Name: dynamic imaging of chimeric antigen receptor t cells with [18f]tetrafluoroborate positron emission tomography/computed tomography
Uploaded: 2022-02-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography at JoVE.com

Dit werk werd gedeeltelijk ondersteund door de Mayo Clinic K2R-pijplijn (SSK), het Mayo Clinic Center for Individualized Medicine (SSK) en de Predolin Foundation (RS). Figuren 1, 2 en 4 zijn gemaakt met BioRender.com.

Het protocol volgt de richtlijnen van de Institutional Review Board van Mayo Clinic, het Institutional Biosafety Committee en het Institutional Animal Care and Use Committee van Mayo Clinic.
1. NIS+ BCMA-CAR T-cel productie
OPMERKING: Dit protocol volgt de richtlijnen van de Institutional Review Board van de Mayo Clinic (IRB 17-008762) en de Institutional Biosafety Committee (IBC Bios00000006.04).
<ol><li>Productie van BCMA-CAR, NIS en luciferase-groen ...

Dit artikel beschrijft een methodologie voor het opnemen van NIS in CAR T-cellen en beeldvorming geïnfundeerde CAR T-cellen in vivo via [18F] TFB-PET. Als proof of concept werden NIS+BCMA-CAR T-cellen gegenereerd via dubbele transductie. We hebben onlangs gemeld dat het opnemen van NIS in CAR T-cellen de functies en werkzaamheid van DE CAR T-cel in vivo niet schaadt en CAR T-celhandel en -expansie mogelijk maakt30. Naarmate CAR T-celtherapieën zich blijven...

