Det övergripande målet med denna procedur är att övervaka cerebral vasospasm efter subarachnoid blödning hos möss in vivo. Detta uppnås genom tillämpning av högfrekvent färgkodad duplex sonography under anestesi med isofluran. Bilddata behandlas för att bestämma blodflödets hastigheter i intra- och extrakraniella inre halspulsådern.
En accelererad intrakraniell blod flöde hastighet indikerar cerebral vasospasm. I denna studie utförde vi mätningar av blodflödeshastigheter av intrakraniella och extrakraniella artärer hos hondjur, C57BL/6N möss i åldern 11 till 12 veckor. Mössen utsattes för antingen SAH-induktion eller skenkirurgi som har beskrivits i detalj någon annanstans.
För att förbereda ultraljudsundersökningen slå på ultraljudsmaskinen och gå in i djur-ID.Värm värmeplattan i ultraljudssystemet till 37 grader Celsius. Se till att rektaltemperatursonden är klar att användas. Använd ett varmt vattenbad för att värma ultraljudsgelen till 37 grader Celsius.
Förbered hårborttagningskrämen, kontaktkrämen för elektroderna och ögonsalvan. Se till att givaren är ordentligt monterad på den mekaniska armen och se till att kammaren för anestesiinduktion spolas med 4%isofluran och 40% syre. Framkalla anestesi genom att sätta musen i kammaren i en minut.
Skydda ögonen med salva. Fortsätt först efter att en tillräckligt djup anestesi har uppnåtts. Behåll anestesi med 1,5% isofluran och 40% syre med hjälp av en anestesimask under hela proceduren.
I det första steget bestäms blodflödet hastigheter i intrakraniell inre halsartärer med transkraniell högfrekvent duplex sonography. Placera musen i benägen position på ultraljudssystemets värmeplatta för att bibehålla en kroppstemperatur 37 grader Celsius. Applicera ögonsalva på båda sidor.
Före den första tentamen förkorta pälsen vid occiput med en elektrisk rakapparat. Ta sedan bort återstående hår kemiskt med hårborttagningskräm. Använd en bomullspinne för att sprida och gnugga grädden i två minuter tills håret börjar falla ut.
Efter ytterligare två minuter ta bort grädden och håret med en spatel och desinficera huden med ett alkoholhaltigt hudantiseptiskt medel. Täck djurets fyra extremiteter med ledande pasta och fixa dem med tejp på EKG-elektroderna inbäddade i brädan. Placera glidmedel på en rektal temperatursond och sätt försiktigt in det för att övervaka kroppstemperaturen med hjälp av ytterligare uppvärmningslampa om det behövs.
Kontrollera om de fysiologiska parametrarna, EKG och andningssignalen visas korrekt på ultraljudssystemets skärm. Vid behov kan anestesinivån justeras för att erhålla målpulsen 4 till 500 slag per minut. Täck den med ultraljudsgel.
Använd en linjär matrisgivare och en bildhastighet över 200 bilder per sekund för att skaffa ultraljudsbilder och montera den på den mekaniska armen. Placera givaren på occiput lutad tillbaka med 30 grader. Använd B-läge och CW-Doppler-läge för att visualisera rätt intrakraniell inre halspulsåder och flytta givaren med styrenheten fram och tillbaka tills vi hittar maximalt flöde av artärerna.
För att samla in anatomisk information använd det traditionella B-läget och CW-Doppler-läget och starta förvärvet genom att klicka på inköpsknappen. För att registrera information om flödesegenskaperna hos de intrakraniella kärlen klickar du på pulsvågsdumlerknappen, placerar en provvolym i mitten av kärlet och förvärvar en cine-slinga längre än tre sekunder. Fortsätt identiskt med vänster sida.
I nästa steg bestäms blodflödets hastigheter i de extrakraniella inre halspulsådern med högfrekvent duplex sonography. Placera musen i supin position på ultraljudssystemets värmeplatta för att bibehålla en kroppstemperatur på 37 grader Celsius. Innan den första undersökningen ta bort håret på nackens framsida med en elektrisk rakapparat.
Ta sedan bort återstående hår kemiskt med hårborttagningskräm som beskrivits tidigare. Täck djurets fyra extremiteter med ledande pasta och fixa dem med tejp på EKG-elektroderna inbäddade i brädan. Placera glidmedel på en rektal temperatursond och sätt försiktigt in det för att övervaka kroppstemperaturen.
