Name: identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter
Uploaded: 2020-03-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

Vi vil gjerne takke Emily Norton og Mikaelan Cucciarre-Stuligross for å ha hjulpet til med utarbeidelsen av shRNA-vektorer. Dette arbeidet ble delvis støttet av en Susan G. Komen Career Catalyst Grant som tildeles J.M.L. (#CCR17477184).

MERK: Et skjematisk sammendrag av denne protokollen vises i figur 1.
1. Forberedelse av fastafysiviralvektorbibliotek
MERK: Den demonstrerte skjermen brukte et arrayed shRNA-bibliotek kjøpt som glyserolaksjer i 96-brønnplater, men biblioteker kan også monteres manuelt basert på en liste over kandidater. Passende kontroller bør vurderes og inkluderes i et hvilket som helst bibliotek. Dette inkluderer en ikke-målretting kontroll shRNA...

I denne studien viser vi en tilnærming til middels gjennomstrømning screening av arrayed viral biblioteker i kombinasjon med en dual-luciferase-basert transkripsjonsreporter analyse som kan brukes til å identifisere og teste nye regulatorer av transkripsjonsfaktorer. Det er avgjørende å karakterisere og optimalisere reportersystemet for hver cellelinje før en skjerm. Eksperimenter bør gjøres for å bekrefte at reporteren reagerer på endret aktivitet av transkripsjonsfaktoren som undersøkes, og omfanget av endri...

Formålet med denne analysen er å bruke virale biblioteker for å identifisere regulatorer av transkripsjonsfaktorer på en relativt rask og rimelig måte. Avvikende transkripsjonsaktivitet er forbundet med kreft og metastase1,2,3,4,5,6, så målretting transkripsjonfaktorer i kreftceller er en lovende terapeutisk tilnærming. Transkripsjonsfaktorer er imidlertid ofte vanskelige å målrette farmakologisk7, og mange er nødvendige for normal cellulær funksjon i voksenvev8,9,10. Målretting mot kreftrelaterte veier som avvikende aktiverer transkripsjonsfaktorer for å drive sykdom, er en mer mulig tilnærming med potensial til å ha mindre alvorlige bivirkninger. Den kommersielle tilgjengeligheten av arrayed lentiviral og retroviral RNAi, CRISPR/ CAS9, cDNA eller ORF biblioteker gjør det mulig for forskere å teste viktigheten av mange gener i et enkelt eksperiment. En pålitelig avlesning for endret transkripsjonsaktivitet er imidlertid nødvendig.
Her beskriver vi bruken av en dual-luciferase-basert transkripsjonsreporteranalyse og arrayed lentivirale biblioteker for å identifisere proteiner som regulerer transkripsjonsfaktorer i kreftceller. I denne analysen er shRNAs som retter seg mot kreftrelaterte gener levert til pattedyrkreftceller via lentiviral transduksjon og celler valgt for stabil integrasjon ved hjelp av puromycin. Cellene er neste transfected med en reporter konstruksjon som uttrykker firefly luciferase drevet av en arrangør som er spesifikk for transkripsjonsfaktoren som undersøkes og en kontrollkonstruksjon som uttrykker Renilla luciferase fra en konstitutivt aktiv arrangør som ikke reagerer på transkripsjonsfaktoren som undersøkes. Vi demonstrerer denne tilnærmingen med en konseptbevisskjerm for regulatorer av YAP og TAZ, de kritiske nedstrømseffektorene av Hippo-banen8,,10,11. Unormal aktivitet av YAP og TAZ fremmer flere trinn av metastatisk kaskade11 og observeres i mange kreftformer11,12,13. Men hvordan YAP og TAZ blir avvikende aktivert i noen kreftceller er ennå ikke fullt ut forstått. YAP og TAZ binder ikke DNA, men rekrutteres i stedet til arrangører av andre transkripsjonsfaktorer. Medlemmer av TEA-domenet (TEAD) familie av transkripsjonsfaktorer er de viktigste bindende partnerne for YAP og TAZ, og er kritiske for de fleste YAP- og TAZ-avhengige funksjoner. Vår reporter konstruere uttrykker firefly luciferase fra en YAP / TAZ-TEAD-responsive arrangør og tidligere studier har vist at det trofast oppdager endringer i YAP-TEAD og TAZ-TEAD transkripsjonsaktivitet2,14,15.
Vår tilnærming er rask, middels gjennomstrømning, og krever ikke screeningfasiliteter, automatiserte roboter eller dyp sekvensering av samlede biblioteker. Kostnadene er relativt lave og det er mange kommersielt tilgjengelige biblioteker å velge mellom. Nødvendig utstyr og reagenser er også relativt standard i de fleste laboratorier. Den kan brukes til å screene for regulatorer av nesten enhver transkripsjonsfaktor hvis en luciferase-basert reporter eksisterer eller genereres. Vi bruker denne tilnærmingen til å screene shRNAs i kreftceller, men enhver cellelinje som kan transfected med rimelig effektivitet kan brukes med alle typer arrayed bibliotek.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.0 ml 96-well deep well polypropylene plate</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1896-2000</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin - 2.50%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090-046</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well flat bottom white assay plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3922</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin - 100 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-10835242001-EA</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto-tryptone - powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>95039</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual-luciferase reporter assay system, which include LAR II reagent (reagent A), Stop &#38; Glo substrate (reagent B substrate) and Stop &#38; Glo buffer (reagent B buffer) - Kit</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E1960</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline w/o calcium, magnesium and phenol red - 9.6 g/L</td>
			<td>Himedia</td>
			<td>TS1006</td>
			<td>For PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA - 0.5 M</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-406</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol - 100%</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97068-085</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexadimethrine bromide (Polybrene) - 8 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-H9268</td>
			<td>For virus infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone DMEM/High glucose - 4 mM L-Glutamine; 4500 mg/L glucose; sodium pyruvate</td>
			<td>GE Healthcare life sciences</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I3-P/i3 Multi-Mode Microplate/EA</td>
			<td>Molecular devices</td>
			<td></td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine - 200 mM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 (Transfection Reagent 2) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Biology Water - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>02-0201-0500</td>
			<td>For dilution of shRNA vector for virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl - powder</td>
			<td>BDH</td>
			<td>BDH9286</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
			<td>For measuring vector DNA concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM (Transfection Buffer) - 100%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985-062</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin - 10,000 Unit/ml (Penicillin); 10,000 &#181;g/ml (Streptomycin)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PureLink Quick Plasmid Miniprep Kit - Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>K210010</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin - 2.5 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-P7255</td>
			<td>For antibiotic selection after infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC20 automated cell counter</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td>For cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE 9 DNA transfection reagent (Transfection Reagent 1) - 100%</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6365787001</td>
			<td>For virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract - powder</td>
			<td>VWR</td>
			<td>J850</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P3000 (Transfection Reagent 3) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter

