Name: is my mouse pregnant? high-frequency ultrasound assessment
Uploaded: 2021-03-18T14:00:00
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Toutes les étapes de ce protocole suivent le Guide for the Care and Use of Laboratory Animals publié par les National Institutes of Health et ont été approuvées par l’Institutional Animal Care and Use Committee de la Grossman School of Medicine de l’Université de New York.
1. Accouplement de souris pour des grossesses chronométrées
<ol><li>Associez la souris femelle appropriée (habituellement un hétérozygote) dans une cage avec la souris mâle appropriée (habituellement un h?...

<ol>
	<li>Bogue, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Phenome+Database:+an+integrative+database+and+analysis+suite+for+curated+empirical+phenotype+data+from+laboratory+mice.">Mouse Phenome Database: an integrative database and analysis suite for curated empirical phenotype data from laboratory mice.</a> Nucleic Acids Research. 46, 843-850 (2018).</li><li>Ito, R., Takahashi, T., Ito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+models:+Application+to+human+diseases.">Humanized mouse models: Application to human diseases.</a> Journal of Cellular Physiology. 233 (5), 3723-3728 (2018).</li><li>Law, M., Shaw, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Genome+Informatics+(MGI)+is+the+international+resource+for+information+on+the+laboratory+mouse.">Mouse Genome Informatics (MGI) is the international resource for information on the laboratory mouse.</a> Methods in Molecular Biology. 1757, 141-161 (2018).</li><li>Rydell-T&#246;rm&#228;nen, K., Johnson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+applicability+of+mouse+models+to+the+study+of+human+disease.">The applicability of mouse models to the study of human disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1940, 3-22 (2019).</li><li>Hinton, R. B., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+valve+structure+and+function+in+development+and+disease.">Heart valve structure and function in development and disease.</a> Annual Reviews of Physiology. 73, 29-46 (2011).</li><li>Dickinson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+discovery+of+novel+developmental+phenotypes.">High-throughput discovery of novel developmental phenotypes.</a> Nature. 537 (7621), 508-514 (2016).</li><li>Tam, P. P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+embryonic+head+in+the+mouse:+attributes+of+a+gene+regulatory+network.">Formation of the embryonic head in the mouse: attributes of a gene regulatory network.</a> Current Topics in Developmental Biology. 117, 497-521 (2016).</li><li>Palis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell-independent+hematopoiesis:+emergence+of+erythroid,+megakaryocyte,+and+myeloid+potential+in+the+mammalian+embryo.">Hematopoietic stem cell-independent hematopoiesis: emergence of erythroid, megakaryocyte, and myeloid potential in the mammalian embryo.</a> FEBS Letters. 590 (22), 3965-3974 (2016).</li><li>Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selecting+female+mice+in+estrus+and+checking+plugs.">Selecting female mice in estrus and checking plugs.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2016 (8), (2016).</li><li>Heyne, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+reliable+method+for+early+pregnancy+detection+in+inbred+mice.">A simple and reliable method for early pregnancy detection in inbred mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (4), 368-371 (2015).</li><li>Finlay, J. B., Liu, X., Ermel, R. W., Adamson, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+weight+gain+as+a+predictor+of+litter+size+in+Swiss+Webster,+C57BL/6J,+and+BALB/cJ+mice.">Maternal weight gain as a predictor of litter size in Swiss Webster, C57BL/6J, and BALB/cJ mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (6), 694-699 (2015).</li><li>Zhou, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+for+multifrequency+ultrasound+biomicroscopy+in+mice+from+implantation+to+adulthood.">Applications for multifrequency ultrasound biomicroscopy in mice from implantation to adulthood.</a> Physiological Genomics. 10 (2), 113-126 (2002).</li><li>Ji, R. P., Phoon, C. K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+localization+of+nuclear+factor+of+activated+T+cells+c1-/-+mouse+embryos+by+ultrasound+biomicroscopy-Doppler+allows+genotype-phenotype+correlation.">Noninvasive localization of nuclear factor of activated T cells c1-/- mouse embryos by ultrasound biomicroscopy-Doppler allows genotype-phenotype correlation.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 18 (12), 1415-1421 (2005).</li><li>Kulandavelu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+and+neonatal+phenotyping+of+genetically+engineered+mice.">Embryonic and neonatal phenotyping of genetically engineered mice.</a> ILAR Journal. 47 (2), 103-117 (2006).</li><li>Mu, J., Slevin, J. C., Qu, D., McCormick, S., Adamson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+quantification+of+embryonic+and+placental+growth+during+gestation+in+mice+using+micro-ultrasound.">In vivo quantification of embryonic and placental growth during gestation in mice using micro-ultrasound.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 6, 34 (2008).</li><li>Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+imaging+in+mice.">Cardiovascular imaging in mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 6 (1), 15-38 (2016).</li><li>Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy-Doppler+in+mouse+cardiovascular+development.">Ultrasound biomicroscopy-Doppler in mouse cardiovascular development.</a> Physiological Genomics. 14 (1), 3-15 (2003).</li><li>Peavey, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+use+of+three-dimensional+high-frequency+ultrasonography+for+early+pregnancy+characterization+in+the+mouse.">A novel use of three-dimensional high-frequency ultrasonography for early pregnancy characterization in the mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (128), e56207 (2017).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+frequency+ultrasound+for+in+vivo+pregnancy+diagnosis+and+staging+of+placental+and+fetal+development+in+mice.">High frequency ultrasound for in vivo pregnancy diagnosis and staging of placental and fetal development in mice.</a> PLoS One. 8 (10), 77205 (2013).</li><li>Flores, L. E., Hildebrandt, T. B., K&#252;hl, A. A., Drews, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+and+staging+of+spontaneous+embryo+resorption+by+ultrasound+biomicroscopy+in+murine+pregnancy.">Early detection and staging of spontaneous embryo resorption by ultrasound biomicroscopy in murine pregnancy.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 12, 38 (2014).</li><li>Norton, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refinements+for+embryo+implantation+surgery+in+the+mouse:+comparison+of+injectable+and+inhalant+anesthesias+-+tribromoethanol,+ketamine+and+isoflurane+-+on+pregnancy+and+pup+survival.">Refinements for embryo implantation surgery in the mouse: comparison of injectable and inhalant anesthesias - tribromoethanol, ketamine and isoflurane - on pregnancy and pup survival.</a> Laboratory Animal. 50 (5), 335-343 (2016).</li><li>Thaete, L. G., Levin, S. I., Dudley, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anaesthetics+and+analgesics+on+fetal+growth+in+the+mouse.">Impact of anaesthetics and analgesics on fetal growth in the mouse.</a> Laboratory Animal. 47 (3), 175-183 (2013).</li><li>Phoon, C. K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tafazzin+knockdown+in+mice+leads+to+a+developmental+cardiomyopathy+with+early+diastolic+dysfunction+preceding+myocardial+noncompaction.">Tafazzin knockdown in mice leads to a developmental cardiomyopathy with early diastolic dysfunction preceding myocardial noncompaction.</a> Journal of the American Heart Association. 1 (2), (2012).</li></ol>