Chimere antigeenreceptor T (CAR T) celtherapie is een snel opkomende en potentieel curatieve benadering bij hematologische maligniteiten1,2,3,4,5,6. Buitengewone klinische resultaten werden gerapporteerd na CD19-gerichte CAR T (CART19) of B-celrijpingsantigeen (BCMA) CAR T-celtherapie2. Dit leidde tot de goedkeuring door de Amerikaanse Food and Drug Administration (FDA) van CART19-cellen voor agressief B-cellymfoom (axicabtagene ciloleucel (Axi-Cel)4, tisagenlecleucel (Tisa-Cel)3 en lisocabtagene maraleucel)7, acute lymfoblastische leukemie (Tisa-Cel)5,8, mantelcellymfoom (brexucabtagene autoleuce)9 en folliculair lymfoom (Axi-Cel)10 . Onlangs keurde de FDA BCMA-gerichte CAR T-celtherapie goed bij patiënten met multipel myeloom (MM) (idecabtagene vicleucel)11. Bovendien bevindt CAR T-celtherapie voor chronische lymfatische leukemie (CLL) zich in een laat stadium van klinische ontwikkeling en zal naar verwachting binnen de komende drie jaar goedkeuring van de FDA krijgen1.
Ondanks de ongekende resultaten van CAR T-celtherapie, wordt het wijdverbreide gebruik ervan beperkt door 1) onvoldoende in vivo CAR T-celuitbreiding of slechte handel naar tumorlocaties, wat leidt tot lagere percentages van duurzame respons12,13 en 2) de ontwikkeling van levensbedreigende bijwerkingen, waaronder cytokine release syndrome (CRS)14,15 . De kenmerken van CRS omvatten niet alleen immuunactivatie die resulteert in verhoogde niveaus van inflammatoire cytokines / chemokines, maar ook massale T-celproliferatie na CAR T-celinfusie15,16. De ontwikkeling van een gevalideerde strategie van klinische kwaliteit om CAR T-cellen in vivo in beeld te brengen, zou dus 1) CAR T-celtracking in realtime in vivo mogelijk maken om hun handel naar tumorlocaties te volgen en potentiële mechanismen van resistentie te ontdekken, en 2) monitoring van CAR T-celuitbreiding en mogelijk hun toxiciteiten voorspellen, zoals de ontwikkeling van CRS.
Klinische kenmerken van mild CRS zijn hoge koorts, vermoeidheid, hoofdpijn, huiduitslag, diarree, artralgie, myalgie en malaise. Bij ernstiger CRS kunnen patiënten tachycardie/hypotensie, capillair lek, hartdisfunctie, nier-/leverfalen en gedissemineerde intravasculaire stolling ontwikkelen17,18. Over het algemeen is aangetoond dat de mate van verhoging van cytokines, waaronder interferon-gamma, granulocyt-macrofaag koloniestimulerende factor, interleukine (IL)-10 en IL-6, correleert met de ernst van klinische symptomen17,19. De uitgebreide toepassing van "real-time" serumcytokinemonitoring om CRS te voorspellen is echter moeilijk vanwege de hoge kosten en beperkte beschikbaarheid. Om de gunstige eigenschappen van CAR T-celtherapie te benutten, kan niet-invasieve beeldvorming van adoptieve T-cellen mogelijk worden gebruikt om de werkzaamheid, toxiciteit en terugval na CAR T-celinfusie te voorspellen.
Verschillende onderzoekers hebben strategieën ontwikkeld om op radionuclide gebaseerde beeldvorming te gebruiken met positronemissietomografie (PET) of single-photon emission computed tomography (SPECT), die een hoge resolutie en hoge gevoeligheid biedt20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30 voor de in vivo visualisatie en monitoring van CAR T-celhandel. Onder die op radionucliden gebaseerde beeldvormingsstrategieën is de natriumjodidesymporter (NIS) ontwikkeld als een gevoelige modaliteit voor beeldcellen en virussen met behulp van PET-scans31,32. NIS+CAR T-celbeeldvorming met [18F]TFB-PET is een gevoelige, efficiënte en handige technologie om CAR T-celuitbreiding, -handel en -toxiciteit te beoordelen en te diagnosticeren30. Dit protocol beschrijft 1) de ontwikkeling van NIS+CAR T-cellen door middel van dubbele transductie met hoge werkzaamheid en 2) een methodologie voor het in beeld brengen van NIS+CAR T-cellen met [18F]TFB-PET-scan. BCMA-CAR T-cellen voor MM worden gebruikt als een proof-of-concept model om NIS te beschrijven als een reporter voor CAR T-celbeeldvorming. Deze methoden kunnen echter worden toegepast op elke andere CAR T-celtherapie.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>22 Gauge needle</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8881250206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28 gauge insulin syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human (ETNL) NIS</td>
			<td>Imanis</td>
			<td>REA009</td>
			<td>ETNL antibody binds the cytosolic C-terminus of NIS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human BCMA, clone 19F2, PE-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>357507</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD45, clone HI30, BV421</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304032</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD45, clone 30-F11, APC-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>103116</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit IgG</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>F0110</td>
			<td>Secondary antibody for NIS staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCMA-CAR construct, second generation</td>
			<td>IDT, Coralville, IA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td>
			<td>BD</td>
			<td>554714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 Monoclonal Antibody (OKT3), PE, eBioscience</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12-0037-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CTS (Cell Therapy Systems) Dynabeads CD3/CD28</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>40203D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CytoFLEX System&#160; B5-R3-V5</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>C04652</td>
			<td>flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Syringes with Luer-Lok Tips</td>
			<td>BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin, Potassium Salt</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS (Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynabeads MPC-S (Magnetic Particle Concentrator)</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>A13346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Easy 50 EasySep Magnet</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>18002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep Human T Cell Isolation Kit</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>17951</td>
			<td>negative selection magnetic beads; 17951RF includes tips and buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>F8067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 647</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inveon Multiple Modality PET/CT scanner</td>
			<td>Siemens Medical Solutions USA, Inc.</td>
			<td>10506989 VFT 000 03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane liquid</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>66794-017-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina S5 Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>CLS148588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS&#174; Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>&#160;124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 Transfection Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L3000075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit, for 405 nm excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L34966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>07851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.22 uM, sterile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>450-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.45 uM, sterile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>450-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-Prkdcscid&#160;Il2rgtm1Wjl/SzJ</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>05557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPM-2</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>CRL-3273</td>
			<td>multiple myeloma cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBMN(CMV-copGFP-Luc2-Puro)</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>80389</td>
			<td>lentiviral vector encoding luciferase-GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Glutamine (100x), Liquid</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10378-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMOD software</td>
			<td>PMOD</td>
			<td>PBAS and P3D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pooled Human AB Serum Plasma Derived</td>
			<td>Innovative Research</td>
			<td>IPLA-SERAB-H-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin Dihydrochloride</td>
			<td>MP Biomedicals, Inc.</td>
			<td>0210055210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RoboSep-S</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>21000</td>
			<td>Fully Automated Cell Separator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI (Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21870-076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SepMate-50 (IVD)</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>85450</td>
			<td>density gradient separation tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide, 5% (w/v)</td>
			<td>Ricca Chemical</td>
			<td>7144.8-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T175 flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terrell (isoflurane, USP)</td>
			<td>Piramal Critical Care Inc</td>
			<td>66794-019-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol Alcohol Prep</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-VIVO 15 Serum-free Hematopoietic Cell Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>04-418Q</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dynamic imaging of chimeric antigen receptor t cells with [18f]tetrafluoroborate positron emission tomography/computed tomography