Transkripsjonsfaktorer kan endre uttrykket for en rekke målgener som påvirker en rekke nedstrømsprosesser, noe som gjør dem gode mål for anti-kreftterapi. Direkte målretting av transkripsjonsfaktorer er imidlertid ofte vanskelig og kan forårsake uønskede bivirkninger hvis transkripsjonsfaktoren er nødvendig i ett eller flere voksne vev. Identifisere oppstrøms regulatorer som avvikende aktivere transkripsjon faktorer i kreftceller tilbyr et mer gjennomførbart alternativ, spesielt hvis disse proteinene er lett å narkotika. Her beskriver vi en protokoll som kan brukes til å kombinere arrayed medium-scale lentiviral biblioteker og en dual-luciferase-basert transkripsjonsreporter analyse for å identifisere nye regulatorer av transkripsjonsfaktorer i kreftceller. Vår tilnærming tilbyr en rask, enkel og rimelig måte å teste hundrevis av gener i et enkelt eksperiment. For å demonstrere bruken av denne tilnærmingen utførte vi en skjerm av et arrayed lentiviral RNAi-bibliotek som inneholder flere regulatorer av Ja-assosiert protein (YAP) og transkripsjonskoaktivator med PDZ-bindende motiv (TAZ), to transkripsjonelle koaktivatorer som er de nedstrøms effektorene på Hippo-banen. Denne tilnærmingen kan imidlertid endres til skjerm for regulatorer av nesten alle transkripsjonsfaktorer eller medfaktor, og kan også brukes til å screene CRISPR/CAS9,cDNA eller ORF-biblioteker.

