Name: dynamic imaging of chimeric antigen receptor t cells with [18f]tetrafluoroborate positron emission tomography/computed tomography
Uploaded: 2022-02-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography at JoVE.com

Эта работа была частично поддержана через трубопровод Mayo Clinic K2R (SSK), Центр индивидуализированной медицины клиники Майо (SSK) и Фонд Предолина (RS). Рисунки 1, 2 и 4 были созданы с BioRender.com.

Протокол следует руководящим принципам Совета по институциональному обзору клиники Майо, Институционального комитета по биобезопасности и Комитета по институциональному уходу за животными и их использованию клиники Майо.
1. Производство Т-клеток NIS+ BCMA-CAR
<p class="jov...

В данной работе описывается методология включения NIS в Т-клетки CAR и визуализации инфузионных CAR T-клеток in vivo через [18F]TFB-PET. В качестве доказательства концепции, Т-клетки NIS + BCMA-CAR были сгенерированы с помощью двойной трансдукции. Недавно мы сообщили, что включение NIS в CAR T-?...

Клеточная терапия химерным антигенным рецептором Т (CAR T) является быстро развивающимся и потенциально излечительным подходом при гематологических злокачественных новообразованиях1,2,3,4,5,6. Сообщалось о экстраординарных клинических исходах после CD19-направленной CAR T (CART19) или антигена созревания В-клеток (BCMA) CAR T-клеточной терапии2. Это привело к одобрению Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) клеток CART19 для агрессивной В-клеточной лимфомы (axicabtagene ciloleucel (Axi-Cel)4, тизагенлеклюцела (Tisa-Cel)3 и лизокабтагена маралеуцеля)7, острого лимфобластного лейкоза (Tisa-Cel)5,8, лимфомы мантийных клеток (brexucabtagene autoleuce)9 и фолликулярной лимфомы (Axi-Cel)10 . Совсем недавно FDA одобрило BCMA-направленную CAR T-клеточную терапию у пациентов с множественной миеломой (MM) (idecabtagene vicleucel)11. Кроме того, CAR T-клеточная терапия хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) находится на поздней стадии клинической разработки и, как ожидается, получит одобрение FDA в течение следующих трех лет1.
Несмотря на беспрецедентные результаты ТЕРАПИИ Т-клетками CAR, ее широкое применение ограничено 1) недостаточным расширением Т-клеток CAR in vivo или плохой транспортировкой к опухолевым участкам, что приводит к снижению показателей длительного ответа12,13 и 2) развитием опасных для жизни нежелательных явлений, включая синдром высвобождения цитокинов (CRS)14,15 . Отличительные признаки CRS включают не только иммунную активацию, приводящую к повышенным уровням воспалительных цитокинов / хемокинов, но и массивную пролиферацию Т-клеток после инфузии Т-клеток CAR15,16. Таким образом, разработка валидированной стратегии клинического уровня для изображения Т-клеток CAR in vivo позволит 1) отслеживать Т-клетки CAR в режиме реального времени in vivo для мониторинга их перемещения в опухолевые участки и выявления потенциальных механизмов резистентности и 2) мониторинга расширения Т-клеток CAR и потенциального прогнозирования их токсичности, такой как развитие CRS.
Клиническими особенностями легкой СВК являются высокая температура, усталость, головная боль, сыпь, диарея, артралгия, миалгия и недомогание. При более тяжелой СВК у пациентов может развиться тахикардия/гипотония, капиллярная утечка, сердечная дисфункция, почечная/печеночная недостаточность и диссеминированная внутрисосудистая коагуляция17,18. В целом, было показано, что степень повышения цитокинов, включая интерферон-гамма, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор, интерлейкин (IL)-10 и IL-6, коррелирует с тяжестью клинических симптомов17,19. Тем не менее, широкое применение мониторинга цитокинов сыворотки «в режиме реального времени» для прогнозирования CRS затруднено из-за высокой стоимости и ограниченной доступности. Чтобы использовать полезные характеристики ТЕРАПИИ Т-клетками CAR, неинвазивная визуализация приемных Т-клеток может быть потенциально использована для прогнозирования эффективности, токсичности и рецидива после инфузии Т-клеток CAR.
Несколько исследователей разработали стратегии использования радионуклидной визуализации с позитронно-эмиссионной томографией (ПЭТ) или однофотонной эмиссионной компьютерной томографией (ОФЭКТ), которая обеспечивает высокое разрешение и высокую чувствительность20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30 для визуализация in vivo и мониторинг незаконного оборота Т-клеток CAR. Среди этих стратегий визуализации на основе радионуклидов был разработан симпортер йодида натрия (NIS) в качестве чувствительного метода к клеткам изображения и вирусам с использованием ПЭТ-сканирования31,32. Визуализация Т-клеток NIS+CAR с помощью [18F]TFB-PET является чувствительной, эффективной и удобной технологией для оценки и диагностики расширения, трафика и токсичности Т-клеток CAR30. Этот протокол описывает 1) разработку Т-клеток NIS+CAR посредством двойной трансдукции с высокой эффективностью и 2) методологию визуализации Т-клеток NIS+CAR с помощью [18F]TFB-ПЭТ-сканирования. Т-клетки BCMA-CAR для MM используются в качестве экспериментальной модели для описания NIS в качестве репортера для визуализации Т-клеток CAR. Однако эти методологии могут быть применены к любой другой терапии Т-клетками CAR.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>22 Gauge needle</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8881250206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28 gauge insulin syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human (ETNL) NIS</td>
			<td>Imanis</td>
			<td>REA009</td>
			<td>ETNL antibody binds the cytosolic C-terminus of NIS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human BCMA, clone 19F2, PE-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>357507</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD45, clone HI30, BV421</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304032</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD45, clone 30-F11, APC-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>103116</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit IgG</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>F0110</td>
