Name: is my mouse pregnant? high-frequency ultrasound assessment
Uploaded: 2021-03-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Is My Mouse Pregnant? High-Frequency Ultrasound Assessment at JoVE.com

Alla steg i detta protokoll följer guiden för vård och användning av laboratoriedjur som publicerats av National Institutes of Health och har godkänts av Institutional Animal Care and Use Committee vid New York University Grossman School of Medicine.
1. Parning av möss för tidsbestämda graviditeter
<ol><li>Para ihop lämplig kvinnlig mus (vanligtvis en heterozygot) i en bur med lämplig manlig mus (vanligtvis en heterozygot) för parning över natten.</li>
	<li>Separera mössen näst...

<ol>
	<li>Bogue, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Phenome+Database:+an+integrative+database+and+analysis+suite+for+curated+empirical+phenotype+data+from+laboratory+mice.">Mouse Phenome Database: an integrative database and analysis suite for curated empirical phenotype data from laboratory mice.</a> Nucleic Acids Research. 46, 843-850 (2018).</li><li>Ito, R., Takahashi, T., Ito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mouse+models:+Application+to+human+diseases.">Humanized mouse models: Application to human diseases.</a> Journal of Cellular Physiology. 233 (5), 3723-3728 (2018).</li><li>Law, M., Shaw, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Genome+Informatics+(MGI)+is+the+international+resource+for+information+on+the+laboratory+mouse.">Mouse Genome Informatics (MGI) is the international resource for information on the laboratory mouse.</a> Methods in Molecular Biology. 1757, 141-161 (2018).</li><li>Rydell-T&#246;rm&#228;nen, K., Johnson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+applicability+of+mouse+models+to+the+study+of+human+disease.">The applicability of mouse models to the study of human disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1940, 3-22 (2019).</li><li>Hinton, R. B., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+valve+structure+and+function+in+development+and+disease.">Heart valve structure and function in development and disease.</a> Annual Reviews of Physiology. 73, 29-46 (2011).</li><li>Dickinson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+discovery+of+novel+developmental+phenotypes.">High-throughput discovery of novel developmental phenotypes.</a> Nature. 537 (7621), 508-514 (2016).</li><li>Tam, P. P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+embryonic+head+in+the+mouse:+attributes+of+a+gene+regulatory+network.">Formation of the embryonic head in the mouse: attributes of a gene regulatory network.</a> Current Topics in Developmental Biology. 117, 497-521 (2016).</li><li>Palis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell-independent+hematopoiesis:+emergence+of+erythroid,+megakaryocyte,+and+myeloid+potential+in+the+mammalian+embryo.">Hematopoietic stem cell-independent hematopoiesis: emergence of erythroid, megakaryocyte, and myeloid potential in the mammalian embryo.</a> FEBS Letters. 590 (22), 3965-3974 (2016).</li><li>Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selecting+female+mice+in+estrus+and+checking+plugs.">Selecting female mice in estrus and checking plugs.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2016 (8), (2016).</li><li>Heyne, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+and+reliable+method+for+early+pregnancy+detection+in+inbred+mice.">A simple and reliable method for early pregnancy detection in inbred mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (4), 368-371 (2015).</li><li>Finlay, J. B., Liu, X., Ermel, R. W., Adamson, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+weight+gain+as+a+predictor+of+litter+size+in+Swiss+Webster,+C57BL/6J,+and+BALB/cJ+mice.">Maternal weight gain as a predictor of litter size in Swiss Webster, C57BL/6J, and BALB/cJ mice.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (6), 694-699 (2015).