Name: dynamic imaging of chimeric antigen receptor t cells with [18f]tetrafluoroborate positron emission tomography/computed tomography
Uploaded: 2022-02-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography at JoVE.com

Dette arbejde blev delvist støttet gennem Mayo Clinic K2R pipeline (SSK), Mayo Clinic Center for Individualized Medicine (SSK) og Predolin Foundation (RS). Figur 1, 2 og 4 blev oprettet med BioRender.com.

Protokollen følger retningslinjerne fra Mayo Clinic's Institutional Review Board, Institutional Biosafety Committee og Mayo Clinic's Institutional Animal Care and Use Committee.
1. NIS+ BCMA-CAR T-celleproduktion
BEMÆRK: Denne protokol følger retningslinjerne fra Mayo Clinic's Institutional Review Board (IRB 17-008762) og Institutional Biosafety Committee (IBC Bios00000006.04).
<ol><li>Produktion af BCMA-CAR, NIS og luciferase-grønt fluorescerende p...

Dette papir beskriver en metode til inkorporering af NIS i CAR T-celler og billeddannelse af infunderede CAR T-celler in vivo gennem [18F] TFB-PET. Som bevis på konceptet blev NIS + BCMA-CAR T-celler genereret via dobbelt transduktion. Vi har for nylig rapporteret, at inkorporering af NIS i CAR T-celler ikke forringer CAR T-cellefunktioner og effektivitet in vivo og tillader CAR T-cellehandel og -udvidelse30. Da CAR T-celleterapier fortsætter med at ekspan...

