Name: a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate
Uploaded: 2021-05-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

Ulusal Kanser Enstitüsü aracılığıyla NIH finansmanı, hibe # CA228582. Shun Ishiyama şu anda Toray Medical Co., Ltd.'den hibe alıyor.

Sıçanları içeren tüm prosedürler ve deneyler Johns Hopkins Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanan protokollere göre gerçekleştirildi.
1. SD rat OS hücre hattı UMR-106 hücre kültürü protokolü
<ol><li>DMEM'de% 10 (v/ v) FBS, penisilin (10 U / mL)- streptomisinin (10 U / mL) nemli% 5 CO2 atmosferinde 37 ° C'de ( 10 U / mL) ile desteklenmiş hücreleri büyütün. 2-812pasajlı hücreleri kullanarak deneyler gerçekleştirin....

<ol>
	<li>Link, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+adjuvant+chemotherapy+on+relapse-free+survival+in+patients+with+osteosarcoma+of+the+extremity.">The effect of adjuvant chemotherapy on relapse-free survival in patients with osteosarcoma of the extremity.</a> New England Journal of Medicine. 314 (25), 1600-1606 (1986).</li><li>Bielack, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+factors+in+high-grade+osteosarcoma+of+the+extremities+or+trunk:+an+analysis+of+1,702+patients+treated+on+neoadjuvant+cooperative+osteosarcoma+study+group+protocols.">Prognostic factors in high-grade osteosarcoma of the extremities or trunk: an analysis of 1,702 patients treated on neoadjuvant cooperative osteosarcoma study group protocols.</a> Journal of Clinical Oncology. 20 (3), 776-790 (2002).</li><li>Botter, S. M., Neri, D., Fuchs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+osteosarcoma.">Recent advances in osteosarcoma.</a> Current Opinion in Pharmacology. 16, 15-23 (2014).</li><li>Ek, E. T. H., Dass, C. R., Choong, P. F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+mouse+models+of+osteosarcoma.">Commonly used mouse models of osteosarcoma.</a> Critical Reviews in Oncology Hematology. 60 (1), 1-8 (2006).</li><li>Guijarro, M. V., Ghivizzani, S. C., Gibbs, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+osteosarcoma.">Animal models in osteosarcoma.</a> Frontiers Oncology. 4, 189 (2014).</li><li>Janeway, K. A., Walkley, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+osteosarcoma+in+the+mouse:+From+bedside+to+bench.">Modeling human osteosarcoma in the mouse: From bedside to bench.</a> Bone. 47 (5), 859-865 (2010).</li><li>Mohseny, A. B., Hogendoorn, P. C., Cleton-Jansen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteosarcoma+models:+from+cell+lines+to+zebrafish.">Osteosarcoma models: from cell lines to zebrafish.</a> Sarcoma. 2012, 417271 (2012).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+model+of+murine+osteosarcoma+with+clonally+related+variants+differing+in+pulmonary+metastatic+potential.">An orthotopic model of murine osteosarcoma with clonally related variants differing in pulmonary metastatic potential.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 18 (3), 261-271 (2000).</li><li>Martin, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parathyroid+hormone-responsive+adenylate+cyclase+in+induced+transplantable+osteogenic+rat+sarcoma.">Parathyroid hormone-responsive adenylate cyclase in induced transplantable osteogenic rat sarcoma.