			<td>Secondary antibody for NIS staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCMA-CAR construct, second generation</td>
			<td>IDT, Coralville, IA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td>
			<td>BD</td>
			<td>554714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 Monoclonal Antibody (OKT3), PE, eBioscience</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12-0037-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CTS (Cell Therapy Systems) Dynabeads CD3/CD28</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>40203D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CytoFLEX System&#160; B5-R3-V5</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>C04652</td>
			<td>flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Syringes with Luer-Lok Tips</td>
			<td>BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin, Potassium Salt</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS (Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynabeads MPC-S (Magnetic Particle Concentrator)</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>A13346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Easy 50 EasySep Magnet</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>18002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep Human T Cell Isolation Kit</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>17951</td>
			<td>negative selection magnetic beads; 17951RF includes tips and buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>F8067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 647</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inveon Multiple Modality PET/CT scanner</td>
			<td>Siemens Medical Solutions USA, Inc.</td>
			<td>10506989 VFT 000 03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane liquid</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>66794-017-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina S5 Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>CLS148588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS&#174; Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>&#160;124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 Transfection Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L3000075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit, for 405 nm excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L34966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>07851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.22 uM, sterile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>450-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.45 uM, sterile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>450-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-Prkdcscid&#160;Il2rgtm1Wjl/SzJ</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>05557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPM-2</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>CRL-3273</td>
			<td>multiple myeloma cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBMN(CMV-copGFP-Luc2-Puro)</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>80389</td>
			<td>lentiviral vector encoding luciferase-GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Glutamine (100x), Liquid</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10378-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMOD software</td>
			<td>PMOD</td>
			<td>PBAS and P3D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pooled Human AB Serum Plasma Derived</td>
			<td>Innovative Research</td>
			<td>IPLA-SERAB-H-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin Dihydrochloride</td>
			<td>MP Biomedicals, Inc.</td>
			<td>0210055210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RoboSep-S</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>21000</td>
			<td>Fully Automated Cell Separator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI (Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21870-076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SepMate-50 (IVD)</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>85450</td>
			<td>density gradient separation tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide, 5% (w/v)</td>
			<td>Ricca Chemical</td>
			<td>7144.8-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T175 flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terrell (isoflurane, USP)</td>
			<td>Piramal Critical Care Inc</td>
			<td>66794-019-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol Alcohol Prep</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-VIVO 15 Serum-free Hematopoietic Cell Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>04-418Q</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dynamic imaging of chimeric antigen receptor t cells with [18f]tetrafluoroborate positron emission tomography/computed tomography

Т-клетки, генетически модифицированные для экспрессии рецепторов химерного антигена (CAR), показали беспрецедентные результаты в ключевых клинических испытаниях для пациентов со злокачественными новообразованиями В-клеток или множественной миеломой (ММ). Однако многочисленные препятствия ограничивают эффективность и запрещают широкое использование терапии Т-клетками CAR из-за плохого трафика и инфильтрации в опухолевые участки, а также отсутствия персистенции in vivo. Кроме того, опасные для жизни токсичные вещества, такие как синдром высвобождения цитокинов или нейротоксичность, являются основными проблемами. Эффективная и чувствительная визуализация и отслеживание Т-клеток CAR позволяет оценить трафик, расширение и характеристику Т-клеток in vivo и позволяет разработать стратегии для преодоления текущих ограничений терапии Т-клетками CAR. В данной работе описывается методология включения симпортера йодида натрия (NIS) в Т-клетки CAR и визуализации Т-клеток CAR с использованием [18F]тетрафторборат-позитронно-эмиссионной томографии ([18F]TFB-PET) в доклинических моделях. Методы, описанные в этом протоколе, могут быть применены к другим конструкциям CAR и генам-мишеням в дополнение к тем, которые используются для этого исследования.