Kimær antigenreceptor T (CAR T) celleterapi er en hurtigt voksende og potentielt helbredende tilgang i hæmatologiske maligniteter1,2,3,4,5,6. Ekstraordinære kliniske resultater blev rapporteret efter CD19-rettet CAR T (CART19) eller B-cellemodningsantigen (BCMA) CAR T-celleterapi2. Dette førte til, at US Food and Drug Administration (FDA) godkendte CART19-celler til aggressivt B-cellelymfom (axicabtagen ciloleucel (Axi-Cel)4, tisagenlecleucel (Tisa-Cel)3 og lisocabtagene maraleucel)7, akut lymfoblastær leukæmi (Tisa-Cel)5,8, mantelcellelymfom (brexucabtageneautoleuce)9 og follikulært lymfom (Axi-Cel)10 . Senest har FDA godkendt BCMA-rettet CAR T-celleterapi til patienter med myelomatose (MM) (idecabtagene vicleucel)11. Desuden er CAR T-celleterapi til kronisk lymfatisk leukæmi (CLL) i sen klinisk udvikling og forventes at modtage FDA-godkendelse inden for de næste tre år1.
På trods af de hidtil usete resultater af CAR T-celleterapi er dens udbredte anvendelse begrænset af 1) utilstrækkelig in vivo CAR T-celleudvidelse eller dårlig handel med tumorsteder, hvilket fører til lavere satser for varig respons12,13 og 2) udvikling af livstruende bivirkninger, herunder cytokinfrigivelsessyndrom (CRS)14,15 . Kendetegnene ved CRS omfatter ikke kun immunaktivering, hvilket resulterer i forhøjede niveauer af inflammatoriske cytokiner / kemokiner, men også massiv T-celleproliferation efter CAR T-celleinfusion15,16. Udviklingen af en valideret strategi af klinisk kvalitet til at afbilde CAR T-celler in vivo vil således gøre det muligt for 1) CAR T-cellesporing i realtid in vivo at overvåge deres handel til tumorsteder og afdække potentielle resistensmekanismer og 2) overvågning af CAR T-celleudvidelse og potentielt forudsigelse af deres toksiciteter såsom udvikling af CRS.
Kliniske træk ved mild CRS er høj feber, træthed, hovedpine, udslæt, diarré, artralgi, myalgi og utilpashed. Ved mere alvorlig CRS kan patienter udvikle takykardi/hypotension, kapillær lækage, hjertedysfunktion, nyre-/leversvigt og dissemineret intravaskulær koagulation17,18. Generelt har graden af forhøjelse af cytokiner, herunder interferon-gamma, granulocyt-makrofagkolonistimulerende faktor, interleukin (IL)-10 og IL-6, vist sig at korrelere med sværhedsgraden af kliniske symptomer17,19. Den omfattende anvendelse af "realtids" serumcytokinovervågning til forudsigelse af CRS er imidlertid vanskelig på grund af de høje omkostninger og den begrænsede tilgængelighed. For at udnytte de gavnlige egenskaber ved CAR T-celleterapi kan ikke-invasiv billeddannelse af adoptive T-celler potentielt bruges til at forudsige effektiviteten, toksiciteterne og tilbagefaldet efter CAR T-celleinfusion.
Flere forskere har udviklet strategier til at anvende radionuklidbaseret billeddannelse med positronemissionstomografi (PET) eller enkeltfotonemissionscomputertomografi (SPECT), som giver høj opløsning og høj følsomhed20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30 for in vivo visualisering og overvågning af CAR T cellehandel. Blandt disse radionuklidbaserede billeddannelsesstrategier er natriumiodidsymporteren (NIS) udviklet som en følsom modalitet over for billedceller og vira ved hjælp af PET-scanninger31,32. NIS+CAR T-cellebilleddannelse med [18F]TFB-PET er en følsom, effektiv og praktisk teknologi til vurdering og diagnosticering af CAR T-celleudvidelse, -handel og -toksicitet30. Denne protokol beskriver 1) udviklingen af NIS + CAR T-celler gennem dobbelt transduktion med høj effektivitet og 2) en metode til billeddannelse af NIS + CAR T-celler med [18F] TFB-PET-scanning. BCMA-CAR T-celler til MM bruges som en proof-of-concept-model til at beskrive NIS som reporter for CAR T-cellebilleddannelse. Disse metoder kan dog anvendes på enhver anden CAR T-celleterapi.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>22 Gauge needle</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8881250206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28 gauge insulin syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human (ETNL) NIS</td>
			<td>Imanis</td>
			<td>REA009</td>
			<td>ETNL antibody binds the cytosolic C-terminus of NIS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human BCMA, clone 19F2, PE-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>357507</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD45, clone HI30, BV421</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304032</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD45, clone 30-F11, APC-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>103116</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit IgG</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>F0110</td>
			<td>Secondary antibody for NIS staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCMA-CAR construct, second generation</td>
			<td>IDT, Coralville, IA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td>
			<td>BD</td>
			<td>554714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 Monoclonal Antibody (OKT3), PE, eBioscience</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12-0037-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CTS (Cell Therapy Systems) Dynabeads CD3/CD28</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>40203D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CytoFLEX System&#160; B5-R3-V5</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>C04652</td>
			<td>flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Syringes with Luer-Lok Tips</td>
			<td>BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin, Potassium Salt</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS (Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynabeads MPC-S (Magnetic Particle Concentrator)</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>A13346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Easy 50 EasySep Magnet</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>18002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep Human T Cell Isolation Kit</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>17951</td>
			<td>negative selection magnetic beads; 17951RF includes tips and buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>F8067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 647</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inveon Multiple Modality PET/CT scanner</td>
			<td>Siemens Medical Solutions USA, Inc.</td>
			<td>10506989 VFT 000 03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane liquid</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>66794-017-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina S5 Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>CLS148588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS&#174; Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>&#160;124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 Transfection Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L3000075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit, for 405 nm excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L34966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>07851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.22 uM, sterile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>450-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.45 uM, sterile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>450-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-Prkdcscid&#160;Il2rgtm1Wjl/SzJ</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>05557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPM-2</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>CRL-3273</td>
			<td>multiple myeloma cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBMN(CMV-copGFP-Luc2-Puro)</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>80389</td>
			<td>lentiviral vector encoding luciferase-GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Glutamine (100x), Liquid</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10378-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMOD software</td>
			<td>PMOD</td>
			<td>PBAS and P3D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pooled Human AB Serum Plasma Derived</td>
			<td>Innovative Research</td>
			<td>IPLA-SERAB-H-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin Dihydrochloride</td>
			<td>MP Biomedicals, Inc.</td>
			<td>0210055210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RoboSep-S</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>21000</td>
			<td>Fully Automated Cell Separator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI (Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21870-076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SepMate-50 (IVD)</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>85450</td>
			<td>density gradient separation tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide, 5% (w/v)</td>
			<td>Ricca Chemical</td>
			<td>7144.8-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T175 flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terrell (isoflurane, USP)</td>
			<td>Piramal Critical Care Inc</td>
			<td>66794-019-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol Alcohol Prep</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-VIVO 15 Serum-free Hematopoietic Cell Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>04-418Q</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dynamic imaging of chimeric antigen receptor t cells with [18f]tetrafluoroborate positron emission tomography/computed tomography