</a> Nature. 260 (5550), 436-438 (1976).</li><li>Fisher, J. L., Mackie, P. S., Howard, M. L., Zhou, H., Choong, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+the+urokinase+plasminogen+activator+system+in+metastatic+murine+osteosarcoma:+an+in+vivo+mouse+model.">The expression of the urokinase plasminogen activator system in metastatic murine osteosarcoma: an in vivo mouse model.</a> Clinical Cancer Research. 7 (6), 1654-1660 (2001).</li><li>Yu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+reproducible+osteosarcoma+rat+model+using+orthotopic+implantation+technique.">Establishment of reproducible osteosarcoma rat model using orthotopic implantation technique.</a> Oncology Reports. 21 (5), 1175-1180 (2009).</li><li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homologous+mesenchymal+stem+cells+promote+the+emergence+and+growth+of+pulmonary+metastases+of+the+rat+osteosarcoma+cell+line+UMR-106.">Homologous mesenchymal stem cells promote the emergence and growth of pulmonary metastases of the rat osteosarcoma cell line UMR-106.</a> Oncology Letters. 8 (1), 127-132 (2014).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+90+and+ErbB2+in+the+cardiac+response+to+doxorubicin+injury.">Heat shock protein 90 and ErbB2 in the cardiac response to doxorubicin injury.</a> Cancer Research. 67 (4), 1436-1441 (2007).</li><li>Sysa-Shah, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bidirectional+cross-regulation+between+ErbB2+and+&#946;-adrenergic+signalling+pathways.">Bidirectional cross-regulation between ErbB2 and &#946;-adrenergic signalling pathways.</a> Cardiovascular Research. 109 (3), 358-373 (2016).</li><li>Wachtman, L. M., Browning, M. D., Bedja, D., Pin, S., Gabrielson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+the+use+of+long-term+indwelling+jugular+catheters+in+a+rat+model+of+cardiotoxicity.">Validation of the use of long-term indwelling jugular catheters in a rat model of cardiotoxicity.</a> Journal of American Association Laboratory Animal Science. 45, 55-64 (2006).</li><li>Abdou, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prognostic+role+of+Ezrin+and+HER2/neu+expression+in+osteosarcoma.">The Prognostic role of Ezrin and HER2/neu expression in osteosarcoma.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 24 (5), 355-363 (2016).</li><li>Hughes, D. P., Thomas, D. G., Giordano, T. J., McDonagh, K. T., Baker, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+erbB+family+phosphorylation+in+osteosarcoma+as+a+target+for+CI-1033+inhibition.">Essential erbB family phosphorylation in osteosarcoma as a target for CI-1033 inhibition.</a> Pediatric Blood &amp; Cancer. 46 (5), 614-623 (2006).</li><li>Wen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+growth+factor+receptor+in+osteosarcoma:+expression+and+mutational+analysis.">Epidermal growth factor receptor in osteosarcoma: expression and mutational analysis.</a> Human Pathology. 38 (8), 1184-1191 (2007).</li><li>Khanna, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+drug+development+path+that+targets+metastatic+progression+in+osteosarcoma.">Toward a drug development path that targets metastatic progression in osteosarcoma.</a> Clinical Cancer Research. 20 (16), 4200-4209 (2014).</li></ol>