La première étape la plus importante de l’imagerie consiste à identifier le vagin, puis à déterminer la bifurcation de la corne utérine à gauche et à droite. En suivant chaque corne utérine, l’imageur est moins susceptible de mal identifier les boucles de l’intestin comme l’utérus. De plus, il est important de comprendre les variations de l’apparence de l’intestin (avec/sans matières fécales) pour les distinguer de l’utérus; à l’occasion, les « boules » fécales dans les boucles intestinal...

La souris est le modèle de mammifère préféré pour de nombreuses maladies humaines et processus biologiques1,2,3,4. La recherche en biologie du développement nécessite souvent des souris enceintes en phase pour déterminer les processus évolutifs à divers points de temps5,6,7,8. De plus, la reproduction optimale et efficace de souris modèles nécessite une évaluation des grossesses chronométré, en particulier lorsque les chercheurs étudient les effets d’une mutation génétique sur le développement. Typiquement, les enquêteurs accouplent des souris hétérozygotes pendant la nuit, cherchent un bouchon vaginal tôt le lendemain matin et espèrent qu’une grossesse s’ensuit9. La détermination de la perte intra-utérine commence généralement par la vérification d’une portée néonatale pour les ratios mendéliens de génotypes, puis par le travail à l’envers en sacrifiant des souris gravides à divers stades gestationnels et en récupérant les embryons. Les investigateurs peuvent déterminer la prise de poids comme mesure d’une grossesse positive10,11; cependant, en particulier avec les souris génétiquement modifiées, les portées peuvent être très petites et par la suite résorbées lorsqu’il y a perte intra-utérine en raison de laquelle le gain de poids peut ne pas être évident (en particulier au début de la grossesse, ~ E6,5-8,5). Une souris peut sembler faussement enceinte en raison, par exemple, d’une tumeur abdominale bénigne. En substance, on travaille « aveugle ».
La biomicroscopie ultrasonore à haute résolution permet la visualisation directe de l’utérus gravide et le développement d’embryons de souris12,13,14,15,16. Bien que nous ayons initialement développé des méthodes pour évaluer la physiologie cardiovasculaire embryonnaire de la souris16,17,nous avons reconnu l’utilité de cette modalité d’imagerie pour rationaliser notre élevage de souris. Plus précisément, nous n’avions plus à attendre pour « voir » si une souris était enceinte, en fonction du gain de poids évident ou de la livraison d’une portée; nous pourrions déterminer l’état gravide et réapprisser rapidement les souris si la mère n’était pas enceinte. De plus, les pertes intra-utérines pourraient également être facilement iées, et une chronologie des pertes pourrait être déterminée sans sacrifier la souris (voir la figure 1 pour un schéma). Du temps, des souris modèles précieuses et des fonds peuvent ainsi être économisés.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 70%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fur clippers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze or KimWipes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical oxygen (optional)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse imaging system (including anesthesia set-up and imaging platform)</td>
			<td>Fujifilm Visual Sonics</td>
			<td>Various</td>
			<td>Any system with 40 MHz center-frequency ultrasound transducer probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade (not a safety razor)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale (to weigh mouse)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

