Name: dynamic imaging of chimeric antigen receptor t cells with [18f]tetrafluoroborate positron emission tomography/computed tomography
Uploaded: 2022-02-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography at JoVE.com

Dette arbeidet ble delvis støttet gjennom Mayo Clinic K2R-rørledningen (SSK), Mayo Clinic Center for Individualized Medicine (SSK) og Predolin Foundation (RS). Figur 1, 2 og 4 ble opprettet med BioRender.com.

Protokollen følger retningslinjene fra Mayo Clinics institusjonelle kontrollutvalg, Institutional Biosafety Committee og Mayo Clinics institusjonelle dyrepleie- og brukskomité.
1. NIS+ BCMA-CAR T celleproduksjon
MERK: Denne protokollen følger retningslinjene fra Mayo Clinic's Institutional Review Board (IRB 17-008762) og Institutional Biosafety Committee (IBC Bios00000006.04).
<ol><li>Produksjon av BCMA-CAR, NIS og luciferase-grønn fluorescerende pr...

Dette dokumentet beskriver en metodikk for å inkorporere NIS i CAR T-celler og avbildning infundert CAR T celler in vivo gjennom [18F]TFB-PET. Som konseptbevis ble NIS+BCMA-CAR T-celler generert via dobbel transduksjon. Vi har nylig rapportert at inkorporering av NIS i CAR T-celler ikke svekker CAR T-cellefunksjoner og effekt in vivo og tillater CAR T cellehandel og utvidelse30. Ettersom CAR T-celleterapier fortsetter å ekspandere utover dagens B-celle mal...