T-celler, der er genetisk manipuleret til at udtrykke kimære antigenreceptorer (CAR), har vist hidtil usete resultater i pivotale kliniske forsøg for patienter med B-cellemaligniteter eller myelomatose (MM). Imidlertid begrænser mange hindringer effektiviteten og forbyder den udbredte anvendelse af CAR T-celleterapier på grund af dårlig handel og infiltration i tumorsteder samt manglende vedholdenhed in vivo. Desuden er livstruende toksiciteter, såsom cytokinfrigivelsessyndrom eller neurotoksicitet, store bekymringer. Effektiv og følsom billeddannelse og sporing af CAR T-celler muliggør evaluering af T-cellehandel, ekspansion og in vivo-karakterisering og muliggør udvikling af strategier til at overvinde de nuværende begrænsninger ved CAR T-celleterapi. Dette papir beskriver metoden til inkorporering af natriumiodidsymporteren (NIS) i CAR T-celler og til CAR T-cellebilleddannelse ved hjælp af [18F] tetrafluorborat-positronemissionstomografi ([18F] TFB-PET) i prækliniske modeller. De metoder, der er beskrevet i denne protokol, kan anvendes på andre CAR-konstruktioner og målgener ud over dem, der anvendes til denne undersøgelse.

Figur 1 repræsenterer trinnene til generering af NIS + BCMA-CAR T-celler. På dag 0 skal du isolere PBMC'er og derefter isolere T-celler ved negativ selektion. Derefter stimuleres T-celler med anti-CD3 / CD28 perler. På dag 1 transduceres T-celler med både NIS og BCMA-CAR lentivirus. På dag 3, 4 og 5 tælles T-celler og fodres med medier for at justere koncentrationen til at være 1,0 × 106 / ml. For NIS-transducerede T-celler tilsættes 1 μg/ml puromycin for at v...

Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography at JoVE.com

Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

Denne protokol beskriver metoden til ikke-invasiv sporing af T-celler, der er genetisk manipuleret til at udtrykke kimære antigenreceptorer in vivo med en klinisk tilgængelig platform.

Dynamisk billeddannelse af kimære antigenreceptor-T-celler med [18F]tetrafluorborat positronemissionstomografi/computertomografi

T cells genetically engineered to express chimeric antigen receptors (CAR) have shown unprecedented results in pivotal clinical trials for patients with B ...