T-cellen die genetisch gemanipuleerd zijn om chimere antigeenreceptoren (CAR) tot expressie te brengen, hebben ongekende resultaten laten zien in cruciale klinische onderzoeken voor patiënten met B-cel maligniteiten of multipel myeloom (MM). Talrijke obstakels beperken echter de werkzaamheid en verbieden het wijdverbreide gebruik van CAR T-celtherapieën als gevolg van slechte handel en infiltratie in tumorlocaties en gebrek aan persistentie in vivo. Bovendien zijn levensbedreigende toxiciteiten, zoals cytokine release syndrome of neurotoxiciteit, grote zorgen. Efficiënte en gevoelige beeldvorming en tracking van CAR T-cellen maakt de evaluatie van T-celhandel, uitbreiding en in vivo karakterisering mogelijk en maakt de ontwikkeling van strategieën mogelijk om de huidige beperkingen van CAR T-celtherapie te overwinnen. Dit artikel beschrijft de methodologie voor het opnemen van de natriumjodidesymporter (NIS) in CAR T-cellen en voor CAR T-celbeeldvorming met behulp van [18F]tetrafluoroboraat-positronemissietomografie ([18F]TFB-PET) in preklinische modellen. De methoden die in dit protocol worden beschreven, kunnen worden toegepast op andere CAR-constructies en doelgenen naast de methoden die voor deze studie worden gebruikt.

Figuur 1 geeft de stappen weer voor het genereren van NIS+BCMA-CAR T-cellen. Isoleer pbmc's op dag 0 en isoleer vervolgens T-cellen door negatieve selectie. Stimuleer vervolgens T-cellen met anti-CD3/CD28-kralen. Op dag 1 transduceren T-cellen met zowel NIS- als BCMA-CAR-lentivirussen. Tel op dag 3, 4 en 5 T-cellen en voer met media om de concentratie aan te passen op 1,0 × 106 / ml. Voeg voor NIS-getransduceerde T-cellen 1 μg/ml puromycine toe om NIS+ -cel...

Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography at JoVE.com

Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

Dit protocol beschrijft de methodologie voor het niet-invasief volgen van T-cellen die genetisch gemanipuleerd zijn om chimere antigeenreceptoren in vivo tot expressie te brengen met een klinisch beschikbaar platform.

Dynamische beeldvorming van chimere antigeenreceptor T-cellen met [18F]Tetrafluoroboraat positronemissietomografie/computertomografie

T cells genetically engineered to express chimeric antigen receptors (CAR) have shown unprecedented results in pivotal clinical trials for patients with B ...