OS tibial implantlı sıçanlar implantasyondan 3 hafta sonra ölçülebilir tümörler geliştirirler. Tümörlü uzuvlar implantasyondan 3 hafta sonra kesilirse akciğer metastazının görülme sıklığı önemli ölçüde azalır. OS'ler hem osteolitik hem de osteoblastiktir. Amputasyonsuz sıçanlar, implantasyondan 7 hafta sonra radyografi veya nekropsi ile gözlenen, çoklu ve değişken boyutta akciğer metastazları geliştirir. EGFR, ErbB2 ve ErbB4, insan işletim sistemi 16 ,17</s...

Osteosarkom (OS) çocuklarda, ergenlerde ve genç erişkinlerde en sık görülen primer kemik tümörüdür. OS tedavisindeki en son ilerleme, 1980'lerde çok ajanlı kemoterapinin sadece cerrahiye kıyasla genel sağkalımını iyileştirdiği gösterildiğinde meydana geldi1. İşletim sistemi hızlı kemik büyümesi sırasında gelişir, tipik olarak femur, kaval kemiği ve humerus gibi uzun tübüler kemiklerde meydana gelir. Osteolitik, osteoblastik veya belirgin periosteal reaksiyonlu karışık görünüm ile karakterizeedilirler 2. Kemoterapi ve cerrahi rezeksiyon, hastaların % 65'i için 5 yıllık sağkalımlı hastalar için sonucu iyileştirebilir2,3. Ne yazık ki, metastatik hastalığı olan yüksek dereceli işletim sistemi hastaları% 20 sağkalıma sahiptir. İşletim sistemi bölgesel olarak istila eder ve öncelikle akciğerlere veya diğer kemiklere metastaz eder ve erkeklerde daha yaygındır. Bu genç hastalar için en zorlayıcı ihtiyaç, uzak metastazların canlılığını önleyen ve ortadan kaldıran yeni bir tedavidir.
OS klinik öncesi modeller gözden geçirilmiştir4,5,6,7 ve ortotopik işletim sisteminin amputasyonu kullanılarak mevcut birkaç immün yetmetik model geliştirilmiştir. 2000 yılında, ortotopik singeneik işletim sistemi ve amputasyon8ile BALB / c fareler kullanılarak önemli bir model geliştirilmiştir. Bu fare modeline kıyasla, sıçan modeli genetik olarak yetiştirilmiş ve bazı avantajlara yol açan 10 kat daha büyük hayvanlara dayanmaktadır. Sıçan UMR106 modeli, bir hücre hattı9'atüretilen bir Sprague Dawley (SD) sıçanında 32P kaynaklı bir işletim sistemi tarafından geliştirilmiştir. 2001 yılında UMR106-01 ortotopik implantasyonu ilk olarak athimik farelerin implante tibialarında hızlı, tutarlı primer tümör gelişimi ve insanlarda işletim sistemi ile ortak radyolojik, histolojik özelliklerle tanımlanmıştır. Pulmoner metastazlar gelişti ve UMR106'nın kemik mikroçevresine ortotopik yerleşimine bağlıydı10. 2009 yılında Yu ve arkadaşları11, daha büyük erkek SD sıçanlarda UMR106 hücrelerini kullanarak tekrarlanabilir bir ortotopik femur OS sıçan modeli kurdu. Amputasyon yapılmamış sıçanlarda başarılı tümör implantasyonları ve akciğer metastaz oranı burada sunulan verilere benzerdi. Bu çalışmada, özellikle metastatik ilerleme ile ilgili olarak, primer tümör çıkarma zamanlamasının modelleme işletim sisteminde çok önemli olduğunu öne süren genç sıçanlar kullanılarak modele ek bir amputasyon yapıldı. Bu arıtma ile amputasyon ve in vivo görüntüleme, işletim sistemi için yeni ilaç değerlendirmesi için klinik öncesi çalışmalar için bu modeli geliştirir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AKT</td>
			<td>Cell Signaling TECHNOLOGY</td>
			<td>4685S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>absorbable suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J214H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-actin</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-47778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;2-AR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-569</td>
			<td>replaced by &#946;2-AR (E-3): sc-271322</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bis&#8211;Tris gels</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>NP0321PK2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine SR Lab</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>IZ-70000-201908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>#A0452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD68 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>#14-0688-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemiluminescent substrate</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>RPN2232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CL-Xposure film</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>34089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Anesthesia System</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>922120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>diaminobenzidine</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Doxorubicin</td>
			<td>Actavis</td>
			<td>NDC 45963-733-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGFR antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-03</td>
			<td>replaced by EGFR (A-10): sc-373746</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB2 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-284</td>
			<td>replaced by Neu (3B5): sc-33684</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERBB4 antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-283</td>
			<td>replaced by ErbB4 (C-7): sc-8050</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ERK antibody</td>
			<td>SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY</td>
			<td>sc-514302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eye lubricant</td>
			<td>PHARMADERM</td>
			<td>NDC 0462-0211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe (100 &#181;L)</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>Model 1710 SN SYR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>horseradish peroxidase-linked secondary antibody</td>
			<td>cytiva</td>
			<td>NA934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP polymer detection kit</td>
			<td>VECTOR LABORATORIES</td>
			<td>MP-7402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>BUTLER SCHEIN</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane vaporizer</td>
			<td>EVETEQUIP</td>
			<td>911103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UMR-106 cell</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray</td>
			<td>Faxitron</td>
			<td>UltraFocus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray processor</td>
			<td>Hope X-Ray Peoducts Inc</td>
			<td>MicroMax X-ray Processor</td>
			<td>Hope Processors are not available in USA anymore</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>wound clips</td>
			<td>BECTON DICKINSON</td>
			<td>427631</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic orthotopic osteosarcoma sprague dawley rat model with amputation to control metastasis rate

