Name: identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter
Uploaded: 2020-03-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

Vi vill tacka Emily Norton och Mikaelan Cucciarre-Stuligross för att de hjälper till vid beredningen av shRNA-vektorer. Detta arbete stöddes delvis av en Susan G. Komen Career Catalyst Grant som tilldelas J.M.L. (#CCR17477184).

OBS: En schematisk sammanfattning av detta protokoll visas i figur 1.
1. Lentiviral vektorbiblioteksberedning
Obs: Den demonstrerade skärmen används en arrayed shRNA bibliotek köpt som glycerol lager i 96-väl plattor, men bibliotek kan också monteras manuellt baserat på en lista över kandidater. Lämpliga kontroller bör övervägas och ingå i alla bibliotek. Detta inkluderar en icke-inriktning kontroll shRNA (shNTC), en kontroll ...

I denna studie visar vi en metod för medium-genomströmning screening av arrayed viral bibliotek i kombination med en dual-luciferase-baserade transkriptionella reporter analys som kan användas för att identifiera och testa nya regulatorer av transkription faktorer. Det är viktigt att karakterisera och optimera reportersystemet för varje cellinje före en skärm. Experiment bör göras för att bekräfta att reportern är lyhörd för förändrad aktivitet av transkriptionsfaktorn som undersöks och omfattningen av ...

Syftet med denna analys är att använda virala bibliotek för att identifiera regulatorer av transkriptionsfaktorer på ett relativt snabbt och billigt sätt. Avvikande transkriptionell aktivitet är associerad med cancer och metastasering1,2,3,4,5,6, så inriktning transkription faktorer i cancerceller är en lovande terapeutisk metod. Transkriptionsfaktorer är dock ofta svåra att rikta farmakologiskt7 och många krävs för normal cellulär funktion i vuxna vävnader8,,9,10. Inriktning på cancer-associerade vägar som aberrantly aktivera transkription faktorer för att driva sjukdom är en mer genomförbar metod med potential att ha mindre allvarliga biverkningar. Den kommersiella tillgängligheten av arrayed lentiviral och retroviral RNAi, CRISPR/CAS9, cDNA, eller ORF bibliotek tillåter forskare att testa vikten av många gener i ett enda experiment. En tillförlitlig avläsning för ändrad transkriptionell aktivitet krävs dock.
Här beskriver vi användningen av en dual-luciferase-baserade transkriptionella reporter analys och arrayed lentiviral bibliotek för att identifiera proteiner som reglerar transkriptionsfaktorer i cancerceller. I denna analys, shRNAs som riktar cancer-associerade gener levereras till däggdjur cancerceller via lentiviral transduktion och celler väljs för stabil integration med puromycin. Cellerna är nästa transfected med en reporter konstruktion som uttrycker firefly luciferas drivs av en promotor som är specifik för transkriptionsfaktor som undersöks och en kontroll konstruktion som uttrycker Renilla luciferas från en constitutively aktiv promotor som inte är lyhörd för transkriptionsfaktorn undersöks. Vi visar detta tillvägagångssätt med en proof-of-concept skärm för regulatorer av YAP och TAZ, de kritiska nedströms effektfaktorer av Hippo väg8,10,11. Onormal aktivitet av YAP och TAZ främjar flera steg i ögonbevarande kaskad11 och observeras i många cancerformer11,12,13. Men hur YAP och TAZ blir aberrantly aktiveras i vissa cancerceller är ännu inte helt klarlagt. YAP och TAZ binder inte DNA, utan rekryteras istället till initiativtagare av andra transkriptionsfaktorer. Medlemmar i TEA-domänens (TEAD) familj av transkriptionsfaktorer är de viktigaste bindande partnerna för YAP och TAZ, och är avgörande för de flesta YAP- och TAZ-beroende funktioner. Vår reporter konstruktion uttrycker firefly luciferas från en YAP /TAZ-TEAD-lyhörd promotor och tidigare studier har visat att det troget upptäcker förändringar i YAP-TEAD och TAZ-TEAD transkriptionell aktivitet2,14,15.
Vårt tillvägagångssätt är snabb, medelgenomströmning, och kräver inte screening anläggningar, automatiserade robotar, eller djup sekvensering av poolade bibliotek. Kostnaderna är relativt låga och det finns många kommersiellt tillgängliga bibliotek att välja mellan. Den utrustning och de reagenser som krävs är också relativt standard i de flesta laboratorier. Det kan användas för att skärmen för regulatorer av praktiskt taget alla transkriptionsfaktor om en luciferas-baserad reporter finns eller genereras. Vi använder denna metod för att skärmen shRNAs i cancerceller, men alla cellinje som kan transfected med rimlig effektivitet kan användas med någon typ av arrayed bibliotek.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.0 ml 96-well deep well polypropylene plate</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1896-2000</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin - 2.50%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090-046</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well flat bottom white assay plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3922</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin - 100 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-10835242001-EA</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto-tryptone - powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>95039</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual-luciferase reporter assay system, which include LAR II reagent (reagent A), Stop &#38; Glo substrate (reagent B substrate) and Stop &#38; Glo buffer (reagent B buffer) - Kit</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E1960</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline w/o calcium, magnesium and phenol red - 9.6 g/L</td>
			<td>Himedia</td>
			<td>TS1006</td>
			<td>For PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA - 0.5 M</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-406</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol - 100%</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97068-085</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexadimethrine bromide (Polybrene) - 8 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-H9268</td>
			<td>For virus infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone DMEM/High glucose - 4 mM L-Glutamine; 4500 mg/L glucose; sodium pyruvate</td>
			<td>GE Healthcare life sciences</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I3-P/i3 Multi-Mode Microplate/EA</td>
			<td>Molecular devices</td>
			<td></td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine - 200 mM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 (Transfection Reagent 2) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Biology Water - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>02-0201-0500</td>
			<td>For dilution of shRNA vector for virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl - powder</td>
			<td>BDH</td>
			<td>BDH9286</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
			<td>For measuring vector DNA concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM (Transfection Buffer) - 100%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985-062</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin - 10,000 Unit/ml (Penicillin); 10,000 &#181;g/ml (Streptomycin)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PureLink Quick Plasmid Miniprep Kit - Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>K210010</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin - 2.5 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-P7255</td>
			<td>For antibiotic selection after infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC20 automated cell counter</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td>For cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE 9 DNA transfection reagent (Transfection Reagent 1) - 100%</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6365787001</td>
			<td>For virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract - powder</td>
			<td>VWR</td>
			<td>J850</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P3000 (Transfection Reagent 3) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter

