Name: identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter
Uploaded: 2020-03-27T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

Emily Norton ve Mikaelan Cucciarre-Stuligross'a shRNA vektörlerinin hazırlanmasına yardımcı olan için teşekkür ederiz. Bu çalışma kısmen J.M.L.'ye (#CCR17477184) verilen Susan G. Komen Career Catalyst Grant tarafından desteklenmiştir.

NOT: Bu protokolün şematik bir özeti Şekil 1'degösterilmiştir.
1. Lentiviral vektör kütüphane hazırlama
NOT: Gösterilen ekran 96-iyi plakalar gliserol stokları olarak satın alınan bir dizili shRNA kütüphane kullanılan, ancak kütüphaneler de adayların bir listesine göre el ile monte edilebilir. Uygun denetimler dikkate alınmalı ve herhangi bir kitaplıkta yer almalıdır. Buna, hedefsiz bir kontrol shRNA (shNTC), tra...

Bu çalışmada, transkripsiyon faktörlerinin yeni düzenleyicilerini tanımlamak ve test etmek için kullanılabilecek çift luciferase tabanlı transkripsiyonel muhabir testi ile birlikte dizili viral kütüphanelerin orta iş bölümü taraması için bir yaklaşım gösterilmiştir. Herhangi bir ekrandan önce her hücre hattı için muhabir sistemini karakterize etmek ve optimize etmek çok önemlidir. Muhabirin incelenmekte olan transkripsiyon faktörünün değiştirilmiş aktivitesine duyarlı olduğunu doğrula...

