Name: a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate
Uploaded: 2021-05-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

NIH-financiering via het National Cancer Institute, subsidie # CA228582. Shun Ishiyama ontvangt momenteel een subsidie van Toray Medical Co., Ltd.

Alle procedures en experimenten met ratten werden uitgevoerd volgens protocollen die zijn goedgekeurd door het Johns Hopkins Animal Care and Use Committee.
1. Het SD rat OS cellijn UMR-106 celkweekprotocol
<ol><li>Kweekcellen in DMEM, aangevuld met 10% (v/v) FBS, penicilline (10 U/ml)-streptomycine (10 U/ml) bij 37 °C in een bevochtigde 5% CO2-atmosfeer. Voer experimenten uit met cellen met passages van 2-812.</li>
</ol>2. Intratibial...

<ol>
	<li>Link, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+adjuvant+chemotherapy+on+relapse-free+survival+in+patients+with+osteosarcoma+of+the+extremity.">The effect of adjuvant chemotherapy on relapse-free survival in patients with osteosarcoma of the extremity.</a> New England Journal of Medicine. 314 (25), 1600-1606 (1986).</li><li>Bielack, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+in+high-grade+osteosarcoma+of+the+extremities+or+trunk:+an+analysis+of+1,702+patients+treated+on+neoadjuvant+cooperative+osteosarcoma+study+group+protocols.">Prognostic factors in high-grade osteosarcoma of the extremities or trunk: an analysis of 1,702 patients treated on neoadjuvant cooperative osteosarcoma study group protocols.</a> Journal of Clinical Oncology. 20 (3), 776-790 (2002).</li><li>Botter, S. M., Neri, D., Fuchs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+osteosarcoma.">Recent advances in osteosarcoma.</a> Current Opinion in Pharmacology. 16, 15-23 (2014).</li><li>Ek, E. T. H., Dass, C. R., Choong, P. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+mouse+models+of+osteosarcoma.">Commonly used mouse models of osteosarcoma.</a> Critical Reviews in Oncology Hematology. 60 (1), 1-8 (2006).</li><li>Guijarro, M. V., Ghivizzani, S. C., Gibbs, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+osteosarcoma.">Animal models in osteosarcoma.</a> Frontiers Oncology. 4, 189 (2014).</li><li>Janeway, K. A., Walkley, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+osteosarcoma+in+the+mouse:+From+bedside+to+bench.">Modeling human osteosarcoma in the mouse: From bedside to bench.</a> Bone. 47 (5), 859-865 (2010).</li><li>Mohseny, A. B., Hogendoorn, P. C., Cleton-Jansen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma+models:+from+cell+lines+to+zebrafish.">Osteosarcoma models: from cell lines to zebrafish.</a> Sarcoma. 2012, 417271 (2012).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+murine+osteosarcoma+with+clonally+related+variants+differing+in+pulmonary+metastatic+potential.">An orthotopic model of murine osteosarcoma with clonally related variants differing in pulmonary metastatic potential.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 18 (3), 261-271 (2000).</li><li>Martin, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parathyroid+hormone-responsive+adenylate+cyclase+in+induced+transplantable+osteogenic+rat+sarcoma.">Parathyroid hormone-responsive adenylate cyclase in induced transplantable osteogenic rat sarcoma.</a> Nature. 260 (5550), 436-438 (1976).</li><li>Fisher, J. L., Mackie, P. S., Howard, M. L., Zhou, H., Choong, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+the+urokinase+plasminogen+activator+system+in+metastatic+murine+osteosarcoma:+an+in+vivo+mouse+model.">The expression of the urokinase plasminogen activator system in metastatic murine osteosarcoma: an in vivo mouse model.</a> Clinical Cancer Research. 7 (6), 1654-1660 (2001).</li><li>Yu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+reproducible+osteosarcoma+rat+model+using+orthotopic+implantation+technique.">Establishment of reproducible osteosarcoma rat model using orthotopic implantation technique.</a> Oncology Reports. 21 (5), 1175-1180 (2009).</li><li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homologous+mesenchymal+stem+cells+promote+the+emergence+and+growth+of+pulmonary+metastases+of+the+rat+osteosarcoma+cell+line+UMR-106.">Homologous mesenchymal stem cells promote the emergence and growth of pulmonary metastases of the rat osteosarcoma cell line UMR-106.</a> Oncology Letters. 8 (1), 127-132 (2014).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+90+and+ErbB2+in+the+cardiac+response+to+doxorubicin+injury.">Heat shock protein 90 and ErbB2 in the cardiac response to doxorubicin injury.</a> Cancer Research. 67 (4), 1436-1441 (2007).</li><li>Sysa-Shah, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+cross-regulation+between+ErbB2+and+&#946;-adrenergic+signalling+pathways.">Bidirectional cross-regulation between ErbB2 and &#946;-adrenergic signalling pathways.</a> Cardiovascular Research. 109 (3), 358-373 (2016).</li><li>Wachtman, L. M., Browning, M. D., Bedja, D., Pin, S., Gabrielson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+use+of+long-term+indwelling+jugular+catheters+in+a+rat+model+of+cardiotoxicity.">Validation of the use of long-term indwelling jugular catheters in a rat model of cardiotoxicity.</a> Journal of American Association Laboratory Animal Science. 45, 55-64 (2006).</li><li>Abdou, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prognostic+role+of+Ezrin+and+HER2/neu+expression+in+osteosarcoma.">The Prognostic role of Ezrin and HER2/neu expression in osteosarcoma.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 24 (5), 355-363 (2016).</li><li>Hughes, D. P., Thomas, D. G., Giordano, T. J., McDonagh, K. T., Baker, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+erbB+family+phosphorylation+in+osteosarcoma+as+a+target+for+CI-1033+inhibition.">Essential erbB family phosphorylation in osteosarcoma as a target for CI-1033 inhibition.</a> Pediatric Blood &amp; Cancer. 46 (5), 614-623 (2006).</li><li>Wen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+in+osteosarcoma:+expression+and+mutational+analysis.">Epidermal growth factor receptor in osteosarcoma: expression and mutational analysis.</a> Human Pathology. 38 (8), 1184-1191 (2007).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+drug+development+path+that+targets+metastatic+progression+in+osteosarcoma.">Toward a drug development path that targets metastatic progression in osteosarcoma.</a> Clinical Cancer Research. 20 (16), 4200-4209 (2014).</li></ol>