Transkriptionsfaktorer kan förändra uttrycket av många målgener som påverkar en mängd olika nedströmsprocesser som gör dem till bra mål för cancerbehandling. Emellertid, direkt inriktning transkription faktorer är ofta svårt och kan orsaka negativa biverkningar om transkriptionsfaktorn är nödvändig i en eller flera vuxna vävnader. Identifiera uppströms tillsynsmyndigheter som aberrantly aktivera transkriptionsfaktorer i cancerceller erbjuder ett mer genomförbart alternativ, särskilt om dessa proteiner är lätta att läkemedel. Här beskriver vi ett protokoll som kan användas för att kombinera arrayed medelstora lentivirala bibliotek och en dual-luciferase-baserade transkriptionella reporter analys för att identifiera nya regulatorer av transkription faktorer i cancerceller. Vårt tillvägagångssätt erbjuder ett snabbt, enkelt och billigt sätt att testa hundratals gener i ett enda experiment. För att demonstrera användningen av detta tillvägagångssätt utförde vi en skärm av en arrayed lentiviral RNAi bibliotek som innehåller flera regulatorer av Ja-associerade protein (YAP) och transkriptionella co-aktivator med PDZ-bindande motiv (TAZ), två transkriptionella co-aktivatorer som är nedströms effektfaktorer av Hippo utbildningsavsnitt. Detta tillvägagångssätt kan dock ändras för att kontrollera för tillsynsmyndigheter av praktiskt taget alla transkriptionsfaktor eller medfaktorer och kan också användas för att kontrollera CRISPR/CAS9-, cDNA- eller ORF-bibliotek.

