Name: isolation of adult human astrocyte populations from fresh-frozen cortex using fluorescence-activated nuclei sorting
Uploaded: 2021-04-16T14:00:00
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Nos gustaría agradecer a los miembros de Patología y Neurocirugía de la Escuela de Medicina Icahn en Mount Sinai por su ayuda con la adquisición de tejido cerebral no identificado y al CORE de Citometría de Flujo de ISMMS por el asesoramiento de expertos. El estudio fue parcialmente financiado por NIH RF1DA048810, R01NS106229, R03NS101581 (a N.M.T.) y R61DA048207 (a S.A.).

NOTA: El Programa para la Protección de Sujetos Humanos de la Escuela de Medicina Icahn en Mount Sinai (ISMMS) y su Junta de Revisión Institucional (IRB) asegura la conducta ética de la investigación y el cumplimiento de las regulaciones federales, estatales e institucionales. En este estudio, todas las muestras postmortem utilizadas fueron desidentificadas, obtenidas bajo el consentimiento apropiado a través del biorepositorio, y fueron exentas de la designación de "investigación humana" por el IRB de ISMMS (HS #...

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	<li>Mitchell, A., Roussos, P., Peter, C., Tsankova, N., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+future+of+neuroepigenetics+in+the+human+brain.">The future of neuroepigenetics in the human brain.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 128, 199-228 (2014).</li><li>Jiang, Y., Matevossian, A., Huang, H. S., Straubhaar, J., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neuronal+chromatin+from+brain+tissue.">Isolation of neuronal chromatin from brain tissue.</a> BMC Neuroscience. 9, 42 (2008).</li><li>Akbarian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PsychENCODE+project.">The PsychENCODE project.</a> Nature Neuroscience. 18 (12), 1707-1712 (2015).</li><li>Matevossian, A., Akbarian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+nuclei+isolation+from+human+postmortem+brain+tissue.">Neuronal nuclei isolation from human postmortem brain tissue.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. 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N., Mi, D., Mason, J. O., Price, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cerebral+cortical+neurogenesis+by+the+Pax6+transcription+factor.">Regulation of cerebral cortical neurogenesis by the Pax6 transcription factor.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9, 70 (2015).</li><li>Sakurai, K., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neurogenesis-controlling+factor,+Pax6,+inhibits+proliferation+and+promotes+maturation+in+murine+astrocytes.">The neurogenesis-controlling factor, Pax6, inhibits proliferation and promotes maturation in murine astrocytes.</a> Journal of Neuroscience. 28 (18), 4604-4612 (2008).</li><li>Zhong, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decoding+the+development+of+the+human+hippocampus.">Decoding the development of the human hippocampus.</a> Nature. 577 (7791), 531-536 (2020).</li><li>Pollen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identity+of+human+outer+radial+glia+during+cortical+development.">Molecular identity of human outer radial glia during cortical development.</a> Cell. 163 (1), 55-67 (2015).</li><li>Cvekl, A., Callaerts, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PAX6:+25th+anniversary+and+more+to+learn.">PAX6: 25th anniversary and more to learn.</a> Experimental Eye Research. 156, 10-21 (2017).</li><li>Goc, J., Liu, J. Y., Sisodiya, S. M., Thom, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+spatiotemporal+study+of+gliosis+in+relation+to+depth+electrode+tracks+in+drug-resistant+epilepsy.">A spatiotemporal study of gliosis in relation to depth electrode tracks in drug-resistant epilepsy.</a> European Journal of Neuroscience. 39 (12), 2151-2162 (2014).</li><li>Monoranu, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH+measurement+as+quality+control+on+human+post+mortem+brain+tissue:+a+study+of+the+BrainNet+Europe+consortium.">pH measurement as quality control on human post mortem brain tissue: a study of the BrainNet Europe consortium.</a> Neuropathology and Applied Neurobiology. 35 (3), 329-337 (2009).</li><li>Ninkovic, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcription+factor+Pax6+regulates+survival+of+dopaminergic+olfactory+bulb+neurons+via+crystallin+&#945;A.">The transcription factor Pax6 regulates survival of dopaminergic olfactory bulb neurons via crystallin &#945;A.</a> Neuron. 68 (4), 682-694 (2010).</li></ol>

