש פיפטה רב ערוצית להוסיף 50 microliters של reagent A לכל באר ולקרוא את אות לוציפראז גחלילית עם קורא צלחת. לאחר מכן השתמש פיפטה רב ערוצית להוסיף 50 microliters של reagent B לכל באר ולקרוא את האות רנילה לוציפראז עם קורא צלחת. כצפוי, YAP2SA מגבירה את פעילות גחלילית לוציפראז אך לא את פעילות רנילה לוציפראז בהשוואה לווקטור הבקרה.לעומת זאת, YAP2SA S94A אינו מגביר את פעילות גחלילת לוציפראז. חשוב לציין, YAP2SA אינו משנה את הפעילות של מבנה מקדם מינימלי חסר אלמנטים מחייבים MCAT TEAD. בתאים מומרים עם מבנה הכתב YAP-TAZ-TEAD, סיכות ראש קצרות YAP ו- TAZ הפחיתו באופן משמעותי את רמות לוציפראז גחליל אש, אבל בקרת סיכת ראש קצרה שליטה ללא מיקוד לא.לעומת זאת, בתאים מנוגדים עם מבנה הכתב המינימלי, RNA סיכת ראש קצרה YAP-TAZ אינו משנה באופן משמעותי את רמות לוציפראז גחליל אש. אות רנילה בכל באר גם לא השתנה באופן משמעותי על ידי בקרת סיכת ראש קצרה ללא מיקוד או RNA סיכת ראש קצרה YAP-TAZ. כצפוי, RNAs סיכת ראש קצרה מיקוד YAP ו TAZ, SARC או PI3 קינאז מפחית באופן משמעותי את פעילות YAP-TAZ-TEAD.RNAs סיכת ראש קצרה מיקוד כספומט, CDH1, CSK, ERBB2, וג'לזלין כל גדל רמות לוציפראז גחליל מנורמל עולה בקנה אחד עם מחקרים שפורסמו מראה כי חלבונים אלה היו YAP ו / או TAZ. למרות תפקידים הוקמה עבור ATR, CCNE2, ו ERBB4 בסוגי תאים אחרים, RNAs סיכת ראש קצרה מיקוד גנים אלה אינם משנים באופן משמעותי רמות לוציפראז גחליל נורמלי בתאי A375. בעקבות מסך זה, יש לאמת את זיהוי הרגולטורים באמצעות קריאות אחרות עבור פעילות גורם התמלול שלהם.יש לאשר גם הפלה אפקטיבית של הרגולטור שזוהה על ידי ההסתה. זכור לנקוט זהירות ולעקוב אחר הנחיות בטיחות בעת עבודה עם lentiviruses זיהומיות, במיוחד אם הנגיפים הם זיהומיות אנושיות.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

חתך בלוטות החלב שלמות מלא עבור זיהוי הנגע

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Flow Cytometry-based Drug Screening System for the Identification of Small Molecules That Promote Cellular Differentiation of Glioblastoma Stem Cells

סמים מבוססי Cytometry זרימה מערכת הסינון לצורך זיהוי מולקולות קטנות המקדמים התמיינות של תאי גזע גליובלסטומה

Glioblastoma (GBM) is the most common and most lethal primary brain tumor in adults, causing roughly 14,000 deaths each year in the U.S. alone. Median ...

Live Cell Imaging of the TGF-	&beta;/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live Cell Imaging of the TGF-	ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

חיים תא הדמיה של TGF-β/Smad3 איתות לשביל במבחנה , In Vivo באמצעות מערכת הכתב אדנו

Transforming Growth Factor &#946; (TGF-&#946;) signaling regulates many important functions required for cellular homeostasis and is commonly found ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

ניתוח של סרטן תאים הפלישה ושל סמים אנטי גרורתי הקרנת באמצעות מערך הידרוג מיקרו-תא (HMCA)-המבוסס על צלחות

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

בידוד של שלשלות חוץ-תאיות מועשרות אקסוזום הנושאות גרנולוציט-מקרופאג' גורם מעורר מושבה מתאי גזע עובריים

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

הקמה ואפיון של המעי הקטן נוירואנדוקרינים הגידול האנדוקרינית

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Mapping the Structure-Function Relationships of Disordered Oncogenic Transcription Factors Using Transcriptomic Analysis

מיפוי קשרי מבנה-פונקציה של גורמי שעתוק אונקוגניים מופרעים באמצעות ניתוח תמלול

Many cancers are characterized by chromosomal translocations which result in the expression of oncogenic fusion transcription factors. Typically, these ...

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

זיהוי מעכבי EGFR ו- RAS באמצעות אלגנים של Caenorhabditis

The changes in the plasma membrane localization of the epidermal growth factor receptor (EGFR) and its downstream effector RAS have been implicated in ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

גילוי של רגולטורים גרורתיים באמצעות מודל ממברנה צ'יק תוך-ויאטואי מהיר וכמותי

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

זרימת עבודה מהירה של סינון לזיהוי טיפול משולב פוטנציאלי עבור GBM באמצעות תאי גזע גליומה שמקורם במטופל

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...