Osteosarkom (OS) tedavisinde en son ilerleme, 1980'lerde multi-ajan kemoterapinin sadece cerrahiye kıyasla genel sağkalımını iyileştirdiği gösterildiğinde gerçekleşti. Bu sorunu gidermek için çalışmanın amacı, sıçanlarda daha az bilinen bir işletim sistemi modelini, sağkalım süresini uzatan kapsamlı bir histolojik, görüntüleme, biyolojik, implantasyon ve amputasyon cerrahi yaklaşımı ile iyileştirmektir. Pediatrik işletim sistemini modellemek için 3 haftalık erkek ve dişi sıçanlara ortotopik tibial tümör implantları ile implante UMR106 OS hücre hattı (SD sıçanından kaynaklanan) ile singeneik bir sıçan modeli olan immün yetmetik, dışlanmış bir Sprague-Dawley (SD) kullandık. Sıçanlarda tekrarlanabilir primer ve metastatik pulmoner tümörler geliştiğini ve implantasyon sonrası 3 haftalık uzuv amputasyonlarının pulmoner metastaz insidansını önemli ölçüde azalttığını ve beklenmedik ölümleri önlüyor olduğunu gördük. Histolojik olarak, sıçanlardaki birincil ve metastatik işletim sistemi insan işletim sistemine çok benziyordu. OS hücrelerinin protein ekspresyon araştırması, bu tümörlerin ErbB ailesi kinazlarını ifade ettiğini ortaya koymaktadır. Bu kinazlar çoğu insan işletim sisteminde de yüksek oranda ifade edildiğinden, bu sıçan modeli tedavi için ErbB yol inhibitörlerini test etmek için kullanılabilir.

Bağışıklık sistemi bozulmamış bir bağışıklık sistemine sahip bir hayvan modeli sunan bu işletim sistemi çalışmaları için bağışıklık sistemi yetersiz SD dışlanmış sıçanlar kullanılmaktadır. ATCC'den UMR106 hücre hattını kullandık, başlangıçta bir SD sıçanından işletim sistemi izole edilmiş hücrelerden geliştirildi. Hücreleri SD sıçanlara yerleştirdik, böylece işletim sistemi için singeneik bir model sağladık. Ayrıca UMR106 hücrelerinin doğrudan kaval kemiği metafiz...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate at JoVE.com

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate (Video) | JoVE

Burada, metastaz biyolojisinin preklinik araştırılması ve yeni terapötiklerin gelişimi için kullanılabilecek spontan pulmoner metastaz ile osteosarkomun amputasyon prosedürünün ardından singeneik ortotopik implantasyon tanımlanmıştır.

Metastaz Oranını Kontrol Etmek için Amputasyonlu Syngeneic Ortotopik Osteosarkom Sprague Dawley Sıçan Modeli

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...