El diseño experimental siguiendo el protocolo esbozado debe finalizarse después de considerar varios factores biológicos y técnicos. Las muestras de tejido iniciales se congelan frescamente, sin haber sido fijadas, y preferiblemente tienen un corto intervalo de recolección post mortem para maximizar la recuperación de los núcleos. Según la experiencia, un PMI de hasta 24 h permite una adecuada recuperación de los núcleos; sin embargo, un PMI de 12 h o menos es preferible para optimizar la recuperación de núcl...

La complejidad molecular de los astrocitos humanos sigue estando mal definida en el tejido primario, requiriendo mejores herramientas para su aislamiento y caracterización a alta resolución, tanto en salud como en enfermedad. La separación de las neuronas y glías humanas intactas de su nicho ha demostrado ser difícil debido al acceso limitado de muestras de tejido cerebral fresco, la naturaleza fuertemente interconectada de los procesos gliales y neuronales, y la inevitable activación celular durante el procesamiento, todo lo cual limita la caracterización molecular de estos tipos de células ex vivo1 . La clasificación de núcleos activados por fluorescencia (FANS) ha surgido como una alternativa a la clasificación de células vivas, permitiendo la disociación e inmunoetiquetado de poblaciones de núcleos de tejido congelado. En la última década, FANS se ha utilizado ampliamente para aislar y caracterizar molecularmente poblaciones de núcleos neuronales humanos (NeuN +) en una variedad de especímenes cerebrales y regiones anatómicas 1,2,3,4.
Sin embargo, los métodos similares para aislar subpoblaciones específicas de núcleos gliales de la corteza humana han sido limitados, lo que lleva a una relativa falta de sofisticación en la comprensión de la complejidad de los astrocitos tanto en tejidos normales como enfermos. Para ello, se adaptó un protocolo previamente publicado para aislar poblaciones neuronales humanas utilizando FANS4, y se validó un método para enriquecer para astrocitos (y para progenitores oligodendrogliales) utilizando una combinación de triple anticuerpo, capturando astrocitos tanto en condiciones de reposo comoreactivas 5. Para enriquecer específicamente los astrocitos en la fracción NeuN-, se utilizaron anticuerpos contra uno de los dos factores de transcripción que se sabe que se expresan diferencialmente entre las poblaciones de astrocitos, PAX6 o factor de transcripción SRY-box 9 (SOX9)6,7. PAX6 se expresa altamente durante el desarrollo fetal temprano dentro de progenitores radiales similares a la glía en zonas germinales y contribuye tanto a la neurogénesis como a la gliogénesis 8,9,10,11, así como a la especificación neuronal retiniana12. En el adulto, PAX6 se sobreexpresa diferencialmente en astrocitos humanosen reposo 6 y muestra coexpresión proteica con proteína ácida fibrilar glial (GFAP) en astrocitos tisulares de epilepsia humana13.
Este protocolo describe el aislamiento simultáneo de poblaciones de núcleos neuronales y astrocitos neocorticales por FANS. El tejido postmortem fresco (no fijo) congelado al instante (es decir, fresco congelado) recolectado de la corteza adulta primero se disocia mecánica y químicamente. Después de la lisis y la ultracentrifugación en un gradiente de sacarosa, los componentes citoplasmáticos y extracelulares se descartan mientras que los núcleos se retienen. Los núcleos se etiquetan con anticuerpos nucleares conjugados fluorescentemente correspondientes a los linajes objetivo deseados y se clasifican utilizando FANS. Siguiendo este enfoque, el enriquecimiento de astrocitos se demuestra en las poblaciones PAX6 + NeuN- recolectadas, validado tanto por un panel de qPCR dirigido como por la secuenciación de ARN nuclear aguas abajo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10x PBS pH 7.2</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>70013073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANTI-NEUN ANTIBODY CLONE A60</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB377A5MI</td>
			<td>mouse anti-NeuN conjugated to a fluorescent compound AF555 (excitation, 553 nm; emission, 568 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANTI-OLIG2 ANTIBODY CLONE 211</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MABN50A4MI</td>
			<td>mouse anti-OLIG2 conjugated to a fluorescent compound AF488 (excitation, 499 nm; emission, 520 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP9704-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bright-Line Counting Chamber</td>
			<td>Hausser Scientific</td>
			<td>3110V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Anhydrous</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>C614-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainers, 40 &#181;M</td>
			<td>SP Scienceware</td>
			<td>136800040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (4&#39;,6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Dithiothreitol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>43815-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA Library Kit</td>
			<td>Illumina, Nextera</td>
			<td>FC-121&#8211;1030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse I</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS002139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dounce Tissue Grinder</td>
			<td>WHEATON</td>
			<td>357542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Sorter</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td>BD FACSAria III</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Acetate Tetrahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M13-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAX6 (PAX6/496) - 100 TESTS</td>
			<td>Novus</td>
			<td>NBP234705J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA Clean &#38; Concentrator</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>R1013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap RNase Decontamination Solution</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMARTer Stranded Total RNA-Seq Kit Pico Input Mammalian</td>
			<td>Clontech Laboratories</td>
			<td>635005</td>
			<td>Fragmentation time of 2.5 minutes, as recommended for low RIN RNA values.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose, crystal certified, ACS, 500 mg</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S5500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SW 41 Ti Swinging-Bucket Rotor</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>331362</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl, 1M Solution, pH 8.0, Molecular Biology Grade, Ultrapure</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J22638AE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TritonX-100</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP151-500</td>
			<td>non-ionic surfactant in lysis buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol LS Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10296028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td>reagent for isolation of RNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter Optima XE-100</td>
			<td>A94516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge tubes PP 9/16 X 3-1/2</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>331372</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure Distilled Water (RNAse-, DNAse-free)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10977023</td>
			<td>referred to as distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15576-028</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of adult human astrocyte populations from fresh-frozen cortex using fluorescence-activated nuclei sorting