</li><li>Zhou, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+for+multifrequency+ultrasound+biomicroscopy+in+mice+from+implantation+to+adulthood.">Applications for multifrequency ultrasound biomicroscopy in mice from implantation to adulthood.</a> Physiological Genomics. 10 (2), 113-126 (2002).</li><li>Ji, R. P., Phoon, C. K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+localization+of+nuclear+factor+of+activated+T+cells+c1-/-+mouse+embryos+by+ultrasound+biomicroscopy-Doppler+allows+genotype-phenotype+correlation.">Noninvasive localization of nuclear factor of activated T cells c1-/- mouse embryos by ultrasound biomicroscopy-Doppler allows genotype-phenotype correlation.</a> Journal of the American Society of Echocardiography. 18 (12), 1415-1421 (2005).</li><li>Kulandavelu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+and+neonatal+phenotyping+of+genetically+engineered+mice.">Embryonic and neonatal phenotyping of genetically engineered mice.</a> ILAR Journal. 47 (2), 103-117 (2006).</li><li>Mu, J., Slevin, J. C., Qu, D., McCormick, S., Adamson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+quantification+of+embryonic+and+placental+growth+during+gestation+in+mice+using+micro-ultrasound.">In vivo quantification of embryonic and placental growth during gestation in mice using micro-ultrasound.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 6, 34 (2008).</li><li>Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+imaging+in+mice.">Cardiovascular imaging in mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 6 (1), 15-38 (2016).</li><li>Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy-Doppler+in+mouse+cardiovascular+development.">Ultrasound biomicroscopy-Doppler in mouse cardiovascular development.</a> Physiological Genomics. 14 (1), 3-15 (2003).</li><li>Peavey, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+use+of+three-dimensional+high-frequency+ultrasonography+for+early+pregnancy+characterization+in+the+mouse.">A novel use of three-dimensional high-frequency ultrasonography for early pregnancy characterization in the mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (128), e56207 (2017).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+frequency+ultrasound+for+in+vivo+pregnancy+diagnosis+and+staging+of+placental+and+fetal+development+in+mice.">High frequency ultrasound for in vivo pregnancy diagnosis and staging of placental and fetal development in mice.</a> PLoS One. 8 (10), 77205 (2013).</li><li>Flores, L. E., Hildebrandt, T. B., K&#252;hl, A. A., Drews, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+detection+and+staging+of+spontaneous+embryo+resorption+by+ultrasound+biomicroscopy+in+murine+pregnancy.">Early detection and staging of spontaneous embryo resorption by ultrasound biomicroscopy in murine pregnancy.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 12, 38 (2014).</li><li>Norton, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refinements+for+embryo+implantation+surgery+in+the+mouse:+comparison+of+injectable+and+inhalant+anesthesias+-+tribromoethanol,+ketamine+and+isoflurane+-+on+pregnancy+and+pup+survival.">Refinements for embryo implantation surgery in the mouse: comparison of injectable and inhalant anesthesias - tribromoethanol, ketamine and isoflurane - on pregnancy and pup survival.</a> Laboratory Animal. 50 (5), 335-343 (2016).</li><li>Thaete, L. G., Levin, S. I., Dudley, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anaesthetics+and+analgesics+on+fetal+growth+in+the+mouse.">Impact of anaesthetics and analgesics on fetal growth in the mouse.</a> Laboratory Animal. 47 (3), 175-183 (2013).</li><li>Phoon, C. K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tafazzin+knockdown+in+mice+leads+to+a+developmental+cardiomyopathy+with+early+diastolic+dysfunction+preceding+myocardial+noncompaction.">Tafazzin knockdown in mice leads to a developmental cardiomyopathy with early diastolic dysfunction preceding myocardial noncompaction.</a> Journal of the American Heart Association. 1 (2), (2012).</li></ol>