Vår YAP/TAZ-TEAD reporter konstruktion (pGL3-5xMCAT (SV)-492,14,15) innehåller en minimal SV-49 promotor med 5 repetitioner av kanoniska TEAD bindningselement (MCAT)15 kör firefly luciferas genen ( figur1). Den är samtransfekt i celler tillsammans med PRL-TK kontrollvektorn (Promega), som uttrycker Renilla luciferas från den kons...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

För att identifiera nya regulatorer av transkription faktorer, utvecklade vi en metod för skärmen arrayed lentiviral eller retroviral RNAi bibliotek med hjälp av en dual-luciferase-baserade transkriptionella reporter analys. Detta tillvägagångssätt erbjuder ett snabbt och relativt billigt sätt att skärmen hundratals kandidater i ett enda experiment.

Identifiering av transkriptionsfaktor regulatorer med hjälp av Medium-Genomströmning Screening av arrayed bibliotek och en Dual-Luciferase-Based Reporter

Transcription factors can alter the expression of numerous target genes that influence a variety of downstream processes making them good targets for ...

Detta protokoll kan användas för att screena arrayed lentiviral eller retroviral assay bibliotek för att identifiera nya regulatorer av transkriptionsfaktorer i cancerceller. De största fördelarna med denna teknik är att det är snabb, medium genomströmning, och billig, och att den använder utrustning och reagenser som vanligen är tillgängliga för de flesta utredare. För att expandera och rena varje lentiviral vektor i biblioteket, tillsätt först 1,3 milliliter Luria buljong kompletteras med 100 mikrogram per milliliter ampicillin till varje brunn av en 96-väl djup brunn tallrik.Inokulera varje brunn med två mikroliter av glycerol lager för en övernattning inkubation på 37 grader Celsius och 225 varv per minut. Nästa dag, överföra varje bakterie kultur till enskilda 1,5 milliliter mikrocentrifugrör för centrifugering. Rena varje vektor med en lämplig bakteriell miniprepsats enligt tillverkarens anvisningar.För varje vektor i det förberedda biblioteket, utsäde en brunn av en 24-brunnsplatta med en gånger 10 till den femte 293FT celler och inkubera cellerna på 37 grader Celsius och 5% koldioxid i 24 timmar. För att förbereda en transfektionsblandning som kommer att inrättas för varje vektor i biblioteket, först elute varje lentiviral vektor till en slutlig koncentration av 50 nanogram per mikroliter med nukleasfritt vatten. Överför fem mikroliter av varje utspädning till enskilda brunnar av en 96-väl PCR-platta.Gör en transfektionssuperblandning genom att blanda 1,25 mikroliter gånger x transfection-reagens en med 23,75 mikroliter gånger x av förvarad transfectionbuffert. Inkubera transfektionssuperblandningen i rumstemperatur i fem minuter. Lägg sedan till 125 nanogram gånger x av psPAX2 och 125 nanogram gånger x av VSVG till superblandningen med skonsam pipettering.Omedelbart aliquot super mix i varje rör av en PCR-remsa och använda en flerkanalig pipett för att överföra 25 mikroliter av blandningen i varje brunn av utspädd viral vektor. Efter en 20 minuters inkubering vid rumstemperatur, använd en flerkanalig pipett för att överföra 30 mikroliter av varje transfektionsblandning från varje brunn till en motsvarande brunn på 293FT-celler i den tidigare beredda 24-brunnsplattan. Inkubera cellerna i 24 timmar innan du byter ut mediet i varje brunn mot 500 mikroliter av färskt komplett tillväxtmedium för ytterligare en 24-timmars inkubation i cellodlingsinkubatorn.Nästa dag, använd en flerkanalig pipett för att samla in viral supernatant från varje brunn och alikvoter 220 mikroliter av varje supernatant i två brunnar i en ny 96-brunnsplatta för att generera en matriserad viral supernatant platta. För att förbereda A375-celler för infektion, frö en gånger 10 till de femte cellerna i en 24-brunnsplatta i 0,5 milliliter komplett tillväxtmedium per brunn för varje viral vektor i biblioteket. Inkludera en extra brunn som inte kommer att smittas för att fungera som en kontroll för läkemedelsval.Efter en 24-timmars inkubation i inkubatorn för cellodling tina den frysta arrayed lentiviral supernatant inställd på rumstemperatur innan du ersätter tillväxtmediet från varje brunn av den förberedda cellodlingsplattan med 200 mikroliter tillväxtmedium kompletterat med 20 mikrogram per milliliter polybrene. Med hjälp av en flerkanalig pipett, överför 200 mikroliter av viral supernatant från varje 96 brunn till varje brunn av 24-brunnsplattan. Återför cellerna till cellodlingsinkubatorn i 24 till 48 timmar.Vid slutet av inkubationen, ersätta mediet i varje brunn med 500 mikroliter av tillväxt medium kompletterat med puromycin och returnera cellerna till cellodlingen inkubatorn i ytterligare 48 timmar. Efter 48-timmars puromycin urval, sortera cellerna i tre eller fyra grupper så att alla brunnar i en enda grupp har en liknande celltäthet och lägga till 200 mikroliter trypsin-EDTA till en representativ brunn från