На рисунке 1 показаны этапы генерации Т-клеток NIS+BCMA-CAR. На 0-й день изолируйте НБМК, а затем изолируйте Т-клетки путем отрицательного отбора. Затем стимулируют Т-клетки шариками против CD3/CD28. На 1-й день трансдукция Т-клеток с помощью лентивирусов NIS и BCMA-CAR. В дни 3, 4 и 5 п?...

Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography at JoVE.com

Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

Этот протокол описывает методологию неинвазивного отслеживания Т-клеток, генетически модифицированных для экспрессии рецепторов химерного антигена in vivo с помощью клинически доступной платформы.

Динамическая визуализация Т-клеток рецептора химерного антигена с помощью [18F]Тетрафтороборатно-позитронно-эмиссионной томографии/компьютерной томографии

T cells genetically engineered to express chimeric antigen receptors (CAR) have shown unprecedented results in pivotal clinical trials for patients with B ...

На сегодняшний день не существует клинически подтвержденной платформы визуализации Т-клеток рецептора химерного антигена. Симпортер натрия-йодида представляет собой чувствительного и клинически значимого репортера для изображения автомобильных Т-клеток с помощью ПЭТ-сканирования. TLP-визуализация Т-клеток NIS CAR позволяет исследователям неинвазивно отслеживать инфузионные клетки in vivo и имеет потенциал для прогнозирования эффективности и токсичности Т-клеточной терапии CAR.Эффективная визуализация Т-клеток CAR позволяет оценить трафик и расширение Т-клеток и позволяет разрабатывать стратегии для преодоления ограничений. Метод, описанный в этом протоколе, прост и может быть применен к другим конструкциям CAR, помимо тех, которые показаны в этом исследовании. Начинают с выделения мононуклеарных клеток периферической крови или ПБМК из образца крови с использованием метода стандартного градиента плотности.Для этого осторожно добавьте 15 миллилитров среды градиента плотности в 50-миллилитровую градиентную трубку разделения градиента плотности, избегая образования пузырьков. Чтобы избежать захвата клеток, разбавьте образец крови PBS, содержащим 2% FBS в объемном соотношении один к одному, и осторожно перенесите разбавленную кровь поверх среды градиента плотности, не нарушая границу раздела между ними. Затем центрифугируют разделительную трубку в 1, 200 раз G в течение 10 минут при комнатной температуре.Соберите супернатант в свежую 50-миллилитровую коническую трубку, промыть клетки PBS, содержащим 2% FBS, заполнив трубку до отметки до 50 миллилитров, и центрифугируя трубку в 300 раз G в течение восьми минут при комнатной температуре. Аспирировать супернатант перед повторным использованием гранулированных клеток в 50 миллилитрах PBS, содержащих 2% FBS. Повторно суспендируют гранулированные МПК в ПБС, содержащие 2%ФБС, до концентрации в 50 раз 10 до шестых клеток на миллилитр.Повторите стирку в свежем 50-миллилитровом тюбике. Подсчитайте количество клеток, а затем центрифугируйте клеточную суспензию в 300 раз G в течение восьми минут при комнатной температуре. Для изоляции Т-клеток перенесите изолированные НБМК в 14-миллилитровую полистирольную трубку с круглым дном.Затем используйте набор магнитных шариков отрицательного отбора для выполнения изоляции Т-клеток, помещая PBMCs в коктейль антител отрицательного отбора в полностью автоматизированный клеточный сепаратор. После выделения Т-клеток подсчитывают клетки и культивируют клетки в Т-клеточной расширительной среде или ТКМ в концентрации в два раза 10-шестая клетка на миллилитр. Затем смешайте флакон, содержащий бусины против CD3/CD28, закручивая и выбрасывая необходимый объем бусин в стерильную микроцентрифужную трубку размером 1,5 миллилитра.Для стирки повторно суспендируйте шарики в одном миллилитре ТКМ, прежде чем поместить трубку на магнит на одну минуту и аспирировать супернатант. После извлечения трубки из магнита повторно суспендируйте вымытые шарики в одном миллилитре ТКМ и повторите стирку дважды. Повторно суспендируют промытые шарики в одном миллилитре ТКМ для переноса их в культуру Т-клеток, затем разбавляют суспензию Т-клеточного шарика ТКМ до концентрации 1,0 раз 10 до шестой клетки на миллилитр перед переносом ее в тканевую культуру, обработанную шестилуночной пластиной.Инкубируйте плиту скважины при 37 градусах Цельсия и 5% углекислого газа. Чтобы прогрессировать с трансдукцией лентивирусов, разморозьте замороженные лентивирусы в покрытии химерных антигенных рецепторов или натриево-йодидного симпортера при четырех градусах Цельсия. После 24-48 часов стимуляции Т-клеток смешайте Т-клетки, чтобы разбить кластеры и добавить свежеотмороженный лентивирус к клеткам при множественности инфекции в пять.