Name: dynamic imaging of chimeric antigen receptor t cells with [18f]tetrafluoroborate positron emission tomography/computed tomography
Uploaded: 2022-02-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography at JoVE.com

Detta arbete stöddes delvis genom Mayo Clinic K2R pipeline (SSK), Mayo Clinic Center for Individualized Medicine (SSK) och Predolin Foundation (RS). Figurerna 1, 2 och 4 skapades med BioRender.com.

Protokollet följer riktlinjerna från Mayo Clinics institutionella granskningsnämnd, institutional biosafety committee och Mayo Clinic's Institutional Animal Care and Use Committee.
1. NIS+ BCMA-CAR T-cellproduktion
OBS: Detta protokoll följer riktlinjerna från Mayo Clinic's Institutional Review Board (IRB 17-008762) och Institutional Biosafety Committee (IBC Bios00000006.04).
<ol><li>Produktion av BCMA-CAR, NIS och luciferasgrönt fluorescerande pr...

Detta dokument beskriver en metod för att införliva NIS i CAR T celler och imaging infunderade CAR T celler in vivo genom [18F]TFB-PET. Som bevis på koncept genererades NIS + BCMA-CAR T-celler via dubbel transduktion. Vi har nyligen rapporterat att införliva NIS i CAR T celler inte försämrar CAR T cell funktioner och effektivitet in vivo och tillåter CAR T cell handel och expansion30. Eftersom CAR T-cellterapier fortsätter att expandera utöver de nu...