varje grupp för en fem minuters inkubation vid 37 grader Celsius. När cellerna har lossnat, neutralisera trypsin med 400 mikroliter av tillväxt medium kompletteras med puromycin och räkna antalet celler från varje trypsinized väl.Späd varje cell suspension till en två gånger 10 till den femte celler per milliliter koncentration med tillväxt medium kompletteras med puromycin och utsäde 500 mikroliter av celler från varje brunn i samma väl position i en ny 24-brunns platta. Efter att ha använt räknarna från varje representativ brunn för att uppskatta cellen antalet i varje återstående brunn i varje grupp, lägga till lämplig volym trypsin-EDTA till varje brunn för att uppnå en en gånger 10 till sjätte celler per milliliter koncentration. Under trypsinization, använd en flerkanalig pipetter för att lägga till 400 mikroliter av tillväxt medium kompletteras med puromycin till lämpliga motsvarande brunnar i den nya 24-brunnsplattan.När celler har lossnat, blanda försiktigt innehållet i varje brunn och överföra 100 mikroliter av varje cell suspension till lämplig motsvarande brunn i den nya 24-brunnsplattan. Sedan tillbaka cellerna till cellodlingen inkubatorn i 24 timmar. För att transfekt cellerna med dual-luciferas reporter konstruktioner, förbereda transfektionen utspädning blandningen som anges i tabellen.För att förbereda reporterns utspädningsblandning, blanda volymerna för varje reagens multiplicerat med det totala antalet transfections plus flera extra volymer. Blanda därefter transfektionsspädningsblandningen med reporterns spädningsblandning och inkubera den resulterande lösningen i rumstemperatur i 15 minuter för att framställa transfektionsblandningen. Under inkubationen, skölj varje brunn av cellodlingsplattan med 250 mikroliter pbs och tillsätt 447 mikroliter av färskt komplett tillväxtmedium till varje brunn.Använd sedan en flerkanalig pipett för att distribuera 53 mikroliter transfektionsmix till varje brunn av cellodlingsplattan. Placera plattan på 37 grader Celsius och 5%koldioxid i 24 timmar. För att mäta lucidasaktiviteten späds 5X passiv lysbuffert från luciferasaktivitetssatsen vid en en till fem-spädning med avjoniserat vatten och tina upp de nödvändiga volymerna av reagens A och reagens B-buffert från satsen.När reagenserna är klara, byt ut supernatanten i varje brunn mot 75 mikroliter av passiv lysbuffert och inkubera plattan i 30 minuter vid rumstemperatur med enstaka skakningar. Under inkubationen späd 50X-reagens B-substratet från satsen till en en-till-50-koncentration med upptinad reagens B-buffert. I slutet av inkubationen, tillsätt 30 mikroliter av passiv lysbuffert till fyra blankkontroll brunnar och överföra 30 mikroliter av lysate från varje brunn i dubbla brunnar av en 96-väl platt botten vit analysplåt.När alla av lysate har pläteras, använd en flerkanalig pipett för att lägga till 50 mikroliter reagens A till varje brunn och läsa firefly luciferase signal med en tallrik läsare. Använd sedan en flerkanalig pipett för att lägga till 50 mikroliter reagens B till varje brunn och läsa Renilla luciferas signal med en plattläsare. Som väntat, YAP2SA ökar firefly luciferas aktivitet men inte Renilla luciferas aktivitet som jämfört med kontrollvektorn.Däremot ökar YAP2SA S94A inte firefly luciferas aktivitet. Viktigt är att YAP2SA inte ändrar aktiviteten hos en minimal promotorkonstruktion som saknar MCAT TEAD-bindningselementen. I celler transfected med YAP-TAZ-TEAD reporter konstruktion, den tandem YAP och TAZ korta hårnålar avsevärt minskat firefly luciferase nivåer, men kontrollen kort hårnål icke-inriktning kontroll inte.I celler som transfekteras med den minimala reporterkonstruktionen, förändrar däremot INTE YAP-TAZ-kort hårnåls-RNA signifikant firefly luciferasnivåer. Renilla signalen i varje brunn är inte heller nämns inte väsentligt ändras av den korta hårnål icke-inriktning kontroll eller YAP-TAZ kort hårnål RNA. Som väntat, kort hårnål RNAs inriktning YAP och TAZ, SARC eller PI3 kinase avsevärt minskar YAP-TAZ-TEAD aktivitet.Kort hårnål RNAs inriktning ATM, CDH1, CSK, ERBB2, och gelsolin varje ökad normaliserade firefly luciferas nivåer överensstämmer med publicerade studier som visar att dessa proteiner var YAP och/eller TAZ. Trots etablerade roller för ATR, CCNE2 och ERBB4 i andra celltyper, kort hårnål RNAs inriktning dessa gener inte väsentligt ändra normaliserade firefly luciferas nivåer i A375 celler. Efter denna skärm bör identifierande tillsynsmyndigheter valideras med hjälp av andra avläsningar för deras transkriptionsfaktoraktivitet.Effektiv knockdown av den identifierade tillsynsmyndigheten av analysen bör också bekräftas. Kom ihåg att vara försiktig och att följa säkerhetsriktlinjer när du arbetar med smittsamma lentivirus, särskilt om virusen är mänskliga smittsamma.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Sektion Mammary Gland Whole Mounts för Lesion Identification

