Name: a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate
Uploaded: 2021-05-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

Financement des NIH par le National Cancer Institute, subvention # CA228582. Shun Ishiyama reçoit actuellement une subvention de Toray Medical Co., Ltd.

Toutes les procédures et expériences impliquant des rats ont été effectuées conformément aux protocoles approuvés par le comité de soins et d’utilisation des animaux de Johns Hopkins.
1. Le protocole de culture cellulaire UMR-106 de la lignée cellulaire UMR-106 du rat SD
<ol><li>Cultiver des cellules dans du DMEM, complété par 10% (v/v) FBS, pénicilline (10 U/mL)-streptomycine (10 U/mL) à 37 °C dans une atmosphère humidifiée de 5% de CO2. Effectuer des expérienc...

<ol>
	<li>Link, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+adjuvant+chemotherapy+on+relapse-free+survival+in+patients+with+osteosarcoma+of+the+extremity.">The effect of adjuvant chemotherapy on relapse-free survival in patients with osteosarcoma of the extremity.</a> New England Journal of Medicine. 314 (25), 1600-1606 (1986).</li><li>Bielack, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+in+high-grade+osteosarcoma+of+the+extremities+or+trunk:+an+analysis+of+1,702+patients+treated+on+neoadjuvant+cooperative+osteosarcoma+study+group+protocols.">Prognostic factors in high-grade osteosarcoma of the extremities or trunk: an analysis of 1,702 patients treated on neoadjuvant cooperative osteosarcoma study group protocols.</a> Journal of Clinical Oncology. 20 (3), 776-790 (2002).</li><li>Botter, S. M., Neri, D., Fuchs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+osteosarcoma.">Recent advances in osteosarcoma.</a> Current Opinion in Pharmacology. 16, 15-23 (2014).</li><li>Ek, E. T. H., Dass, C. R., Choong, P. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+mouse+models+of+osteosarcoma.">Commonly used mouse models of osteosarcoma.</a> Critical Reviews in Oncology Hematology. 60 (1), 1-8 (2006).</li><li>Guijarro, M. V., Ghivizzani, S. C., Gibbs, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+osteosarcoma.">Animal models in osteosarcoma.</a> Frontiers Oncology. 4, 189 (2014).</li><li>Janeway, K. A., Walkley, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+osteosarcoma+in+the+mouse:+From+bedside+to+bench.">Modeling human osteosarcoma in the mouse: From bedside to bench.</a> Bone. 47 (5), 859-865 (2010).</li><li>Mohseny, A. B., Hogendoorn, P. C., Cleton-Jansen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma+models:+from+cell+lines+to+zebrafish.">Osteosarcoma models: from cell lines to zebrafish.</a> Sarcoma. 2012, 417271 (2012).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+murine+osteosarcoma+with+clonally+related+variants+differing+in+pulmonary+metastatic+potential.">An orthotopic model of murine osteosarcoma with clonally related variants differing in pulmonary metastatic potential.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 18 (3), 261-271 (2000).</li><li>Martin, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parathyroid+hormone-responsive+adenylate+cyclase+in+induced+transplantable+osteogenic+rat+sarcoma.">Parathyroid hormone-responsive adenylate cyclase in induced transplantable osteogenic rat sarcoma.</a> Nature. 260 (5550), 436-438 (1976).</li><li>Fisher, J. L., Mackie, P. S., Howard, M. L., Zhou, H., Choong, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+the+urokinase+plasminogen+activator+system+in+metastatic+murine+osteosarcoma:+an+in+vivo+mouse+model.">The expression of the urokinase plasminogen activator system in metastatic murine osteosarcoma: an in vivo mouse model.</a> Clinical Cancer Research. 7 (6), 1654-1660 (2001).</li><li>Yu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+reproducible+osteosarcoma+rat+model+using+orthotopic+implantation+technique.">Establishment of reproducible osteosarcoma rat model using orthotopic implantation technique.</a> Oncology Reports. 21 (5), 1175-1180 (2009).</li><li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homologous+mesenchymal+stem+cells+promote+the+emergence+and+growth+of+pulmonary+metastases+of+the+rat+osteosarcoma+cell+line+UMR-106.">Homologous mesenchymal stem cells promote the emergence and growth of pulmonary metastases of the rat osteosarcoma cell line UMR-106.</a> Oncology Letters. 8 (1), 127-132 (2014).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+90+and+ErbB2+in+the+cardiac+response+to+doxorubicin+injury.">Heat shock protein 90 and ErbB2 in the cardiac response to doxorubicin injury.</a> Cancer Research. 67 (4), 1436-1441 (2007).</li><li>Sysa-Shah, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+cross-regulation+between+ErbB2+and+&#946;-adrenergic+signalling+pathways.">Bidirectional cross-regulation between ErbB2 and &#946;-adrenergic signalling pathways.</a> Cardiovascular Research. 109 (3), 358-373 (2016).</li><li>Wachtman, L. M., Browning, M. D., Bedja, D., Pin, S., Gabrielson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+use+of+long-term+indwelling+jugular+catheters+in+a+rat+model+of+cardiotoxicity.">Validation of the use of long-term indwelling jugular catheters in a rat model of cardiotoxicity.</a> Journal of American Association Laboratory Animal Science. 45, 55-64 (2006).</li><li>Abdou, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prognostic+role+of+Ezrin+and+HER2/neu+expression+in+osteosarcoma.">The Prognostic role of Ezrin and HER2/neu expression in osteosarcoma.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 24 (5), 355-363 (2016).</li><li>Hughes, D. P., Thomas, D. G., Giordano, T. J., McDonagh, K. T., Baker, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+erbB+family+phosphorylation+in+osteosarcoma+as+a+target+for+CI-1033+inhibition.">Essential erbB family phosphorylation in osteosarcoma as a target for CI-1033 inhibition.</a> Pediatric Blood &amp; Cancer. 46 (5), 614-623 (2006).</li><li>Wen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+in+osteosarcoma:+expression+and+mutational+analysis.">Epidermal growth factor receptor in osteosarcoma: expression and mutational analysis.</a> Human Pathology. 38 (8), 1184-1191 (2007).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+drug+development+path+that+targets+metastatic+progression+in+osteosarcoma.">Toward a drug development path that targets metastatic progression in osteosarcoma.</a> Clinical Cancer Research. 20 (16), 4200-4209 (2014).</li></ol>