Bu takınç amacı nispeten hızlı ve ucuz bir şekilde transkripsiyon faktörlerinin düzenleyicileri belirlemek için viral kütüphaneler kullanmaktır. Anormal transkripsiyonel aktivite kanser ve metastaz ile ilişkili1,2,3,4,5,6,bu yüzden kanser hücrelerinde transkripsiyon faktörleri hedefleme umut verici bir tedavi yaklaşımıdır. Ancak, transkripsiyon faktörleri genellikle farmakolojikolarak 7 hedef zordur ve birçok yetişkin dokularda normal hücresel fonksiyon için gereklidir8,9,10. Anormal hastalığı sürücü transkripsiyon faktörleri etkinleştirmek kanser ile ilişkili yolları hedefleme daha az şiddetli yan etkilere sahip potansiyeli ile daha uygulanabilir bir yaklaşımdır. Dizili lentiviral ve retroviral RNAi, CRISPR/CAS9, cDNA veya ORF kütüphanelerinin ticari kullanılabilirliği, araştırmacıların tek bir deneyde çok sayıda genin önemini test etmesine olanak tanır. Ancak, değiştirilmiş transkripsiyonel etkinlik için güvenilir bir okuma gereklidir.
Burada, kanser hücrelerindeki transkripsiyon faktörlerini düzenleyen proteinleri tanımlamak için çift luciferase tabanlı transkripsiyonel muhabir testin ve dizili lentiviral kütüphanelerin kullanımını tanımlıyoruz. Bu araştırmada, kanserle ilişkili genleri hedef alan shRNA'lar lentiviral transdüksiyon yoluyla memeli kanser hücrelerine ulaştırılır ve hücreler puromisin kullanılarak kararlı entegrasyon için seçilir. Hücreler sonraki araştırılmaktadır transkripsiyon faktörü ne özgü bir organizatör tarafından yönlendirilen firefly luciferase ve araştırılan transkripsiyon faktörü yanıt vermeyen bir kurucu aktif organizatörü renilla luciferase ifade eden bir kontrol yapısı tarafından yönlendirilen firefly luciferase ifade eden bir muhabir yapısı ile transfeced vardır. Biz YAP ve TAZ düzenleyicileri için bir proof-of-concept ekran ile bu yaklaşımı göstermek, Hippo yolukritikdownstream efektörleri 8,10,11. YAP ve TAZ anormal aktivite metastatik basamak birkaç adım teşvik11 ve birçok kanserlerde gözlenen11,12,13. Ancak, YAP ve TAZ'ın bazı kanser hücrelerinde nasıl anormal bir şekilde aktive olduğu henüz tam olarak anlaşılamamıştır. YAP ve TAZ DNA'yı bağlamaz, ancak bunun yerine diğer transkripsiyon faktörleri tarafından organizatörlere istihdam edilir. ÇAY etki alanı (TEAD) transkripsiyon faktörleri ailesinin üyeleri YAP ve TAZ için en önemli bağlayıcı ortaklardır ve çoğu YAP ve TAZ'a bağımlı fonksiyonlar için kritik öneme sahiptir. Muhabirimiz yapı bir YAP/TAZ-TEAD duyarlı organizatörü nden firefly luciferase ifade eder ve önceki çalışmalar da sadakatle YAP-TEAD ve TAZ-TEAD transkripsiyonel aktivite2,,14,15değişiklikleri algılar göstermiştir .
Yaklaşımımız hızlı, orta iş lenmedir ve tarama tesisleri, otomatik robotlar veya havuzlu kütüphanelerin derin sıralamasını gerektirmez. Maliyetler nispeten düşüktür ve aralarından seçim yapabileceğiniz çok sayıda ticari kütüphane vardır. Gerekli ekipman ve reaktifler de çoğu laboratuvarda nispeten standart. Luciferase tabanlı bir muhabir varsa veya oluşturulursa hemen hemen her transkripsiyon faktörü düzenleyicileri için ekran için kullanılabilir. Bu yaklaşımı kanser hücrelerinde shRNA'ları taramak için kullanıyoruz, ancak makul bir verimlilikle aktarılabilen herhangi bir hücre hattı, her türlü dizili kütüphanede kullanılabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2.0 ml 96-well deep well polypropylene plate</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1896-2000</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin - 2.50%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15090-046</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well flat bottom white assay plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3922</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin - 100 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-10835242001-EA</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto-tryptone - powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>95039</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual-luciferase reporter assay system, which include LAR II reagent (reagent A), Stop &#38; Glo substrate (reagent B substrate) and Stop &#38; Glo buffer (reagent B buffer) - Kit</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E1960</td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline w/o calcium, magnesium and phenol red - 9.6 g/L</td>
			<td>Himedia</td>
			<td>TS1006</td>
			<td>For PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA - 0.5 M</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97061-406</td>
			<td>Component of trypsin-EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol - 100%</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal Bovine Serum - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97068-085</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexadimethrine bromide (Polybrene) - 8 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-H9268</td>
			<td>For virus infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone DMEM/High glucose - 4 mM L-Glutamine; 4500 mg/L glucose; sodium pyruvate</td>
			<td>GE Healthcare life sciences</td>
			<td>SH30243.01</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I3-P/i3 Multi-Mode Microplate/EA</td>
			<td>Molecular devices</td>
			<td></td>
			<td>For dual-luciferase assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine - 200 mM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 (Transfection Reagent 2) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Biology Water - 100%</td>
			<td>VWR</td>
			<td>02-0201-0500</td>
			<td>For dilution of shRNA vector for virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl - powder</td>
			<td>BDH</td>
			<td>BDH9286</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td></td>
			<td>For measuring vector DNA concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM (Transfection Buffer) - 100%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985-062</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin - 10,000 Unit/ml (Penicillin); 10,000 &#181;g/ml (Streptomycin)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Component of complete growth media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PureLink Quick Plasmid Miniprep Kit - Kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>K210010</td>
			<td>For bacterial mini-prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin - 2.5 mg/ml</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>45-P7255</td>
			<td>For antibiotic selection after infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC20 automated cell counter</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td>For cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-tremeGENE 9 DNA transfection reagent (Transfection Reagent 1) - 100%</td>
			<td>Roche</td>
			<td>6365787001</td>
			<td>For virus packaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract - powder</td>
			<td>VWR</td>
			<td>J850</td>
			<td>Component of LB broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P3000 (Transfection Reagent 3) - 100%</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>L3000008</td>
			<td>For transfections</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of transcription factor regulators using medium-throughput screening of arrayed libraries and a dual-luciferase-based reporter