Ratten met OS tibiale implantaten ontwikkelen meetbare tumoren tegen 3 weken na implantatie. Als ledematen met tumoren 3 weken na implantatie worden geamputeerd, is de incidentie van longmetastase aanzienlijk verminderd. Besturingssystemen zijn zowel osteolytisch als osteoblastisch. Ratten zonder amputatie ontwikkelen longmetastasen die meervoudig en variabel zijn, waargenomen door radiografie of bij obductie tegen 7 weken na implantatie. EGFR, ErbB2 en ErbB4 worden uitgedrukt in rat UMR106 OS, vergelijkbaar met het mens...

Osteosarcoom (OS) is de meest voorkomende primaire bottumor bij kinderen, adolescenten en jonge volwassenen. De meest recente vooruitgang in de behandeling van OS vond plaats in de jaren 1980 toen multi-agent chemotherapie de algehele overleving bleek te verbeteren in vergelijking met chirurgie alleen1. OS ontwikkelt zich tijdens snelle botgroei, meestal voorkomend in lange buisvormige botten zoals dijbeen, scheenbeen en opperarmbeen. Ze worden gekenmerkt door een osteolytisch, osteoblastisch of gemengd uiterlijk met opmerkelijke periostale reactie2. Chemotherapie en chirurgische resectie kunnen de uitkomst verbeteren voor patiënten met een 5-jaarsoverleving voor 65% van de patiënten2,3. Helaas hebben hooggradige OS-patiënten met gemetastaseerde ziekte een overleving van 20%. OS dringt regionaal binnen en metastaseert voornamelijk naar de longen of andere botten en komt vaker voor bij mannen. De meest dwingende behoefte voor deze jonge patiënten is een nieuwe therapie die de levensvatbaarheid van metastasen op afstand voorkomt en elimineert.
OS preklinische modellen zijn beoordeeld4,5,6,7 en er zijn weinig beschikbare immunocompetente modellen ontwikkeld met behulp van amputatie van orthotopisch OS. In 2000 werd een belangrijk model ontwikkeld met BALB/c muizen met orthotopisch syngeneïsch OS en amputatie8. Vergeleken met dit muismodel is het rattenmodel gebaseerd op genetisch gefokte en 10 keer grotere dieren, wat tot enkele voordelen leidt. Het rat UMR106-model werd ontwikkeld op basis van een 32P geïnduceerde OS in een Sprague Dawley (SD) rat, die werd afgeleid in een cellijn9. In 2001 werd orthotopische implantatie van UMR106-01 voor het eerst beschreven in geïmplanteerde tibia's van athymische muizen met snelle, consistente primaire tumorontwikkeling en radiologische, histologische kenmerken die gemeen hebben met OS bij mensen. Pulmonale metastasen ontwikkelden en waren afhankelijk van orthotopische plaatsing van UMR106 in de botmicro-omgeving10. In 2009 hebben Yu et al.11 een reproduceerbaar orthotopisch femur OS-ratmodel vastgesteld met behulp van UMR106-cellen in grotere mannelijke SD-ratten. De succesvolle tumorimplantaties en longmetastasesnelheid bij ratten zonder amputatie waren vergelijkbaar met de hier gepresenteerde gegevens. In deze studie werd een toegevoegde amputatie aan het model uitgevoerd met behulp van jonge ratten, wat suggereerde dat de timing van primaire tumorverwijdering cruciaal is bij het modelleren van OS, vooral gerelateerd aan metastatische progressie. Met deze verfijning verbeteren amputatie en in vivo beeldvorming dit model voor preklinische studies voor de beoordeling van nieuwe geneesmiddelen voor OS.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AKT</td>
			<td>Cell Signaling TECHNOLOGY</td>
			<td>4685S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>absorbable suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J214H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-47778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;2-AR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-569</td>
			<td>replaced by &#946;2-AR (E-3): sc-271322</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bis&#8211;Tris gels</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NP0321PK2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR Lab</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>IZ-70000-201908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>#A0452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD68 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>#14-0688-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemiluminescent substrate</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>RPN2232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CL-Xposure film</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>34089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Anesthesia System</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>922120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diaminobenzidine</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>Actavis</td>
			<td>NDC 45963-733-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGFR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-03</td>
			<td>replaced by EGFR (A-10): sc-373746</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB2 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-284</td>
			<td>replaced by Neu (3B5): sc-33684</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB4 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-283</td>
			<td>replaced by ErbB4 (C-7): sc-8050</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERK antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-514302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye lubricant</td>
			<td>PHARMADERM</td>
			<td>NDC 0462-0211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe (100 &#181;L)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>Model 1710 SN SYR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>horseradish peroxidase-linked secondary antibody</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>NA934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>BUTLER SCHEIN</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane vaporizer</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>911103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UMR-106 cell</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray</td>
			<td>Faxitron</td>
			<td>UltraFocus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray processor</td>
			<td>Hope X-Ray Peoducts Inc</td>
			<td>MicroMax X-ray Processor</td>
			<td>Hope Processors are not available in USA anymore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>wound clips</td>
			<td>BECTON DICKINSON</td>
			<td>427631</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate

De meest recente vooruitgang in de behandeling van osteosarcoom (OS) vond plaats in de jaren 1980 toen multi-agent chemotherapie werd aangetoond dat het de algehele overleving verbeterde in vergelijking met chirurgie alleen. Om dit probleem aan te pakken, is het doel van de studie om een minder bekend model van OS bij ratten te verfijnen met een uitgebreide histologische, beeldvormings-, biologische, implantatie- en amputatiechirurgische benadering die de overleving verlengt. We gebruikten een immunocompetente, gefokte Sprague-Dawley (SD), syngenetisch ratmodel met geïmplanteerde UMR106 OS-cellijn (afkomstig van een SD-rat) met orthotopische tibiale tumorimplantaten in 3 weken oude mannelijke en vrouwelijke ratten om pediatrische OS te modelleren. We ontdekten dat ratten reproduceerbare primaire en gemetastaseerde longtumoren ontwikkelen en dat ledemaatamputaties 3 weken na implantatie de incidentie van pulmonale metastase aanzienlijk verminderen en onverwachte sterfgevallen voorkomen. Histologisch gezien leken de primaire en gemetastaseerde besturingssystemen bij ratten sterk op humane OS. Met behulp van immunohistochemische methoden toont de studie aan dat ratten OS zijn geïnfiltreerd met macrofagen en T-cellen. Een eiwitexpressie-onderzoek van OS-cellen onthult dat deze tumoren ErbB-familiekinasen tot expressie brengen. Omdat deze kinasen ook sterk tot expressie komen in de meeste menselijke besturingssystemen, kan dit rattenmodel worden gebruikt om ErbB-routeremmers te testen voor therapie.