Vår YAP/TAZ-TEAD reporter konstruksjon (pGL3-5xMCAT (SV)-492,14,15) inneholder en minimal SV-49 arrangør med 5 repetisjoner av den kanoniske TEAD binding element (MCAT)15 kjører firefly luciferase genet ( Figur1). Det er co-transfected i celler sammen med PRL-TK kontroll vektor (Promega), som uttrykker Renilla luciferase fra den ko...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

For å identifisere nye regulatorer av transkripsjonsfaktorer utviklet vi en tilnærming til skjermarrayed lentivirale eller retrovirale RNAi-biblioteker ved hjelp av en dual-luciferase-basert transkripsjonsreporteranalyse. Denne tilnærmingen tilbyr en rask og relativt billig måte å screene hundrevis av kandidater i et enkelt eksperiment.

Identifikasjon av transkripsjonsfaktorregulatorer ved hjelp av middels gjennomstrømningsscreening av arrayed biblioteker og en Dual-Luciferase-basert reporter

Transcription factors can alter the expression of numerous target genes that influence a variety of downstream processes making them good targets for ...

Denne protokollen kan brukes til å screene arrayed lentiviral eller retroviral analyse biblioteker for å identifisere nye regulatorer av transkripsjonsfaktorer i kreftceller. De viktigste fordelene med denne teknikken er at den er rask, middels gjennomstrømning og billig, og at den bruker utstyr og reagenser som er allment tilgjengelige for de fleste etterforskere. For å utvide og rense hver lentiviral vektor i biblioteket, legg først til 1,3 milliliter Luria kjøttkraft supplert med 100 mikrogram per milliliter ampicillin til hver brønn av en 96-brønn dyp brønnplate.Inokuler hver brønn med to mikroliter glyserol lager for en overnatting inkubasjon ved 37 grader Celsius og 225 omdreininger per minutt. Neste dag, overføre hver bakteriekultur til individuelle 1,5 milliliter mikrocentrifuge rør for sentrifugering. Rens hver vektor med et passende bakteriell miniprep-sett i henhold til produsentens instruksjoner.For hver vektor i det tilberedte biblioteket, frø en brønn av en 24-brønns plate med en ganger 10 til den femte 293FT celler og inkubere cellene ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid i 24 timer. For å forberede en transfeksjonsblanding som vil bli satt opp for hver vektor i biblioteket, må du først elute hver lentiviral vektor til en endelig konsentrasjon på 50 nanogram per mikroliter med kjernefritt vann. Overfør fem mikroliter av hver fortynning til individuelle brønner på en 96-brønns PCR-plate.Lag en transfection super mix ved å blande 1,25 mikroliter ganger x transfection reagens en med 23,75 mikroliter ganger x av forhåndsoppvarmet transfection buffer. Inkuber transfection super mix ved romtemperatur i fem minutter. Tilsett deretter 125 nanogram ganger x psPAX2 og 125 nanograms ganger x av VSVG til superblandingen med mild pipettering.Umiddelbart aliquot super blandingen i hvert rør av en PCR stripe og bruke en flerkanals pipette for å overføre 25 mikroliter av blandingen til hver brønn av fortynnet viral vektor. Etter en 20 minutters inkubasjon ved romtemperatur, bruk en flerkanals pipette til å overføre 30 mikroliter av hver transfeksjonsblanding fra hver brønn til en tilsvarende brønn på 293FT-celler i den tidligere tilberedte 24-brønnplaten. Inkuber cellene i 24 timer før du erstatter mediet i hver brønn med 500 mikroliter friskt komplett vekstmedium for ytterligere 24-timers inkubasjon i cellekulturinkubatoren.Neste dag, bruk en flerkanals pipette for å samle viral supernatant fra hver brønn og aliquot 220 mikroliter av hver supernatant i to brønner i en ny 96-brønns plate for å generere en kledd viral supernatant plate. For å forberede A375-celler for infeksjon, frø en ganger 10 til de femte cellene i en 24-brønns plate i 0,5 milliliter med komplett vekstmedium per brønn for hver viral vektor i biblioteket. Inkluder en ekstra brønn som ikke vil bli smittet for å tjene som en kontroll for narkotikavalg.Etter en 24-timers inkubasjon i cellekulturinkubatoren tiner du den frosne lentivirale supernatanten satt til romtemperatur før du erstatter vekstmediet fra hver brønn av den tilberedte cellekulturplaten med 200 mikroliter vekstmedium supplert med 20 mikrogram per milliliter polybryne. Bruk en flerkanals pipette til å overføre 200 mikroliter virale supernatant fra hver 96-brønn til hver brønn av 24-brønnplaten. Returner cellene til cellekulturinkubatoren i 24 til 48 timer.På slutten av inkubasjonen erstatter du mediet i hver brønn med 500 mikroliter vekstmedium supplert med puromycin og returnerer cellene til cellekulturinkubatoren i ytterligere 48 timer. Etter 48-timers puromycinvalg, sorter cellene i tre eller fire grupper slik at alle brønnene i en enkelt gruppe har en lignende celletetthet og legger til 200 mikroliter trypsin-EDTA til en