Name: identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter
Uploaded: 2020-03-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

Nos gustaría dar las gracias a Emily Norton y Mikaelan Cucciarre-Stuligross por ayudar en la preparación de vectores de ARNH. Este trabajo fue apoyado en parte por una beca Susan G. Komen Career Catalyst que otorgó a J.M.L. (#CCR17477184).

NOTA: En la Figura 1se muestra un resumen esquemático de este protocolo.
1. Preparación de la biblioteca de vectores Lentivirales
NOTA: La pantalla demostrada utilizaba una biblioteca de shRNA en matriz comprada como acciones de glicerol en placas de 96 pocillos, pero las bibliotecas también se pueden ensamblar manualmente en función de una lista de candidatos. Los controles adecuados deben ser considerados e incluidos en cualquier bi...

En este estudio, demostramos un enfoque para la detección de rendimiento medio de bibliotecas virales en conjunto con un ensayo de reportero transcripcional basado en doble luciferasa que se puede utilizar para identificar y probar nuevos reguladores de factores de transcripción. Es fundamental caracterizar y optimizar el sistema de reportero para cada línea celular antes de cualquier pantalla. Se deben realizar experimentos para confirmar que el reportero responde a la actividad alterada del factor de transcripción ...

El propósito de este ensayo es utilizar bibliotecas virales para identificar reguladores de los factores de transcripción de una manera relativamente rápida y económica. La actividad transcripcional aberrante se asocia con el cáncer y la metástasis1,2,3,4,5,6, por lo que la orientación a los factores de transcripción en las células cancerosas es un enfoque terapéutico prometedor. Sin embargo, los factores de transcripción son a menudo difíciles de atacar farmacológicamente7 y muchos son necesarios para la función celular normal en los tejidos adultos8,9,10. Dirigirse a las vías asociadas al cáncer que activan aberrantemente los factores de transcripción para impulsar la enfermedad es un enfoque más factible con el potencial de tener efectos secundarios menos graves. La disponibilidad comercial de las bibliotecas arrayed lentiviral y retroviral RNAi, CRISPR/CAS9, cDNA o ORF permite a los investigadores probar la importancia de numerosos genes en un solo experimento. Sin embargo, se requiere una lectura confiable para la actividad transcripcional alterada.
Aquí, describimos el uso de un ensayo de reportero transcripcional basado en doble luciferasa y bibliotecas lentivirales arrayed para identificar proteínas que regulan los factores de transcripción en las células cancerosas. En este ensayo, los shRNA que se dirigen a los genes asociados al cáncer se entregan a las células cancerosas de los mamíferos a través de la transducción lentiviral y las células se seleccionan para una integración estable mediante puromicina. Las células se transtroculan a continuación con una construcción de reportero que expresa luciferasa de luciérnaga impulsada por un promotor específico para el factor de transcripción que se está investigando y una construcción de control que expresa Renilla luciferasse de un promotor constitutivamente activo que no responde al factor de transcripción que se está investigando. Demostramos este enfoque con una pantalla de prueba de concepto para reguladores de YAP y TAZ, los efectores descendentes críticos de la vía Hippo8,10,11. La actividad anormal de YAP y TAZ promueve varios pasos de la cascada metastásica11 y se observa en muchos cánceres11,,12,13. Sin embargo, aún no se entiende completamente cómo YAP y TAZ se activan aberrantemente en algunas células cancerosas. YAP y TAZ no unen EL ADN, sino que son reclutados a promotores por otros factores de transcripción. Los miembros de la familia de factores de transcripción del dominio TEA (TEAD) son los principales socios vinculantes para YAP y TAZ, y son críticos para la mayoría de las funciones dependientes de YAP y TAZ. Nuestra construcción de reportero expresa la luciferasa de la luciosel de un promotor yAP/TAZ-TEAD-responsive y estudios anteriores han demostrado que detecta fielmente los cambios en la actividad transcripcional YAP-TEAD y TAZ-TEAD2,14,15.
Nuestro enfoque es rápido, de rendimiento medio, y no requiere instalaciones de cribado, robots automatizados o secuenciación profunda de bibliotecas agrupadas. Los costos son relativamente bajos y hay numerosas bibliotecas disponibles comercialmente para elegir. Los equipos y reactivos requeridos también son relativamente estándar en la mayoría de los laboratorios. Se puede utilizar para detectar reguladores de prácticamente cualquier factor de transcripción si existe o se genera un reportero basado en luciferasa. Utilizamos este enfoque para examinar los shRNA en las células cancerosas, pero cualquier línea celular que pueda ser transllenada con una eficiencia razonable podría ser utilizada con cualquier tipo de biblioteca de matriz.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.0 ml 96-well deep well polypropylene plate</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1896-2000</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin - 2.50%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090-046</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well flat bottom white assay plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3922</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin - 100 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-10835242001-EA</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto-tryptone - powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>95039</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual-luciferase reporter assay system, which include LAR II reagent (reagent A), Stop &#38; Glo substrate (reagent B substrate) and Stop &#38; Glo buffer (reagent B buffer) - Kit</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E1960</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline w/o calcium, magnesium and phenol red - 9.6 g/L</td>
			<td>Himedia</td>
			<td>TS1006</td>
			<td>For PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA - 0.5 M</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-406</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol - 100%</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97068-085</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexadimethrine bromide (Polybrene) - 8 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-H9268</td>
			<td>For virus infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone DMEM/High glucose - 4 mM L-Glutamine; 4500 mg/L glucose; sodium pyruvate</td>
			<td>GE Healthcare life sciences</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I3-P/i3 Multi-Mode Microplate/EA</td>
			<td>Molecular devices</td>
			<td></td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine - 200 mM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 (Transfection Reagent 2) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Biology Water - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>02-0201-0500</td>
			<td>For dilution of shRNA vector for virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl - powder</td>
			<td>BDH</td>
			<td>BDH9286</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
			<td>For measuring vector DNA concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM (Transfection Buffer) - 100%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985-062</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin - 10,000 Unit/ml (Penicillin); 10,000 &#181;g/ml (Streptomycin)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PureLink Quick Plasmid Miniprep Kit - Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>K210010</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin - 2.5 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-P7255</td>
			<td>For antibiotic selection after infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC20 automated cell counter</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td>For cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE 9 DNA transfection reagent (Transfection Reagent 1) - 100%</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6365787001</td>
			<td>For virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract - powder</td>
			<td>VWR</td>
			<td>J850</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P3000 (Transfection Reagent 3) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter

Los factores de transcripción pueden alterar la expresión de numerosos genes diana que influyen en una variedad de procesos posteriores, por lo que son buenos objetivos para las terapias contra el cáncer. Sin embargo, apuntar directamente a los factores de transcripción es a menudo difícil y puede causar efectos secundarios adversos si el factor de transcripción es necesario en uno o más tejidos adultos. La identificación de reguladores ascendentes que activan aberrantemente los factores de transcripción en las células cancerosas ofrece una alternativa más factible, especialmente si estas proteínas son fáciles de drogar. Aquí, describimos un protocolo que se puede utilizar para combinar bibliotecas lentivirales a escala media y un ensayo de reportero transcripcional basado en doble luciferasa para identificar nuevos reguladores de factores de transcripción en las células cancerosas. Nuestro enfoque ofrece una manera rápida, fácil y económica de probar cientos de genes en un solo experimento. Para demostrar el uso de este enfoque, realizamos una pantalla de una biblioteca de ARN lentiviral esampliatizada que contiene varios reguladores de proteína asociada al Sí (YAP) y coactivadora transcripcional con motivo de unión a PDZ (TAZ), dos coactivadores transcripcionales que son los efectores descendentes de la vía Hippo. Sin embargo, este enfoque podría modificarse para detectar a los reguladores de prácticamente cualquier factor de transcripción o cofactor y también podría utilizarse para examinar las bibliotecas CRISPR/CAS9, cDNA u ORF.