Chimeric antigen receptor T (CAR T) cellterapi är en snabbt framväxande och potentiellt botande strategi i hematologiska maligniteter1,2,3,4,5,6. Extraordinära kliniska resultat rapporterades efter CD19-riktad CAR T (CART19) eller B cell mognad antigen (BCMA) CAR T cellterapi2. Detta ledde till det amerikanska food and drug administration (FDA) godkännandet av CART19-celler för aggressivt B-cellslymfom (axicabtagene ciloleucel (Axi-Cel)4, tisagenlecleucel (Tisa-Cel)3, och lisocabtagene maraleucel)7, akut lymfatisk leukemi (Tisa-Cel)5,8, mantelcellslymfom (brexucabtagene autoleuce)9, akut lymfatisk leukemi (Tisa-Cel)5,8, mantelcellslymfom (brexucabtagene autoleuce)7, akut lymfatisk leukemi (Tisa-Cel)5,8, mantelcellslymfom (brexucabtagene autoleuce)9, akut lymfatisk leukemi (Tisa-Cel)5,8, mantelcellslymfom (brexucabtagene autoleuce)9, akut lymfatisk leukemi (Tisa-Cel)5,8, mantelcellslymfom (brexucabtagene autoleuce)9, akut lymfatisk leukemi (Tisa-Cel)5,8, mantelcellslymfom (brexucabtagene autoleuce)9, akut lymfatisk leukemi (Tisa-Cel)5,8, mantelcellslymfom (brexucabtagene autoleuce)9, akut lymfatisk leukemi (Tisa-Cel)5,8, mantelcellslymfom (brexucabtagene auto . Senast godkände FDA BCMA-riktad CAR T-cellbehandling hos patienter med multipelt myelom (MM) (idecabtagene vicleucel)11. Dessutom är CAR T-cellterapi för kronisk lymfatisk leukemi (KLL) i sen klinisk utveckling och förväntas få FDA-godkännande inom de närmaste tre åren1.
Trots de oöverträffade resultaten av CAR T-cellterapi begränsas dess utbredda användning av 1) otillräcklig in vivo CAR T-cellexpansion eller dålig handel med tumörplatser, vilket leder till lägre frekvenser av varaktig respons12,13 och 2) utvecklingen av livshotande biverkningar, inklusive cytokinfrisättningssyndrom (CRS)14,15 . Kännetecknen för CRS inkluderar inte bara immunaktivering som resulterar i förhöjda nivåer av inflammatoriska cytokiner/ kemoker utan också massiv T-cellsproliferation efter CAR T-cellsinfusion15,16. Utvecklingen av en validerad, klinisk strategi för att avbilda CAR T-celler in vivo skulle således möjliggöra 1) CAR T-cellspårning i realtid in vivo för att övervaka deras handel med tumörplatser och avslöja potentiella resistensmekanismer, och 2) övervakning av CAR T-cellexpansion och potentiellt förutsäga deras toxicitet såsom utvecklingen av CRS.
Kliniska funktioner av mild CRS är hög feber, trötthet, huvudvärk, utslag, diarré, artralgi, myalgi och sjukdom. I allvarligare CRS kan patienter utveckla takykardi/hypotoni, kapillär läcka, hjärt dysfunktion, njurmedicinska/lever misslyckande och spridas intravaskulära koagulering17,18. I allmänhet har graden av höjning av cytokiner, inklusive interferon-gamma, granulocyt-makrofag koloni-stimulerande faktor, interleukin (IL)-10 och IL-6, visat sig korrelera med svårighetsgraden av kliniska symtom17,19. Den omfattande tillämpningen av "realtid" serum cytokin övervakning för att förutsäga CRS är dock svårt på grund av den höga kostnaden och begränsad tillgänglighet. För att utnyttja de fördelaktiga egenskaperna hos CAR T cellterapi, icke-invasiv imaging av adoptiv T celler kan potentiellt användas för att förutsäga effekt, toxicitet och återfall efter CAR T cell infusion.
Flera forskare har utvecklat strategier för att använda radionuklidbaserad avbildning med positrutsläppstomografi (PET) eller enfotonutsläppsberäkningstomografi (SPECT), vilket ger hög upplösning och hög känslighet20,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30 för in vivo visualisering och övervakning av CAR T-cellhandel. Bland dessa radionuklidbaserade bildstrategier har natriumjodid symportören (NIS) utvecklats som en känslig modalitet för bildceller och virus med PET-skanningar31,32. NIS + CAR T-cellavbildning med [18F]TFB-PET är en känslig, effektiv och bekväm teknik för att bedöma och diagnostisera CAR T-cellsexpansion, handel och toxicitet30. Detta protokoll beskriver 1) utvecklingen av NIS + CAR T-celler genom dubbel transduktion med hög effekt och 2) en metod för avbildning NIS + CAR T celler med [18F]TFB-PET scan. BCMA-CAR T celler för MM används som en proof-of-concept modell för att beskriva NIS som en reporter för CAR T cell imaging. Dessa metoder kan dock tillämpas på alla andra CAR T-cellterapi.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>22 Gauge needle</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>8881250206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28 gauge insulin syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well plate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3595</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human (ETNL) NIS</td>
			<td>Imanis</td>
			<td>REA009</td>
			<td>ETNL antibody binds the cytosolic C-terminus of NIS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human BCMA, clone 19F2, PE-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>357507</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD45, clone HI30, BV421</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304032</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD45, clone 30-F11, APC-Cy7</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>103116</td>
			<td>Flow antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit IgG</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>F0110</td>
			<td>Secondary antibody for NIS staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCMA-CAR construct, second generation</td>
			<td>IDT, Coralville, IA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td>
			<td>BD</td>
			<td>554714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 Monoclonal Antibody (OKT3), PE, eBioscience</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12-0037-42</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CTS (Cell Therapy Systems) Dynabeads CD3/CD28</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>40203D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CytoFLEX System&#160; B5-R3-V5</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>C04652</td>
			<td>flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D2650-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Syringes with Luer-Lok Tips</td>
			<td>BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin, Potassium Salt</td>
			<td>Gold Biotechnology</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-PBS (Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynabeads MPC-S (Magnetic Particle Concentrator)</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>A13346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Easy 50 EasySep Magnet</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>18002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep Human T Cell Isolation Kit</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>17951</td>
			<td>negative selection magnetic beads; 17951RF includes tips and buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>F8067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 647</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inveon Multiple Modality PET/CT scanner</td>
			<td>Siemens Medical Solutions USA, Inc.</td>
			<td>10506989 VFT 000 03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane liquid</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>66794-017-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina S5 Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>CLS148588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS&#174; Spectrum In Vivo Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>&#160;124262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 Transfection Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L3000075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit, for 405 nm excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L34966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lymphoprep</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>07851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.22 uM, sterile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>450-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Rapid-Flow 500 mL Vacuum Filter, 0.45 uM, sterile</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>450-0045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD.Cg-Prkdcscid&#160;Il2rgtm1Wjl/SzJ</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>05557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPM-2</td>
			<td>DSMZ</td>
			<td>CRL-3273</td>
			<td>multiple myeloma cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBMN(CMV-copGFP-Luc2-Puro)</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>80389</td>
			<td>lentiviral vector encoding luciferase-GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin-Glutamine (100x), Liquid</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10378-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMOD software</td>
			<td>PMOD</td>
			<td>PBAS and P3D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pooled Human AB Serum Plasma Derived</td>
			<td>Innovative Research</td>
			<td>IPLA-SERAB-H-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin Dihydrochloride</td>
			<td>MP Biomedicals, Inc.</td>
			<td>0210055210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RoboSep-S</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>21000</td>
			<td>Fully Automated Cell Separator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI (Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21870-076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SepMate-50 (IVD)</td>
			<td>STEMCELL Technologies</td>
			<td>85450</td>
			<td>density gradient separation tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide, 5% (w/v)</td>
			<td>Ricca Chemical</td>
			<td>7144.8-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T175 flask</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Terrell (isoflurane, USP)</td>
			<td>Piramal Critical Care Inc</td>
			<td>66794-019-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Webcol Alcohol Prep</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>6818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-VIVO 15 Serum-free Hematopoietic Cell Medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>04-418Q</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dynamic imaging of chimeric antigen receptor t cells with [18f]tetrafluoroborate positron emission tomography/computed tomography

