Name: is my mouse pregnant? high-frequency ultrasound assessment
Uploaded: 2021-03-18T14:00:00
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このプロトコルのすべての手順は、国立衛生研究所が発行し、ニューヨーク大学グロスマン医学部の施設動物ケアと使用委員会によって承認された実験動物のケアと使用のためのガイドに従います。
1. 時を取った妊娠のためのマウスの交配
<ol><li>ケージ内の適切なメスマウス(通常はヘテロジゴテ)と適切な雄マウス(通常はヘテロジゴテ)を一晩の交配に対してペアリン?...

<ol>
	<li>Bogue, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Phenome+Database:+an+integrative+database+and+analysis+suite+for+curated+empirical+phenotype+data+from+laboratory+mice.">Mouse Phenome Database: an integrative database and analysis suite for curated empirical phenotype data from laboratory mice.</a> Nucleic Acids Research. 46, 843-850 (2018).</li><li>Ito, R., Takahashi, T., Ito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+models:+Application+to+human+diseases.">Humanized mouse models: Application to human diseases.</a> Journal of Cellular Physiology. 233 (5), 3723-3728 (2018).</li><li>Law, M., Shaw, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Genome+Informatics+(MGI)+is+the+international+resource+for+information+on+the+laboratory+mouse.">Mouse Genome Informatics (MGI) is the international resource for information on the laboratory mouse.</a> Methods in Molecular Biology. 1757, 141-161 (2018).</li><li>Rydell-T&#246;rm&#228;nen, K., Johnson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+applicability+of+mouse+models+to+the+study+of+human+disease.">The applicability of mouse models to the study of human disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1940, 3-22 (2019).</li><li>Hinton, R. B., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+valve+structure+and+function+in+development+and+disease.">Heart valve structure and function in development and disease.</a> Annual Reviews of Physiology. 73, 29-46 (2011).</li><li>Dickinson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+discovery+of+novel+developmental+phenotypes.">High-throughput discovery of novel developmental phenotypes.</a> Nature. 537 (7621), 508-514 (2016).</li><li>Tam, P. P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+embryonic+head+in+the+mouse:+attributes+of+a+gene+regulatory+network.">Formation of the embryonic head in the mouse: attributes of a gene regulatory network.</a> Current Topics in Developmental Biology. 117, 497-521 (2016).</li><li>Palis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell-independent+hematopoiesis:+emergence+of+erythroid,+megakaryocyte,+and+myeloid+potential+in+the+mammalian+embryo.">Hematopoietic stem cell-independent hematopoiesis: emergence of erythroid, megakaryocyte, and myeloid potential in the mammalian embryo.</a> FEBS Letters. 590 (22), 3965-3974 (2016).</li><li>Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selecting+female+mice+in+estrus+and+checking+plugs.">Selecting female mice in estrus and checking plugs.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2016 (8), (2016).</li><li>Heyne, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+reliable+method+for+early+pregnancy+detection+in+inbred+mice.">A simple and reliable method for early pregnancy detection in inbred mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (4), 368-371 (2015).</li><li>Finlay, J. B., Liu, X., Ermel, R. W., Adamson, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+weight+gain+as+a+predictor+of+litter+size+in+Swiss+Webster,+C57BL/6J,+and+BALB/cJ+mice.">Maternal weight gain as a predictor of litter size in Swiss Webster, C57BL/6J, and BALB/cJ mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (6), 694-699 (2015).</li><li>Zhou, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+for+multifrequency+ultrasound+biomicroscopy+in+mice+from+implantation+to+adulthood.">Applications for multifrequency ultrasound biomicroscopy in mice from implantation to adulthood.</a> Physiological Genomics. 10 (2), 113-126 (2002).</li><li>Ji, R. P., Phoon, C. K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+localization+of+nuclear+factor+of+activated+T+cells+c1-/-+mouse+embryos+by+ultrasound+biomicroscopy-Doppler+allows+genotype-phenotype+correlation.">Noninvasive localization of nuclear factor of activated T cells c1-/- mouse embryos by ultrasound biomicroscopy-Doppler allows genotype-phenotype correlation.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 18 (12), 1415-1421 (2005).</li><li>Kulandavelu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+and+neonatal+phenotyping+of+genetically+engineered+mice.">Embryonic and neonatal phenotyping of genetically engineered mice.</a> ILAR Journal. 47 (2), 103-117 (2006).</li><li>Mu, J., Slevin, J. C., Qu, D., McCormick, S., Adamson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+quantification+of+embryonic+and+placental+growth+during+gestation+in+mice+using+micro-ultrasound.">In vivo quantification of embryonic and placental growth during gestation in mice using micro-ultrasound.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 6, 34 (2008).</li><li>Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+imaging+in+mice.">Cardiovascular imaging in mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 6 (1), 15-38 (2016).</li><li>Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy-Doppler+in+mouse+cardiovascular+development.">Ultrasound biomicroscopy-Doppler in mouse cardiovascular development.</a> Physiological Genomics. 14 (1), 3-15 (2003).</li><li>Peavey, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+use+of+three-dimensional+high-frequency+ultrasonography+for+early+pregnancy+characterization+in+the+mouse.">A novel use of three-dimensional high-frequency ultrasonography for early pregnancy characterization in the mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (128), e56207 (2017).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+frequency+ultrasound+for+in+vivo+pregnancy+diagnosis+and+staging+of+placental+and+fetal+development+in+mice.">High frequency ultrasound for in vivo pregnancy diagnosis and staging of placental and fetal development in mice.</a> PLoS One. 8 (10), 77205 (2013).</li><li>Flores, L. E., Hildebrandt, T. B., K&#252;hl, A. A., Drews, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+and+staging+of+spontaneous+embryo+resorption+by+ultrasound+biomicroscopy+in+murine+pregnancy.">Early detection and staging of spontaneous embryo resorption by ultrasound biomicroscopy in murine pregnancy.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 12, 38 (2014).</li><li>Norton, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refinements+for+embryo+implantation+surgery+in+the+mouse:+comparison+of+injectable+and+inhalant+anesthesias+-+tribromoethanol,+ketamine+and+isoflurane+-+on+pregnancy+and+pup+survival.">Refinements for embryo implantation surgery in the mouse: comparison of injectable and inhalant anesthesias - tribromoethanol, ketamine and isoflurane - on pregnancy and pup survival.</a> Laboratory Animal. 50 (5), 335-343 (2016).</li><li>Thaete, L. G., Levin, S. I., Dudley, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anaesthetics+and+analgesics+on+fetal+growth+in+the+mouse.">Impact of anaesthetics and analgesics on fetal growth in the mouse.</a> Laboratory Animal. 47 (3), 175-183 (2013).</li><li>Phoon, C. K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tafazzin+knockdown+in+mice+leads+to+a+developmental+cardiomyopathy+with+early+diastolic+dysfunction+preceding+myocardial+noncompaction.">Tafazzin knockdown in mice leads to a developmental cardiomyopathy with early diastolic dysfunction preceding myocardial noncompaction.</a> Journal of the American Heart Association. 1 (2), (2012).</li></ol>