Er is tot op heden geen klinisch gevalideerd chimere antigeenreceptor T-cel beeldvormingsplatform. De natriumjodidesymporter vertegenwoordigt een gevoelige en klinisch relevante verslaggever om Car T-cellen in beeld te brengen door PET-scan. TLP PET-beeldvorming van NIS CAR T-cel stelt onderzoekers in staat om niet-invasief geïnfundeerde cellen in vivo te volgen en heeft een potentieel om de werkzaamheid en toxiciteit van CAR T-celtherapie te voorspellen.Efficiënte beeldvorming van CAR T-cellen maakt de evaluatie van T-celhandel en -uitbreiding mogelijk en maakt de ontwikkeling van strategieën mogelijk om de beperkingen te overwinnen. De methode die in dit protocol wordt beschreven, is eenvoudig en kan worden toegepast op andere CAR-constructies dan die welke in deze studie worden getoond. Begin met de isolatie van perifere mononucleaire bloedcellen of PBMC's uit het bloedmonster met behulp van de standaard dichtheidsgradiënttechniek.Voeg hiervoor voorzichtig 15 milliliter dichtheidsgradiëntmedium toe aan een scheidingsbuis van 50 milliliter dichtheidsgradiënt om bubbelvorming te voorkomen. Om celvangst te voorkomen, verdunt u het bloedmonster met PBS met 2% FBS bij een één-op-één volumeverhouding en brengt u het verdunde bloed voorzichtig over op het medium met dichtheidsgradiënt zonder het raakvlak tussen de twee te verbreken. Centrifugeer vervolgens de scheidingsbuis op 1, 200 maal G gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur.Verzamel het supernatant in een verse conische buis van 50 milliliter, was de cellen met PBS met 2% FBS door de buis tot 50 milliliter te vullen en de buis gedurende acht minuten bij kamertemperatuur op 300 maal G te centrifugeren. Zuig het supernatant op voordat u de gepelletiseerde cellen resuspendeert in 50 milliliter PBS met 2% FBS. Resuspend de gepelleteerde PBMC's in PBS met 2%FBS tot een concentratie van 50 maal 10 tot de zesde cel per milliliter.Herhaal de was in een verse tube van 50 milliliter. Tel het aantal cellen en centrifugeer de celsuspensie vervolgens gedurende acht minuten bij kamertemperatuur op 300 maal G. Breng voor T-celisolatie geïsoleerde PBMC's over naar een ronde onderbuis van 14 milliliter polystyreen.Gebruik vervolgens een negatieve selectie magnetische kralenkit om T-celisolatie uit te voeren door de PBMC's in negatieve selectie antilichaamcocktail in een volledig geautomatiseerde celscheider te plaatsen. Tel na T-celisolatie de cellen en kweek de cellen in T-cel expansiemedium of TCM in een concentratie van twee keer 10 tot de zesde cel per milliliter. Meng vervolgens de injectieflacon met de anti-CD3/CD28-kralen door te wervelen en pipetteer het vereiste volume kralen in een steriele microcentrifugebuis van 1,5 milliliter.Voor het wassen, resuspend de kralen in een milliliter TCM voordat u de buis gedurende één minuut op een magneet plaatst en het supernatant opzweept. Nadat u de buis uit de magneet hebt verwijderd, resuspendeert u de gewassen kralen in één milliliter TCM en herhaalt u de was twee keer. Resuspend de gewassen kralen in één milliliter TCM om ze over te brengen naar de T-cellencultuur, verdun vervolgens de T-celkraalsuspensie met TCM tot een concentratie van 1,0 maal 10 tot de zesde cel per milliliter voordat u deze overbrengt naar een weefselkweek behandelde zes-well plaat.Incubeer de putplaat bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide. Om vooruitgang te boeken met de transductie van lentivirussen, ontdooit u de bevroren lentivirussen in coating chimere antigeenreceptoren of natriumjodidesymporter bij vier graden Celsius. Na 24 tot 48 uur T-celstimulatie mengt u de T-cellen om de clusters te breken en voegt u het vers ontdooide lentivirus toe aan de cellen bij een veelvoud aan infecties van vijf.Incubeer de getransduceerde T-cellen bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide. Tel op dag drie, vier en vijf van incubatie de getransduceerde T-cellen en pas de celconcentratie aan tot 1,0 maal 10 tot de zesde cel per milliliter door verse voorverwarmde TCM toe te voegen. Voor NIS-getransduceerde T-cellen die het puromycineresistentiegen