Chimeric antigen reseptor T (CAR T) celleterapi er en raskt fremvoksende og potensielt kurativ tilnærming i hematologiske maligniteter1,2,3,4,5,6. Ekstraordinære kliniske utfall ble rapportert etter CD19-rettet CAR T (CART19) eller B celle modning antigen (BCMA) CAR T celleterapi2. Dette førte til at US Food and Drug Administration (FDA) godkjenning av CART19-celler for aggressiv B-celle lymfom (axicabtagene ciloleucel (Axi-Cel)4, tisagenlecleucel (Tisa-Cel)3 og lisocabtagene maraleucel)7, akutt lymfoblastisk leukemi (Tisa-Cel)5,8, mantelcellelymfom (breksucabtagen autoleuce)9, og follikulært lymfom (Axi-Cel)10 . Nylig godkjente FDA BCMA-rettet CAR T-cellebehandling hos pasienter med myelomatose (MM) (idecabtagene vicleucel)11. Videre er CAR T celleterapi for kronisk lymfocytisk leukemi (CLL) i sen klinisk utvikling og forventes å motta FDA-godkjenning i løpet av de neste tre årene1.
Til tross for de enestående resultatene av CAR T celleterapi, er den utbredte bruken begrenset av 1) utilstrekkelig in vivo CAR T celleutvidelse eller dårlig menneskehandel til tumorsteder, noe som fører til lavere rater av holdbar respons12,13 og 2) utviklingen av livstruende bivirkninger, inkludert cytokinfrigjøringssyndrom (CRS) 14,15 . Kjennetegnene til CRS inkluderer ikke bare immunaktivering som resulterer i forhøyede nivåer av inflammatoriske cytokiner / kjemokiner, men også massiv T-celleproliferasjon etter CAR T-celleinfusjon15,16. Dermed vil utviklingen av en validert, klinisk strategi for å bilde CAR T-celler in vivo tillate 1) CAR T cellesporing i sanntid in vivo for å overvåke deres menneskehandel til tumorsteder og avdekke potensielle motstandsmekanismer, og 2) overvåking av CAR T celleutvidelse og potensielt forutsi deres toksisiteter som utvikling av CRS.
Kliniske egenskaper ved mild CRS er høy feber, tretthet, hodepine,, diaré, artralgi, myalgi og ubehag. Ved mer alvorlig CRS kan pasienter utvikle takykardi/hypotensjon, kapillærlekkasje, hjertedysfunksjon, nyre-/leversvikt og spre intravaskulær koagulasjon17,18. Generelt har graden av forhøyelse av cytokiner, inkludert interferon-gamma, granulocytt-makrofagkolonistimulerende faktor, interleukin (IL)-10 og IL-6 vist seg å korrelere med alvorlighetsgraden av kliniske symptomer17,19. Imidlertid er den omfattende anvendelsen av "sanntids" serumcytokinovervåking for å forutsi CRS vanskelig på grunn av høye kostnader og begrenset tilgjengelighet. For å utnytte de fordelaktige egenskapene ved CAR T-celleterapi, kan ikke-invasiv avbildning av adoptiv T-celler potensielt brukes til å forutsi effekt, toksisiteter og tilbakefall etter CAR T-celleinfusjon.
Flere forskere har utviklet strategier for å bruke radionuklidbasert avbildning med positronutslippstomografi (PET) eller enkeltfotoutslippsberegnet tomografi (SPECT), som gir høy oppløsning og høy følsomhet20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30 for in vivo visualisering og overvåking av CAR T cellehandel. Blant de radionuklidbaserte bildestrategiene er natriumjodidsympporteren (NIS) utviklet som en sensitiv modalitet for bildeceller og virus ved hjelp av PET-skanninger31,32. NIS+CAR T celleavbildning med [18F]TFB-PET er en sensitiv, effektiv og praktisk teknologi for å vurdere og diagnostisere CAR T-celleutvidelse, menneskehandel og toksisitet30. Denne protokollen beskriver 1) utviklingen av NIS+CAR T-celler gjennom dobbel transduksjon med høy effekt og 2) en metodikk for avbildning av NIS+CAR T-celler med [18F]TFB-PET-skanning. BCMA-CAR T-celler for MM brukes som konseptgodkjenningsmodell for å beskrive NIS som reporter for CAR T-celleavbildning. Imidlertid kan disse metodene brukes på enhver annen CAR T-celleterapi.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>22 Gauge needle</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8881250206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28 gauge insulin syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human (ETNL) NIS</td>
			<td>Imanis</td>
			<td>REA009</td>
			<td>ETNL antibody binds the cytosolic C-terminus of NIS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human BCMA, clone 19F2, PE-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>357507</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD45, clone HI30, BV421</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304032</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD45, clone 30-F11, APC-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>103116</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit IgG</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>F0110</td>
			<td>Secondary antibody for NIS staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCMA-CAR construct, second generation</td>
			<td>IDT, Coralville, IA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td>
			<td>BD</td>
			<td>554714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 Monoclonal Antibody (OKT3), PE, eBioscience</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12-0037-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CTS (Cell Therapy Systems) Dynabeads CD3/CD28</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>40203D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CytoFLEX System&#160; B5-R3-V5</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>C04652</td>
			<td>flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Syringes with Luer-Lok Tips</td>
			<td>BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin, Potassium Salt</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS (Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynabeads MPC-S (Magnetic Particle Concentrator)</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>A13346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Easy 50 EasySep Magnet</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>18002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep Human T Cell Isolation Kit</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>17951</td>
			<td>negative selection magnetic beads; 17951RF includes tips and buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>F8067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 647</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inveon Multiple Modality PET/CT scanner</td>
			<td>Siemens Medical Solutions USA, Inc.</td>
			<td>10506989 VFT 000 03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane liquid</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>66794-017-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina S5 Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>CLS148588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS&#174; Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>&#160;124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 Transfection Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L3000075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit, for 405 nm excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L34966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>07851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.22 uM, sterile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>450-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.45 uM, sterile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>450-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-Prkdcscid&#160;Il2rgtm1Wjl/SzJ</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>05557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPM-2</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>CRL-3273</td>
			<td>multiple myeloma cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBMN(CMV-copGFP-Luc2-Puro)</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>80389</td>
			<td>lentiviral vector encoding luciferase-GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Glutamine (100x), Liquid</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10378-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMOD software</td>
			<td>PMOD</td>
			<td>PBAS and P3D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pooled Human AB Serum Plasma Derived</td>
			<td>Innovative Research</td>
			<td>IPLA-SERAB-H-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin Dihydrochloride</td>
			<td>MP Biomedicals, Inc.</td>
			<td>0210055210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RoboSep-S</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>21000</td>
			<td>Fully Automated Cell Separator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI (Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21870-076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SepMate-50 (IVD)</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>85450</td>
			<td>density gradient separation tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide, 5% (w/v)</td>
			<td>Ricca Chemical</td>
			<td>7144.8-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T175 flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terrell (isoflurane, USP)</td>
			<td>Piramal Critical Care Inc</td>
			<td>66794-019-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol Alcohol Prep</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-VIVO 15 Serum-free Hematopoietic Cell Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>04-418Q</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dynamic imaging of chimeric antigen receptor t cells with [18f]tetrafluoroborate positron emission tomography/computed tomography

