Name: is my mouse pregnant? high-frequency ultrasound assessment
Uploaded: 2021-03-18T14:00:00
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Tutte le fasi di questo protocollo seguono la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio pubblicata dal National Institutes of Health e sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee della Grossman School of Medicine della New York University.
1. Accoppiamento di topi per gravidanze a tempo
<ol><li>Abbina il topo femmina appropriato (di solito un eterozigote) in una gabbia con il topo maschio appropriato (di solito un eterozigote) per l'accoppiamento nottur...

<ol>
	<li>Bogue, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Phenome+Database:+an+integrative+database+and+analysis+suite+for+curated+empirical+phenotype+data+from+laboratory+mice.">Mouse Phenome Database: an integrative database and analysis suite for curated empirical phenotype data from laboratory mice.</a> Nucleic Acids Research. 46, 843-850 (2018).</li><li>Ito, R., Takahashi, T., Ito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+models:+Application+to+human+diseases.">Humanized mouse models: Application to human diseases.</a> Journal of Cellular Physiology. 233 (5), 3723-3728 (2018).</li><li>Law, M., Shaw, D. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+embryonic+head+in+the+mouse:+attributes+of+a+gene+regulatory+network.">Formation of the embryonic head in the mouse: attributes of a gene regulatory network.</a> Current Topics in Developmental Biology. 117, 497-521 (2016).</li><li>Palis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell-independent+hematopoiesis:+emergence+of+erythroid,+megakaryocyte,+and+myeloid+potential+in+the+mammalian+embryo.">Hematopoietic stem cell-independent hematopoiesis: emergence of erythroid, megakaryocyte, and myeloid potential in the mammalian embryo.</a> FEBS Letters. 590 (22), 3965-3974 (2016).</li><li>Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selecting+female+mice+in+estrus+and+checking+plugs.">Selecting female mice in estrus and checking plugs.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2016 (8), (2016).</li><li>Heyne, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+reliable+method+for+early+pregnancy+detection+in+inbred+mice.">A simple and reliable method for early pregnancy detection in inbred mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (4), 368-371 (2015).</li><li>Finlay, J. B., Liu, X., Ermel, R. W., Adamson, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+weight+gain+as+a+predictor+of+litter+size+in+Swiss+Webster,+C57BL/6J,+and+BALB/cJ+mice.">Maternal weight gain as a predictor of litter size in Swiss Webster, C57BL/6J, and BALB/cJ mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (6), 694-699 (2015).</li><li>Zhou, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+for+multifrequency+ultrasound+biomicroscopy+in+mice+from+implantation+to+adulthood.">Applications for multifrequency ultrasound biomicroscopy in mice from implantation to adulthood.</a> Physiological Genomics. 10 (2), 113-126 (2002).</li><li>Ji, R. P., Phoon, C. K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+localization+of+nuclear+factor+of+activated+T+cells+c1-/-+mouse+embryos+by+ultrasound+biomicroscopy-Doppler+allows+genotype-phenotype+correlation.">Noninvasive localization of nuclear factor of activated T cells c1-/- mouse embryos by ultrasound biomicroscopy-Doppler allows genotype-phenotype correlation.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 18 (12), 1415-1421 (2005).</li><li>Kulandavelu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+and+neonatal+phenotyping+of+genetically+engineered+mice.">Embryonic and neonatal phenotyping of genetically engineered mice.</a> ILAR Journal. 47 (2), 103-117 (2006).</li><li>Mu, J., Slevin, J. C., Qu, D., McCormick, S., Adamson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+quantification+of+embryonic+and+placental+growth+during+gestation+in+mice+using+micro-ultrasound.">In vivo quantification of embryonic and placental growth during gestation in mice using micro-ultrasound.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 6, 34 (2008).</li><li>Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+imaging+in+mice.">Cardiovascular imaging in mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 6 (1), 15-38 (2016).</li><li>Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy-Doppler+in+mouse+cardiovascular+development.">Ultrasound biomicroscopy-Doppler in mouse cardiovascular development.</a> Physiological Genomics. 14 (1), 3-15 (2003).</li><li>Peavey, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+use+of+three-dimensional+high-frequency+ultrasonography+for+early+pregnancy+characterization+in+the+mouse.">A novel use of three-dimensional high-frequency ultrasonography for early pregnancy characterization in the mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (128), e56207 (2017).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+frequency+ultrasound+for+in+vivo+pregnancy+diagnosis+and+staging+of+placental+and+fetal+development+in+mice.">High frequency ultrasound for in vivo pregnancy diagnosis and staging of placental and fetal development in mice.</a> PLoS One. 8 (10), 77205 (2013).</li><li>Flores, L. E., Hildebrandt, T. B., K&#252;hl, A. A., Drews, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+and+staging+of+spontaneous+embryo+resorption+by+ultrasound+biomicroscopy+in+murine+pregnancy.">Early detection and staging of spontaneous embryo resorption by ultrasound biomicroscopy in murine pregnancy.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 12, 38 (2014).</li><li>Norton, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refinements+for+embryo+implantation+surgery+in+the+mouse:+comparison+of+injectable+and+inhalant+anesthesias+-+tribromoethanol,+ketamine+and+isoflurane+-+on+pregnancy+and+pup+survival.">Refinements for embryo implantation surgery in the mouse: comparison of injectable and inhalant anesthesias - tribromoethanol, ketamine and isoflurane - on pregnancy and pup survival.</a> Laboratory Animal. 50 (5), 335-343 (2016).</li><li>Thaete, L. G., Levin, S. I., Dudley, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anaesthetics+and+analgesics+on+fetal+growth+in+the+mouse.">Impact of anaesthetics and analgesics on fetal growth in the mouse.</a> Laboratory Animal. 47 (3), 175-183 (2013).</li><li>Phoon, C. K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tafazzin+knockdown+in+mice+leads+to+a+developmental+cardiomyopathy+with+early+diastolic+dysfunction+preceding+myocardial+noncompaction.">Tafazzin knockdown in mice leads to a developmental cardiomyopathy with early diastolic dysfunction preceding myocardial noncompaction.</a> Journal of the American Heart Association. 1 (2), (2012).</li></ol>