Det viktigaste första steget i avbildningen är att identifiera slidan och sedan bestämma bifurcation av livmoderhornet till vänster och höger. Genom att följa varje livmoderhorn är det mindre troligt att bildaren felidentifierar tarmens slingor som livmodern. Dessutom är det viktigt att förstå variationerna i tarmens utseende (med / utan fekal materia) för att skilja dessa från livmodern; ibland kan fekala "bollar" i tarmslingor efterlikna en gravid (gravid) livmoder. Även om andra författare har beskrivit ...

Musen är den föredragna däggdjursmodellen för många mänskliga sjukdomar och biologiska processer1,2,3,4. Forskning inom utvecklingsbiologi kräver ofta iscensatta gravida möss för att bestämma utvecklingsprocesser vid olika tidpunkter5,6,7,8. Dessutom kräver optimal och effektiv uppfödning av modellmöss en bedömning av tidsbestämda graviditeter, särskilt när utredare studerar effekterna av en genmutation på utvecklingen. Vanligtvis parar utredare heterozygous möss över natten, letar efter en vaginal plugg tidigt nästa morgon och hoppas att en graviditet följer9. Att bestämma intrauterin förlust börjar vanligtvis med att kontrollera en nyfödd kull för mendelian förhållanden av genotyper, sedan arbeta bakåt genom att offra gravida möss i olika graviditetsstadier och återställa embryona. Utredare kan bestämma viktökning som ett mått på en positiv graviditet10,11; Men särskilt med genetiskt konstruerade möss kan kullarna vara mycket små och därefter resorbed när det finns intrauterin förlust på grund av vilken viktökningen kanske inte är uppenbar (särskilt tidigt i graviditeten, ~ E6.5-8.5). En mus kan verka falskt gravid på grund av till exempel en godartad buktumör. I grund och botten fungerar man "blind".
Högupplöst ultraljud biomicroscopy möjliggör direkt visualisering av gravid livmodern och utveckla mus embryon12,13,14,15,16. Även om vi ursprungligen hade utvecklat metoder för att bedöma embryonal mus kardiovaskulär fysiologi16,17, kände vi igen nyttan av denna bildframställning modalitet för att effektivisera vår mus avel. Specifikt behövde vi inte längre vänta för att "se" om en mus var gravid, baserat på antingen den uppenbara viktökningen eller leveransen av en kull; vi kunde bestämma gravid tillstånd och re-mate möss snabbt om dammen inte var gravid. Dessutom kan intrauterin förlust också lätt avbildas, och en tidslinje över förlust kan bestämmas utan att offra musen (se figur 1 för ett schema). Tid, värdefulla modellmöss och medel kan därmed sparas.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 70%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fur clippers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze or KimWipes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical oxygen (optional)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse imaging system (including anesthesia set-up and imaging platform)</td>
			<td>Fujifilm Visual Sonics</td>
			<td>Various</td>
			<td>Any system with 40 MHz center-frequency ultrasound transducer probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade (not a safety razor)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale (to weigh mouse)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound gel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

is my mouse pregnant? high-frequency ultrasound assessment

Musen är däggdjursdjurmodellen för många mänskliga sjukdomar och biologiska processer. Utvecklingsbiologi kräver ofta iscensatta gravida möss för att bestämma utvecklingsprocesser vid olika tidpunkter. Dessutom kräver optimal och effektiv uppfödning av modellmöss en bedömning av tidsbestämda graviditeter. Oftast paras möss över natten, och närvaron av en vaginal plugg bestäms; Det positiva prediktiva värdet av denna teknik är dock suboptimalt, och man måste vänta för att veta om musen verkligen är gravid. Högupplöst ultraljud biomikroskopi är ett effektivt och effektivt verktyg för avbildning: 1) Om en mus är gravid; 2) Vilket graviditetsstadium musen har nått; och 3) Om det finns intrauterin förlust. Förutom embryon och foster måste prövaren också känna igen vanliga artefakter i bukhålan för att inte missta dessa för en gravid livmoder. Den här artikeln innehåller ett protokoll för avbildning tillsammans med belysande exempel.

Detta protokoll kommer att göra det möjligt för en utredare att avgöra säkert om en mus är gravid, inklusive under de tidiga stadierna och att avgöra om det finns uppenbara prenatala embryonala eller fetala förluster utan att behöva offra den gravida dammen. Detta protokoll är särskilt användbart vid uppfödning av genetiskt modifierade möss; Vanligtvis leder heterozygous x heterozygous kors för att ge homozygous avkommor till misslyckande av korrekt utveckling, vilket orsakar fostertoxicitet. <strong class...

Watch this Scientific Journal Video about Is My Mouse Pregnant? High-Frequency Ultrasound Assessment at JoVE.com

Is My Mouse Pregnant? High-Frequency Ultrasound Assessment

Högupplöst ultraljud kan hjälpa till att effektivisera experiment som kräver tidsbestämda gravida möss genom att bestämma graviditetstillstånd, graviditetsålder och graviditetsförluster. Presenteras här är ett protokoll för att illustrera metoder för att bedöma mus graviditeter samt potentiella fallgropar (bild artefakter) som kan efterlikna graviditet.

Är musen gravid? Ultraljudsbedömning med hög frekvens

The mouse is the mammalian animal model of choice for many human diseases and biological processes. Developmental biology often requires staged-pregnant ...

