Name: is my mouse pregnant? high-frequency ultrasound assessment
Uploaded: 2021-03-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Is My Mouse Pregnant? High-Frequency Ultrasound Assessment at JoVE.com

Alle trinnene i denne protokollen følger Guide for the Care and Use of Laboratory Animals publisert av National Institutes of Health og er godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee ved New York University Grossman School of Medicine.
1. Parring av mus for tidsbetimede graviditeter
<ol><li>Par den aktuelle kvinnelige musen (vanligvis en heterozygote) i et bur med riktig mannlig mus (vanligvis en heterozygote) for parring over natten.</li>
	<li>Skill musene neste morgen. Alterna...

<ol>
	<li>Bogue, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Phenome+Database:+an+integrative+database+and+analysis+suite+for+curated+empirical+phenotype+data+from+laboratory+mice.">Mouse Phenome Database: an integrative database and analysis suite for curated empirical phenotype data from laboratory mice.</a> Nucleic Acids Research. 46, 843-850 (2018).</li><li>Ito, R., Takahashi, T., Ito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+models:+Application+to+human+diseases.">Humanized mouse models: Application to human diseases.</a> Journal of Cellular Physiology. 233 (5), 3723-3728 (2018).</li><li>Law, M., Shaw, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Genome+Informatics+(MGI)+is+the+international+resource+for+information+on+the+laboratory+mouse.">Mouse Genome Informatics (MGI) is the international resource for information on the laboratory mouse.</a> Methods in Molecular Biology. 1757, 141-161 (2018).</li><li>Rydell-T&#246;rm&#228;nen, K., Johnson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+applicability+of+mouse+models+to+the+study+of+human+disease.">The applicability of mouse models to the study of human disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1940, 3-22 (2019).</li><li>Hinton, R. B., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+valve+structure+and+function+in+development+and+disease.">Heart valve structure and function in development and disease.</a> Annual Reviews of Physiology. 73, 29-46 (2011).</li><li>Dickinson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+discovery+of+novel+developmental+phenotypes.">High-throughput discovery of novel developmental phenotypes.</a> Nature. 537 (7621), 508-514 (2016).</li><li>Tam, P. P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+embryonic+head+in+the+mouse:+attributes+of+a+gene+regulatory+network.">Formation of the embryonic head in the mouse: attributes of a gene regulatory network.</a> Current Topics in Developmental Biology. 117, 497-521 (2016).</li><li>Palis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell-independent+hematopoiesis:+emergence+of+erythroid,+megakaryocyte,+and+myeloid+potential+in+the+mammalian+embryo.">Hematopoietic stem cell-independent hematopoiesis: emergence of erythroid, megakaryocyte, and myeloid potential in the mammalian embryo.</a> FEBS Letters. 590 (22), 3965-3974 (2016).</li><li>Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selecting+female+mice+in+estrus+and+checking+plugs.">Selecting female mice in estrus and checking plugs.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2016 (8), (2016).</li><li>Heyne, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+reliable+method+for+early+pregnancy+detection+in+inbred+mice.">A simple and reliable method for early pregnancy detection in inbred mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (4), 368-371 (2015).</li><li>Finlay, J. B., Liu, X., Ermel, R. W., Adamson, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+weight+gain+as+a+predictor+of+litter+size+in+Swiss+Webster,+C57BL/6J,+and+BALB/cJ+mice.">Maternal weight gain as a predictor of litter size in Swiss Webster, C57BL/6J, and BALB/cJ mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (6), 694-699 (2015).