dragen, behandel de cellen met één microgram per milliliter puromycinedihydrochloride op dag drie, vier en vijf.Breek op dag zes de T-celclusters op en verwijder de anti-CD3/CD28-kralen uit de getransduceerde T-cellen door de plaat gedurende één minuut op een magneet te plaatsen. Plaats vervolgens de verzamelde cellen terug in de kweek in een concentratie van 1,0 maal 10 tot de zesde cel per milliliter. Was een aliquot van de T-celcultuur met 50.000 cellen met flowbuffer en resuspend de cellen met 50 microliter flowbuffer.Voor het detecteren van CAR-expressie, kleur de T-cellen met één microliter geitenantilichaam tegen muizen. Om de dode cellen uit te sluiten, voegt u 0,3 microliter LIVE/DEAD Aqua toe. Incubeer de gekleurde cellen in het donker bij kamertemperatuur.Was de cellen na 15 minuten met 150 microliter flowbuffer op 650 maal G gedurende drie minuten bij vier graden Celsius. Om de gekleurde cellen te fixeren en te permeabiliseren, incubeer de cellen met 100 microliter fixatiemedium gedurende 20 minuten bij vier graden Celsius. Was de cellen vervolgens tweemaal met 100 microliter van een buffer met daarin een celpermeabilisatiemiddel zoals saponine en centrifuge.Na het wassen resuspend de gepermeabiliseerde cellen in 50 microliter van een permeabiliserende buffer. Voeg vervolgens 0,3 nanogram anti-humaan ETNL NIS-antilichaam toe en incubeer bij vier graden Celsius. Was de cellen na een uur incubatie door 150 microliter flowbuffer en centrifuge toe te voegen, zoals aangetoond.Incubeer vervolgens de cellen met 50 microliter flowbuffer met 2,5 microliter anti-konijn secundair antilichaam gedurende 30 minuten bij vier graden Celsius. Na het wassen van de T-cellen zoals aangetoond, resuspend de cellen in 200 microliter flowbuffer om flowcytometrie uit te voeren. Bepaal vervolgens de transductie-efficiëntie van de cellen.Tel en draai op dag acht de T-cellen gedurende acht minuten bij vier graden Celsius op 300 maal G voordat de celkorrel opnieuw wordt opgeschort met een vriesmedium in een concentratie van 10 keer 10 tot de zesde cel per milliliter. Breng één milliliter van de celsuspensie over naar elke gelabelde cryoflacon om gedurende 48 uur bij een vriezer van min 80 graden Celsius te bewaren. Breng na 48 uur de T-cellen over in vloeibare stikstof.Bereid de muizen geïnjecteerd met NIS-positieve BCMA CAR T-cellen voor op de PET / CT-beeldvorming door de muizen te wegen en metalen oormerken te verwijderen. Injecteer vervolgens 9,25 megabecquerel vers bereid F18-tetrafluorboraat intraveneus in de muis via staartaderinjectie. Na 45 minuten opnameperiode, ga verder met het verkrijgen van statische PET-beelden van een verdoofde muis gedurende 15 minuten, gevolgd door CT-beeldacquisitie gedurende vijf minuten met 360 graden rotatie en 180 projecties.In deze representatieve analyse genereerde co-transductie van twee virussen in T-cellen NIS-positieve BCMA CAR T-cellen waar meer dan 90% van de cellen NIS-positief waren. De analyse van T-celgroeikinetiek van nul tot acht dagen onthulde dat de integratie van BCMA CAR en NIS geen significante invloed had op T-celexpansie in vergelijking met de niet-getransformeerde cellen. In de flowcytometrische analyse van OPM-2 vertegenwoordigden cellen getransduceerd met lentivirus de GFP-expressie na behandeling met puromycine.De muizen die BCMA-positieve luciferasepositieve OPM-2-cellen kregen, werden onderworpen aan bioluminescentiebeeldvorming om de engraftment van OPM-2-cellen te bevestigen. PET-beeldvorming van de met F18 tetrafluorboraat toegediende muis toonde NIS-positieve BCMA CAR T-celverdeling in de verschillende organen en het beenmerg. Bovendien vertoonden de beenmergcellen die uit de muis werden geoogst de engraftment van OPM-2-cellen en de afgifte van de NIS-positieve BCMA CAR T-cellen aan het beenmerg.Voor hoogwaardige beeldvorming van geïnfundeerde CAR T-cellen is het belangrijk om de stappen van het NIS CAR T-cell generation protocol te volgen en de aanwezigheid van dubbele NIS- en CAR-positieve fracties te bevestigen.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