T-celler som är genetiskt konstruerade för att uttrycka chimeriska antigenreceptorer (CAR) har visat oöverträffade resultat i pivotala kliniska prövningar för patienter med B-cells maligniteter eller multipelt myelom (MM). Många hinder begränsar dock effektiviteten och förbjuder utbredd användning av CAR T-cellterapier på grund av dålig handel och infiltration i tumör platser samt brist på uthållighet in vivo. Dessutom är livshotande toxiciteter, såsom cytokinfrisättningssyndrom eller neurotoxicitet, stora problem. Effektiv och känslig avbildning och spårning av CAR T-celler möjliggör utvärdering av T-cellhandel, expansion och in vivo-karakterisering och möjliggör utveckling av strategier för att övervinna de nuvarande begränsningarna för CAR T-cellterapi. I detta dokument beskrivs metoden för att införliva natriumjodid symportören (NIS) i CAR T-celler och för CAR T-cell imaging med [18F]tetrafluorborate-positron emission tomography ([18F]TFB-PET) i prekliniska modeller. De metoder som beskrivs i detta protokoll kan tillämpas på andra CAR-konstruktioner och målgener utöver de som används för denna studie.

Figur 1 representerar stegen för att generera NIS+BCMA-CAR T-celler. På dag 0 isolerar du PBMCs och isolerar sedan T-celler genom negativ markering. Stimulera sedan T-celler med anti-CD3 / CD28 pärlor. På dag 1, transducera T-celler med både NIS och BCMA-CAR lentiviruses. På dag 3, 4 och 5, räkna T-celler och mata med media för att justera koncentrationen till 1,0 × 106/ml. För NIS-transduced T-celler, tillsätt 1 μg/ml puromycin för att välja NIS+</su...

Watch this Scientific Journal Video about Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography at JoVE.com

Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

Detta protokoll beskriver metoden för icke-invasiv spårning T-celler genetiskt konstruerade för att uttrycka chimeric antigen receptorer in vivo med en kliniskt tillgänglig plattform.