T-celler genetisk utviklet for å uttrykke chimeric antigen reseptorer (CAR) har vist enestående resultater i pivotale kliniske studier for pasienter med B celle maligniteter eller flere myeloma (MM). Imidlertid begrenser mange hindringer effekten og forbyr utbredt bruk av CAR T-cellebehandlinger på grunn av dårlig menneskehandel og infiltrasjon på tumorsteder, samt mangel på utholdenhet in vivo. Videre er livstruende toksisiteter, som cytokinfrigjøringssyndrom eller nevrotoksisitet, store bekymringer. Effektiv og sensitiv bildebehandling og sporing av CAR T-celler muliggjør evaluering av T-cellehandel, ekspansjon og in vivo-karakterisering og gjør det mulig å utvikle strategier for å overvinne de nåværende begrensningene ved CAR T-celleterapi. Dette dokumentet beskriver metodikken for å inkorporere natriumjodidsymporteren (NIS) i CAR T-celler og for CAR T-celleavbildning ved hjelp av [18F]tetrafluoroborate-positron utslipp tomografi ([18F]TFB-PET) i prekliniske modeller. Metodene beskrevet i denne protokollen kan brukes på andre CAR-konstruksjoner og målgener i tillegg til de som brukes til denne studien.

Figur 1 representerer trinnene for å generere NIS+BCMA-CAR T-celler. På dag 0 isolerer du PBMCer og isolerer deretter T-celler ved negativ merking. Stimulere deretter T-celler med anti-CD3 / CD28 perler. På dag 1 transduce T celler med både NIS og BCMA-CAR lentivirus. På dag 3, 4 og 5 teller du T-celler og mater med medier for å justere konsentrasjonen til 1,0 × 106/ml. For NIS-transduserede T-celler legger du til 1 μg/ml puromycin for å velge NIS+- ...

Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography at JoVE.com

Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

Denne protokollen beskriver metodikken for ikke-invasiv sporing av T-celler genetisk konstruert for å uttrykke chimeriske antigenreseptorer in vivo med en klinisk tilgjengelig plattform.

Dynamisk avbildning av chimeriske antigenreseptor T-celler med [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

T cells genetically engineered to express chimeric antigen receptors (CAR) have shown unprecedented results in pivotal clinical trials for patients with B ...