Immunocompetente SD-gefokte ratten worden gebruikt voor deze OS-studies, die een diermodel bieden met een intact immuunsysteem. We hebben de UMR106-cellijn van ATCC gebruikt, ontwikkeld uit cellen die aanvankelijk werden geïsoleerd uit een OS van een SD-rat. We implanteerden de cellen in SD-ratten en leverden zo een syngenetisch model op voor OS. UMR106-cellen worden geïmplanteerd in het scheenbeen van 3 weken oude mannelijke en vrouwelijke SD-ratten, waarbij een pediatrisch OS-model wordt gesimuleerd. Bovendien geeft ...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate (Video) | JoVE

Hier wordt een syngenetische orthotopische implantatie gevolgd door een amputatieprocedure van het osteosarcoom met spontane pulmonale metastase beschreven die kan worden gebruikt voor preklinisch onderzoek van metastasebiologie en ontwikkeling van nieuwe therapieën.

Een syngeneïsch orthotopisch osteosarcoom Sprague Dawley Rat-model met amputatie om de metastasesnelheid te beheersen

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

Het implanteren van osteosarcoomcellen in de micro-omgeving van het scheenbeen bevordert longmetastase. Dit model kan ook nuttig zijn voor het bestuderen van de mechanismen van pulmonale metastase of nieuwe kankertherapieën die een intact immuunsysteem vereisen. Zodra de tumor is vastgesteld, is amputatie noodzakelijk om de snelheid van metastase in overlevingsstudies op lange termijn te beheersen.We gebruiken de jugulaire injecties om de visualisatie van intraveneuze medicijnafgifte mogelijk te maken. Jugulaire aderinjectie is nuttig voor veel andere ziektemodellen waarvoor een nauwkeurige medicijnafgifte vereist is. We hebben deze methode gebruikt om nanodeeltjes en radioactief gelabelde ligans te leveren voor in-vivo beeldvorming.We adviseren nieuwe gebruikers om te oefenen met het verwijderen van een ledemaat van vijf tot 10 geëuthanaseerde ratten voordat ze een experiment proberen om de mechanica van ledemaatamputatie zonder bloedverlies onder de knie te krijgen. Na het bevestigen van een gebrek aan reactie op de penisreflex, zet u de verdoofde rat vast in een neuskegel op een warmtekussen met lage temperatuur in rugligging. Verwijder het haar op het rechterbeen, tot aan de ventrale en dorsale onderbuik.Gebruik gaas of spray om het operatiegebied te desinfecteren met 70% ethanol en een geschikt verdund antisepticum en breng zalf aan op de ogen van het dier. Gebruik een boorachtige beweging om een opening te maken, steek een naald van 22 gauge gemarkeerd op 10 millimeter van de punt 10 millimeter in de diafyse van het scheenbeen in het midden van het tibiale plateau, waarbij de naald door de metafyse in de diafyse wordt verlengd. Na het verwijderen van de naald, meng voorzichtig de tumorcelsuspensie van belang om een homogene celsuspensie te verkrijgen en laad 7,5 x 10 tot de vierde van de cellen in 20 microliter PBS in een Hamilton-spuit.Markeer de Hamilton-spuit met cellen op 10 millimeter van de naaldpunt en steek de naald tot de 10 millimetermarkering in het gat dat door de 22-gauge naald wordt gemaakt. Loos vervolgens voorzichtig het volledige volume cellen in de mergholte en plaats de rat in een kooi op een verwarmingskussen met bewaking tot volledige ligtijd. Voor intraveneuze toediening van doxorubicine, na bevestiging van de anesthesie, gebruikt u zorgvuldige dissectie om de rechter- of linker halsader te visualiseren en steekt u de naald in het bovenliggende spierweefsel.Richt de naald naar de kop in het jugulaire aderlumen, zoals het wordt gevisualiseerd in de halsader vooraan bij de borstspier, en trek een klein volume bloed in de naaldpunt om een nauwkeurige inbrenging te bevestigen. Wanneer de naald op zijn plaats zit, injecteer