Dynamisk avbildning av chimeriska antigenreceptor T-celler med [18F]Tetrafluorborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

T cells genetically engineered to express chimeric antigen receptors (CAR) have shown unprecedented results in pivotal clinical trials for patients with B ...

Det finns hittills ingen kliniskt validerad chimerisk antigenreceptor T-cells imaging plattform. Natriumjodid symportören representerar en känslig och kliniskt relevant reporter för att avbilda Car T-celler genom PET-skanning.Effektiv avbildning av CAR T-celler möjliggör utvärdering av handel och expansion av T-celler och möjliggör utveckling av strategier för att övervinna begränsningarna. Metoden som beskrivs i detta protokoll är enkel och kan tillämpas på andra CAR-konstruktioner utöver de som visas i denna studie. Börja med isolering av mononukleära celler i perifert blod eller PBBC från blodprovet med hjälp av standarddensitetsgradienttekniken.För att göra det, tillsätt försiktigt 15 milliliter densitetsgradientmedium till ett 50 milliliter densitet gradient separationsrör undvika bubbelbildning. För att undvika cellfångst, späd blodprovet med PBS som innehåller 2% FBS med ett volymförhållande på 1 till 1 och överför försiktigt det utspädda blodet ovanpå densitetsgradientmediet utan att bryta gränssnittet mellan de två. Centrifugera sedan separationsröret vid 1, 200 gånger G i 10 minuter vid rumstemperatur.Samla supernatanten i ett nytt koniskt rör på 50 milliliter, tvätta cellerna med PBS som innehåller 2% FBS genom att fylla röret upp till 50 ml-märket och centrifugera röret vid 300 gånger G i åtta minuter vid rumstemperatur. Aspirera supernatanten innan du återanvänder de pelleterade cellerna i 50 milliliter PBS som innehåller 2%FBS. Återanvänd de pelleterade PBMCs i PBS som innehåller 2%FBS till en koncentration av 50 gånger 10 till de sjätte cellerna per milliliter.Upprepa tvätten i ett färskt 50 ml rör. Räkna antalet celler och centrifugera sedan cellupphängningen vid 300 gånger G i åtta minuter vid rumstemperatur. För T-cellsisolering, överför isolerade PBMCs till ett 14 milliliter polystyren runt botten rör.Använd sedan ett negativt urval magnetiskt pärlkit för att utföra T-cellsisolering genom att placera PBMCs i negativ urval antikroppscocktail i en helautomatisk cellavskiljare. Efter T-cellsisolering, räkna cellerna och odla cellerna i T-cellsexpansionsmedium eller TCM i en koncentration av två gånger 10 till de sjätte cellerna per milliliter. Blanda sedan injektionsflaskan som innehåller anti-CD3/CD28-pärlorna genom att virvla och pipettera ut den önskade volymen pärlor i ett sterilt 1,5 ml mikrocentrifugerör.För tvätt, återanvänd pärlorna i en milliliter TCM innan du placerar röret på en magnet i en minut och aspirerar supernatanten. Efter att ha tagit bort röret från magneten, återanvänd de tvättade pärlorna i en milliliter TCM och upprepa tvätten två gånger. Återanvänd de tvättade pärlorna i en milliliter TCM för att överföra dem till T-cellskulturen och späd sedan T-cellspälsupphängningen med TCM till en koncentration av 1,0 gånger 10 till de sjätte cellerna per milliliter innan den överförs till en vävnadskulturbehandlad sex-brunnsplatta.Inkubera brunnsplattan vid 37 grader Celsius och 5% koldioxid. För att gå vidare med transduktion av lentivirus, tina de frysta lentivirusen i beläggning chimeric antigenreceptorer eller natriumjodid symportör vid fyra grader Celsius. Efter 24 till 48 timmars T-cellsstimulering, blanda T-cellerna för att bryta upp klustren och tillsätt det nyupptinade lentiviruset till cellerna vid en multiplicitet av infektion av fem.Inkubera de transduced T-cellerna vid 37 grader Celsius och 5% koldioxid. På dag tre, fyra och fem av inkubation, räkna de transduced T-cellerna och justera cellkoncentrationen till 1,0 gånger 10 till de sjätte cellerna per milliliter genom att tillsätta färska förvärmda TCM. För NIS transduced T-celler som bär