Name: dynamic imaging of chimeric antigen receptor t cells with [18f]tetrafluoroborate positron emission tomography/computed tomography
Uploaded: 2022-02-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado en parte a través de la canalización K2R (SSK) de Mayo Clinic, el Centro de Medicina Individualizada (SSK) de Mayo Clinic y la Fundación Predolin (RS). Las figuras 1, 2 y 4 se crearon con BioRender.com.

El protocolo sigue las pautas de la Junta de Revisión Institucional de Mayo Clinic, el Comité Institucional de Bioseguridad y el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de Mayo Clinic.
1. Producción de células T NIS+ BCMA-CAR
NOTA: Este protocolo sigue las pautas de la Junta de Revisión Institucional de Mayo Clinic (IRB 17-008762) y el Comité Institucional de Bioseguridad (IBC Bios00000006.04).
<ol><li>Producción de lentivirus que codi...

Este artículo describe una metodología para incorporar NIS en células T CAR e imágenes de células T CAR infundidas in vivo a través de [18F]TFB-PET. Como prueba de concepto, las células T NIS+BCMA-CAR se generaron a través de la transducción dual. Recientemente hemos informado que la incorporación de NIS en las células T CAR no perjudica las funciones y la eficacia in vivo de las células T CAR y permite el tráfico y la expansión de las células T CAR...