Il primo passo più importante nell'imaging è identificare la vagina e quindi determinare la biforcazione del corno uterino a sinistra e a destra. Seguendo ogni corno uterino, è meno probabile che l'imager identifichi erroneamente i loop dell'intestino come utero. Inoltre, comprendere le variazioni nell'aspetto dell'intestino (con /senza materia fecale) è importante per distinguerli dall'utero; occasionalmente, le "palle" fecali negli anelli intestinali possono imitare un utero gravide (incinta). Sebbene altri autori ...

Il topo è il modello di mammifero preferito per molte malattie umane e processibiologici 1,2,3,4. La ricerca in biologia dello sviluppo richiede spesso topi in gravidanza a fasi per determinare i processi in evoluzione in varipunti di tempo 5,6,7,8. Inoltre, l'allevamento ottimale ed efficace di topi modello richiede una valutazione delle gravidanze a tempo, in particolare quando gli investigatori stanno studiando gli effetti di una mutazione genica sullo sviluppo. In genere, gli investigatori accoppiano topi eterozigoti durante la notte, cercano una spina vaginale la mattina successiva e sperano che ne suscidauna gravidanza 9. Determinare la perdita intrauterina inizia in genere con il controllo di una cucciolata appena nata per i rapporti mendeliani dei genotipi, quindi lavorando all'indietro sacrificando i topi gravidi in varie fasi gestazionali e recuperando gli embrioni. Gli investigatori possono determinare l'aumento di peso come metrica di una gravidanzapositiva 10,11; tuttavia, specialmente con topi geneticamente modificati, le cucciolate possono essere molto piccole e successivamente riassorbiti quando c'è perdita intrauterina a causa della quale l'aumento di peso potrebbe non essere ovvio (in particolare all'inizio della gravidanza, ~ E6.5-8.5). Un topo può apparire falsamente incinta a causa, ad esempio, di un tumore addominale benigno. In sostanza, si lavora "ciechi".
La biomicroscopia ad ultrasuoni ad alta risoluzione consente la visualizzazione diretta dell'utero gravidato e lo sviluppo di embrioni ditopo 12,13,14,15,16. Sebbene inizialmente avessimo sviluppato metodi per valutare la fisiologia cardiovascolare del topo embrionale16,17, abbiamo riconosciuto l'utilità di questa modalità di imaging per semplificare il nostro allevamento di topi. In particolare, non abbiamo più dovuto aspettare di "vedere" se un topo era incinta, in base all'ovvio aumento di peso o alla consegna di una cucciolata; potremmo determinare lo stato gravid e ri-accoppiare rapidamente i topi se la diga non era incinta. Inoltre, le perdite intrauterina potrebbero anche essere facilmente individuate e una sequenza temporale di perdita potrebbe essere determinata senza sacrificare il mouse (vedi figura 1 per uno schema). Il tempo, i topi modello preziosi e i fondi possono quindi essere risparmiati.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 70%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fur clippers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze or KimWipes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical oxygen (optional)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse imaging system (including anesthesia set-up and imaging platform)</td>
			<td>Fujifilm Visual Sonics</td>
			<td>Various</td>
			<td>Any system with 40 MHz center-frequency ultrasound transducer probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade (not a safety razor)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale (to weigh mouse)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