representativ brønn fra hver gruppe for en fem minutters inkubasjon ved 37 grader Celsius. Når cellene har løsnet, nøytralisere trypsin med 400 mikroliter vekstmedium supplert med puromycin og telle antall celler fra hver trypsinisert godt.Fortynn hver celle suspensjon til en to ganger 10 til femte celler per milliliter konsentrasjon med vekstmedium supplert med puromycin og frø 500 mikroliter celler fra hver brønn inn i samme brønnposisjon i en ny 24-brønnplate. Etter å ha brukt tellingene fra hver representant godt til å estimere cellenummeret i hver gjenværende godt i hver gruppe, legg til riktig volum trypsin-EDTA til hver brønn for å oppnå en gang 10 til de sjette cellene per milliliter konsentrasjon. Under trypsiniseringen bruker du en flerkanals pipette til å tilsette 400 mikroliter vekstmedium supplert med puromycin til de aktuelle tilsvarende brønnene i den nye 24-brønnplaten.Når cellene har løsnet, bland forsiktig innholdet i hver brønn og overfør 100 mikroliter av hver cellefjæring til riktig tilsvarende brønn i den nye 24-brønnplaten. Deretter returnerer cellene til cellekulturinkubatoren i 24 timer. For å transfisere cellene med dual-luciferase reporter konstruerer, forberede transfection fortynning blandingen som angitt i tabellen.For å forberede reporterfortynningsblandingen, bland volumene til hver reagens multiplisert med det totale antall transfections pluss flere ekstra volumer. Bland deretter transfection fortynningsblandingen med reporterfortynningsblandingen og inkubere den resulterende løsningen ved romtemperatur i 15 minutter for å produsere transfeksjonsblandingen. Under inkubasjonen skyll hver brønn av cellekulturplaten med 250 mikroliter PBS og tilsett 447 mikroliter med friskt komplett vekstmedium til hver brønn.Bruk deretter en flerkanals pipette til å distribuere 53 mikroliter transinfeksjonsblanding til hver brønn av cellekulturplaten. Plasser platen på 37 grader Celsius og 5% karbondioksid i 24 timer. For å måle luciferaseaktiviteten, fortynne 5X passiv lysisbuffer fra luciferase aktivitetssettet ved en en-til-fem fortynning med deionisert vann og tine de nødvendige volumene av reagens A og reagens B buffer fra settet.Når reagensene er klare, skift supernatanten i hver brønn med 75 mikroliter passiv lysisbuffer og inkuber platen i 30 minutter ved romtemperatur med sporadisk risting. Under inkubasjonen fortynnes 50X reagens B-substratet fra settet til en en-til-50 konsentrasjon med tint reagens B-buffer. På slutten av inkubasjonen legger du til 30 mikroliter passiv lysisbuffer til fire tomme kontrollbrønner og overfører 30 mikroliter lysate fra hver brønn til dupliserte brønner av en 96-brønns flat bunnhvit analyseplate.Når alt lysatet er belagt, bruk en flerkanals pipette til å tilsette 50 mikroliter reagens A til hver brønn og les firefly luciferasesignalet med en plateleser. Bruk deretter en flerkanals pipette til å legge til 50 mikroliter reagens B til hver brønn og les Renilla luciferasesignalet med en plateleser. Som forventet øker YAP2SA firefly luciferase aktivitet, men ikke Renilla luciferase aktivitet i forhold til kontroll vektor.I motsetning øker YAP2SA S94A ikke firefly luciferase aktivitet. Viktigere, YAP2SA endrer ikke aktiviteten til en minimal promotor konstruksjon som mangler MCAT TEAD bindeelementer. I celler som er transfisert med YAP-TAZ-TEAD reporter konstruere, tandem YAP og TAZ korte hårnåler betydelig redusert firefly luciferase nivåer, men kontrollen kort hårnål ikke-målretting kontroll ikke.I motsetning, i celler transfisert med minimal reporter konstruere, YAP-TAZ kort hårnål RNA endrer ikke betydelig firefly luciferase nivåer. Renilla-signalet i hver brønn er heller ikke signifikant endret av den korte hårnålen som ikke er rettet mot eller YAP-TAZ kort hårnål RNA. Som forventet reduserer kort hårnål RNA-er rettet mot YAP- og TAZ-, SARC- eller PI3-kinase YAP-TAZ-TEAD-aktivitet betydelig.Kort hårnål RNA-er rettet mot ATM, CDH1, CSK, ERBB2 og gelsolin økte hver normaliserte firefly luciferasenivåer i samsvar med publiserte studier som viste at disse proteinene var YAP og/ eller TAZ. Til tross for etablerte roller for ATR, CCNE2 og ERBB4 i andre celletyper, endrer kort hårnål RNA-er rettet mot disse genene ikke signifikant normaliserte firefly luciferasenivåer i A375-celler. Etter denne skjermen bør identifisering av regulatorer valideres ved hjelp av andre avlesninger for deres transkripsjonsfaktoraktivitet.Effektiv knockdown av den identifiserte regulatoren av analysen bør også bekreftes. Husk å være forsiktig og følge sikkerhetsretningslinjer når du arbeider med smittsomme lentivirus, spesielt hvis virusene er menneskelige smittsomme.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Seksjon Mammary Gland Whole Mount for Lesion Identification