La terapia con células T (CAR T) receptoras de antígeno quimérico es un abordaje rápidamente emergente y potencialmente curativo en neoplasias hematológicas malignas1,2,3,4,5,6. Se informaron resultados clínicos extraordinarios después de la terapia con células T CAR T (CART19) dirigida por CD19 o antígeno de maduración de células B (BCMA)CAR2. Esto llevó a la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA) a la aprobación de células CART19 para el linfoma agresivo de células B (axicabtagene ciloleucel (Axi-Cel)4, tisagenlecleucel (Tisa-Cel)3 y lisocabtagene maraleucel)7, leucemia linfoblástica aguda (Tisa-Cel)5,8, linfoma de células del manto (brexucabtagene autoleuce)9 y linfoma folicular (Axi-Cel)10 . Más recientemente, la FDA aprobó la terapia de células T CAR dirigida por BCMA en pacientes con mieloma múltiple (MM) (idecabtagene vicleucel)11. Además, la terapia de células T con CAR para la leucemia linfocítica crónica (LLC) se encuentra en etapa tardía de desarrollo clínico y se espera que reciba la aprobación de la FDA en los próximos tres años1.
A pesar de los resultados sin precedentes de la terapia de células T con CAR, su uso generalizado está limitado por 1) la insuficiente expansión in vivo de las células T con CAR o el tráfico deficiente a los sitios tumorales, lo que conduce a tasas más bajas de respuesta duradera12,13 y 2) el desarrollo de eventos adversos potencialmente mortales, incluido el síndrome de liberación de citoquinas (SRC)14,15 . Las características distintivas del SRC incluyen no solo la activación inmune que resulta en niveles elevados de citoquinas / quimiocinas inflamatorias, sino también la proliferación masiva de células T después de la infusión de células T con CAR15,16. Por lo tanto, el desarrollo de una estrategia validada de grado clínico para obtener imágenes de células T CAR in vivo permitiría 1) el seguimiento de células T CAR en tiempo real in vivo para monitorear su tráfico a sitios tumorales y descubrir posibles mecanismos de resistencia, y 2) monitorear la expansión de células T CAR y potencialmente predecir sus toxicidades, como el desarrollo de CRS.
Las características clínicas del SRC leve son fiebre alta, fatiga, dolor de cabeza, erupción cutánea, diarrea, artralgia, mialgia y malestar general. En el SRC más grave, los pacientes pueden desarrollar taquicardia/hipotensión, fuga capilar, disfunción cardíaca, insuficiencia renal/hepática y coagulación intravascular diseminada17,18. En general, se ha demostrado que el grado de elevación de las citoquinas, incluyendo interferón-gamma, factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos, interleucina (IL)-10 e IL-6, se correlaciona con la gravedad de los síntomas clínicos17,19. Sin embargo, la aplicación extensiva de monitoreo de citoquinas séricas "en tiempo real" para predecir CRS es difícil debido al alto costo y la disponibilidad limitada. Para explotar las características beneficiosas de la terapia de células T con CAR, las imágenes no invasivas de las células T adoptivas se pueden utilizar potencialmente para predecir la eficacia, las toxicidades y la recaída después de la infusión de células T con CAR.
Varios investigadores han desarrollado estrategias para utilizar imágenes basadas en radionúclidos con tomografía por emisión de positrones (PET) o tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT), que proporciona alta resolución y alta sensibilidad20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30 para el visualización y monitoreo in vivo del tráfico de células T CAR. Entre esas estrategias de imagen basadas en radionúclidos, se ha desarrollado el simportador de yoduro de sodio (NIS) como una modalidad sensible para obtener imágenes de células y virus mediante tomografías PET31,32. Las imágenes de células T NIS+CAR con [18F]TFB-PET son una tecnología sensible, eficiente y conveniente para evaluar y diagnosticar la expansión, el tráfico y la toxicidad de las células T CAR30. Este protocolo describe 1) el desarrollo de células T NIS+CAR a través de la transducción dual con alta eficacia y 2) una metodología para obtener imágenes de células T NIS+CAR con [18F]TFB-PET. Las células T BCMA-CAR para MM se utilizan como un modelo de prueba de concepto para describir NIS como un reportero para imágenes de células T CAR. Sin embargo, estas metodologías se pueden aplicar a cualquier otra terapia de células T con CAR.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>22 Gauge needle</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8881250206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28 gauge insulin syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human (ETNL) NIS</td>
			<td>Imanis</td>
			<td>REA009</td>
			<td>ETNL antibody binds the cytosolic C-terminus of NIS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human BCMA, clone 19F2, PE-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>357507</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD45, clone HI30, BV421</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304032</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD45, clone 30-F11, APC-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>103116</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit IgG</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>F0110</td>
			<td>Secondary antibody for NIS staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCMA-CAR construct, second generation</td>
			<td>IDT, Coralville, IA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td>
			<td>BD</td>
			<td>554714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 Monoclonal Antibody (OKT3), PE, eBioscience</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12-0037-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CTS (Cell Therapy Systems) Dynabeads CD3/CD28</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>40203D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CytoFLEX System&#160; B5-R3-V5</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>C04652</td>
			<td>flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Syringes with Luer-Lok Tips</td>
			<td>BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin, Potassium Salt</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS (Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynabeads MPC-S (Magnetic Particle Concentrator)</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>A13346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Easy 50 EasySep Magnet</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>18002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep Human T Cell Isolation Kit</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>17951</td>
			<td>negative selection magnetic beads; 17951RF includes tips and buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>F8067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 647</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inveon Multiple Modality PET/CT scanner</td>
			<td>Siemens Medical Solutions USA, Inc.</td>
			<td>10506989 VFT 000 03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane liquid</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>66794-017-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina S5 Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>CLS148588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS&#174; Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>&#160;124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 Transfection Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L3000075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit, for 405 nm excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L34966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>07851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.22 uM, sterile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>450-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.45 uM, sterile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>450-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-Prkdcscid&#160;Il2rgtm1Wjl/SzJ</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>05557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPM-2</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>CRL-3273</td>
			<td>multiple myeloma cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBMN(CMV-copGFP-Luc2-Puro)</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>80389</td>
			<td>lentiviral vector encoding luciferase-GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Glutamine (100x), Liquid</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10378-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMOD software</td>
			<td>PMOD</td>
			<td>PBAS and P3D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pooled Human AB Serum Plasma Derived</td>
			<td>Innovative Research</td>
			<td>IPLA-SERAB-H-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin Dihydrochloride</td>
			<td>MP Biomedicals, Inc.</td>
			<td>0210055210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RoboSep-S</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>21000</td>
			<td>Fully Automated Cell Separator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI (Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21870-076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SepMate-50 (IVD)</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>85450</td>
			<td>density gradient separation tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide, 5% (w/v)</td>
			<td>Ricca Chemical</td>
			<td>7144.8-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T175 flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terrell (isoflurane, USP)</td>
			<td>Piramal Critical Care Inc</td>
			<td>66794-019-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol Alcohol Prep</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-VIVO 15 Serum-free Hematopoietic Cell Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>04-418Q</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dynamic imaging of chimeric antigen receptor t cells with [18f]tetrafluoroborate positron emission tomography/computed tomography