puromycinresistensgenen, behandla cellerna med ett mikrogram per milliliter puromycin dihydroklorid dag tre, fyra och fem.På dag sex bryter du upp T-cellsklustren och tar bort anti-CD3/ CD28-pärlor från de transduced T-cellerna genom att placera plattan på en magnet i en minut. Placera sedan de insamlade cellerna tillbaka i kulturen vid en koncentration av 1,0 gånger 10 till de sjätte cellerna per milliliter. Tvätta en alikvot av T-cellskulturen som innehåller 50 000 celler med flödesbuffert och återanvänd cellerna med 50 mikroliter flödesbuffert.För att upptäcka CAR-uttryck, färga T-cellerna med en mikroliter av get antimusantikropp. Om du vill utesluta de döda cellerna lägger du till 0,3 mikroliter LIVE/DEAD Aqua. Inkubera de färgade cellerna i mörkret vid rumstemperatur.Tvätta cellerna med 150 mikroliter flödesbuffert vid 650 gånger G i tre minuter vid fyra grader Celsius efter 15 minuter. För att fixa och permeabilisera de färgade cellerna, inkubera cellerna med 100 mikroliter fixeringsmedel i 20 minuter vid fyra grader Celsius. Tvätta sedan cellerna två gånger med 100 mikroliter av en buffert som innehåller ett cellpermeabiliserande medel som saponin och centrifug.Efter tvätt, återanvänd de permeabiliserade cellerna i 50 mikroliter av en permeabiliserande buffert. Tillsätt sedan 0,3 nanogram anti-human ETNL NIS-antikropp och inkubera vid fyra grader Celsius. Tvätta cellerna efter en timmes inkubation genom att tillsätta 150 mikroliter flödesbuffert och centrifug som visats.Inkubera sedan cellerna med 50 mikroliter flödesbuffert som innehåller 2,5 mikroliter antikanin sekundär antikropp i 30 minuter vid fyra grader Celsius. Efter tvättning av T-cellerna som visats, återanvänd cellerna i 200 mikroliter flödesbuffert för att utföra flödescytometri. Bestäm sedan cellernas transduktionseffektivitet.På dag åtta räknar och snurrar du ner T-cellerna vid 300 gånger G i åtta minuter vid fyra grader Celsius innan cellpelleten återanvänds med ett frysmedium vid en koncentration av 10 gånger 10 till de sjätte cellerna per milliliter. Överför en milliliter av cellfjädringen till varje märkt kryoflaska för att lagra vid minus 80 grader Celsius frys i 48 timmar. Efter 48 timmar överför du T-cellerna till flytande kväve.Förbered mössen injicerade med NIS-positiva BCMA CAR T-celler för PET/CT-avbildning genom att väga mössen och ta bort öronmärken i metall. Injicera sedan 9,25 megabecquerel nyberedd F18 tetrafluorborat i musen intravenöst via svansveninjektion. Efter 45 minuters upptagsperiod, fortsätt att förvärva statiska PET-bilder av en sövd mus i 15 minuter, följt av CT-bildförvärv i fem minuter med 360 graders rotation och 180 projektioner.I denna representativa analys genererade samtransduktion av två virus i T-celler NIS positiva BCMA CAR T-celler där över 90% av cellerna var NIS-positiva. Analysen av T-cells tillväxtkinetik från noll till åtta dagar visade att införlivandet av BCMA CAR och NIS inte signifikant påverkade T-cells expansion jämfört med de otransduced cellerna. I flöde cytometrisk analys av OPM-2 representerade celler transduced med lentivirus GFP uttryck vid behandling med puromycin.Möss som får BCMA positiva luciferas positiva OPM-2 celler utsattes för bioluminescens imaging för att bekräfta engraftment av OPM-2 celler. PET imaging av F18 tetrafluoroborate administreras mus visade NIS positiva BCMA CAR T-cells distribution i de olika organen och benmärgen. Dessutom visade benmärgscellerna skördade från musen engraftment av OPM-2 celler och leverans av NIS positiva BCMA CAR T-celler till benmärgen.För högkvalitativ avbildning av infunderade CAR T-celler är det viktigt att följa stegen i NIS CAR T-cells generation protokoll och att bekräfta förekomsten av dubbla NIS och CAR positiva fraktioner.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Dynamic Imaging of Chimeric Antigen Receptor T Cells with [18F]Tetrafluoroborate Positron Emission Tomography/Computed Tomography