</li><li>Zhou, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+for+multifrequency+ultrasound+biomicroscopy+in+mice+from+implantation+to+adulthood.">Applications for multifrequency ultrasound biomicroscopy in mice from implantation to adulthood.</a> Physiological Genomics. 10 (2), 113-126 (2002).</li><li>Ji, R. P., Phoon, C. K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+localization+of+nuclear+factor+of+activated+T+cells+c1-/-+mouse+embryos+by+ultrasound+biomicroscopy-Doppler+allows+genotype-phenotype+correlation.">Noninvasive localization of nuclear factor of activated T cells c1-/- mouse embryos by ultrasound biomicroscopy-Doppler allows genotype-phenotype correlation.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 18 (12), 1415-1421 (2005).</li><li>Kulandavelu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+and+neonatal+phenotyping+of+genetically+engineered+mice.">Embryonic and neonatal phenotyping of genetically engineered mice.</a> ILAR Journal. 47 (2), 103-117 (2006).</li><li>Mu, J., Slevin, J. C., Qu, D., McCormick, S., Adamson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+quantification+of+embryonic+and+placental+growth+during+gestation+in+mice+using+micro-ultrasound.">In vivo quantification of embryonic and placental growth during gestation in mice using micro-ultrasound.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 6, 34 (2008).</li><li>Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+imaging+in+mice.">Cardiovascular imaging in mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 6 (1), 15-38 (2016).</li><li>Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy-Doppler+in+mouse+cardiovascular+development.">Ultrasound biomicroscopy-Doppler in mouse cardiovascular development.</a> Physiological Genomics. 14 (1), 3-15 (2003).</li><li>Peavey, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+use+of+three-dimensional+high-frequency+ultrasonography+for+early+pregnancy+characterization+in+the+mouse.">A novel use of three-dimensional high-frequency ultrasonography for early pregnancy characterization in the mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (128), e56207 (2017).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+frequency+ultrasound+for+in+vivo+pregnancy+diagnosis+and+staging+of+placental+and+fetal+development+in+mice.">High frequency ultrasound for in vivo pregnancy diagnosis and staging of placental and fetal development in mice.</a> PLoS One. 8 (10), 77205 (2013).</li><li>Flores, L. E., Hildebrandt, T. B., K&#252;hl, A. A., Drews, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+and+staging+of+spontaneous+embryo+resorption+by+ultrasound+biomicroscopy+in+murine+pregnancy.">Early detection and staging of spontaneous embryo resorption by ultrasound biomicroscopy in murine pregnancy.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 12, 38 (2014).</li><li>Norton, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refinements+for+embryo+implantation+surgery+in+the+mouse:+comparison+of+injectable+and+inhalant+anesthesias+-+tribromoethanol,+ketamine+and+isoflurane+-+on+pregnancy+and+pup+survival.">Refinements for embryo implantation surgery in the mouse: comparison of injectable and inhalant anesthesias - tribromoethanol, ketamine and isoflurane - on pregnancy and pup survival.</a> Laboratory Animal. 50 (5), 335-343 (2016).</li><li>Thaete, L. G., Levin, S. I., Dudley, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anaesthetics+and+analgesics+on+fetal+growth+in+the+mouse.">Impact of anaesthetics and analgesics on fetal growth in the mouse.</a> Laboratory Animal. 47 (3), 175-183 (2013).</li><li>Phoon, C. K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tafazzin+knockdown+in+mice+leads+to+a+developmental+cardiomyopathy+with+early+diastolic+dysfunction+preceding+myocardial+noncompaction.">Tafazzin knockdown in mice leads to a developmental cardiomyopathy with early diastolic dysfunction preceding myocardial noncompaction.</a> Journal of the American Heart Association. 1 (2), (2012).</li></ol>