Las células T genéticamente modificadas para expresar receptores de antígeno quimérico (CAR) han mostrado resultados sin precedentes en ensayos clínicos fundamentales para pacientes con neoplasias malignas de células B o mieloma múltiple (MM). Sin embargo, numerosos obstáculos limitan la eficacia y prohíben el uso generalizado de terapias de células T con CAR debido al tráfico deficiente y la infiltración en los sitios tumorales, así como la falta de persistencia in vivo. Además, las toxicidades potencialmente mortales, como el síndrome de liberación de citoquinas o la neurotoxicidad, son las principales preocupaciones. La obtención de imágenes y el seguimiento eficientes y sensibles de las células T con CAR permiten la evaluación del tráfico, la expansión y la caracterización in vivo de las células T con T y permiten el desarrollo de estrategias para superar las limitaciones actuales de la terapia con células T con CAR. Este artículo describe la metodología para incorporar el simportador de yoduro de sodio (NIS) en células T CAR y para imágenes de células T CAR utilizando tomografía por emisión de tetrafluoroborato-positrón [18F] ([18F]TFB-PET) en modelos preclínicos. Los métodos descritos en este protocolo se pueden aplicar a otras construcciones CAR y genes diana además de los utilizados para este estudio.

La Figura 1 representa los pasos para generar células T NIS+BCMA-CAR. El día 0, aísle los PBMC y luego aísle las células T por selección negativa. Luego, estimule las células T con perlas anti-CD3 / CD28. El día 1, transduzca células T con lentivirus NIS y BCMA-CAR. En los días 3, 4 y 5, cuente las células T y alimente con medios para ajustar la concentración a 1.0 × 106 / ml. Para las células T transducidas por NIS, agregue 1 μg/ml de puromicina para sel...

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Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

Este protocolo describe la metodología para el seguimiento no invasivo de células T genéticamente modificadas para expresar receptores de antígenos quiméricos in vivo con una plataforma clínicamente disponible.

Imágenes dinámicas de células T receptoras de antígeno quimérico con [18F]Tomografía por emisión de positrones tetrafluoroborato/Tomografía computarizada

T cells genetically engineered to express chimeric antigen receptors (CAR) have shown unprecedented results in pivotal clinical trials for patients with B ...