Nuestra construcción de reportero YAP/TAZ-TEAD (pGL3-5xMCAT (SV)-492,14,15) contiene un promotor SV-49 mínimo con 5 repeticiones del elemento canónico TEAD binding element (MCAT)15 conduciendo el gen de la luciosa luciérnaga(Figura 1). Se co-tranfectó en células junto con el vector de control PRL-TK (Promega), que expresa Renilla</em...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

Para identificar nuevos reguladores de los factores de transcripción, desarrollamos un enfoque para las bibliotecas de ARN lentivirales o retrovirales arrayed utilizando un ensayo de reportero transcripcional basado en doble luciferasa. Este enfoque ofrece una forma rápida y relativamente económica de examinar a cientos de candidatos en un solo experimento.

Identificación de reguladores de factores de transcripción mediante la proyección de rendimiento medio de bibliotecas de matriz y un reportero basado en la doble luciferasa

Transcription factors can alter the expression of numerous target genes that influence a variety of downstream processes making them good targets for ...

Este protocolo se puede utilizar para examinar bibliotecas de ensayos lentivirales o retrovirales para identificar nuevos reguladores de factores de transcripción en células cancerosas. Las principales ventajas de esta técnica son que es rápida, de rendimiento medio y económica, y que utiliza equipos y reactivos comúnmente accesibles para la mayoría de los investigadores. Para ampliar y purificar cada vector lentiviral de la biblioteca, primero agregue 1,3 mililitros de caldo de Luria complementados con 100 microgramos por mililitro de ampicilina a cada pozo de un pozo de 96 pozos de profundidad.Inocular cada pozo con dos microlitros de caldo de glicerol para una incubación nocturna a 37 grados celsius y 225 revoluciones por minuto. Al día siguiente, transfiera cada cultivo de bacterias a tubos individuales de microcentrífuga de 1,5 mililitros para centrifugación. Purifique cada vector con un kit de miniprep bacteriano adecuado de acuerdo con las instrucciones del fabricante.Para cada vector de la biblioteca preparada, sembra un pozo de una placa de 24 pozos con una por 10 a la quinta célula 293FT e incuba las células a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono durante 24 horas. Para preparar una mezcla de transfección que se configurará para cada vector en la biblioteca, primero ele cada vector lentiviral a una concentración final de 50 nanogramos por microlitro con agua libre de nucleasas. Transfiera cinco microlitros de cada dilución a pozos individuales de una placa PCR de 96 pocillos.Haga una supermezcla de transfección mezclando 1,25 microlitros veces x de reactivo de transfección uno con 23,75 microlitros veces x de tampón de transfección precalentado. Incubar la súper mezcla de transfección a temperatura ambiente durante cinco minutos. A continuación, añadir 125 nanogramos por x de psPAX2 y 125 nanogramos por x de VSVG a la súper mezcla con pipeteo suave.Inmediatamente aliquot la súper mezcla en cada tubo de una tira de PCR y utilizar una pipeta multicanal para transferir 25 microlitros de la mezcla en cada pozo de vector viral diluido. Después de una incubación de 20 minutos a temperatura ambiente, utilice una pipeta multicanal para transferir 30 microlitros de cada mezcla de transfección de cada pozo a un pozo correspondiente de 293FT células en la placa de 24 pocillos previamente preparada. Incubar las células durante 24 horas antes de reemplazar el medio en cada pozo con 500 microlitros de medio de crecimiento completo fresco para otra incubación de 24 horas en la incubadora de cultivo celular.Al día siguiente, utilice una pipeta multicanal para recoger el sobrenadante viral de cada pozo y aliquot 220 microlitros de cada sobrenadante en dos pozos en una nueva placa de 96 pozos para generar una placa de sobrenadante viral. Para preparar las células A375 para la infección, se siembra una vez 10 a las quintas células en una placa de 24 pozos en 0,5 mililitros de medio de crecimiento completo por pozo para cada vector viral en la biblioteca. Incluya un pozo extra que no esté infectado para servir como control para la selección de drogas.Después de una incubación de 24 horas en la incubadora de cultivo celular, descongele el sobrenadante lentiviral de matriz congelada establecido a temperatura ambiente antes de reemplazar el medio de crecimiento de cada pozo de la placa de cultivo celular preparada por 200 microlitros de medio de crecimiento complementados con 20 microgramos por mililitro de polibreno. Usando una pipeta multicanal, transfiera 200 microlitros de sobrenadantes virales de cada pozo de 96 a cada pozo de la placa de 24 pozos. Devuelva las células a la incubadora de cultivo celular durante 24 a 48 horas.Al final de la incubación, reemplace el medio en cada pozo por 500 microlitros de medio de crecimiento complementados con puromicina y devuelva las células a la incubadora de cultivo celular durante 48 horas adicionales. Después de la selección de puromicina de 48 horas, ordene las células en tres o cuatro grupos de modo que todos los pozos de un solo grupo tengan una densidad celular similar y agreguen 200 microlitros de trippsina-EDTA a un pozo representativo de cada grupo para una incubación de cinco minutos a 37 grados centígrados. Una vez que las células se han desprendido, neutralizar la tripina con 400 microlitros de medio