Det viktigste første trinnet i bildet er å identifisere skjeden og deretter bestemme bifurkasjonen av livmorhornet til venstre og høyre. Ved å følge hvert livmorhorn er det mindre sannsynlig at imageren feil identifiserer tarmens løkker som livmor. Videre er det viktig å forstå variasjonene i tarmens utseende (med / uten fekal materie) å skille disse fra livmoren; av og til kan fekale "baller" i tarmløkker etterligne en gravid (gravid) livmor. Selv om andre forfattere har beskrevet diagnosen graviditet og iscen...

Musen er den foretrukne pattedyrmodellen for mange menneskelige sykdommer og biologiske prosesser1,2,3,4. Forskning på utviklingsbiologi krever ofte iscenesatte gravide mus for å bestemme utviklende prosesser på ulike tidspunkter5,6,7,8. Videre krever optimal og effektiv avl av modellmus en vurdering av tidsmessige graviditeter, spesielt når etterforskere studerer effekten av en genmutasjon på utvikling. Vanligvis parrer etterforskere heterozygote mus over natten, ser etter en vaginal plugg tidlig neste morgen, og håper at en graviditet følger9. Å bestemme intrauterin tap starter vanligvis med å sjekke et nyfødt søppel for mendeliske forhold mellom genotyper, og deretter jobbe bakover ved å ofre gravide mus på ulike svangerskapsstadier, og gjenopprette embryoene. Etterforskere kan bestemme vektøkning som en beregning av en positiv graviditet10,11; Men spesielt med genetisk konstruerte mus kan kullene være svært små og deretter resorbert når det er intrauterin tap på grunn av hvilken vektøkningen kanskje ikke er åpenbar (spesielt tidlig i svangerskapet, ~ E6,5-8,5). En mus kan virke falsk gravid på grunn av for eksempel en godartet magesvulst. I hovedsak fungerer man "blind".
Høyoppløselig ultralydbiomikroskopi muliggjør direkte visualisering av gravid livmor og utvikling av museembryoer12,13,14,15,16. Selv om vi i utgangspunktet hadde utviklet metoder for å vurdere embryonal mus kardiovaskulær fysiologi16,17, anerkjente vi nytten av denne avbildningsmodaliteten for å effektivisere museavlen vår. Spesielt måtte vi ikke lenger vente med å "se" om en mus var gravid, basert på enten den åpenbare vektøkningen eller leveringen av et søppel; vi kunne bestemme gravid tilstand og re-mate mus raskt hvis demningen ikke var gravid. Videre kan intrauterine tap også lett avbildes, og en tidslinje for tap kan bestemmes uten å ofre musen (se figur 1 for et skjematisk). Tid, verdifulle modellmus og midler kan dermed spares.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 70%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fur clippers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze or KimWipes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical oxygen (optional)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse imaging system (including anesthesia set-up and imaging platform)</td>
			<td>Fujifilm Visual Sonics</td>
			<td>Various</td>
			<td>Any system with 40 MHz center-frequency ultrasound transducer probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade (not a safety razor)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale (to weigh mouse)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

is my mouse pregnant? high-frequency ultrasound assessment

Musen er den pattedyr dyremodellen du velger for mange menneskelige sykdommer og biologiske prosesser. Utviklingsbiologi krever ofte iscenesatte gravide mus for å bestemme utviklende prosesser på ulike tidspunkter. Videre krever optimal og effektiv avl av modellmus en vurdering av tidsdømte graviditeter. Vanligvis er mus parret over natten, og tilstedeværelsen av en vaginal plugg bestemmes; Imidlertid er den positive prediktive verdien av denne teknikken suboptimal, og man må vente med å vite om musen virkelig er gravid. Ultralydbiomikroskopi med høy oppløsning er et effektivt verktøy for avbildning: 1) Om en mus er gravid; 2) Hvilket svangerskapsstadium musen har nådd; og 3) Om det er intrauterine tap. I tillegg til embryoer og fostre må undersøkeren også gjenkjenne vanlige gjenstander i bukhulen for ikke å forveksle disse for en gravid livmor. Denne artikkelen inneholder en protokoll for avbildning sammen med illustrasjonseksempler.

Denne protokollen vil tillate en undersøker å avgjøre trygt om en mus er gravid, inkludert i de tidlige stadiene og for å avgjøre om det er åpenbare prenatale embryonale eller fostertap uten å måtte ofre den gravide demningen. Denne protokollen er spesielt nyttig ved avl av genetisk konstruerte mus; vanligvis fører heterozygote x heterozygote kryss for å gi homozygote avkom til svikt i riktig utvikling, noe som forårsaker prenatal dødelighet. Figur 1 skildrer en representativ sit...

Watch this Scientific Journal Video about Is My Mouse Pregnant? High-Frequency Ultrasound Assessment at JoVE.com

Is My Mouse Pregnant? High-Frequency Ultrasound Assessment

Høyoppløselig ultralyd kan bidra til å strømlinjeforme eksperimenter som krever tidsinnstilte gravide mus ved å bestemme tilstanden til graviditet, svangerskapsalder og graviditetstap. Presentert her er en protokoll for å illustrere metoder for å vurdere musegraviditeter samt potensielle fallgruver (bildeartefakter) som kan etterligne graviditet.

Er musen min gravid? Høyfrekvent ultralydvurdering

The mouse is the mammalian animal model of choice for many human diseases and biological processes. Developmental biology often requires staged-pregnant ...