Hasta la fecha, no existe una plataforma de imágenes de células T con receptor de antígeno quimérico clínicamente validada. El simportador de yoduro de sodio representa un informador sensible y clínicamente relevante para obtener imágenes de células T de car mediante PET. Las imágenes T de T de T NIS CAR permiten a los investigadores rastrear de forma no invasiva las células infundidas in vivo y tienen el potencial de predecir la eficacia y la toxicidad de la terapia de células T con CAR.La obtención de imágenes eficientes de las células T CAR permite la evaluación del tráfico y la expansión de las células T y permite el desarrollo de estrategias para superar las limitaciones. Los métodos descritos en este protocolo son simples y se pueden aplicar a otras construcciones CAR más allá de las mostradas en este estudio. Comience con el aislamiento de células mononucleares de sangre periférica o PBMC de la muestra de sangre utilizando la técnica de gradiente de densidad estándar.Para hacerlo, agregue suavemente 15 mililitros de medio de gradiente de densidad a un tubo de separación de gradiente de densidad de 50 mililitros evitando la formación de burbujas. Para evitar la captura celular, diluya la muestra de sangre con PBS que contiene 2% FBS en una relación de volumen de uno a uno y transfiera suavemente la sangre diluida sobre el medio de gradiente de densidad sin romper la interfaz entre los dos. Luego centrifugue el tubo de separación a 1, 200 veces G durante 10 minutos a temperatura ambiente.Recoja el sobrenadante en un tubo cónico fresco de 50 mililitros, lave las células con PBS que contenga 2% de FBS llenando el tubo hasta una marca de 50 mililitros y centrifugando el tubo a 300 veces G durante ocho minutos a temperatura ambiente. Aspire el sobrenadante antes de resuspender las células peletizadas en 50 mililitros de PBS que contengan 2% de FBS. Resuspend los PBMC peletizados en PBS que contienen 2% FBS a una concentración de 50 veces 10 a la sexta célula por mililitro.Repita el lavado en un tubo fresco de 50 mililitros. Cuente el número de células y luego centrífique la suspensión celular a 300 veces G durante ocho minutos a temperatura ambiente. Para el aislamiento de células T, transfiera PBMC aislados a un tubo inferior redondo de poliestireno de 14 mililitros.Luego, use un kit de cuentas magnéticas de selección negativa para realizar el aislamiento de células T colocando los PBMC en un cóctel de anticuerpos de selección negativa en un separador celular totalmente automatizado. Después del aislamiento de células T, cuente las células y cultive las células en medio de expansión de células T o MTC a una concentración de dos veces 10 a las sextas células por mililitro. A continuación, mezcle el vial que contiene las perlas anti-CD3 / CD28 girando y pipetee el volumen requerido de perlas en un tubo de microcentrífuga estéril de 1,5 mililitros.Para el lavado, vuelva a suspender las perlas en un mililitro de MTC antes de colocar el tubo en un imán durante un minuto y aspire el sobrenadante. Después de retirar el tubo del imán, vuelva a suspender las perlas lavadas en un mililitro de MTC y repita el lavado dos veces. Resuspender las perlas lavadas en un mililitro de MTC para transferirlas al cultivo de células T, luego diluir la suspensión de perlas de células T con MTC a una concentración de 1.0 veces 10 a las sextas células por mililitro antes de transferirla a una placa de seis pocillos tratada con cultivo de tejidos.Incubar la placa del pozo a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono. Para progresar con la transducción de lentivirus, descongele los lentivirus congelados en el recubrimiento de los receptores de antígeno quimérico o el simportador de yoduro de sodio a cuatro grados centígrados. Después de 24 a 48 horas de estimulación de células T, mezcle las células T para romper los grupos y agregue el lentivirus recién descongelado a las células en una multiplicidad de infección de cinco.Incubar las células T transducidas a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono. En los días tres, cuatro y cinco de incubación, cuente las células T transducidas y ajuste la concentración celular a 1.0 veces 10 a la sexta célula por mililitro agregando MTC fresca precalentada. Para las células T transducidas por NIS que portan el gen de resistencia a la puromicina, trate las células con un microgramo por mililitro de diclorhidrato de puromicina en los días tres, cuatro y cinco.En el sexto día, rompa los grupos de células T y elimine las perlas anti-CD3 / CD28 de las células T transducidas colocando la placa en un imán durante un minuto. Luego coloque las células recolectadas nuevamente en el cultivo a una concentración de 1.0 veces 10 a las sextas células por mililitro. Lavar una alícuota del cultivo de células T que contiene 50.000 células con tampón de flujo y resuspendir las células con 50 microlitros de tampón de flujo.Para detectar la expresión de CAR, tiñe las células T con un microlitro de anticuerpos anti-ratón de cabra. Para excluir las células muertas, agregue 0.3 microlitros de ALIVE/DEAD Aqua. Incubar las células teñidas en la oscuridad a temperatura ambiente.Después de 15 minutos, lave las células con 150 microlitros de tampón de flujo a 650 veces G durante tres minutos a cuatro grados Centígrados. Para fijar y permeabilizar las células teñidas, incubar las células con 100 microlitros de medio de fijación durante 20 minutos a cuatro grados centígrados. Luego lave las células dos veces con 100 microlitros de un tampón que contenga un agente permeabilizante celular como la saponina y la centrífuga.Después del lavado, resuspenda las células permeabilizadas en 50 microlitros de un tampón permeabilizante. Luego agregue 0.3 nanogramos de anticuerpo ETNL NIS antihumano e incube a cuatro grados centígrados. Después de una hora de incubación, lave las células agregando 150 microlitros de tampón de flujo y centrífuga como se ha demostrado.Luego incubar las células con 50 microlitros de tampón de flujo que contienen 2,5 microlitros de anticuerpo secundario anti-conejo durante 30 minutos a cuatro grados centígrados. Después de lavar las células T como se ha demostrado, vuelva a suspender las células en 200 microlitros de tampón de flujo para realizar la citometría de flujo. Luego determine la eficiencia de transducción de las células.En el octavo día, cuente y gire hacia abajo las células T a 300 veces G durante ocho minutos a cuatro grados Celsius antes de volver a depositar el pellet celular con un medio de congelación a una concentración de 10 veces 10 a las sextas células por mililitro. Transfiera un mililitro de la suspensión celular a cada vial criogénico etiquetado para almacenar a menos 80 grados Celsius durante 48 horas. Después de 48 horas, transfiera las células T a nitrógeno líquido.Prepare a los ratones inyectados con células T BCMA CAR NIS positivas para las imágenes PET / CT pesando los ratones y eliminando las marcas metálicas en los oídos. Luego inyecte 9.25 megabecquerel de tetrafluoroborato F18 recién preparado en el ratón por vía intravenosa a través de la inyección de la vena de la cola. Después de 45 minutos de período de absorción, proceda a adquirir imágenes PET estáticas de un ratón anestesiado durante 15 minutos, seguidas de la adquisición de imágenes por TC durante cinco minutos con rotación de 360 grados y 180 proyecciones.En este análisis representativo, la cotransducción de dos virus en células T generó células T BCMA CAR NIS positivas, donde más del 90% de las células eran NIS positivas. El análisis de la cinética de crecimiento de células T de cero a ocho días reveló que la incorporación de BCMA CAR y NIS no tuvo un impacto significativo en la expansión de las células T en comparación con las células no transducidas. En el análisis citométrico de flujo de OPM-2, las células transducidas con lentivirus representaron la expresión de GFP tras el tratamiento con puromicina.Los ratones que recibieron células OPM-2 positivas para luciferasa BCMA positiva fueron sometidos a imágenes de bioluminiscencia para confirmar el injerto de células OPM-2. Las imágenes PET del ratón administrado con tetrafluoroborato F18 revelaron una distribución de células T BCMA CAR NIS positiva en los diversos órganos y médula ósea. Además, las células de la médula ósea recolectadas del ratón mostraron el injerto de células OPM-2 y la entrega de las células T BCMA CAR NIS positivas a la médula ósea.Para obtener imágenes de alta calidad de células T CAR infundidas, es importante seguir los pasos del protocolo de generación de células T NIS CAR y confirmar la presencia de fracciones duales NIS y CAR positivas.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

