Name: gonadectomy and blood sampling procedures in the small size teleost model japanese medaka (oryzias latipes)
Uploaded: 2020-12-11T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Gonadectomy and Blood Sampling Procedures in the Small Size Teleost Model Japanese Medaka Oryzias latipes at JoVE.com

लेखक मछली पालन में उसकी सहायता के लिए सुश्री लूर्डेस कैरेऑन जी टैन का शुक्रिया अदा करते हैं । इस काम को एनएमबीयू द्वारा वित्त पोषित किया गया था, जापान सोसायटी फॉर द प्रमोशन ऑफ साइंस (जेएसपीएस) (ग्रांट नंबर 18H04881 और 18K19323) से अनुदान-सहायता, और सुमितोमो फाउंडेशन से एसके के लिए बुनियादी विज्ञान अनुसंधान परियोजनाओं के लिए अनुदान

नार्वे के जीवन विज्ञान विश्वविद्यालय में प्रायोगिक पशु कल्याण पर सिफारिशों के अनुसार सभी प्रयोग और पशु हैंडलिंग आयोजित किए गए थे । नार्वे खाद्य सुरक्षा प्राधिकरण (FOTS ID 24305) द्वारा गोनाडेकॉमी का उपयोग क?...

जैसा कि पिछले साहित्य में बताया गया है, बीपीजी धुरी के नियमन में सेक्स स्टेरॉयड की भूमिका से संबंधित सवालों की जांच करने के लिए अन्य मॉडल प्रजातियों में गोनाडेकॉमी और रक्त नमूना का उपयोग किया जाता रहा ?...