Les rats porteurs d’implants tibias OS développent des tumeurs mesurables 3 semaines après l’implantation. Si les membres avec des tumeurs sont amputés 3 semaines après l’implantation, l’incidence des métastases pulmonaires est considérablement réduite. Les systèmes d’exploitation sont à la fois ostéolytiques et ostéoblastiques. Les rats sans amputation développent des métastases pulmonaires multiples et de taille variable, observées par radiographie ou lors de la nécropsie 7 semaines après l’...

L’ostéosarcome (SG) est la tumeur osseuse primaire la plus courante chez les enfants, les adolescents et les jeunes adultes. L’avancée la plus récente dans le traitement de la SG a eu lieu dans les années 1980, lorsqu’il a été démontré que la chimiothérapie multi-agents améliorait la survie globale par rapport à la chirurgie seule1. La SG se développe au cours d’une croissance osseuse rapide, se produisant généralement dans les os tubulaires longs tels que le fémur, le tibia et l’humérus. Ils sont caractérisés par un aspect ostéolytique, ostéoblastique ou mixte avec une réaction périostée notable2. La chimiothérapie et la résection chirurgicale peuvent améliorer les résultats pour les patients ayant une survie à 5 ans pour 65% des patients2,3. Malheureusement, les patients atteints de SG de haut grade atteints d’une maladie métastatique ont une survie de 20%. La SG envahit la région et métastase principalement dans les poumons ou d’autres os et est plus répandue chez les hommes. Le besoin le plus impérieux pour ces jeunes patients est une nouvelle thérapie qui prévient et élimine la viabilité des métastases à distance.
Des modèles précliniques de SG ont été examinés4,5,6,7et peu de modèles immunocompétents disponibles utilisant l’amputation de la SG orthotopique ont été développés. En 2000, un modèle important a été développé en utilisant des souris BALB/c avec OS syngénique orthotopique et amputation8. Par rapport à ce modèle murin, le modèle de rat est basé sur des animaux génétiquement élevés et 10 fois plus gros, ce qui présente certains avantages. Le modèle UMR106 du rat a été développé à partir d’une SG induite par 32P chez un rat Sprague Dawley (SD), qui a été dérivé dans une lignée cellulaire9. En 2001, l’implantation orthotopique d’UMR106-01 a été décrite pour la première fois dans des tibias implantés de souris athymiques présentant un développement tumoral primaire rapide et cohérent et des caractéristiques radiologiques et histologiques en commun avec la SG chez l’homme. Des métastases pulmonaires se sont développées et dépendaient du placement orthotopique d’UMR106 dans le microenvironnement osseux10. En 2009, Yu et al.11 ont établi un modèle reproductible de rat OS du fémur orthotopique en utilisant des cellules UMR106 chez des rats SD mâles plus grands. Les implantations tumorales réussies et le taux de métastases pulmonaires chez le rat sans amputation étaient similaires aux données présentées ici. Dans cette étude, une amputation supplémentaire au modèle utilisant de jeunes rats a été effectuée, ce qui suggère que le moment de l’ablation de la tumeur primaire est crucial dans la modélisation de la SG, en particulier en ce qui concerne la progression métastatique. Grâce à ce raffinement, l’amputation et l’imagerie in vivo améliorent ce modèle pour les études précliniques d’évaluation des nouveaux médicaments pour la SG.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AKT</td>
			<td>Cell Signaling TECHNOLOGY</td>
			<td>4685S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>absorbable suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J214H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-47778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;2-AR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-569</td>