La complejidad de los astrocitos humanos sigue estando mal definida en el tejido humano primario, requiriendo mejores herramientas para su aislamiento y caracterización molecular. La clasificación de núcleos activados por fluorescencia (FANS) se puede utilizar para aislar y estudiar con éxito las poblaciones de núcleos neuronales humanos (NeuN +) a partir de tejido de archivo congelado, evitando así problemas asociados con el manejo de tejido fresco. Sin embargo, faltan esfuerzos para aislar de manera similar la astroglía del elemento no neuronal (NeuN-). Una estrategia de inmunoetiquetado recientemente desarrollada y validada utiliza tres anticuerpos de factor de transcripción para aislar simultáneamente poblaciones de núcleos neuronales enriquecidos (NeuN+), astrocitos (proteína de caja pareada 6 (PAX6)+NeuN-) y progenitores de oligodendrocitos (OLIG2+NeuN-) de tejido neocórtex temporal humano no enfermo, fresco (no fijo) congelado al instante.
Esta técnica demostró ser útil para la caracterización de alteraciones del transcriptoma específico del tipo celular en neocórtex de epilepsia patológica primaria. Los análisis transcriptómicos confirmaron que las poblaciones clasificadas con PAX6 + NeuN- están sólidamente enriquecidas para marcadores de pan-astrocitos y capturan astrocitos tanto en condiciones de reposo como reactivas. Este artículo describe la metodología FANS para el aislamiento de poblaciones de núcleos enriquecidos con astrocitos de la corteza humana recién congelada, incluida la disociación de tejidos en suspensión de un solo núcleo (sn); inmunoetiquetado de núcleos con anticuerpos conjugados fluorescentemente anti-NeuN y anti-PAX6; Estrategias de cierre de FANS y métricas de control de calidad para optimizar la sensibilidad y la especificidad durante la clasificación y para confirmar el enriquecimiento de astrocitos; y la adquisición recomendada para la secuenciación de la accesibilidad al transcriptoma y la cromatina aguas abajo a resolución masiva o sn. Este protocolo es aplicable para especímenes corticales humanos no necróticos, recién congelados, con diversas patologías y recolección de tejido postmortem recomendada dentro de las 24 h.