कशेरुकी में, सेक्स स्टेरॉयड, जो मुख्य रूप से गोनाड द्वारा उत्पादित होते हैं, विभिन्न प्रतिक्रिया तंत्र 1,2,3,4,5के माध्यम से मस्तिष्क-पिट्यूटरी-गोनाडल (बीपीजी) धुरी के नियमन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। इसके अलावा, सेक्स स्टेरॉयड मस्तिष्क में न्यूरॉन्स के प्रसार और गतिविधि को प्रभावित करते हैं6,7,8 और अंतःस्रावी कोशिकाओं, जिनमें गोंडोट्रोप्स शामिल हैं, पिट्यूटरी9,10में, और इस प्रकार मस्तिष्क और पीयूष प्लास्टिसिटी में महत्वपूर्ण भूमिकाओं को पूरा करते हैं। स्तनधारियों में अपेक्षाकृत अच्छे ज्ञान के बावजूद, सेक्स स्टेरॉयड द्वारा मध्यस्थता बीपीजी एक्सिस विनियमन का तंत्र गैर-स्तनधारी प्रजातियों में समझा जा रहा है, जिससे विकासवादी संरक्षित सिद्धांतों की खराब समझ11है। वहाँ अभी भी मस्तिष्क और पीयूष प्लास्टिसिटी पर सेक्स स्टेरॉयड की भूमिका का दस्तावेजीकरण अध्ययन की एक सीमित संख्या है, इस प्रकार भूमिका और विविध कशेरुकी प्रजातियों पर सेक्स स्टेरॉयड के प्रभाव की आगे की जांच के लिए की जरूरत को बढ़ाने.
कशेरुकी में, टेओस्ट कई जैविक और शारीरिक प्रश्नों को संबोधित करने में शक्तिशाली आदर्श जानवर बन गए हैं, जिनमें तनाव प्रतिक्रिया12,13,विकास14,15,पोषण शरीर विज्ञान16,17 और प्रजनन2शामिल हैं। टेलीओस्ट्स, जिसमें सेक्स स्टेरॉयड ज्यादातर महिलाओं में एस्ट्राडिओल (E2) और पुरुषों में 11-कीटोटेस्टोस्टेरोन (11-केटी) द्वारा प्रतिनिधित्व किया जाता है18,19,प्रजातियों में प्रजनन के सामान्य सिद्धांत की जांच के लिए लंबे समय से विश्वसनीय प्रयोगात्मक मॉडल रहे हैं। टेलीओस्ट अपने हाइपोथैलेमिक-पिट्यूटरी कनेक्शन20,21 और अलग गोंडोट्रोप कोशिकाओं22में विशिष्टता दिखाते हैं, जो कभी-कभी नियामक तंत्र के स्पष्टीकरण के लिए सुविधाजनक होते हैं। इसके अलावा, प्रयोगशाला और क्षेत्र दोनों प्रयोगों के लिए उनकी उत्तरदायीता के कारण, टेलीओस्ट अन्य जीवों की तुलना में कई फायदे प्रदान करते हैं। वे23 , 24की खरीद और रखरखाव के लिए अपेक्षाकृत सस्ती हैं । विशेष रूप से, जेब्राफिश(डैनियो रेरियो)और जापानी मेडाका(ओरिज़ियस लैटिप्स)जैसे छोटे टेलीओस्ट मॉडल, बहुत अधिक मलखंभ और अपेक्षाकृत कम जीवन चक्र वाली प्रजातियां हैं जो जीन फ़ंक्शन और रोग तंत्र23के तेजी से विश्लेषण को सक्षम करती हैं, इस प्रकार जैविक और शारीरिक प्रश्नों की अधिकता को संबोधित करने में और भी अधिक लाभ प्रदान करतीहैं,इन प्रजातियों के लिए उपलब्ध कई अच्छी तरह से विकसित प्रोटोकॉल और आनुवंशिक उपकरण किट को ध्यान में रखते हुए।
कई अध्ययनों में, रक्त नमूना तकनीकों के साथ गोनाड (गोनाडेक्टोमी) को हटाने का उपयोग कई शारीरिक प्रश्नों की जांच के लिए एक विधि के रूप में किया गया है, जिसमें स्तनधारियों में कशेरुकी प्रजनन शरीर विज्ञान में इसका प्रभाव26,27,28,पक्षी29 और उभयचर30शामिल हैं। यद्यपि प्रजनन शरीर विज्ञान पर गोनाडेकॉमी प्रभाव को वैकल्पिक रूप से सेक्स स्टेरॉयड विरोधी, जैसे टैमोक्सिफेन और क्लोमिफेन द्वारा नकल की जा सकती है, दवाओं का प्रभाव बिमोडल प्रभाव31,32के कारण असंगत प्रतीत होता है। सेक्स स्टेरॉयड विरोधी के लिए पुराने जोखिम अंडाशय वृद्धि33,34,जो एक अस्वस्थ फेनोटाइप के कारण दीर्घकालिक प्रयोजनों के लिए इसके प्रभाव के अवलोकन को अक्षम कर सकते हैं करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं। इसके अलावा, कुछ सेक्स स्टेरॉयड के विशिष्ट प्रभाव को वारंट करने के लिए सेक्स स्टेरॉयड विरोधी उपचार के बाद एक वसूली प्रयोग करना असंभव है। उन उपरोक्त बिंदुओं के साथ, सेक्स स्टेरॉयड विरोधी उपयोग के अन्य व्यापार-नापसंद की बड़े पैमाने पर समीक्षा की गई है31,32। इसलिए, गोनाडेकॉमी आज भी सेक्स स्टेरॉयड की भूमिका की जांच करने के लिए एक शक्तिशाली तकनीक के रूप में प्रकट होता है।