Använd ytterligare uppvärmningslampa vid behov. Kontrollera igen för korrekt visning av de fysiologiska parametrarna på skärmen. Täck nackens framsida med ultraljudsgel värmd till 37 grader Celsius.
Placera givaren parallellt med djuret och justera positionen för att få longitudinella bilder av rätt halspulsåder. Använd CW-Doppler-läge i B-läge för att visualisera rätt halspulsåder. Bilden ska innehålla rätt gemensam halspulsåder, rätt inre halspulsåder och rätt yttre halspulsåder.
För att samla in anatomisk information använd det traditionella B-läget och CW-Doppler-läget och starta förvärvet genom att klicka på inköpsknappen. För att registrera information om flödesegenskaperna hos den extrakransiga halsartären klicka på pulsvågsdopplerknappen, placera provvolymen i mitten av mitten av den gemensamma halsartären den inre halsartären och den yttre halspulsådern och förvärva en cine-slinga längre än tre sekunder. Fortsätt identiskt med vänster sida.
Avsluta anestesi och ta bort djuret från uppvärmningsplattan och lägg den i en bur, placerad i en inkubator uppvärmd till 36 grader Celsius i en timme för att förhindra hypotermi och kontrollera för fullständig återhämtning. Nästa steg är att bearbeta ultrasonography data. Använda extern arbetsstation för efterbehandling av ultraljudsdata med hög frekvens.
Exportera bilder i B-läge, CW-Doppler-läge och PW-Doppler-läge och cine-loopar till Vevo LAB-programvaran. Öppna den exporterade ultraljudsstudien. Välj ett djur och öppna PW-Doppler cine-slingan i den intrakraniella halspulsådern.
I det här protokollet registreras vanligtvis sju till åtta pulsslag i motsvarande flödeshastighetskurvor. Pausa cine-slingan och klicka på mätknappen. Välj kärlförpackningen och klicka på RICA PSV för att mäta topp systoliskt tryck på rätt intrakraniell halsartär.
Klicka nu åt vänster på toppen av en hastighetskurva och dra den raka linjen till nolllinjen. Bestäm mätningen med ett klick med höger musknapp. Välj nu RICA EDV för att mäta den diastoliska hastigheten.
Klicka åt vänster på de minimala utslagen i hastighetskurvan i slutet av diastolen. Dra linjen direkt till nolllinjen och bestäm mätningen med ett klick med höger musknapp. Välj RICA VTI för att mäta hastighetstidens integral.
Klicka åt vänster i början av en hastighetskurva och följ kurvan med en mus till slutet av den diastoliska platån. Och klicka sedan åt höger igen för att bestämma mätningen. Exportera data från de intrakraniella inre halspulsådern med hjälp av rapportknappen.
Tryck på exportera och spara data som en VSI-rapportfil. Använd samma metod för att mäta PSV, EDV och VTI av rätt extrakransiga inre halspulsåder och exportera data i enlighet därmed. Fortsätt identiskt med vänster sida och använd LICA PSV, EDV och VTI.
I fem möss och tre av vilka SAH inducerades medan två erhåller sham kirurgi blodflödet hastigheter i intrakraniell inre gatan och av den extrakraniella inre halsartären fastställdes en dag före kirurgi och en, tre och sju dagar efter kirurgi. Före kirurgi, extra och intrakraniell blod flöde hastigheter samt förhållandet mellan intra och extrakraniell blodflödet var liknande mellan SAH och sham djur. Den första dagen efter SAH induktion fanns det inga större förändringar i intra eller extrakraniell blod flöde hastigheter eller förhållandet mellan intra och extrakraniell blodflödet.
På dag tre och sju ökade intrakraniell blodflödet hastigheter i den inre halsartären markant och två av SAH djur anger cerebral vasospasm efter SAH. Eftersom de extrakraniella blod flöde hastigheterna förblev nästan oförändrade, förhållandet mellan intra och extrakraniell blod flöde hastigheter ökade också betydligt på dag sju i SAH djur som anger cerebral vasospasm. Sammanfattningsvis kan högfrekvent färgkodad transkraniell duplex sonography användas för att utföra in vivo mätningar av hastigheterna för intrakraniellt blodflöde hos möss.
I likhet med situationen hos mänskliga patienter accelererar intrakraniell blodflödeshastighet hos möss efter SAH som indikerar vasospasm. Den ultrasonografiska metoden som visas här är snabb och av liten invasivitet. Det möjliggör longitudinella studier av vasospasm i murin SAH-modeller.