			<td>replaced by &#946;2-AR (E-3): sc-271322</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bis&#8211;Tris gels</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NP0321PK2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR Lab</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>IZ-70000-201908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>#A0452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD68 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>#14-0688-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemiluminescent substrate</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>RPN2232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CL-Xposure film</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>34089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Anesthesia System</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>922120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diaminobenzidine</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>Actavis</td>
			<td>NDC 45963-733-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGFR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-03</td>
			<td>replaced by EGFR (A-10): sc-373746</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB2 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-284</td>
			<td>replaced by Neu (3B5): sc-33684</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB4 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-283</td>
			<td>replaced by ErbB4 (C-7): sc-8050</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERK antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-514302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye lubricant</td>
			<td>PHARMADERM</td>
			<td>NDC 0462-0211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe (100 &#181;L)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>Model 1710 SN SYR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>horseradish peroxidase-linked secondary antibody</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>NA934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>BUTLER SCHEIN</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane vaporizer</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>911103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UMR-106 cell</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray</td>
			<td>Faxitron</td>
			<td>UltraFocus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray processor</td>
			<td>Hope X-Ray Peoducts Inc</td>
			<td>MicroMax X-ray Processor</td>
			<td>Hope Processors are not available in USA anymore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>wound clips</td>
			<td>BECTON DICKINSON</td>
			<td>427631</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate

L’avancée la plus récente dans le traitement de l’ostéosarcome (SG) s’est produite dans les années 1980, lorsqu’il a été démontré que la chimiothérapie multi-agents améliorait la survie globale par rapport à la chirurgie seule. Pour résoudre ce problème, l’objectif de l’étude est d’affiner un modèle moins connu de SG chez le rat avec une approche chirurgicale histologique, d’imagerie, biologique, d’implantation et d’amputation complète qui prolonge la survie. Nous avons utilisé un modèle de rat syngénique Sprague-Dawley (SD) immunocompétent et consanguin avec une lignée cellulaire UMR106 OS implantée (provenant d’un rat SD) avec des implants de tumeur tibiale orthotopique chez des rats mâles et femelles âgés de 3 semaines pour modéliser la SG pédiatrique. Nous avons constaté que les rats développent des tumeurs pulmonaires primaires et métastatiques reproductibles, et que les amputations de membres à 3 semaines après l’implantation réduisent considérablement l’incidence des métastases pulmonaires et préviennent les décès inattendus. Histologiquement, les SYSTÈMES primaires et métastatiques chez le rat étaient très similaires à ceux de la SG humaine. En utilisant des méthodes d’immunohistochimie, l’étude montre que la SG du rat est infiltrée par des macrophages et des cellules T. Une étude de l’expression protéique des cellules OS révèle que ces tumeurs expriment des kinases de la famille ErbB. Étant donné que ces kinases sont également fortement exprimées dans la plupart des systèmes d’exploitation humains, ce modèle de rat pourrait être utilisé pour tester les inhibiteurs de la voie ErbB pour le traitement.