Det er ingen klinisk validert chimeric antigenreseptor T-celle bildeplattform til dags dato. Natrium-jod symporter representerer en sensitiv og klinisk relevant reporter for å bilde Bil T-celler ved PET-skanning. TLP PET-avbildning av NIS CAR T-celle gjør det mulig for etterforskere å ikke-invasivt spore infunderte celler in vivo og har potensial til å forutsi effekt og toksisitet av CAR T-celleterapi.Effektiv bildebehandling av CAR T-celler muliggjør evaluering av T-cellehandel og ekspansjon og gjør det mulig å utvikle strategier for å overvinne begrensningene. Metoden beskrevet i denne protokollen er enkel og kan brukes på andre CAR-konstruksjoner utover de som er vist i denne studien. Start med isolering av perifere mononukleære celler i blodet eller PBMCer fra blodprøven ved hjelp av standard tetthetsgradientteknikk.For å gjøre dette, legg forsiktig til 15 milliliter tetthetsgradient middels til et 50 milliliter tetthet gradient separasjonsrør unngår bobledannelse. For å unngå cellefangst, fortynn blodprøven med PBS som inneholder 2% FBS med et en-til-en-volumforhold og overfør forsiktig det fortynnede blodet på toppen av tetthetsgradientmediet uten å bryte grensesnittet mellom de to. Sentrifuger deretter separasjonsrøret ved 1200 ganger G i 10 minutter ved romtemperatur.Samle supernatanten i et friskt konisk rør på 50 milliliter, vask cellene med PBS som inneholder 2% FBS ved å fylle røret opp til 50 millilitermerke, og sentrifuger røret ved 300 ganger G i åtte minutter ved romtemperatur. Aspirer supernatanten før du bruker de pelleterte cellene på nytt i 50 milliliter PBS som inneholder 2% FBS. Resuspend pelleted PBMCs i PBS som inneholder 2% FBS til en konsentrasjon på 50 ganger 10 til sjette celler per milliliter.Gjenta vasken i et friskt 50 milliliterrør. Tell antall celler og sentrifuger deretter cellefjæringen ved 300 ganger G i åtte minutter ved romtemperatur. For T-celleisolasjon, overfør isolerte PBMCer til et 14 milliliter polystyren rundt bunnrør.Bruk deretter et negativt utvalg magnetisk perlesett for å utføre T-celleisolasjon ved å plassere PBMC-ene i negativ seleksjonsantistoffcocktail i en helautomatisk celleseparator. Etter T-celleisolasjon teller du cellene og kulturen cellene i T-celle ekspansjonsmedium eller TCM i en konsentrasjon på to ganger 10 til de sjette cellene per milliliter. Bland deretter hetteglasset som inneholder anti-CD3 / CD28 perler ved å virvle og pipette ut det nødvendige volumet av perler i et sterilt 1,5 milliliter mikrosenterrør.For vasking, resuspend perlene i en milliliter TCM før du plasserer røret på en magnet i ett minutt og aspirerer supernatanten. Etter å ha fjernet røret fra magneten, resuspend de vaskede perlene i en milliliter TCM og gjenta vasken to ganger. Resuspend de vaskede perlene i en milliliter av TCM for å overføre dem til T-celler kultur, deretter fortynne T-celle perle suspensjon med TCM til en konsentrasjon på 1,0 ganger 10 til sjette celler per milliliter før du overfører den til en vev kultur behandlet seks-brønn plate.Inkuber brønnplaten ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid. For å komme videre med transduksjon av lentivirus, tine de frosne lentivirusene i belegg chimeric antigen reseptorer eller natrium-jod symporter ved fire grader Celsius. Etter 24 til 48 timer med T-cellestimulering blander du T-cellene for å bryte opp klyngene og legge til det nytinede lentiviruset til cellene med en multiplisitet av infeksjon på fem.Inkuber de transinduserte T-cellene ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid. På dag tre, fire og fem av inkubasjonen teller du de transinduserte T-cellene og justerer cellekonsentrasjonen til 1,0 ganger 10 til de sjette cellene per milliliter ved å legge til fersk forvarmet TCM. For NIS-transinduserte T-celler som bærer puromycinresistensgenet, behandle cellene med ett mikrogram per milliliter puromycindihydroklorid på dag tre, fire og fem.På dag seks, bryte opp T-celle klynger og fjerne anti-CD3 / CD28 perler fra transduced T-celler ved å plassere platen på en magnet i ett minutt. Plasser deretter de oppsamlede cellene tilbake i kulturen i en konsentrasjon på 1,0 ganger 10 til de sjette cellene per milliliter. Vask en aliquot av T-cellekulturen som inneholder 50 000 celler med strømningsbuffer og resuspender cellene med 50 mikroliter strømningsbuffer.For å oppdage CAR-uttrykk, flekk T-cellene med en mikroliter geit anti-mus antistoff. For å utelukke de døde cellene, legg til 0,3 mikroliter LIVE / DEAD Aqua. Inkuber de fargede cellene i mørket ved romtemperatur.Etter 15 minutter, vask cellene med 150 mikroliter strømningsbuffer ved 650 ganger G i tre minutter ved fire grader Celsius. For å fikse og permeabilisere de fargede cellene, inkuber cellene med 100 mikroliter fikseringsmedium i 20 minutter ved fire grader Celsius. Vask deretter cellene to ganger med 100 mikroliter av en buffer som inneholder et cellepermeabiliserende middel som saponin og sentrifuger.Etter vask, resuspend permeabilized celler i 50 mikroliter av en permeabiliserende buffer. Tilsett deretter 0,3 nanogram antimennesket ETNL NIS antistoff og inkuber ved fire grader Celsius. Etter en time med inkubasjon, vask cellene ved å legge til 150 mikroliter strømningsbuffer og sentrifuge som demonstrert.Inkuber deretter cellene med 50 mikroliter strømningsbuffer som inneholder 2,5 mikroliter antikanin sekundært antistoff i 30 minutter ved fire grader Celsius. Etter å ha vasket T-cellene som demonstrert, resuspenderer cellene i 200 mikroliter av strømningsbuffer for å utføre strømningscytometri. Bestem deretter transduksjonseffektiviteten til cellene.På dag åtte teller og spinner du ned T-cellene ved 300 ganger G i åtte minutter ved fire grader Celsius før du bruker cellepelleten på nytt med et frysemedium i en konsentrasjon på 10 ganger 10 til de sjette cellene per milliliter. Overfør en milliliter av cellefjæringen til hvert merket cryo-hetteglass for å lagre ved minus 80 grader Celsius fryser i 48 timer. Etter 48 timer, overfør T-cellene til flytende nitrogen.Forbered musene injisert med NIS positive BCMA CAR T-celler for PET / CT-avbildningen ved å veie musene og fjerne metalløremerker. Injiser deretter 9,25 megabecquerel av nylaget F18 tetrafluorborate i musen intravenøst via hale vene injeksjon. Etter 45 minutter med opptaksperiode, fortsett å skaffe statiske PET-bilder av en bedøvet mus i 15 minutter, etterfulgt av CT-bildeanskaffelse i fem minutter med 360 graders rotasjon og 180 projeksjoner.I denne representative analysen genererte samtransduksjon av to virus i T-celler NIS positive BCMA CAR T-celler der over 90% av cellene var NIS positive. Analysen av T-celle vekstkinetikk fra null til åtte dager viste at inkorporering av BCMA CAR og NIS ikke påvirket T-celleutvidelsen betydelig sammenlignet med de utransduserte cellene. I strømningscytometrisk analyse av OPM-2 representerte celler transdusert med lentivirus GFP-uttrykket ved behandling med puromycin.Musene som fikk BCMA positiv luciferase positive OPM-2 celler ble utsatt for bioluminescensavbildning for å bekrefte engraftment av OPM-2 celler. PET-avbildning av F18 tetrafluoroborate administrert mus avslørte NIS positiv BCMA CAR T-cellefordeling i de ulike organene og benmargen. I tillegg viste benmargscellene som ble høstet fra musen, engraftment av OPM-2-celler og levering av NIS positive BCMA CAR T-celler til benmargen.For bilde av høy kvalitet av infunderte CAR T-celler er det viktig å følge trinnene i NIS CAR T-cellegenereringsprotokollen og bekrefte tilstedeværelsen av doble NIS- og CAR-positive fraksjoner.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