Der er ingen klinisk valideret kimær antigenreceptor T-cellebilleddannelsesplatform til dato. Natrium-iodid-symporteren repræsenterer en følsom og klinisk relevant indberetter til billede af bil-T-celler ved PET-scanning. TLP PET-billeddannelse af NIS CAR T-celle giver efterforskere mulighed for ikke-invasivt at spore infunderede celler in vivo og har potentiale til at forudsige effektivitet og toksicitet af CAR T-celleterapi.Effektiv billeddannelse af CAR T-celler muliggør evaluering af T-cellehandel og -udvidelse og gør det muligt at udvikle strategier til at overvinde begrænsningerne. Metoden beskrevet i denne protokol er enkel og kan anvendes på andre CAR-konstruktioner ud over dem, der er vist i denne undersøgelse. Start med isolering af mononukleære celler eller PBMC'er i perifert blod fra blodprøven ved hjælp af standarddensitetsgradientteknikken.For at gøre dette skal du forsigtigt tilføje 15 ml densitetsgradientmedium til et 50 ml densitetsgradientseparationsrør for at undgå bobledannelse. For at undgå cellefangst fortyndes blodprøven med PBS indeholdende 2% FBS i et et-til-en volumenforhold og overfører forsigtigt det fortyndede blod oven på densitetsgradientmediet uden at bryde grænsefladen mellem de to. Derefter centrifugeres separationsrøret ved 1.200 gange G i 10 minutter ved stuetemperatur.Saml supernatanten i et frisk 50 ml konisk rør, vask cellerne med PBS indeholdende 2% FBS ved at fylde røret op til 50 ml mærke og centrifugere røret ved 300 gange G i otte minutter ved stuetemperatur. Aspirer supernatanten, før du genbruger de pelleterede celler i 50 ml PBS indeholdende 2% FBS. Resuspend de pelleterede PBMC'er i PBS indeholdende 2% FBS til en koncentration på 50 gange 10 til de sjette celler pr. Milliliter.Gentag vasken i et frisk 50 ml rør. Tæl antallet af celler, og centrifuger derefter cellesuspensionen ved 300 gange G i otte minutter ved stuetemperatur. Til T-celleisolering overføres isolerede PBMC'er til et 14 ml polystyren rundt bundrør.Brug derefter et magnetisk perlesæt med negativ selektion til at udføre T-celleisolering ved at placere PBMC'erne i negativ selektionsantistofcocktail i en fuldautomatisk celleseparator. Efter T-celleisolering tælles cellerne og cellerne dyrkes i T-celleekspansionsmedium eller TCM i en koncentration på to gange 10 til de sjette celler pr. Milliliter. Bland derefter hætteglasset, der indeholder anti-CD3 / CD28-perlerne, ved at hvirvle og pipette det krævede volumen perler ud i et sterilt 1,5 ml mikrocentrifugerør.Til vask skal du suspendere perlerne i en milliliter TCM, inden du placerer røret på en magnet i et minut og aspirerer supernatanten. Når du har fjernet røret fra magneten, skal du genbruge de vaskede perler i en milliliter TCM og gentage vasken to gange. Resuspend de vaskede perler i en milliliter TCM for at overføre dem til T-cellekulturen, fortynd derefter T-celleperlesuspensionen med TCM til en koncentration på 1,0 gange 10 til de sjette celler pr. Milliliter, før den overføres til en vævskultur behandlet seks-brønds plade.Inkuber brøndpladen ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid. For at komme videre med transduktion af lentivirus skal du optø de frosne lentivirus ved belægning af kimære antigenreceptorer eller natriumiodidsymporter ved fire grader Celsius. Efter 24 til 48 timers T-cellestimulering blandes T-cellerne for at bryde klyngerne op og tilsættes det frisk optøede lentivirus til cellerne ved en mangfoldighed af infektion på fem.Inkuber de transducerede T-celler ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid. På dag tre, fire og fem af inkubation tæller de transducerede T-celler og justerer cellekoncentrationen til 1,0 gange 10 til de sjette celler pr. Milliliter ved at tilsætte frisk forvarmet TCM. For NIS-transducerede T-celler, der bærer puromycinresistensgenet, behandles cellerne med et mikrogram pr. Milliliter puromycindihydrochlorid på dag tre, fire og fem.På dag seks skal du bryde T-celleklyngerne op og fjerne anti-CD3 / CD28-perlerne fra de transducerede T-celler ved at placere pladen på en magnet i et minut. Placer derefter de indsamlede celler tilbage i kulturen i en koncentration på 1,0 gange 10 til de sjette celler pr. Milliliter. Vask en alikvote af T-cellekulturen indeholdende 50.000 celler med flowbuffer og resuspend cellerne med 50 mikroliter flowbuffer.Til påvisning af CAR-ekspression skal T-cellerne plettes med en mikroliter gedeanti-mus-antistof. For at udelukke de døde celler skal du tilføje 0,3 mikroliter LIVE/DEAD Aqua. Inkuber de farvede celler i mørket ved stuetemperatur.Efter 15 minutter vaskes cellerne med 150 mikroliter flowbuffer ved 650 gange G i tre minutter ved fire grader Celsius. For at fiksere og permeabilisere de farvede celler skal du inkubere cellerne med 100 mikroliter fikseringsmedium i 20 minutter ved fire grader Celsius. Vask derefter cellerne to gange med 100 mikroliter af en buffer indeholdende et cellepermeabiliserende middel, såsom saponin og centrifuge.Efter vask skal du genanvende de permeabiliserede celler i 50 mikroliter af en permeabiliserende buffer. Derefter tilsættes 0,3 nanogram anti-humant ETNL NIS-antistof og inkuberes ved fire grader Celsius. Efter en times inkubation vaskes cellerne ved at tilsætte 150 mikroliter flowbuffer og centrifuge som påvist.Derefter inkuberes cellerne med 50 mikroliter flowbuffer indeholdende 2,5 mikroliter anti-kanin sekundært antistof i 30 minutter ved fire grader Celsius. Efter vask af T-cellerne som påvist, resuspend cellerne i 200 mikroliter flowbuffer for at udføre flowcytometri. Bestem derefter cellernes transduktionseffektivitet.På dag otte tæller og spinder T-cellerne ned ved 300 gange G i otte minutter ved fire grader Celsius, før du genopliver cellepillen med et frysemedium i en koncentration på 10 gange 10 til de sjette celler pr. Milliliter. Overfør en milliliter af cellesuspensionen til hvert mærket kryohætteglas til opbevaring ved minus 80 grader Celsius fryser i 48 timer. Efter 48 timer overføres T-cellerne til flydende nitrogen.Forbered musene injiceret med NIS-positive BCMA CAR T-celler til PET/CT-billeddannelsen ved at veje musene og fjerne metaløremærker. Derefter injiceres 9,25 megabecquerel frisklavet F18 tetrafluorborat i musen intravenøst via haleveninjektion. Efter 45 minutters optagelsesperiode skal du fortsætte med at erhverve statiske PET-billeder af en bedømret mus i 15 minutter efterfulgt af CT-billedoptagelse i fem minutter med 360 graders rotation og 180 fremskrivninger.I denne repræsentative analyse genererede co-transduktion af to vira til T-celler NIS-positive BCMA CAR T-celler, hvor over 90% af cellerne var NIS-positive. Analysen af T-cellevækstkinetik fra nul til otte dage afslørede, at inkorporering af BCMA CAR og NIS ikke signifikant påvirkede T-celleudvidelse sammenlignet med de utransducerede celler. I den flowcytometriske analyse af OPM-2 repræsenterede celler transduceret med lentivirus GFP-ekspressionen ved behandling med puromycin.De mus, der fik BCMA-positive luciferasepositive OPM-2-celler, blev udsat for bioluminescensbilleddannelse for at bekræfte engraftmentet af OPM-2-celler. PET-billeddannelse af den F18-tetrafluorboratadministrerede mus afslørede NIS-positiv BCMA CAR T-cellefordeling i de forskellige organer og knoglemarv. Derudover viste knoglemarvscellerne høstet fra musen engraftment af OPM-2-celler og levering af de NIS-positive BCMA CAR T-celler til knoglemarven.For højkvalitets billeddannelse af infunderede CAR T-celler er det vigtigt at følge trinnene i NIS CAR T-cellegenereringsprotokollen og bekræfte tilstedeværelsen af dobbelte NIS- og CAR-positive fraktioner.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