画像化における最も重要な最初のステップは、膣を識別し、次に左右に子宮角の分岐を決定することです。各子宮ホーンに従うことによって、イメージャーは子宮として腸のループを誤って識別する可能性が低い。さらに、腸の外観の変化を理解することは重要です(便の有無にかかわらず)これらは子宮と区別する必要があります。時折、腸ループの便「ボール」は、グラビッド(妊娠)子宮を...

マウスは、多くのヒト疾患および生物学的プロセス1、2、3、4に好ましい哺乳類モデルである。発生生物学の研究では、多くの場合、様々な時点点5、6、7、8で進化するプロセスを決定するために、段階的妊娠マウスが必要です。さらに、モデルマウスの最適かつ効果的な繁殖は、特に研究者が遺伝子変異が発症に及ぼす影響を研究している場合に、時限妊娠の評価を必要とする。典型的には、研究者は一晩ヘテロ接合マウスを交尾し、翌朝早く膣プラグを探し、妊娠が9を続けることを望む。子宮内損失の決定は、通常、遺伝子型のメンデリア比の新生児ごみをチェックし、様々な妊娠段階で妊娠中のマウスを犠牲にして後方に働き、胚を回復させることから始まります。研究者は、体重増加を陽性妊娠10、11の指標として決定することができる。しかし、特に遺伝子操作されたマウスでは、体重増加が明らかにならない可能性があるために子宮内損失がある場合(特に妊娠初期の~E6.5~8.5)に、ごみは非常に小さく、その後再起する可能性があります。マウスは、例えば良性腹部腫瘍のために誤って妊娠しているように見えることがある。本質的に、人は「盲目」を働く。
高解像度超音波バイオ顕微鏡は、グラビッド子宮の直接可視化を可能にし、マウス胚を開発12、13、14、15、16。我々は、最初に胚マウス心血管生理学16、17を評価する方法を開発したが、我々は我々のマウスの繁殖を合理化するために、このイメージングモダリティの有用性を認識した。具体的には、明らかな体重増加またはごみの送達に基づいて、マウスが妊娠しているかどうかを「見る」のを待つ必要がなくなりました。ダムが妊娠していない場合、私たちはグラビッド状態を決定し、すぐにマウスを再嵌合することができました。さらに、子宮内損失を容易に画像化することができ、マウスを犠牲にすることなく損失のタイムラインを決定することができます(図1を参照)。時間、貴重なモデルマウス、資金を節約することができます。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 70%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fur clippers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze or KimWipes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical oxygen (optional)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse imaging system (including anesthesia set-up and imaging platform)</td>
			<td>Fujifilm Visual Sonics</td>
			<td>Various</td>
			<td>Any system with 40 MHz center-frequency ultrasound transducer probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade (not a safety razor)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale (to weigh mouse)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