Högupplöst ultraljud kan hjälpa till att effektivisera experiment som kräver tidsbestämda gravida möss genom att bestämma graviditetstillstånd, graviditetsålder och graviditetsförluster. Detta protokoll visar hur man bedömer mus graviditeter och identifiera potentiella bild artefakter som kan efterlikna graviditet. För att börja, identifiera blåsan på skärmen.Skanna kaudally från urinblåsan, identifiera vaginan. När ultraljudsgivaren är placerad mittlinjen och låg på buken är urinblåsan och vaginan synliga. Skanna sedan långsamt och smidigt i en kranial riktning, identifiera bifurcation av slidan i vänster och höger livmoderhorn.Underrätta vänster och höger livmoderhorn. Upp till mitten av dräktigheten kommer musembryon att placeras längs höger och vänster periferi. När de växer kommer de mer distala delarna av livmodern och deras motsvarande embryon att vända sig utåt och dorsalt.Detta protokoll är särskilt användbart vid uppfödning av genetiskt konstruerade möss. Vanligtvis leder heterozygous med heterozygous kors för att ge homozygous avkommor till misslyckande av korrekt utveckling, orsakar prenatala dödlighet. Musembryon i olika utvecklingsstadier visas här.Tidigt stadium kan musembryon, döda embryon eller resorbed embryon likna andra organ i buken eller avföring i tarmarna, medan intestinala slingor kan efterlikna den icke-gravida livmodern. Vissa utredare föredrar att använda en stegmonterad givare, till exempel visas i den här bilden, men vi föredrar den handhållna skanningsmetoden, eftersom detta möjliggör snabb och effektiv avbildning i hela buken.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Omfattande Bedömning av nedärvda Kemisk toxicitet Använda Nematode<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the ...

Contrast Imaging in Mouse Embryos Using High-frequency Ultrasound

Contrast Imaging i musembryon Använda Högfrekvent Ultraljud

Ultrasound contrast-enhanced imaging can convey essential quantitative information regarding tissue vascularity and perfusion and, in targeted ...

Assessment of Endothelial Cell Migration After Exposure to Toxic Chemicals

Bedömning av endotelcellmigration Efter exponering för giftiga kemikalier

Exposure to chemical substances (including alkylating chemical warfare agents like sulfur and nitrogen mustards) cause a plethora of clinical symptoms ...

Assessment of Maternal Vascular Remodeling During Pregnancy in the Mouse Uterus

Bedömning av Maternal kärlremodellering under graviditeten i musen livmoder

The placenta mediates the exchange of factors such as gases and nutrients between mother and fetus and has specific demands for supply of blood from the ...

A Novel Use of Three-dimensional High-frequency Ultrasonography for Early Pregnancy Characterization in the Mouse

En ny användning av tredimensionella högfrekvent ultraljud för tidig graviditet karakterisering i musen

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is ...

Fetal Mouse Cardiovascular Imaging Using a High-frequency Ultrasound (30/45MHZ) System

Fetal Mouse Cardiovascular Imaging Using a High-frequency Ultrasound 30/45MHZ System

Fostrets mus hjärt Imaging använder ett högfrekvent ultraljud (30 / 45MHZ)

Congenital heart defects (CHDs) are the most common cause of childhood morbidity and early mortality. Prenatal detection&#160;of the underlying molecular ...

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Hög frekvens ultraljud för analys av foster och placenta utveckling In Vivo

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and ...

Fluorimetric Techniques for the Assessment of Sperm Membranes

Fluorimetriskt tekniker för bedömning av spermier membran

Standard spermiograms describing sperm quality are mostly based on the physiological and visual parameters, such as ejaculate volume and concentration, ...

Assessment of Ultrastructural Neuroplasticity Parameters After In Utero Transduction of the Developing Mouse Brain and Spinal Cord

Bedömning av ultrastrukturella neuroplasticitet parametrar efter i Utero transduktion i utvecklingsländer mus hjärnan och ryggmärgen

The present study combines in utero transduction with transmission electron microscopy (TEM) aiming at a precise morphometrical analysis of ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Bedömning av oxidativ skada i de primära musokulära ytcellerna/stamcellerna som svar på ultraviolett-C (UV-C) Skada

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...