is my mouse pregnant? high-frequency ultrasound assessment

La souris est le modèle animal mammifère de choix pour de nombreuses maladies humaines et processus biologiques. La biologie du développement exige souvent que les souris enceintes étagés déterminent les processus en évolution à divers moments. De plus, l’élevage optimal et efficace de souris modèles nécessite une évaluation des grossesses chronométré. Le plus souvent, les souris sont accouplées pendant la nuit et la présence d’un bouchon vaginal est déterminée; cependant, la valeur prédictive positive de cette technique est sous-optimale, et il faut attendre de savoir si la souris est vraiment enceinte. La biomicroscopie ultrasonore à haute résolution est un outil efficace et efficient pour l’imagerie: 1) Si une souris est enceinte; 2) Quel stade gestationnel la souris a atteint; et 3) S’il y a des pertes intra-utérines. En plus des embryons et des fœtus, l’investigateur doit également identifier des artefacts communs dans la cavité abdominale afin de ne pas les confondre avec un utérus gravide. Cet article fournit un protocole pour l’imagerie avec des exemples illustratifs.

Ce protocole permettra à un investigateur de déterminer en toute confiance si une souris est enceinte, y compris pendant les premiers stades et de déterminer s’il y a des pertes embryonnaires ou fœtales prénatales évidentes sans avoir à sacrifier la mère enceinte. Ce protocole est particulièrement utile lors de l’élevage de souris génétiquement modifiées; typiquement, les croisements hétérozygotes x hétérozygotes pour produire la progéniture homozygote mènent à l’échec du développement appropr...

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Is My Mouse Pregnant? High-Frequency Ultrasound Assessment

Les ultrasons à haute résolution peuvent aider à rationaliser les expériences nécessitant des souris enceintes chronométré en déterminant l’état de la grossesse, l’âge gestationnel et les pertes de grossesse. Présenté ici est un protocole pour illustrer des méthodes pour évaluer des grossesses de souris aussi bien que des pièges potentiels (artefacts d’image) qui peuvent imiter la grossesse.

Ma souris est-elle enceinte? Évaluation par ultrasons à haute fréquence

The mouse is the mammalian animal model of choice for many human diseases and biological processes. Developmental biology often requires staged-pregnant ...

Les ultrasons à haute résolution peuvent aider à rationaliser les expériences nécessitant des souris gravides chronométré en déterminant l’état de la grossesse, l’âge gestationnel et les pertes de grossesse. Ce protocole démontre comment évaluer des grossesses de souris et identifier des objets façonné potentiels d’image qui peuvent imiter la grossesse. Pour commencer, identifiez la vessie à l’écran.Balayage caudale de la vessie, identifier le vagin. Lorsque le transducteur à ultrasons est positionné à mi-ligne et bas sur l’abdomen, la vessie et le vagin sont visibles. Puis en balayant lentement et en douceur dans une direction crânienne, identifier la bifurcation du vagin dans les cornes utérines gauche et droite.Arpentez les cornes utérines gauche et droite. Jusqu’à mi-gestation, les embryons de souris seront positionnés le long des périphéries droite et gauche. Au fur et à mesure qu’ils grandissent, les parties les plus distales de l’utérus et leurs embryons correspondants se tournent vers l’extérieur et dorsalement.Ce protocole est particulièrement utile lors de l’élevage de souris génétiquement modifiées. Typiquement, les croisements hétérozygotes avec des croisements hétérozygotes pour produire la progéniture homozygote mènent à l’échec du développement approprié, causant la létalité prénatale. Les embryons de souris à différents stades de développement sont présentés ici.Les embryons de souris à un stade précoce, les embryons morts ou les embryons résorbés peuvent ressembler à d’autres organes de l’abdomen ou à des matières fécales dans les intestins, tandis que les boucles intestinales peuvent imiter l’utérus non gravide. Certains chercheurs préfèrent utiliser un transducteur monté sur scène, comme le montre cette image, mais nous préférons la méthode de balayage portable, car cela permet une imagerie rapide et efficace dans tout l’abdomen.

Research

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Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

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