जबकि गोनाडेकटॉमी और रक्त नमूना तकनीक बड़ी प्रजातियों में प्रदर्शन करने के लिए अपेक्षाकृत आसान हैं, जैसे यूरोपीय समुद्री बास(डिसेंट्रारकस लैब्राक्स)35,ब्लूहेड रैस(थैलेसोमा बिफसियाटम)36,डॉगफिश(स्किलोहिनस कैनिकुला)37 और कैटफ़िश(हेट्रोपेनियस फॉसिलिस और क्लेरिस बाथराकस)38,39,वे छोटी मछलियों में मेडका के रूप में लागू होने पर चुनौतियां बढ़ाते हैं। उदाहरण के लिए, मछली संज्ञाहरण वितरण प्रणाली (FADS)४० का उपयोग कम संभव है और छोटी मछली के लिए अत्यधिक शारीरिक क्षति का खतरा प्रतीत होता है । इसके अलावा, एक गोनाडेक्टोमी प्रक्रिया जो आमतौर पर बड़ी मछली40 के लिए उपयोग की जाती है, छोटी मछली के लिए उपयुक्त नहीं है जिसके लिए अत्यधिक क्षति से बचने के लिए उच्च परिशुद्धता की आवश्यकता होती है। अंत में, रक्त वाहिकाओं तक सीमित पहुंच और उन जानवरों में रक्त की थोड़ी मात्रा के कारण रक्त नमूना चुनौतीपूर्ण है। इसलिए, एक छोटे से टेलीओस्ट में गोनाडेकॉमी और रक्त नमूने के हर कदम का प्रदर्शन करने वाला एक स्पष्ट प्रोटोकॉल महत्वपूर्ण है।
यह प्रोटोकॉल जापानी मेडाका में रक्त नमूने के बाद गोनाडेकॉमी की कदम-दर-कदम प्रक्रियाओं को दर्शाता है, जो पूर्वी एशिया के मूल निवासी एक छोटे मीठे पानी की मछली है। जापानी मेडका में एक अनुक्रमित जीनोम, कई आणविक और आनुवंशिक उपकरण उपलब्धहैं,और एक आनुवंशिक लिंग निर्धारण प्रणाली है जो माध्यमिक यौन विशेषताओं या गोनाडों को अच्छीतरहसे विकसित करने से पहले यौन मतभेदों की जांच के लिए अनुमति देती है। दिलचस्प बात यह है कि जापानी मेडका के पास कई अन्य टेलीओस्ट प्रजातियों के विपरीत फ्यूज्ड गोनाडहैं। इन दो तकनीकों को संयुक्त रूप से कुल मिलाकर केवल 8 मिनट का समय लगेगा और इस प्रजाति के लिए पहले से मौजूद वीडियो प्रोटोकॉल की सूची पूरी हो जाएगी जिसमें रक्त वाहिकाओं43की लेबलिंग, पिट्यूटरी सेक्शन44 और ब्रेन न्यूरॉन्स45पर पैच-क्लैंप और प्राथमिक सेल कल्चर46शामिल हैं। इन तकनीकों अनुसंधान समुदाय की जांच करने के लिए और बेहतर प्रतिक्रिया तंत्र में सेक्स स्टेरॉयड की भूमिकाओं के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मस्तिष्क और पीयूष प्लास्टिसिटी भविष्य में समझने की अनुमति होगी.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Glass capilary</td>
			<td></td>
			<td>GD1</td>
			<td>Glass Capillary with Filament GD-1; Narishige</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium salt</td>
			<td></td>
			<td>H4784-1G</td>
			<td>Sigma-aldrich</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle puller</td>
			<td></td>
			<td>P97</td>
			<td>Flaming/Brown Micropipette puller Model P-97; Sutter Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon thread</td>
			<td></td>
			<td>N45VL</td>
			<td>Polyamide suture, 0.2 metric; Crownjun</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic tube</td>
			<td></td>
			<td>T9661</td>
			<td>Eppendorf Safe-lock microcentifuge tube 1.5 ml, Sigma-aldrich</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td>Astra Superior Platinum Double Edge Razor Blades Green, salonwholesale.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone capillary</td>
			<td></td>
			<td>a16090800ux0403</td>
			<td>Uxcell Silicone Tube 1 mm ID x 2 mm OD, amazon.com&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine</td>
			<td></td>
			<td>WXBC9102V</td>
			<td>Aldrich chemistry</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