Инкубируют трансдуцированные Т-клетки при 37 градусах Цельсия и 5% углекислого газа. На третий, четвертый и пятый дни инкубации подсчитайте трансдуцированные Т-клетки и отрегулируйте концентрацию клеток до 1,0 раз 10-шестых клеток на миллилитр, добавив свежую предварительно нагретую ТКМ. Для NIS-трансдуцированных Т-клеток, несущих ген устойчивости к пуромицину, обработайте клетки одним микрограммом на миллилитр дигидрохлорида пуромицина в третий, четвертый и пятый дни.На шестой день разбейте кластеры Т-клеток и удалите шарики анти-CD3 / CD28 из трансдуцированных Т-клеток, поместив пластину на магнит на одну минуту. Затем поместите собранные клетки обратно в культуру в концентрации от 1,0 раз 10 до шестой клетки на миллилитр. Промыть аликвоту культуры Т-клеток, содержащей 50 000 клеток с буфером потока, и повторно суспендировать клетки 50 микролитрами буфера потока.Для обнаружения экспрессии CAR окрашивают Т-клетки одним микролитром козьего антимышьего антитела. Чтобы исключить мертвые клетки, добавьте 0,3 микролитра LIVE/DEAD Aqua. Инкубировать окрашенные клетки в темноте при комнатной температуре.Через 15 минут промыть клетки 150 микролитрами буфера потока в 650 раз G в течение трех минут при четырех градусах Цельсия. Чтобы зафиксировать и пропитать окрашенные клетки, инкубируйте клетки со 100 микролитрами фиксирующей среды в течение 20 минут при четырех градусах Цельсия. Затем дважды промыть клетки 100 микролитрами буфера, содержащего клеточный проникающий агент, такой как сапонин и центрифуга.После промывки повторно суспендируют пермеабилизированные клетки в 50 микролитрах пермеабилизирующего буфера. Затем добавьте 0,3 нанограмма античеловеческого антитела ETNL NIS и инкубируйте при четырех градусах Цельсия. После одного часа инкубации промыть клетки, добавив 150 микролитров буфера потока и центрифуги, как показано на рисунке.Затем инкубируют клетки с 50 микролитрами буфера потока, содержащего 2,5 микролитра анти-кроликового вторичного антитела в течение 30 минут при четырех градусах Цельсия. После промывки Т-клеток, как показано, повторно суспендируйте клетки в 200 микролитрах буфера потока для выполнения проточной цитометрии. Затем определяют эффективность трансдукции клеток.На восьмой день подсчитайте и раскрутите Т-клетки в 300 раз G в течение восьми минут при четырех градусах Цельсия, прежде чем повторно использовать гранулу клетки с морозильной средой в концентрации 10 раз 10 до шестой клетки на миллилитр. Переложите один миллилитр клеточной суспензии в каждый меченый криобазок для хранения в морозильной камере при минус 80 градусах Цельсия в течение 48 часов. Через 48 часов переведите Т-клетки в жидкий азот.Подготовьте мышей, которым вводили NIS-положительные Т-клетки BCMA CAR, для визуализации ПЭТ/КТ путем взвешивания мышей и удаления металлических ушных бирок. Затем вводят 9,25 мегабеккереля свежеприготовленного тетрафторбората F18 мыши внутривенно через инъекцию в хвостовую вену. После 45 минут периода поглощения приступайте к получению статических ПЭТ-изображений анестезированной мыши в течение 15 минут, а затем получения изображения КТ в течение пяти минут с поворотом на 360 градусов и 180 проекциями.В этом репрезентативном анализе котрансдукция двух вирусов в Т-клетки генерировала NIS-положительные BCMA CAR Т-клетки, где более 90% клеток были NIS-положительными. Анализ кинетики роста Т-клеток от нуля до восьми дней показал, что включение BCMA CAR и NIS не оказало существенного влияния на расширение Т-клеток по сравнению с нетрансдуцированными клетками. В проточном цитометрическом анализе OPM-2 клетки, трансдуцированные лентивирусом, представляли экспрессию GFP при лечении пуромицином.Мыши, получавшие BCMA-положительные люциферазные клетки OPM-2, подвергались биолюминесцентной визуализации для подтверждения приживления клеток OPM-2. ПЭТ-визуализация ферфторбората F18, введенного мышью, выявила NIS-положительное распределение Т-клеток BCMA CAR в различных органах и костном мозге. Кроме того, клетки костного мозга, собранные у мыши, показали приживление клеток OPM-2 и доставку NIS-положительных BCMA CAR T-клеток в костный мозг.Для получения высококачественной визуализации инфузионных Т-клеток CAR важно следовать шагам протокола генерации Т-клеток NIS CAR и подтвердить наличие двойных положительных фракций NIS и CAR.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