Live Imaging to Study Microtubule Dynamic Instability in Taxane-resistant Breast Cancers

Live Imaging att studera mikrotubuli Dynamisk Instabilitet i taxan resistent bröstcancer

Taxanes such as docetaxel belong to a group of microtubule-targeting agents (MTAs) that are commonly relied upon to treat cancer. However, taxane ...

Utilizing 18F-FDG PET/CT Imaging and Quantitative Histology to Measure Dynamic Changes in the Glucose Metabolism in Mouse Models of Lung Cancer

Utilizing 18F-FDG PET/CT Imaging and Quantitative Histology to Measure Dynamic Changes in the Glucose Metabolism in Mouse Models of Lung Cancer

Utnyttja 18F-FDG PET/CT Imaging och kvantitativa histologi för att mäta dynamiska förändringar i glukosmetabolism i musmodeller av lungcancer

A hallmark of advanced tumors is a switch to aerobic glycolysis that is readily measured by [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose positron emission tomography ...

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Fluorescens molekylär tomografi för In Vivo Imaging av Glioblastoma xenograft

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

Multimodal Bioluminescent and Positronic-emission Tomography/Computational Tomography Imaging of Multiple Myeloma Bone Marrow Xenografts in NOG Mice

Multimodala självlysande och Positronic-emission Tomography/Computational tomografisk avbildning av multipelt myelom benmärgen xenograft i NOG möss

Multiple myeloma (MM) tumors engraft in the bone marrow (BM) and their survival and progression are dependent upon complex molecular and cellular ...

In Vitro Tumor Cell Rechallenge For Predictive Evaluation of Chimeric Antigen Receptor T Cell Antitumor Function

I Vitro tumör Cell återinsättning för förutsägande utvärdering av chimära Antigen receptorn T Cell antitumöreffekt funktion

The field of chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy is rapidly advancing with improvements in CAR design, gene-engineering approaches and ...

Manufacturing Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cells for Adoptive Immunotherapy

Manufacturing Chimeric Antigen Receptor CAR T Cells for Adoptive Immunotherapy

Tillverkning chimeric antigen receptor (bil) T celler för adoptiv immunterapi

Adoptive immunotherapy holds promise for the treatment of cancer and infectious disease. We describe a simple approach to transduce primary human T cells ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cells for the Generation of Tumor Antigen-specific T Cells

Använda humana inducerade pluripotenta stamceller för generering av tumör antigen-specifika T-celler

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of ...

Management of Respiratory Motion Artefacts in 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography using an Amplitude-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Management of Respiratory Motion Artefacts in 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emission Tomography using an Amplitude-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Hantering av Respiratory Motion artefakter i 18F-fluorodeoxyglucose Positron Emissions Tomografi med hjälp av en Amplitud-Based Optimal Respiratory Gating Algorithm

Positron emission tomography (PET) combined with X-ray computed tomography (CT) is an important molecular imaging platform that is required for accurate ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Patologisk analys av lungmetastasering efter lateral svansveninjektion av tumörceller

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Positron Emission Tomography-based Dose Painting Radiation Therapy in a Glioblastoma Rat Model using the Small Animal Radiation Research Platform

Positron Emission Tomography-baserad dosmålning strålbehandling i en Glioblastoma Rat Modell med hjälp av Small Animal Radiation Research Platform

A rat glioblastoma model to mimic chemo-radiation treatment of human glioblastoma in the clinic was previously established. Similar to the clinical ...