de crecimiento complementados con puromicina y contar el número de células de cada pozo tripinsario.Diluir cada suspensión celular a un dos veces 10 a la quinta concentración de células por mililitro con medio de crecimiento complementado con puromicina y semilla 500 microlitros de células de cada pozo en la misma posición de pozo en una nueva placa de 24 pozos. Después de usar los recuentos de cada pozo representativo para estimar el número de celda en cada pozo restante en cada grupo, agregue el volumen adecuado de trippsina-EDTA a cada pozo para lograr una concentración de una por 10 a las sextas células por mililitro. Durante la tripsinación, utilice una pipeta multicanal para añadir 400 microlitros de medio de crecimiento complementados con puromicina a los pozos correspondientes apropiados en la nueva placa de 24 pozos.Una vez que las células se hayan desprendido, mezcle suavemente el contenido de cada pozo y transfiera 100 microlitros de cada suspensión celular al pozo correspondiente apropiado en la nueva placa de 24 pozos. Luego devuelva las células a la incubadora de cultivo celular durante 24 horas. Para transfecar las células con las construcciones del reportero de doble-luciferasa, prepare la mezcla de dilución de transfección como se indica en la tabla.Para preparar la mezcla de dilución del reportero, mezcle los volúmenes de cada reactivo multiplicados por el número total de transfeccións más varios volúmenes adicionales. A continuación, mezcle la mezcla de dilución de transfección con la mezcla de dilución del reportero e incubar la solución resultante a temperatura ambiente durante 15 minutos para producir la mezcla de transfección. Durante la incubación, enjuague cada pocóculo de la placa de cultivo celular con 250 microlitros de PBS y agregue 447 microlitros de medio de crecimiento completo fresco a cada pocóyo.A continuación, utilice una pipeta multicanal para distribuir 53 microlitros de mezcla de transfección a cada pocero de la placa de cultivo celular. Coloque la placa a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono durante 24 horas. Para medir la actividad de la luciferasa, diluir el tampón de lisis pasiva 5X del kit de actividad de la luciferasa en una dilución de uno a cinco con agua desionizada y descongelar los volúmenes necesarios de reactivo A y tampón de reactivo B del kit.Cuando los reactivos estén listos, sustituya el sobrenadante de cada pozo por 75 microlitros de tampón de lysis pasiva e incubar la placa durante 30 minutos a temperatura ambiente con agitación ocasional. Durante la incubación, diluya el sustrato del reactivo B 50X del kit a una concentración de uno a 50 con tampón de reactivo B descongelado. Al final de la incubación, agregue 30 microlitros de tampón de lysis pasiva a cuatro pozos de control en blanco y transfiera 30 microlitros de allicades de cada pozo a pozos duplicados de una placa de ensayo blanco de fondo plano de 96 pocillos.Cuando todo el lisosato haya sido chapado, utilice una pipeta multicanal para añadir 50 microlitros de reactivo A a cada pozo y lea la señal luciferasa con un lector de placas. A continuación, utilice una pipeta multicanal para añadir 50 microlitros de reactivo B a cada pozo y lea la señal de Renilla luciferase con un lector de placas. Como era de esperar, YAP2SA aumenta la actividad de la luciferasa de la luciérnculo de fuego, pero no la actividad de la Luciferasa renilla en comparación con el vector de control.Por el contrario, YAP2SA S94A no aumenta la actividad de la luciosa de luciélula. Es importante destacar que YAP2SA no altera la actividad de una construcción promotor mínima que carece de los elementos de enlace MCAT TEAD. En las células transfectadas con la construcción del reportero YAP-TAZ-TEAD, las horquillas cortas YAP y TAZ en tándem redujeron significativamente los niveles de luciferasa de luciélula de fuego, pero el control de la horquilla corta de control no lo hace.Por el contrario, en las células transfectantes con la construcción mínima del reportero, el ARN de horquilla corta YAP-TAZ no altera significativamente los niveles de luciferasa de luciosa. La señal Renilla en cada pozo tampoco se ve alterada significativamente por el control corto de horquillas sin orientación o el ARN de horquilla corta YAP-TAZ. Como era de esperar, los ARN cortos dirigidos a YAP y TAZ, SARC o PI3 quinasa reducen significativamente la actividad de YAP-TAZ-TEAD.Los ARN de horquilla corta dirigidos a ATM, CDH1, CSK, ERBB2 y gelsolina aumentaron los niveles normalizados de luciferasa de luciérnqueo de forma coherente con los estudios publicados que muestran que estas proteínas eran YAP y/o TAZ. A pesar de los roles establecidos para ATR, CCNE2 y ERBB4 en otros tipos de células, los ARN cortos dirigidos a estos genes no cambian significativamente los niveles normalizados de luciferasa de luciosa en las células A375. Después de esta pantalla, la identificación de los reguladores debe ser validada usando otras lecturas para su actividad de factor de transcripción.También debe confirmarse la eliminación efectiva del regulador identificado por el ensayo. Recuerde tener cuidado y seguir las pautas de seguridad cuando trabaje con lentivirus infecciosos, especialmente si los virus son infecciosos humanos.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Seccionando los Montes Enteros de las Glándulas Mamarias para la Identificación de Lesiones