Ultralyd med høy oppløsning kan bidra til å strømlinjeforme eksperimenter som krever tidsinnstilte gravide mus ved å bestemme tilstanden til graviditet, svangerskapsalder og graviditetstap. Denne protokollen demonstrerer hvordan du vurderer muse graviditeter og identifisere potensielle bildeartefakter som kan etterligne graviditet. For å begynne, identifiser blæren på skjermen.Skanning årsaksmessig fra blæren, identifiser skjeden. Når ultralydtransduseren er plassert midtlinje og lav på magen, er blæren og skjeden synlige. Deretter skanner sakte og jevnt i kranial retning, identifiser bifurkasjonen av skjeden i venstre og høyre livmorhorn.Undermål venstre og høyre livmorhorn. Opptil midten av svangerskapet vil museembryoene bli plassert langs høyre og venstre periferi. Etter hvert som de vokser, vil de mer distale delene av livmoren og deres tilsvarende embryoer vise seg utover og dorsalt.Denne protokollen er spesielt nyttig ved avl av genetisk konstruerte mus. Vanligvis fører heterozygot med heterozygote kryss for å gi homozygote avkom til svikt i riktig utvikling, noe som forårsaker prenatal dødelighet. Museembryoer på ulike stadier av utviklingen er vist her.Tidlige museembryoer, døde embryoer eller resorberte embryoer kan ligne andre organer i magen eller avføring i tarmene, mens tarmløkker kan etterligne ikke-gravid livmor. Noen etterforskere foretrekker å bruke en scenemontert svinger, for eksempel vist i dette bildet, men vi foretrekker den håndholdte skannemetoden, siden dette gir rask og effektiv avbildning i magen.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Helhetlig vurdering av kimbane Chemical Toxicity Bruke Nematode<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the ...

Contrast Imaging in Mouse Embryos Using High-frequency Ultrasound

Kontrast Imaging i Mouse Embryoer hjelp Høyfrekvente ultralyd

Ultrasound contrast-enhanced imaging can convey essential quantitative information regarding tissue vascularity and perfusion and, in targeted ...

Assessment of Endothelial Cell Migration After Exposure to Toxic Chemicals

Vurdering av endotelcelle Migration etter eksponering for giftige kjemikalier

Exposure to chemical substances (including alkylating chemical warfare agents like sulfur and nitrogen mustards) cause a plethora of clinical symptoms ...

Assessment of Maternal Vascular Remodeling During Pregnancy in the Mouse Uterus

Vurdering av Maternal vaskulær remodelle under graviditeten i Mouse Livmor

The placenta mediates the exchange of factors such as gases and nutrients between mother and fetus and has specific demands for supply of blood from the ...

A Novel Use of Three-dimensional High-frequency Ultrasonography for Early Pregnancy Characterization in the Mouse

Romanen bruk av tredimensjonal høyfrekvente Ultrasonography for tidlig Graviditet karakterisering musen

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is ...

Fetal Mouse Cardiovascular Imaging Using a High-frequency Ultrasound (30/45MHZ) System

Fetal Mouse Cardiovascular Imaging Using a High-frequency Ultrasound 30/45MHZ System

Fosterets musen hjerte Imaging bruker høyfrekvente ultralyd (30 / 45MHZ) System

Congenital heart defects (CHDs) are the most common cause of childhood morbidity and early mortality. Prenatal detection&#160;of the underlying molecular ...

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Høy frekvens ultralyd for analyse av Fetal og Placental utvikling i Vivo

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and ...

Fluorimetric Techniques for the Assessment of Sperm Membranes

Fluorimetric teknikker for vurdering av Sperm membraner

Standard spermiograms describing sperm quality are mostly based on the physiological and visual parameters, such as ejaculate volume and concentration, ...

Assessment of Ultrastructural Neuroplasticity Parameters After In Utero Transduction of the Developing Mouse Brain and Spinal Cord

Vurdering av Ultrastructural Neuroplasticity parametere etter i Utero signaltransduksjon utvikle musen hjernen og ryggmarg

The present study combines in utero transduction with transmission electron microscopy (TEM) aiming at a precise morphometrical analysis of ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Vurdering av oksidativ skade i primær mus okulære overflateceller / stamceller som svar på ultrafiolett-C (UV-C) skade

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...