dan langzaam 100 tot 150 microliter van twee milligram per kilogram doxorubicine gedurende één minuut. De oplossing moet tijdens de bevalling zichtbaar zijn in de ader.Wanneer alle oplossing is toegediend, gebruikt u steriel gaas om zachte druk op de ader uit te oefenen en gebruikt u drie tot vier wondclips om de incisie te sluiten. Na bevestiging van de sedatie, verwijdert u het haar op het rechterbeen, tot aan de ventrale en de dorsale onderbuik, en plaatst u de rat in rugligging op een verwarmingskussen. Schrob de huid van het midden van het kalf tot net boven het heupgewricht van de rechter onderbuik zoals aangetoond en breng zalf aan op de ogen van het dier.Trek met steriele handschoenen en instrumenten het been door de opening van het steriele chirurgische gordijn en maak een omtrekkende cutane incisie net proximaal aan de verstikking. Deglove de achterste ledemaat om de dijbeenslagader en ader bloot te leggen op het ventraal-mediale oppervlak van de achterpoot en gebruik 4-0 absorbeerbare hechtingen om de bloedvaten ter hoogte van het middendijbeen en transect distaal te procederen. Klem de ader distaal om lekkage tijdens spierdissectie te verminderen en gebruik stompe dissectie om het heupgewricht te abducteren met laterale buitenwaartse rotatie.Lokaliseer en disarticuleer de kop van het dijbeen van het acetabulum en verwijder eventueel achtergebleven weefsel, waardoor het been aan het lichaam vast blijft zitten. Dien een spatblok toe aan het acetabulum en de heupzenuw met ongeveer zes milligram per kilogram ropivacaïne en gebruik een eenvoudige onderbroken 4-0 absorbeerbare hechting om de musculatuur over het acetabulum te sluiten. Gebruik vervolgens wondclips die vijf tot 10 millimeter zijn geplaatst om de randen van de huid te sluiten.Röntgenbeeldvorming voor tumorsurveillance maakt de bevestiging van bottumorinvasie mogelijk en kan worden uitgevoerd op recent geamputeerde of formaline-gefixeerde ledematen. Röntgenbeeldvorming maakt ook evaluatie van de radiografische morfologie van de longen met en zonder metastasen mogelijk, waardoor een snelle en eenvoudige methode wordt geboden om de noodzaak van euthanasie te bepalen om onnodige spontane sterfgevallen te voorkomen. Bij osteosarcoom bij ratten kan zowel osteolytische als osteoblastische tumormorfologie worden bevestigd door histopathologie van de geamputeerde ledemaat.Merk op dat het corticale bot in dit voorbeeld afwezig is en dat het aangrenzende bot is vervangen door of versterkt door nieuw geweven bot dat loodrecht op de bestaande schacht van de cortex is georiënteerd. Eilanden van onrijpe osteoiden kunnen ook in de tumor worden geïdentificeerd. In deze afbeeldingen kan de microscopische morfologie van representatieve longmetastasen, sommige met gemineraliseerde bot- en tumorvasculaire emboli, worden waargenomen.Immunostaining van primaire osteosarcoomtumoren kan infiltratie van de tumoren door immuuncelpopulaties onthullen, zoals CD68-positieve macrofagen of CD3-positieve T-cellen. Western blotting van tumorceleiwitlysaten kan worden gebruikt om de expressie van eiwitkinasen, eiwitkinasereceptoren en andere eiwitten die interageren met deze routes te bepalen. Voor tibiale implantatie, zodra het eerste tibiale gat is gemaakt, blijf het been in uw niet-dominante hand in dezelfde hoek houden om de huid en de botgaten op één lijn te houden om het inbrengen van de Hamilton-naald gemakkelijker te maken.Voor jugulaire injectie, steek de naald in de spier, maar draai de naald niet te veel om te voorkomen dat de ader ontbreekt. Oefen voor de amputatie eerst de disarticulatie op geëuthanaseerde ratten.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescerende orthotope Muis Model van pancreaskanker