Levende Imaging å studere microtubule Dynamic Ustabilitet i taxan-resistent brystkreft

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Utilizing 18F-FDG PET/CT Imaging and Quantitative Histology to Measure Dynamic Changes in the Glucose Metabolism in Mouse Models of Lung Cancer

Utilizing 18F-FDG PET/CT Imaging and Quantitative Histology to Measure Dynamic Changes in the Glucose Metabolism in Mouse Models of Lung Cancer

18F-FDG PET/CT Imaging og kvantitative Histology måle dynamiske endringer i glukose metabolisme i musen modeller av lungekreft

A hallmark of advanced tumors is a switch to aerobic glycolysis that is readily measured by [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose positron emission tomography ...

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescens molekylær tomografi ved i Vivo avbildning av glioblastom Xenografts

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

Multimodal Bioluminescent and Positronic-emission Tomography/Computational Tomography Imaging of Multiple Myeloma Bone Marrow Xenografts in NOG Mice

Flere Bioluminescent og Positronic-utslipp tomografi/beregningsorientert tomografi avbilding av myelom benmarg Xenografts i NOG mus

Multiple myeloma (MM) tumors engraft in the bone marrow (BM) and their survival and progression are dependent upon complex molecular and cellular ...

In Vitro Tumor Cell Rechallenge For Predictive Evaluation of Chimeric Antigen Receptor T Cell Antitumor Function

I Vitro svulst celle Rechallenge For prediktiv evaluering av Chimeric Antigen reseptor T celle Antitumor funksjon

The field of chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy is rapidly advancing with improvements in CAR design, gene-engineering approaches and ...

Manufacturing Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cells for Adoptive Immunotherapy

Manufacturing Chimeric Antigen Receptor CAR T Cells for Adoptive Immunotherapy

Fremstilling chimeric antigen reseptor (CAR) T celler for adoptiv immunterapi

Adoptive immunotherapy holds promise for the treatment of cancer and infectious disease. We describe a simple approach to transduce primary human T cells ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cells for the Generation of Tumor Antigen-specific T Cells

Bruke Human indusert Pluripotent stamceller for generering av tumor antigen-spesifikke T celler

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of ...

Management of Respiratory Motion Artefacts in 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography using an Amplitude-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Management of Respiratory Motion Artefacts in 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography using an Amplitude-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Håndtering av respirasjonsbevegelsesartefakter i 18F-fluorodeoksyglucose Positron Emission Tomografi ved hjelp av en amplitudebasert optimal respiratorisk gatingalgoritme

Positron emission tomography (PET) combined with X-ray computed tomography (CT) is an important molecular imaging platform that is required for accurate ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Patologisk analyse av lungemetastase etter lateral hale-vene injeksjon av tumorceller

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Positron Emission Tomography-based Dose Painting Radiation Therapy in a Glioblastoma Rat Model using the Small Animal Radiation Research Platform

Positron Emission Tomography-basert dosemalingsstrålebehandling i en Glioblastoma Rat-modell ved hjelp av Small Animal Radiation Research Platform

A rat glioblastoma model to mimic chemo-radiation treatment of human glioblastoma in the clinic was previously established. Similar to the clinical ...