gonadectomy and blood sampling procedures in the small size teleost model japanese medaka (oryzias latipes)

सेक्स स्टेरॉयड, gonads द्वारा उत्पादित, मस्तिष्क और पीयूष ऊतक प्लास्टिसिटी में एक आवश्यक भूमिका निभाते हैं और मस्तिष्क और पीयूष को प्रतिक्रिया प्रदान करके सभी कशेरुकी में प्रजनन के न्यूरोएंडोक्राइन नियंत्रण में। टेलीओस्ट मछलियों में स्तनधारियों की तुलना में ऊतक प्लास्टिसिटी और प्रजनन रणनीतियों में भिन्नता की उच्च डिग्री होती है और वे सेक्स स्टेरॉयड की भूमिका और तंत्र की जांच करने के लिए उपयोगी मॉडल दिखाई देते हैं जिसके द्वारा वे कार्य करते हैं। स्टेरॉयड के स्तर को मापने के लिए रक्त नमूने के साथ एक साथ gonadectomy का उपयोग कर सेक्स स्टेरॉयड उत्पादन के मुख्य स्रोत को हटाने के लिए अच्छी तरह से स्थापित किया गया है और बड़ी मछली में काफी संभव है और भूमिका और सेक्स स्टेरॉयड के प्रभाव की जांच करने के लिए एक शक्तिशाली तकनीक है. हालांकि, ये तकनीक छोटे आकार के टेलीओस्ट मॉडल में लागू होने पर चुनौतियां बढ़ाती हैं। यहां, हम पुरुषों और महिला जापानी मेडाका दोनों में गोनाडेकॉमी की कदम-दर-कदम प्रक्रियाओं का वर्णन करते हैं जिसके बाद रक्त नमूनाकरण होता है। इन प्रोटोकॉल ों को एक उच्च जीवित रहने की दर, जीवन काल और मछली के फेनोटाइप के लिए सुरक्षा, और सेक्स स्टेरॉयड निकासी के मामले में प्रजनन क्षमता द्वारा इंगित मेडका में अत्यधिक व्यवहार्य दिखाया गया है। इस छोटे से टेलीओस्ट मॉडल का उपयोग करने के अन्य फायदों के साथ संयुक्त इन प्रक्रियाओं का उपयोग कशेरुकी में सेक्स स्टेरॉयड द्वारा प्रदान किए गए प्रजनन और ऊतक प्लास्टिसिटी के न्यूरोएंडोक्राइन नियंत्रण में प्रतिक्रिया तंत्र की समझ में काफी सुधार करेगा।

यह प्रोटोकॉल एक छोटे आकार के मॉडल टेलीओस्ट, जापानी मेडका में गोनाडेकॉमी और रक्त नमूने के प्रदर्शन के लिए हर कदम का वर्णन करता है। महिलाओं में ओवेरेक्टॉमी (ओवेक्स) के बाद मछली की जीवित रहने ?...

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Gonadectomy and Blood Sampling Procedures in the Small Size Teleost Model Japanese Medaka Oryzias latipes

लेख एक त्वरित प्रोटोकॉल का वर्णन करने के लिए gonadectomize और छोटे teleost मछली से रक्त नमूना, जापानी medaka(Oryzias latipes)का उपयोग कर एक मॉडल के रूप में, पशु शरीर विज्ञान में सेक्स स्टेरॉयड की भूमिका की जांच करने के लिए ।

छोटे आकार के टेलीओस्ट मॉडल जापानी मेडका(ओरिज़ियास लैटिप्स)में गोनाडेकॉमी और रक्त नमूना प्रक्रियाएं

Sex steroids, produced by the gonads, play an essential role in brain and pituitary tissue plasticity and in the neuroendocrine control of reproduction in ...

Research

JoVE Journal

Biology

Gonadectomy and Blood Sampling Procedures in the Small Size Teleost Model Japanese Medaka (Oryzias latipes)

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