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Investigación

Investigación sobre el cáncer

Flow Cytometry-based Drug Screening System for the Identification of Small Molecules That Promote Cellular Differentiation of Glioblastoma Stem Cells

Detección sistema para la identificación de pequeñas moléculas que promueven la diferenciación celular de células de Glioblastoma de drogas basados en citometría flujo

Glioblastoma (GBM) is the most common and most lethal primary brain tumor in adults, causing roughly 14,000 deaths each year in the U.S. alone. Median ...

Live Cell Imaging of the TGF-	&beta;/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live Cell Imaging of the TGF-	ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Proyección de imagen de células del TGF-β/Smad3 señalización vía In Vitro y In Vivo utilizando un Adenovirus reportero sistema en vivo

Transforming Growth Factor &#946; (TGF-&#946;) signaling regulates many important functions required for cellular homeostasis and is commonly found ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Análisis de invasión de células de cáncer y uso de hidrogel Micro-cámara matriz (HMCA) de detección de drogas anti-metastásico-basado en placas

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

Aislamiento de vesículas extracelulares enriquecidas con exosomas que transportan factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos a partir de células madre embrionarias

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

Establecimiento y caracterización de esferoides de tumores neuroendocrinos de intestino delgado

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Mapping the Structure-Function Relationships of Disordered Oncogenic Transcription Factors Using Transcriptomic Analysis

Mapeo de las relaciones estructura-función de los factores de transcripción oncogénicos desordenados utilizando el análisis transcriptómico

Many cancers are characterized by chromosomal translocations which result in the expression of oncogenic fusion transcription factors. Typically, these ...

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Identificación de inhibidores de EGFR y RAS mediante Caenorhabditis elegans

The changes in the plasma membrane localization of the epidermal growth factor receptor (EGFR) and its downstream effector RAS have been implicated in ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Descubrimiento de reguladores metastásicos utilizando un modelo de membrana corioalantoica intravital de pollitos rápido y cuantitativo

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

Un flujo de trabajo de detección rápido para identificar una posible terapia combinada para GBM utilizando células madre de glioma derivadas del paciente

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...