Live-Imaging om te studeren microtubuli Dynamic Instabiliteit in taxaan-resistente borstkankers

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Utilizing 18F-FDG PET/CT Imaging and Quantitative Histology to Measure Dynamic Changes in the Glucose Metabolism in Mouse Models of Lung Cancer

Utilizing 18F-FDG PET/CT Imaging and Quantitative Histology to Measure Dynamic Changes in the Glucose Metabolism in Mouse Models of Lung Cancer

Met behulp van 18F-FDG PET/CT beeldvorming en kwantitatieve histologie voor het meten van dynamische veranderingen in het Glucose metabolisme in muismodellen van longkanker

A hallmark of advanced tumors is a switch to aerobic glycolysis that is readily measured by [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose positron emission tomography ...

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescentie moleculaire tomografie voor In Vivo Imaging van Glioblastoma Xenografts

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

Multimodal Bioluminescent and Positronic-emission Tomography/Computational Tomography Imaging of Multiple Myeloma Bone Marrow Xenografts in NOG Mice

Multimodale bioluminescente en positronisch-emissie tomografie/computationele Tomography Imaging van Multiple Myeloma beenmerg Xenografts in NOG muizen

Multiple myeloma (MM) tumors engraft in the bone marrow (BM) and their survival and progression are dependent upon complex molecular and cellular ...

In Vitro Tumor Cell Rechallenge For Predictive Evaluation of Chimeric Antigen Receptor T Cell Antitumor Function

In Vitro Tumor cel Rechallenge voor voorspellende evaluatie van chimeer antigeen Receptor T cel antitumorale functie

The field of chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy is rapidly advancing with improvements in CAR design, gene-engineering approaches and ...

Manufacturing Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cells for Adoptive Immunotherapy

Manufacturing Chimeric Antigen Receptor CAR T Cells for Adoptive Immunotherapy

Productie van Chimerische antigeen receptor (auto) T cellen voor adoptie immunotherapie

Adoptive immunotherapy holds promise for the treatment of cancer and infectious disease. We describe a simple approach to transduce primary human T cells ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cells for the Generation of Tumor Antigen-specific T Cells

Met behulp van menselijke geïnduceerde pluripotente stamcellen voor het genereren van tumor-antigeen-specifieke T-cellen

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of ...

Management of Respiratory Motion Artefacts in 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography using an Amplitude-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Management of Respiratory Motion Artefacts in 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography using an Amplitude-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Beheer van Respiratory Motion Artefacten in 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography met behulp van een Amplitude-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Positron emission tomography (PET) combined with X-ray computed tomography (CT) is an important molecular imaging platform that is required for accurate ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Pathologische analyse van longmetastase na laterale staartaderinjectie van tumorcellen

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Positron Emission Tomography-based Dose Painting Radiation Therapy in a Glioblastoma Rat Model using the Small Animal Radiation Research Platform

Positronemissie Tomografie-gebaseerde dosis schilderen Bestralingstherapie in een glioblastoom rat model met behulp van het Small Animal Radiation Research Platform

A rat glioblastoma model to mimic chemo-radiation treatment of human glioblastoma in the clinic was previously established. Similar to the clinical ...