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model van de oorspronkelijke tumor Ontwikkeling en peritoneale metastase<em&gt; via</em&gt; Orthotope Inenting met ovariumcarcinoom Cells

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

Een poortader Injection Model op de studie van de lever metastase van borstkanker

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

Praktische overwegingen bij het bestuderen van uitgezaaide longkanker kolonisatie in met behulp van de pulmonaire metastase Assay Osteosarcoom

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

A Preclinical Mouse Model of Osteosarcoma to Define the Extracellular Vesicle-mediated Communication Between Tumor and Mesenchymal Stem Cells

Een preklinische muismodel van osteosarcoom definiëren de extracellulaire vesikel-gemedieerde communicatie tussen Tumor en mesenchymale stamcellen

Within the tumor microenvironment, resident or recruited mesenchymal stem cells (MSCs) contribute to malignant progression in multiple cancer types. Under ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Een muismodel van Syngeneic Pancreatic kanker te bestuderen van de gevolgen van onomkeerbaar Electroporation

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Een bioluminescente en fluorescerende Orthotopic Syngeneic lymfkliertest Model van androgeen-afhankelijke en castratie-resistente prostaatkanker

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping van Orthotopic Homograft (Syngeneic) van de alvleesklier ductaal adenocarcinoom lymfkliertest primaire KPC door Stroom Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Orthotopic transplantatie van Syngeneic Long adenocarcinoom cellen te bestuderen van PD-L1 expressie

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Acellulair en cellulaire Lung Model studie Tumor uitzaaiingen

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...