Kaval kemiği mikroçevriminin içine osteosarkom hücrelerinin yerleştirilmesi akciğer metastazını teşvik eder. Bu model, sağlam bir bağışıklık sistemi gerektiren pulmoner metastaz veya yeni kanser tedavilerinin mekanizmalarını incelemek için de yararlı olabilir. Tümör kurulduktan sonra, uzun süreli sağkalım çalışmalarında metastaz oranını kontrol etmek için amputasyon gereklidir.Damardan ilaç dağıtımının görselleştirilmesine izin vermek için şahdamar enjeksiyonlarını kullanıyoruz. Juguler ven enjeksiyonu, kesin bir ilaç teslimatının gerekli olduğu diğer birçok hastalık modeli için yararlıdır. Bu yöntemi in-vivo görüntüleme için nanopartiküller ve radyolabelli liganlar sunmak için kullandık.Yeni kullanıcılara, kan kaybı olmadan uzuv amputasyon mekaniğine hakim olmak için bir deney denemeden önce beş ila 10 ötenazili sıçandan bir uzvu çıkarma pratiği yapmalarını tavsiye ediyoruz. Penis refleksine yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, uyuşturulmış sıçanı burun kemiğinde, düşük ısı ayarlı bir ısı yastığında supine pozisyonunda sabitleyin. Sağ bacakta, ventral ve dorsal alt karına kadar olan saçları çıkarın.Cerrahi bölgeyi% 70 etanol ve uygun bir seyreltilmiş antiseptik ile dezenfekte etmek ve hayvanın gözlerine merhem uygulamak için gazlı bez veya sprey kullanın. Bir açıklık yapmak için matkap benzeri bir hareket kullanarak, uçtan 10 milimetre işaretli 22 kalibrelik bir iğneyi, tibial platonun ortasındaki kaval kemiğinin diyafizine yerleştirin ve iğneyi metafizden diafize doğru uzatın. İğneyi çıkardıktan sonra, homojen bir hücre süspansiyonu elde etmek için ilgi çekici tümör hücresi süspansiyonu hafifçe karıştırın ve 20 mikrolitre PBS'deki hücrelerin dördüncüsüne 7,5 x 10'u bir Hamilton şırıngasına yükleyin.Hamilton şırıngasını iğne ucundan 10 milimetrelik hücrelerle işaretleyin ve iğneyi 22 kalibrelik iğnenin yaptığı deliğe 10 milimetre işaretine yerleştirin. Daha sonra tüm hücre hacmini ilik boşluğuna hafifçe boşaltın ve sıçanı tam görev süresine kadar izleme ile bir ısıtma yastığı üzerindeki bir kafese yerleştirin. İntravenöz doksofubisin uygulanması için, anestezi onayından sonra, sağ veya sol şahdamarını görselleştirmek için dikkatli diseksiyon kullanın ve iğneyi aşırı kas dokusuna yerleştirin.Şahdamar ön kısmında pektoralis kasına görselleştirildiği için iğneyi başlığa doğru şahdamarına doğru yönlendirin ve doğru bir yerleştirmeyi onaylamak için iğne ucuna küçük bir kan hacmi çizin. İğne yerindeyken, bir dakika içinde kilogram başına iki miligramlık 100 ila 150 mikrolitre enjekte edin. Çözelti doğum sırasında damar içinde görünmelidir.Çözeltinin tamamı teslim edildiğinde, damara hafif basınç uygulamak için steril gazlı bez kullanın ve kesiği kapatmak için üç ila dört yara klipsi kullanın. Sedasyonu onayladıktan sonra, sağ bacaktaki saçları, ventral ve sırt alt karın bölgesine kadar çıkarın ve sıçanı bir ısıtma yastığına sırtüstü konuma yerleştirin. Cildi, gösterildiği gibi baldırın ortasından sağ alt karın kalça ekleminin hemen üstüne ovalayın ve hayvanın gözlerine merhem uygulayın.Steril eldivenler ve aletler kullanarak, bacağı steril cerrahi örtünün havalandırmasına çekin ve boğucuya sadece proksimal olan çevresel bir kesi yapın. Arka uzvun ventral-medial yüzeyindeki femoral arteri ve damarı açığa çıkarmak için arka uzvu deglove edin ve damarları orta uyluk kemiği seviyesinde dava etmek ve distal olarak transeksiyon yapmak için 4-0 emilebilir dikiş kullanın. Kas diseksiyonu sırasında sızıntıyı azaltmak için damarı distal olarak kelepçeleyin ve kalça eklemini yanal dışa doğru dönüşle kaçırmak için künt diseksiyon kullanın.Femurun başını