Transkripsiyon faktörleri onları anti-kanser tedavileri için iyi hedefler haline downstream süreçlerin çeşitli etkileyen çok sayıda hedef genlerin ekspresyonu değiştirebilirsiniz. Ancak, transkripsiyon faktörlerinin doğrudan hedef alınması genellikle zordur ve bir veya daha fazla erişkin dokuda transkripsiyon faktörü gerekliyse yan etkilere neden olabilir. Bu proteinlerin ilaçlanması kolaysa, kanser hücrelerindeki transkripsiyon faktörlerini anormal bir şekilde aktive eden upstream regülatörlerinin belirlenmesi daha uygulanabilir bir alternatif sunar. Burada, dizili orta ölçekli lentiviral kütüphaneleri birleştirmek için kullanılabilecek bir protokol ve kanser hücrelerindeki transkripsiyon faktörlerinin yeni düzenleyicileri belirlemek için çift luciferase tabanlı transkripsiyonel muhabir test açıklar. Yaklaşımımız, yüzlerce geni tek bir deneyde test etmek için hızlı, kolay ve ucuz bir yol sunar. Bu yaklaşımın kullanımını göstermek için, Hippo yolunun alt etkileri olan iki transkripsiyonel koaktivatörler olan PDZ bağlayıcı motifli (TAZ) ile Evet ilişkili protein (YAP) ve transkripsiyonel koaktivatörün çeşitli düzenleyicileri içeren dizili lentiviral RNAi kütüphanesinin bir ekranını gerçekleştirdik. Ancak, bu yaklaşım hemen hemen herhangi bir transkripsiyon faktörü veya co-faktör düzenleyiciler için ekrana değiştirilebilir ve aynı zamanda CRISPR/CAS9, cDNA veya ORF kitaplıklarını taramak için de kullanılabilir.

Bizim YAP / TAZ-TEAD muhabir yapısı (pGL3-5xMCAT (SV)-492,14,15) kanonik TEAD bağlayıcı elemanı (MCAT)15 ateşböceği luciferase gen sürüş 5 tekrarları ile minimal Bir SV-49 organizatörü içerir ( Şekil1). Constitutively aktif HSV TK organizatörü renilla luciferase ifade PRL-TK kontrol vektörü (Promega) ile birlikte ...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter at JoVE.com

Identification of Transcription Factor Regulators using Medium-Throughput Screening of Arrayed Libraries and a Dual-Luciferase-Based Reporter

Transkripsiyon faktörlerinin yeni düzenleyicilerini belirlemek için, çift luciferase tabanlı transkripsiyonel muhabir testi kullanarak dizili lentiviral veya retroviral RNAi kitaplıklarını taramak için bir yaklaşım geliştirdik. Bu yaklaşım, tek bir deneyde yüzlerce adayı taramak için hızlı ve nispeten ucuz bir yol sunar.

Dizili Kütüphanelerin Orta İşleç Lik Taraması ve Çift Luciferase Tabanlı Muhabir kullanılarak Transkripsiyon Faktörü Düzenleyicilerin Tanımlanması

Transcription factors can alter the expression of numerous target genes that influence a variety of downstream processes making them good targets for ...