Des rats consanguins SD immunocompétents sont utilisés pour ces études sur la SG, qui offrent un modèle animal avec un système immunitaire intact. Nous avons utilisé la lignée cellulaire UMR106 d’ATCC, développée à partir de cellules initialement isolées d’un système d’exploitation d’un rat SD. Nous avons implanté les cellules dans des rats SD, fournissant ainsi un modèle syngénique pour OS. Les cellules UMR106 sont implantées dans le tibia de rats SD mâles et femelles âgés de 3 semaines, simul...

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A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate (Video) | JoVE

Ici, une implantation orthotopique syngénique suivie d’une procédure d’amputation de l’ostéosarcome avec métastases pulmonaires spontanées pouvant être utilisée pour l’investigation préclinique de la biologie des métastases et le développement de nouvelles thérapies est décrite.

Un modèle de rat Sprague Dawley d’ostéosarcome orthotopique syngénique avec amputation pour contrôler le taux de métastases

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

L’implantation de cellules d’ostéosarcome à l’intérieur du microenvironnement du tibia favorise les métastases pulmonaires. Ce modèle peut également être utile pour étudier les mécanismes des métastases pulmonaires ou de nouvelles thérapies contre le cancer qui nécessitent un système immunitaire intact. Une fois la tumeur établie, l’amputation est nécessaire pour contrôler le taux de métastases dans les études de survie à long terme.Nous utilisons les injections jugulaires pour permettre la visualisation de l’administration intraveineuse de médicaments. L’injection de veine jugulaire est utile pour de nombreux autres modèles de maladies pour lesquels une administration précise de médicaments est nécessaire. Nous avons utilisé cette méthode pour fournir des nanoparticules et des ligans radiomarqués pour l’imagerie in vivo.Nous conseillons aux nouveaux utilisateurs de s’entraîner à retirer un membre de cinq à 10 rats euthanasiés avant de tenter une expérience pour maîtriser la mécanique de l’amputation d’un membre sans perte de sang. Après avoir confirmé un manque de réponse au réflexe pénien, fixez le rat anesthésié dans un cône nasal sur un coussin chauffant à faible température en position couchée. Enlevez les poils de la jambe droite, jusqu’au bas-ventre ventral et dorsal.Utilisez de la gaze ou un spray pour désinfecter la zone chirurgicale avec de l’éthanol à 70% et un antiseptique dilué approprié et appliquez une pommade sur les yeux de l’animal. À l’aide d’un mouvement semblable à une perceuse pour faire une ouverture, insérez une aiguille de calibre 22 marquée à 10 millimètres de la pointe 10 millimètres dans la diaphyse du tibia au milieu du plateau tibial, étendant l’aiguille à travers la métaphyse dans la diaphyse. Après avoir retiré l’aiguille, mélanger doucement la suspension de cellules tumorales d’intérêt pour obtenir une suspension cellulaire homogène et charger 7,5 x 10 à la quatrième des cellules dans 20 microlitres de PBS dans une seringue Hamilton.Marquez la seringue Hamilton avec des cellules situées à 10 millimètres de l’extrémité de l’aiguille et insérez l’aiguille à la marque de 10 millimètres dans le trou fait par l’aiguille de calibre 22. Ensuite, déchargez doucement tout le volume de cellules dans la cavité de la moelle et placez le rat dans une cage sur un coussin chauffant avec surveillance jusqu’à ce qu’il soit couché complètement. Pour l’administration intraveineuse de doxorubicine, après confirmation de l’anesthésie, utilisez une dissection minutieuse pour visualiser la veine jugulaire droite ou gauche et insérez l’aiguille dans le tissu musculaire sus-jacent.Dirigez l’aiguille vers la tête dans la lumière de la veine jugulaire, telle qu’elle est visualisée dans la veine jugulaire antérieure au muscle pectoral, et aspirez un petit volume de sang dans la pointe de l’aiguille pour confirmer une insertion précise. Lorsque l’aiguille est en place, injecter lentement 100 à 150 microlitres de deux milligrammes par kilogramme de doxorubicine pendant une minute. La solution doit être visible dans la veine pendant l’accouchement.Lorsque toute la solution a été administrée, utilisez de la gaze stérile pour appliquer une légère pression sur la veine et utilisez trois à quatre clips de plaie pour fermer l’incision. Après avoir confirmé la sédation, retirez les poils de la jambe droite, jusqu’au bas-ventre ventral et dorsal, et placez le rat en position couchée sur un coussin chauffant. Frottez la peau du milieu du mollet jusqu’à juste au-dessus de l’articulation de la hanche du bas-ventre droit comme démontré et appliquez une pommade sur les yeux de l’animal.