Live-Imaging til at studere på mikrotubulus Dynamisk Ustabilitet i taxan-resistent brystkræft

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Utilizing 18F-FDG PET/CT Imaging and Quantitative Histology to Measure Dynamic Changes in the Glucose Metabolism in Mouse Models of Lung Cancer

Utilizing 18F-FDG PET/CT Imaging and Quantitative Histology to Measure Dynamic Changes in the Glucose Metabolism in Mouse Models of Lung Cancer

Udnytte 18F-FDG PET/CT billeddannelse og kvantitative histologi at måle dynamiske ændringer i glukose stofskifte i musemodeller af lungekræft

A hallmark of advanced tumors is a switch to aerobic glycolysis that is readily measured by [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose positron emission tomography ...

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescens molekylære tomografi for In Vivo billeddannelse af glioblastom Xenografts

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

Multimodal Bioluminescent and Positronic-emission Tomography/Computational Tomography Imaging of Multiple Myeloma Bone Marrow Xenografts in NOG Mice

Multimodal en bioluminescerende og Positron-emissions-tomografi/edb tomografi billeddannelse af myelomatose knoglemarv Xenografts i NOG mus

Multiple myeloma (MM) tumors engraft in the bone marrow (BM) and their survival and progression are dependent upon complex molecular and cellular ...

In Vitro Tumor Cell Rechallenge For Predictive Evaluation of Chimeric Antigen Receptor T Cell Antitumor Function

I Vitro Tumor celle Rechallenge For intelligent evaluering af kimære Antigen Receptor T-celle Antitumor funktion

The field of chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy is rapidly advancing with improvements in CAR design, gene-engineering approaches and ...

Manufacturing Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cells for Adoptive Immunotherapy

Manufacturing Chimeric Antigen Receptor CAR T Cells for Adoptive Immunotherapy

Fremstilling af Chimeric antigen receptor (bil) T-celler til adoptiv immunterapi

Adoptive immunotherapy holds promise for the treatment of cancer and infectious disease. We describe a simple approach to transduce primary human T cells ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cells for the Generation of Tumor Antigen-specific T Cells

Anvendelse af menneskeskabte pluripotente stamceller til generering af tumor antigen-specifikke T-celler

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of ...

Management of Respiratory Motion Artefacts in 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography using an Amplitude-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Management of Respiratory Motion Artefacts in 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography using an Amplitude-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Håndtering af respiratoriske bevægelsesgenstande i 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomografi ved hjælp af en Amplitude-baseret optimal respiratorisk gating algoritme

Positron emission tomography (PET) combined with X-ray computed tomography (CT) is an important molecular imaging platform that is required for accurate ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Patologisk analyse af lungemetasase Efter Lateral Hale-Vene Injektion af tumorceller

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Positron Emission Tomography-based Dose Painting Radiation Therapy in a Glioblastoma Rat Model using the Small Animal Radiation Research Platform

Positronemissionstomografibaseret dosismalingsstrålebehandling i en glioblastomrottemodel ved hjælp af Small Animal Radiation Research Platform

A rat glioblastoma model to mimic chemo-radiation treatment of human glioblastoma in the clinic was previously established. Similar to the clinical ...