Bu protokol, kanser hücrelerindeki transkripsiyon faktörlerinin yeni düzenleyicilerini belirlemek için dizili lentiviral veya retroviral test kitaplıklarını taramak için kullanılabilir. Bu tekniğin başlıca avantajları, hızlı, orta iş ortası ve ucuz olması ve çoğu araştırmacının erişebileceği ekipman ve reaktifler kullanmasıdır. Genişletmek ve kütüphanede her lentiviral vektör arındırmak için, ilk 96-derin kuyu plaka her kuyuya ampisilin mililitre başına 100 mikrogram ile desteklenen Luria suyu 1.3 mililitre ekleyin.Dakikada 37 santigrat derece ve 225 devrimleri bir gecede kuluçka için gliserol stok iki mikrolitre ile her iyi aşılamak. Ertesi gün, santrifüj için ayrı 1.5 mililitre mikrosantrifüj tüpler içine her bakteri kültürü aktarın. Üreticinin talimatlarına uygun bir bakteriyel miniprep kiti ile her vektör arındırın.Hazırlanan kütüphanedeki her vektör için, 10-5 293FT hücreleri bir kez 24-iyi plaka bir kuyu tohum ve 24 saat boyunca 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksit hücreleri kuluçka. Kütüphanedeki her vektör için kurulacak bir transfeksiyon karışımı hazırlamak için, ilk olarak her lentiviral vektörü mikrolitre başına 50 nanogramlık son konsantrasyona ve nükleaziçermeyen suyla eleyin. Her seyreltmenin beş mikrolitresini 96 kuyulu bir PCR plakanın ayrı kuyularına aktarın.1.25 mikrolitre x transfeksiyon reaktifini 23,75 mikrolitre x önceden ısıtılmış transfeksiyon tamponu ile karıştırarak transfeksiyon süper karışımı yapın. Transfeksiyon süper karışımını oda sıcaklığında beş dakika kuluçkaya yatırın. Daha sonra 125 nanogram x psPAX2 ve 125 nanogram kez VSVG kez x ekleyin nazik pipetleme ile süper karışımı.Hemen bir PCR şerit her tüp içine süper karışımı aliquot ve seyreltilmiş viral vektör her kuyuya karışımın 25 mikrolitre aktarmak için çok kanallı pipet kullanın. Oda sıcaklığında 20 dakikalık bir kuluçkadan sonra, her bir kuyudan 30 mikrolitrelik bir transfeksiyon karışımını daha önce hazırlanmış 24 kuyuplakasında 293FT hücreli bir kuyuya aktarmak için çok kanallı bir pipet kullanın. Hücre kültürü kuluçka başka bir 24 saat kuluçka için taze tam büyüme ortamı 500 mikrolitre ile her kuyuda orta değiştirmeden önce 24 saat boyunca hücreleri kuluçka.Ertesi gün, her kuyudan viral supernatant toplamak için çok kanallı bir pipet kullanın ve aliquot 220 her supernatant mikrolitre yeni bir 96-iyi plaka içinde iki kuyu içine dizili viral supernatant plaka oluşturmak için. Enfeksiyon için A375 hücreleri hazırlamak için, kütüphanede her viral vektör için iyi başına tam büyüme ortamı 0,5 mililitre 24 iyi plaka beşinci hücrelere bir kez 10 tohum. Uyuşturucu seçimi için bir kontrol olarak hizmet etmek için enfekte olmayacak ekstra bir kuyu ekleyin.Hücre kültürü kuluçka 24 saatlik bir kuluçka sonra, polibren mililitre başına 20 mikrogram ile takviye büyüme ortamı 200 mikrolitre ile hazırlanan hücre kültür plakaher kuyudan büyüme ortamı değiştirmeden önce oda sıcaklığına ayarlanmış dondurulmuş dizili lentiviral supernatant çözültün. Çok kanallı pipet kullanarak, her 96 kuyudan 24 kuyulu plakanın her kuyuya 200 mikrolitre viral süpernatant aktarın. Hücreleri 24 ila 48 saat boyunca hücre kültürü kuluçka makinesine geri döndürün.Kuluçka sonunda, puromisin ile takviye büyüme orta 500 mikrolitre ile her kuyuda orta değiştirin ve ek bir 48 saat için hücre kültürü kuluçka hücreleri dönmek. 48 saatlik puromisin seçimini takiben, hücreleri üç veya dört gruba ayırın, tek bir gruptaki tüm kuyular benzer bir hücre yoğunluğuna sahip olur ve 37 santigrat derecede beş dakikalık bir kuluçka için her gruptan bir temsilciye 200 mikrolitre tripsin-EDTA ekleyin. Hücreler ayrıldıktan sonra, püromisin ile takviye büyüme ortamı 400 mikrolitre ile tripsin nötralize ve iyi bir iki kez gelen hücre sayısını saymak.Her hücre süspansiyonunu mililitre konsantrasyonu başına iki kez 10 ile beşinci hücrelere seyreltin ve her kuyudan 500 mikrolitre hücreyi 24 kuyuluktaki aynı iyi konuma getirin. Her bir grupta kalan her bir hücre numarasını tahmin etmek için her temsilcinin sayılarını iyi kullandıktan sonra, her kuyuya uygun trypsin-EDTA hacmini ekleyerek mililitre konsantrasyonu başına