Живая съемка по изучению микротрубочек динамической неустойчивости в таксанов устойчивостью рака молочной железы

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Utilizing 18F-FDG PET/CT Imaging and Quantitative Histology to Measure Dynamic Changes in the Glucose Metabolism in Mouse Models of Lung Cancer

Utilizing 18F-FDG PET/CT Imaging and Quantitative Histology to Measure Dynamic Changes in the Glucose Metabolism in Mouse Models of Lung Cancer

Использование 18F-ФДГ ПЭТ/КТ и количественных гистология для измерения динамического изменения в метаболизме глюкозы в моделях мыши рака легких

A hallmark of advanced tumors is a switch to aerobic glycolysis that is readily measured by [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose positron emission tomography ...

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Молекулярные томография флуоресценции для изображений в Vivo ксенотрасплантатов глиобластомы

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

Multimodal Bioluminescent and Positronic-emission Tomography/Computational Tomography Imaging of Multiple Myeloma Bone Marrow Xenografts in NOG Mice

Смешанных биолюминесцентных и позитронный выбросов томография/вычислительная томография томография множественной миеломы ксенотрасплантатов костного мозга мышей Нагель

Multiple myeloma (MM) tumors engraft in the bone marrow (BM) and their survival and progression are dependent upon complex molecular and cellular ...

In Vitro Tumor Cell Rechallenge For Predictive Evaluation of Chimeric Antigen Receptor T Cell Antitumor Function

В Vitro опухолевых клеток Rechallenge для прогнозирования оценки химерных антигена рецепторов Т-клеток противоопухолевые функции

The field of chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy is rapidly advancing with improvements in CAR design, gene-engineering approaches and ...

Manufacturing Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cells for Adoptive Immunotherapy

Manufacturing Chimeric Antigen Receptor CAR T Cells for Adoptive Immunotherapy

Производство химерных антигенных рецепторов (CAR) Т-клеток для приемной иммунотерапии

Adoptive immunotherapy holds promise for the treatment of cancer and infectious disease. We describe a simple approach to transduce primary human T cells ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cells for the Generation of Tumor Antigen-specific T Cells

Использование человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток для поколения опухолевых антигенов конкретных Т-клеток

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of ...

Management of Respiratory Motion Artefacts in 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography using an Amplitude-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Management of Respiratory Motion Artefacts in 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography using an Amplitude-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Управление респираторного движения артефактов в 18F-фтордеоксиглукозы позитронно-эмиссионной томографии с использованием Амплитуды основе оптимального респираторного gating алгоритм

Positron emission tomography (PET) combined with X-ray computed tomography (CT) is an important molecular imaging platform that is required for accurate ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Патологический анализ метастазирования в легкие после инъекции опухолевых клеток в латеральную хвостовую вену

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Positron Emission Tomography-based Dose Painting Radiation Therapy in a Glioblastoma Rat Model using the Small Animal Radiation Research Platform

Лучевая терапия на основе позитронно-эмиссионной томографии в модели крысы с использованием платформы радиационных исследований мелких животных

A rat glioblastoma model to mimic chemo-radiation treatment of human glioblastoma in the clinic was previously established. Similar to the clinical ...