Imágenes en vivo para el Estudio de la inestabilidad dinámica de microtúbulos en los cánceres de mama resistentes a taxano

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Investigación

Investigación sobre el cáncer

Utilizing 18F-FDG PET/CT Imaging and Quantitative Histology to Measure Dynamic Changes in the Glucose Metabolism in Mouse Models of Lung Cancer

Utilizing 18F-FDG PET/CT Imaging and Quantitative Histology to Measure Dynamic Changes in the Glucose Metabolism in Mouse Models of Lung Cancer

Utilizando 18F-FDG PET/CT la proyección de imagen e histología cuantitativa para medir cambios dinámicos en el metabolismo de la glucosa en modelos de ratón de cáncer de pulmón

A hallmark of advanced tumors is a switch to aerobic glycolysis that is readily measured by [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose positron emission tomography ...

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Tomografía Molecular de la fluorescencia para obtener imágenes In Vivo de xenoinjertos de Glioblastoma

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

Multimodal Bioluminescent and Positronic-emission Tomography/Computational Tomography Imaging of Multiple Myeloma Bone Marrow Xenografts in NOG Mice

Proyección de imagen de tomografía multimodal bioluminiscente y emisión positrónica tomografía/computacional de xenoinjertos de médula ósea del mieloma múltiple en ratones NOG

Multiple myeloma (MM) tumors engraft in the bone marrow (BM) and their survival and progression are dependent upon complex molecular and cellular ...

In Vitro Tumor Cell Rechallenge For Predictive Evaluation of Chimeric Antigen Receptor T Cell Antitumor Function

En Vitro Tumor celular Rechallenge de evaluación predictiva de antígeno quimérico del Receptor de la célula T función antitumoral

The field of chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy is rapidly advancing with improvements in CAR design, gene-engineering approaches and ...

Manufacturing Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cells for Adoptive Immunotherapy

Manufacturing Chimeric Antigen Receptor CAR T Cells for Adoptive Immunotherapy

Fabricación de células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) para inmunoterapia adoptiva

Adoptive immunotherapy holds promise for the treatment of cancer and infectious disease. We describe a simple approach to transduce primary human T cells ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cells for the Generation of Tumor Antigen-specific T Cells

Uso de células madre pluripotentes inducidas por el hombre para la generación de células T específicas de antígenos tumorales

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of ...

Management of Respiratory Motion Artefacts in 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography using an Amplitude-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Management of Respiratory Motion Artefacts in 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography using an Amplitude-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Manejo de artefactos de movimiento respiratorio en 18tomografía por emisión de positrones F-fluorodeoxiglucosa utilizando un algoritmo de medición respiratoria óptima basado en la amplitud

Positron emission tomography (PET) combined with X-ray computed tomography (CT) is an important molecular imaging platform that is required for accurate ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Análisis patológico de metástasis pulmonares después de la inyección lateral de células tumorales en la vena de la cola

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Positron Emission Tomography-based Dose Painting Radiation Therapy in a Glioblastoma Rat Model using the Small Animal Radiation Research Platform

Radioterapia de pintura de dosis basada en tomografía por emisión de positrones en un modelo de rata con glioblastoma utilizando la Plataforma de Investigación de Radiación en Animales Pequeños

A rat glioblastoma model to mimic chemo-radiation treatment of human glioblastoma in the clinic was previously established. Similar to the clinical ...