is my mouse pregnant? high-frequency ultrasound assessment

マウスは、多くのヒト疾患および生物学的プロセスに適した哺乳類動物モデルである。発生生物学では、多くの場合、様々な時点で進化するプロセスを決定するために、段階的な妊娠マウスが必要です。さらに、モデルマウスの最適かつ効率的な繁殖には、時効妊娠の評価が必要です。最も一般的には、マウスは一晩で交配され、膣プラグの存在が決定される。しかし、この技術の正の予測値は最適ではなく、マウスが本当に妊娠しているかどうかを知るのを待つ必要があります。高解像度超音波バイオ顕微鏡は、イメージングのための効果的かつ効率的なツールです: 1) マウスが妊娠しているかどうか;2)マウスが到達した妊娠段階。3)子宮内損失があるかどうか。胚および胎児に加えて、研究者はまた、これらを重力子宮と間違えないように、腹腔内の一般的な人工物を認識しなければならない。この記事では、例示の例と共に、イメージング用のプロトコルを提供します。

このプロトコルは、研究者がマウスが妊娠しているかどうかを自信を持って判断することを可能にします, 初期段階を含みます, 妊娠ダムを犠牲にすることなく、明らかな出生前胚または胎児の損失があるかどうかを判断します.このプロトコルは、遺伝子操作されたマウスを繁殖させるときに特に有用である。典型的には、ホモ接合子孫を生み出すためにヘテロ接合xヘテロ接合は、出生前致?...

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Is My Mouse Pregnant? High-Frequency Ultrasound Assessment

高解像度超音波は、妊娠、妊娠年齢、妊娠喪失の状態を決定することによって、時限妊娠マウスを必要とする実験を合理化するのに役立ちます。ここで提示されるは、マウスの妊娠だけでなく、妊娠を模倣する可能性のある潜在的な落とし穴(画像アーティファクト)を評価する方法を説明するためのプロトコルです。

私のマウスは妊娠していますか?高周波超音波評価

The mouse is the mammalian animal model of choice for many human diseases and biological processes. Developmental biology often requires staged-pregnant ...

高解像度超音波は、妊娠、妊娠年齢、および妊娠喪失の状態を決定することによって、タイミングの良い妊娠中のマウスを必要とする実験を合理化するのに役立ちます。このプロトコルは、マウスの妊娠を評価し、妊娠を模倣する可能性のある潜在的な画像アーティファクトを同定する方法を示しています。まず、画面上の膀胱を特定します。膀胱からスキャンし、膣を識別する。超音波トランスデューサが正中に位置し、腹部に低く配置されると、膀胱と膣が見える。その後、頭蓋方向にゆっくりとスムーズにスキャンし、膣の分岐を左右の子宮角に特定する。左右の角を調べてください。妊娠中まで、マウス胚は左右の周辺に沿って配置されます。彼らが成長するにつれて、子宮のより遠位の部分とそれに対応する胚は外側と背部に向かうだろう。このプロトコルは、遺伝子操作されたマウスを繁殖させるときに特に有用である。典型的には、異種性の十字架を持つヘテロ接合は、均質性の子孫を生み出すために適切な発達の失敗をもたらし、出生前致死性を引き起こす。開発の様々な段階でのマウス胚をここに示す。初期段階のマウス胚、死んだ胚、または再吸収胚は、腸内の腹部または便の他の器官に似ている可能性があり、腸管ループは非グラビド子宮を模倣する可能性がある。一部の研究者は、この画像に示すように、ステージマウントトランスデューサを使用することを好むが、これは腹部全体で迅速かつ効率的なイメージングを可能にするので、我々はスキャンのハンドヘルド方法を好む。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

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Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the ...

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高周波超音波を用いて、マウス胚におけるコントラストイメージング

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