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Flow Cytometry-based Drug Screening System for the Identification of Small Molecules That Promote Cellular Differentiation of Glioblastoma Stem Cells

Flow cytometri-baserte narkotika Screening System for identifisering av små molekyler som fremmer differensiering av glioblastom stilk celler

Glioblastoma (GBM) is the most common and most lethal primary brain tumor in adults, causing roughly 14,000 deaths each year in the U.S. alone. Median ...

Live Cell Imaging of the TGF-	&beta;/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live Cell Imaging of the TGF-	ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live celle avbildning av den TGF-β/Smad3 signalnettverk Pathway In Vitro og i Vivo bruker en Adenovirus Reporter System

Transforming Growth Factor &#946; (TGF-&#946;) signaling regulates many important functions required for cellular homeostasis and is commonly found ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Analyse av kreft cellen invasjon og anti-metastatisk narkotikarelaterte Screening bruker Hydrogel mikro-kammer Array (HMCA)-baserte plater

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

Isolering av exosome-beriket ekstracellulære vesikler som bærer granulocytt-makrofag kolonistimulerende faktor fra embryonale stamceller

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

Etablering og karakterisering av små tarm Nevroendokrine tumor Spheroids

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Mapping the Structure-Function Relationships of Disordered Oncogenic Transcription Factors Using Transcriptomic Analysis

Kartlegging av strukturfunksjonsrelasjoner av uordnede onkogene transkripsjonsfaktorer ved hjelp av transkripsjonsanalyse

Many cancers are characterized by chromosomal translocations which result in the expression of oncogenic fusion transcription factors. Typically, these ...

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Identifisering av EGFR- og RAS-hemmere ved bruk av Caenorhabditis elegans

The changes in the plasma membrane localization of the epidermal growth factor receptor (EGFR) and its downstream effector RAS have been implicated in ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Oppdagelse av metastatiske regulatorer ved hjelp av en rask og kvantitativ intravital chick chorioallantoic membranmodell

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

En arbeidsflyt for rask screening for å identifisere potensiell kombinasjonsterapi for GBM ved bruk av pasientavledede gliomastammeceller

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...