altıncı hücrelere bir kez 10'a ulaşın. Tripsinizasyon sırasında, yeni 24 kuyuplakasındaki ilgili kuyulara puromisin ile takviye edilmiş 400 mikrolitre lik büyüme ortamı eklemek için çok kanallı bir pipet kullanın.Hücreler ayrıldıktan sonra, her kuyunun içeriğini nazikçe karıştırın ve her hücre süspansiyonunun 100 mikrolitresini yeni 24 kuyulu plakadaki uygun kuyuya aktarın. Sonra hücreleri 24 saat boyunca hücre kültürü kuluçka makinesine geri döndürün. Hücreleri çift luciferase muhabiri ile nakletmek için, tabloda belirtildiği gibi transfeksiyon seyreltme karışımı nı hazırlayın.Muhabir seyreltme karışımını hazırlamak için, her bir reaktifin hacimlerini toplam transfection sayısı ve birkaç ekstra hacimle karıştırın. Daha sonra transfeksiyon seyreltme karışımını muhabir seyreltme karışımıyla karıştırın ve transfeksiyon karışımını üretmek için elde edilen çözeltiyi oda sıcaklığında 15 dakika kuluçkaya yatırın. Kuluçka sırasında, hücre kültür plakasının her kuyuyu 250 mikrolitre PBS ile durulayın ve her kuyuya 447 mikrolitre taze tam büyüme ortamı ekleyin.Daha sonra hücre kültürü plakasının her kuyuya 53 mikrolitre transfeksiyon karışımı dağıtmak için çok kanallı bir pipet kullanın. Plakayı 24 saat boyunca 37 santigrat derece ve %5 karbondioksit olarak yerleştirin. Luciferase aktivitesini ölçmek için, 5X pasif lisis tamponunu deiyonize su ile bir-beş seyreltme deluciferase aktivite kitinden seyreltin ve gerekli hacimleri kitten a ve reaktif B tamponunun çözülmesi.Reaktifler hazır olduğunda, her kuyudaki süpernatantı 75 mikrolitre pasif lisis tamponu ile değiştirin ve oda sıcaklığında ara sıra sallayarak plakayı 30 dakika kuluçkaya yatırın. Kuluçka sırasında, 50X reaktif B substratını kitten çözülmüş reaktif B tamponu ile 1'den 50'ye kadar seyreltin. Kuluçka sonunda, dört boş kontrol kuyularına 30 mikrolitre pasif lisis tamponu ekleyin ve her kuyudan 30 mikrolitre likiti 96 kuyulu düz alt beyaz bir deneme plakasının yinelenen kuyularına aktarın.Tüm lysate kaplama lı olduğunda, her kuyuya 50 mikrolitre reaktif A eklemek ve ateş böceği luciferase sinyalini bir plaka okuyucuile okumak için çok kanallı bir pipet kullanın. Daha sonra her kuyuya 50 mikrolitre reaktif B eklemek için çok kanallı bir pipet kullanın ve bir plaka okuyucu ile Renilla luciferase sinyalini okuyun. Beklendiği gibi, YAP2SA kontrol vektörü ile karşılaştırıldığında firefly luciferase aktivitesini artırır, ancak Renilla luciferase aktivitesini artırır.Buna karşılık, YAP2SA S94A firefly luciferase aktivitesini artırmaz. Daha da önemlisi, YAP2SA, MCAT TEAD bağlama elemanlarından yoksun minimal bir organizatör yapının etkinliğini değiştirmez. YAP-TAZ-TEAD muhabir yapısı ile transfected hücrelerde, tandem YAP ve TAZ kısa saç tokaları önemli ölçüde firefly luciferase düzeylerini azalttı, ancak kontrol kısa saç tokası olmayan hedefleme kontrolü yok.Buna karşılık, minimal muhabir yapısı ile transfected hücrelerde, YAP-TAZ kısa saç tokası RNA önemli ölçüde firefly luciferase düzeylerini değiştirmez. Her kuyudaki Renilla sinyali, kısa saç tokası olmayan hedefleme kontrolü veya YAP-TAZ kısa saç tokası RNA ile de önemli ölçüde değişmez. Beklendiği gibi YAP ve TAZ, SARC veya PI3 kiyazı hedefleyen kısa saç tokası RNA'ları YAP-TAZ-TEAD aktivitesini önemli ölçüde azaltır.ATM, CDH1, CSK, ERBB2 ve gelsolin hedefleyen kısa saç tokası RNA'lar, bu proteinlerin YAP ve/veya TAZ olduğunu gösteren yayınlanmış çalışmalarla tutarlı olarak her biri normalleştirilmiş ateş böceği luciferase düzeylerini artırmıştır. Diğer hücre tiplerinde ATR, CCNE2 ve ERBB4 için kurulan rollere rağmen, bu genleri hedef alan kısa saç tokası RNA'ları A375 hücrelerindeki normalleştirilmiş ateş böceği luciferase düzeylerini önemli ölçüde değiştirmez. Bu ekranı takiben, tanımlayıcı düzenleyiciler transkripsiyon faktörü etkinliği için diğer okumalar kullanılarak doğrulanmalıdır.Tespit edilen regülatörün tsay ile etkin bir şekilde yıkılması da teyit edilmelidir. Özellikle virüsler insan bulaşıcıysa, dikkatli olmayı ve bulaşıcı lentivirüslerle çalışırken güvenlik yönergelerine uymayı unutmayın.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification

Lezyon Tanımlaması için Meme Bandı Bütün Dağılımları

Normal mammary gland development may be altered by exposure to environmental toxicants and pharmaceutical products, excessive exposure to hormones, and ...

Flow Cytometry-based Drug Screening System for the Identification of Small Molecules That Promote Cellular Differentiation of Glioblastoma Stem Cells

Akış Sitometresi tabanlı uyuşturucu Glioblastoma kök hücre hücresel farklılaşma teşvik küçük moleküller tanımlanması için eleme sistemi

Glioblastoma (GBM) is the most common and most lethal primary brain tumor in adults, causing roughly 14,000 deaths each year in the U.S. alone. Median ...

Live Cell Imaging of the TGF-	&beta;/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Live Cell Imaging of the TGF-	ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System

Hücre görüntüleme TGF-β/Smad3 sinyal yolu Vitro ve Adenovirus muhabir sistemiyle Vivo içinde yaşamak

Transforming Growth Factor &#946; (TGF-&#946;) signaling regulates many important functions required for cellular homeostasis and is commonly found ...

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array (HMCA)-based Plates

Analysis of Cancer Cell Invasion and Anti-metastatic Drug Screening Using Hydrogel Micro-chamber Array HMCA-based Plates

Kanser hücre işgali ve Anti-metastatik uyuşturucu kullanarak hidrojel mikro-odası dizi (HMCA) eleme Analizi-tabak dayalı

Cancer metastasis is known to cause 90% of cancer lethality. Metastasis is a multistage process which initiates with the penetration/invasion of tumor ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

Embriyonik Kök Hücrelerden Granülosit-Makrofaj Kolonisi Uyarıcı Faktör Taşıyan EkzozomLa Zenginleştirilmiş Hücre Dışı Veziküllerin İzolasyonu

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

İnce Barsak Nöroendokrin Tümör Spheroidlerinin Kurulması ve Karakterizasyonu

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Mapping the Structure-Function Relationships of Disordered Oncogenic Transcription Factors Using Transcriptomic Analysis

Transcriptomik Analiz Kullanarak Düzensiz Onkojenik Transkripsiyon Faktörlerinin Yapı-fonksiyon İlişkilerinin Eşlenmesini

Many cancers are characterized by chromosomal translocations which result in the expression of oncogenic fusion transcription factors. Typically, these ...

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Identification of EGFR and RAS Inhibitors using Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans kullanılarak EGFR ve RAS inhibitörlerinin tanımlanması

The changes in the plasma membrane localization of the epidermal growth factor receptor (EGFR) and its downstream effector RAS have been implicated in ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

Hızlı ve Nicel Intravital Chick Chorioallantoic Membran Modeli Kullanılarak Metastatik Regülatörlerin Keşfi

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...

A Rapid Screening Workflow to Identify Potential Combination Therapy for GBM using Patient-Derived Glioma Stem Cells

Hasta Kaynaklı Glioma Kök Hücreleri Kullanarak GBM için Potansiyel Kombinasyon Tedavisini Belirlemek için Hızlı Tarama İş Akışı

The glioma stem cells (GSCs) are a small fraction of cancer cells which play essential roles in tumor initiation, angiogenesis, and drug resistance in ...