is my mouse pregnant? high-frequency ultrasound assessment

Il topo è il modello animale di mammiferi preferito per molte malattie umane e processi biologici. La biologia dello sviluppo richiede spesso topi in gravidanza a fasi per determinare i processi in evoluzione in vari punti di tempo. Inoltre, l'allevamento ottimale ed efficiente dei topi modello richiede una valutazione delle gravidanze a tempo. Più comunemente, i topi vengono accoppiati durante la notte e viene determinata la presenza di una spina vaginale; tuttavia, il valore predittivo positivo di questa tecnica è non ottimale e bisogna aspettare per sapere se il topo è veramente incinta. La biomicroscopia ad ultrasuoni ad alta risoluzione è uno strumento efficace ed efficiente per l'imaging: 1) Se un topo è incinta; 2) Quale stadio gestazionale ha raggiunto il topo; e 3) Se ci sono perdite intrauterina. Oltre agli embrioni e ai feti, l'investigatore deve anche riconoscere artefatti comuni nella cavità addominale in modo da non scambiarli per un utero gravide. Questo articolo fornisce un protocollo per l'imaging insieme ad esempi illustrativi.

Questo protocollo consentirà a uno sperimentatore di determinare con sicurezza se un topo è incinta, anche durante le prime fasi e di determinare se ci sono evidenti perdite embrionali o fetali prenatali senza dover sacrificare la diga incinta. Questo protocollo è particolarmente utile quando si allevano topi geneticamente modificati; tipicamente, le croci eterozigoti x eterozigoti per produrre prole omozigota portano al fallimento di uno sviluppo adeguato, che causa letalità prenatale. La figura...

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Is My Mouse Pregnant? High-Frequency Ultrasound Assessment

Gli ultrasuoni ad alta risoluzione possono aiutare a semplificare gli esperimenti che richiedono topi in gravidanza a tempo determinando lo stato di gravidanza, l'età gestazionale e le perdite di gravidanza. Presentato qui è un protocollo per illustrare i metodi per valutare le gravidanze del mouse e potenziali insidie (artefatti dell'immagine) che possono imitare la gravidanza.

Il mio topo è incinta? Valutazione ecografico ad alta frequenza

The mouse is the mammalian animal model of choice for many human diseases and biological processes. Developmental biology often requires staged-pregnant ...

Gli ultrasuoni ad alta risoluzione possono aiutare a semplificare gli esperimenti che richiedono topi gravidi a tempo determinando lo stato di gravidanza, l'età gestazionale e le perdite di gravidanza. Questo protocollo dimostra come valutare le gravidanze del mouse e identificare potenziali artefatti dell'immagine che possono imitare la gravidanza. Per iniziare, identificare la vescica sullo schermo.Scansionando caudally dalla vescica, identificare la vagina. Quando il trasduttore ad ultrasuoni è posizionato a metà linea e basso sull'addome, la vescica e la vagina sono visibili. Quindi scansionare lentamente e senza intoppi in una direzione cranica, identificare la biforcazione della vagina nelle corna uterine sinistra e destra.Rilevamento delle corna uterine sinistra e destra. Fino alla gestazione media, gli embrioni di topo saranno posizionati lungo le periferie destra e sinistra. Man mano che crescono, le porzioni più distali dell'utero e i loro embrioni corrispondenti si trasformeranno verso l'esterno e dorsalmente.Questo protocollo è particolarmente utile quando si allevano topi geneticamente modificati. Tipicamente, eterozigoti con croci eterozigoti per produrre prole omozigota portano al fallimento di uno sviluppo adeguato, causando letalità prenatale. Qui vengono mostrati embrioni di topo in varie fasi di sviluppo.Embrioni di topo allo stadio iniziale, embrioni morti o embrioni riassorbiti possono assomigliare ad altri organi nell'addome o nelle feci nell'intestino, mentre gli anelli intestinali possono imitare l'utero non gravid. Alcuni investigatori preferiscono utilizzare un trasduttore montato sul palco, come mostrato in questa immagine, ma preferiamo il metodo di scansione portatile, poiché ciò consente immagini veloci ed efficienti in tutto l'addome.

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Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Valutazione dei danni ossidativi nelle cellule primarie della superficie oculare del topo/cellule staminali in risposta ai danni ultravioletti-C (UV-C)

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