À l’aide de gants et d’instruments stériles, tirez la jambe à travers l’évent du drap chirurgical stérile et faites une incision cutanée circonférentielle juste proximale à l’étouffement. Dégraissez le membre postérieur pour exposer l’artère fémorale et la veine sur la surface ventrale-médiale du membre postérieur, et utilisez des sutures résorbables 4-0 pour plaider les vaisseaux au niveau du fémur moyen et transect distalement. Serrez la veine distalement pour réduire les fuites pendant la dissection musculaire et utilisez la dissection émoussée pour enlever l’articulation de la hanche avec une rotation latérale vers l’extérieur.Localisez et désarticulez la tête du fémur de l’acétabulum et retirez tout tissu restant, en gardant la jambe attachée au corps. Administrer un bloc d’éclaboussures à l’acétabulum et au nerf sciatique avec environ six milligrammes par kilogramme de ropivacaïne, et utiliser une simple suture résorbable interrompue 4-0 pour fermer la musculature sur l’acétabulum. Utilisez ensuite des clips de plaie placés de cinq à 10 millimètres pour fermer les bords de la peau.L’imagerie par rayons X pour la surveillance tumorale permet la confirmation de l’invasion de la tumeur osseuse et peut être effectuée sur des membres récemment amputés ou fixés au formol. L’imagerie par rayons X permet également d’évaluer la morphologie radiographique des poumons avec et sans métastases, fournissant une méthode rapide et facile pour déterminer la nécessité de l’euthanasie afin de prévenir les décès spontanés inutiles. Dans l’ostéosarcome du rat, la morphologie tumorale ostéolytique et ostéoblastique peut être confirmée par l’histopathologie du membre amputé.Notez que l’os cortical est absent dans cet exemple et que l’os adjacent a été remplacé ou enrichi par un nouvel os tissé orienté perpendiculairement à la tige existante du cortex. Des îlots d’ostéoïdes immatures peuvent également être identifiés dans la tumeur. Dans ces images, on peut observer la morphologie microscopique de métastases pulmonaires représentatives, certaines avec des embolies osseuses et vasculaires tumorales minéralisées.L’immunocoloration des tumeurs primaires de l’ostéosarcome peut révéler une infiltration des tumeurs par des populations de cellules immunitaires, telles que les macrophages CD68 positifs ou les lymphocytes T CD3 positifs. Le transfert western des lysats de protéines des cellules tumorales peut être utilisé pour déterminer l’expression des protéines kinases, des récepteurs des protéines kinases et d’autres protéines qui interagissent avec ces voies. Pour l’implantation tibiale, une fois que le premier trou tibial a été fait, continuez à tenir la jambe dans votre main non dominante au même angle pour garder la peau et les trous osseux alignés pour faciliter l’insertion de l’aiguille Hamilton.Pour l’injection jugulaire, insérez l’aiguille dans le muscle, mais n’inclinez pas trop l’aiguille pour éviter de manquer la veine. Pour l’amputation, pratiquez d’abord la désarticulation sur des rats euthanasiés.

Research

JoVE Journal

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Within the tumor microenvironment, resident or recruited mesenchymal stem cells (MSCs) contribute to malignant progression in multiple cancer types. Under ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Un modèle de souris syngénique Cancer du pancréas pour étudier les effets de l’électroporation irréversible

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Un modèle murin syngénique bioluminescentes et Fluorescent orthotopique du Cancer de la Prostate androgéno-dépendants et résistant à la Castration

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophénotypage de homogreffe orthotopique (syngéniques) d’adénocarcinome Ductal pancréatique KPC primaires murines par cytométrie en flux

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Orthotopic Transplantation de cellules d’adénocarcinome pulmonaire syngénique pour étudier l’Expression des PD-L1

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Cellulaire et acellulaire poumon modèle pour étudier les métastases tumorales

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...