asetabulumdan bulun ve dağıtın ve bacağı vücuda bağlı tutarak kalan herhangi bir dokuyu çıkarın. Asetatülum ve siyatik sinire kilogram ropivakain başına yaklaşık altı miligram ile bir sıçrama bloğu geçirin ve asetatül üzerindeki kasları kapatmak için basit bir kesintiye uğramış 4-0 emilebilir dikiş kullanın. Daha sonra cildin kenarlarını kapatmak için beş ila 10 milimetre yerleştirilen yara klipslerini kullanın.Tümör gözetimi için X-ışını görüntüleme kemik tümörü invazyonunun doğrulanmasına izin verir ve yakın zamanda kesilmiş veya formalin sabit uzuvlarında yapılabilir. Röntgen görüntüleme ayrıca metastazlı ve metastazsız akciğerlerin radyografik morfolojisinin değerlendirilmesine izin vererek, gereksiz spontan ölümleri önlemek için ötanazi ihtiyacını belirlemek için hızlı ve kolay bir yöntem sağlar. Sıçan osteosarkomunda hem osteolitik hem de osteoblastik tümör morfolojisi, kesilmiş uzvun histopatolojisi ile doğrulanabilir.Kortikal kemiğin bu örnekte bulunmadığını ve bitişik kemiğin korteksin mevcut şaftına dik olarak yönlendirilen yeni dokuma kemikle değiştirildiğini veya güçlendirildiğini unutmayın. Olgunlaşmamış osteoid adaları da tümör içinde tanımlanabilir. Bu görüntülerde, bazıları mineralize kemik ve tümör vasküler emboli ile temsili akciğer metastazlarının mikroskobik morfolojisi gözlenebilir.Primer osteosarkom tümörlerinin immünostainingi, tümörlerin CD68 pozitif makrofajlar veya CD3-pozitif T hücreleri gibi bağışıklık hücresi popülasyonları tarafından infiltrasyonunu ortaya çıkarabilir. Tümör hücre protein lysates Batı şişkinliği protein kinazları, protein kinaz reseptörleri ve bu yollar ile etkileşime diğer proteinlerin ekspresyonunu belirlemek için kullanılabilir. Tibial implantasyon için, ilk tibial delik yapıldıktan sonra, hamilton iğnesi yerleştirmeyi kolaylaştırmak için cildi ve kemik deliklerini hizada tutmak için bacağı baskın olmayan elinizde tutmaya devam edin.Şahdamar enjeksiyonu için, iğneyi kas içine yerleştirin, ancak damarı kaçırmamak için iğneyi çok fazla açıya sokmayın. Amputasyon için, önce ötenazili sıçanlar üzerinde disartikülasyon uygulayın.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz<em&gt; yoluyla</emYumurtalık Kanseri Hücreleri ile&gt; Ortotopik aşılama

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

Metastatik akciğer kolonizasyon pulmoner metastaz tahlil kullanarak osteosarkom içinde eğitim pratik düşünceler

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

A Preclinical Mouse Model of Osteosarcoma to Define the Extracellular Vesicle-mediated Communication Between Tumor and Mesenchymal Stem Cells

Tümör ve Mezenkimal Kök hücreler arasında ekstrasellüler vezikül aracılı iletişim tanımlamak için osteosarkom preklinik fare modeli

Within the tumor microenvironment, resident or recruited mesenchymal stem cells (MSCs) contribute to malignant progression in multiple cancer types. Under ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Geri dönüşü olmayan Elektroporasyon etkilerini incelemek için bir Syngeneic pankreas kanseri fare modeli

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Orthotopic Homogref (Syngeneic) fare birincil KPC pankreas duktal adenokarsinom, akış sitometresi tarafından Immunophenotyping

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Orthotopic nakli PD-L1 ifade çalışmaya Syngeneic akciğer adenokarsinom hücre

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis (Video) | JoVE

Insan Üromotorial Hücre Karsinomu ve kolorektal kanser tümörü büyüme ve spontan Metasrik için hasta türevi Ortootopik xenograft modelleri

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...