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Flow Cytometry-based Drug Screening System for the Identification of Small Molecules That Promote Cellular Differentiation of Glioblastoma Stem Cells

Flöde flödescytometri-baserade Drug Screening System för identifiering av små molekyler som främjar celldifferentiering av Glioblastoma stamceller

Glioblastoma (GBM) is the most common and most lethal primary brain tumor in adults, causing roughly 14,000 deaths each year in the U.S. alone. Median ...

Live Cell Imaging of the TGF-	&beta;/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live Cell Imaging of the TGF-	ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Levande cellen avbildning av TGF-β/Smad3 signalering utbildningsavsnitt i In Vitro och In Vivo använder ett Adenovirus Reporter System

Transforming Growth Factor &#946; (TGF-&#946;) signaling regulates many important functions required for cellular homeostasis and is commonly found ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Analys av Cancer Cell Invasion och anti metastaserande Drug Screening med hjälp av Hydrogel Micro-kammare Array (HMCA)-baserade plattor

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

Isolering av exosomberikade extracellulära vesiklar som bär granulocyt-makrofagkolonistimulerande faktor från embryonala stamceller

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

Etablering och karakterisering av små tarm neuroendokrina tumör spheroids

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Mapping the Structure-Function Relationships of Disordered Oncogenic Transcription Factors Using Transcriptomic Analysis

Kartläggning av strukturfunktionsrelationer för oordnade onkogena transkriptionsfaktorer med transkriptomisk analys

Many cancers are characterized by chromosomal translocations which result in the expression of oncogenic fusion transcription factors. Typically, these ...

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Identifiering av EGFR- och RAS-hämmare med Caenorhabditis elegans

The changes in the plasma membrane localization of the epidermal growth factor receptor (EGFR) and its downstream effector RAS have been implicated in ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Upptäckt av metastaserade regulatorer med hjälp av en snabb och kvantitativ intravital chick chorioallantoic membranmodell

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

Ett snabbt screeningarbetsflöde för att identifiera potentiell kombinationsterapi för GBM med hjälp av patientbaserade Glioma-stamceller

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...