Los núcleos se recolectaron a partir de tejido neocorte temporal fresco (no fijo) congelado con un tiempo de recolección postmortem de 12 h. Después de la disociación tisular en suspensión de núcleos, las muestras se incubaron con anticuerpos contra NeuN, PAX6 y OLIG2, y se clasificaron de acuerdo con el cierre que se muestra en la Figura 1 y la Figura 2. Se recolectaron núcleos de poblaciones ordenadas por NeuN+, PAX6+NeuN-, y OLIG2+NeuN- (<strong class=...

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Isolation of Adult Human Astrocyte Populations from Fresh-Frozen Cortex Using Fluorescence-Activated Nuclei Sorting

Hemos desarrollado un método que enriquece y aísla poblaciones de astrocitos humanos a partir de tejido fresco congelado para su uso en análisis moleculares posteriores.

Aislamiento de poblaciones adultas de astrocitos humanos de la corteza recién congelada utilizando la clasificación de núcleos activados por fluorescencia

The complexity of human astrocytes remains poorly defined in primary human tissue, requiring better tools for their isolation and molecular ...

Este protocolo puede ayudar a los científicos que están interesados en estudiar la función molecular de los astrocitos humanos en su nicho nativo. La principal ventaja de esta técnica es que permite el aislamiento y enriquecimiento de un tipo celular específico, astrocitos adultos a partir de muestras de tejido cerebral humano a granel utilizando la clasificación de núcleos activados por fluorescencia. Esta metodología se puede aplicar para aislar otros tipos de células de la neocorteza humana, como las neuronas y las células progenitoras de oligodendrocitos utilizando otros anticuerpos conjugados fluorescentes apropiados.Comience a diseccionar aproximadamente de 200 a 400 miligramos de tejido de una muestra fresca de tejido de corteza adulta humana congelada. Coloque el tejido en un douncer de tejido de vidrio de siete mililitros que contenga cuatro mililitros de tampón de lisis helado sobre hielo y moler el tejido aproximadamente 50 veces. Transfiera el homogeneizado a un tubo de polipropileno ultracentrífuga de 12 mililitros.Use una pipeta de cinco mililitros para agregar 6,5 mililitros de tampón de sacarosa helada al fondo del tubo de la ultracentrífuga sin perturbar la interfaz entre la sacarosa y el homogeneizado del tejido. Para recoger los núcleos, ultracentrifugar el lisado durante una hora a 101, 814 veces G y aspirar cuidadosamente el sobrenadante y los escombros sin perturbar el pellet. Agregue 0.1% BSA en PBS al tubo de la ultracentrífuga durante una incubación de 10 minutos en hielo antes de volver a depositar el pellet de núcleos.Luego, use azul tripano para visualizar los núcleos intactos bajo un microscopio de luz y para asegurarse de que la concentración sea superior a 10 a los quintos núcleos por mililitro Para la clasificación activada por fluorescencia de los núcleos aislados, agregue aproximadamente 20 microlitros de la muestra resuspendida a una solución de anticuerpos que contenga el anticuerpo anti-NeuN conjugado de ratón Alexa fluor 555. Agregue aproximadamente 20 microlitros de la muestra resuspendida a una solución de anticuerpos que contenga anticuerpos anti-PAX6 de ratón conjugados con APC. Después de una incubación de una hora a cuatro grados centígrados con agitación, protegido de la luz, agregue DAPI en una proporción de 1: 1000 a todas las muestras y controles.Para incluir núcleos del tamaño apropiado y para excluir los glóbulos rojos y los desechos, use un tubo de control para cerrar las células por sus áreas de dispersión hacia adelante y hacia los lados. Para seleccionar la población de núcleos singletes, puerta por área de dispersión hacia adelante versus ancho o alto de dispersión hacia adelante y área de dispersión lateral versus ancho o alto de dispersión lateral. Puerta por DAPI para incluir solo los singletes de núcleos intactos y para excluir cualquier escombro y doblete.Después de cerrar de acuerdo con cualquier control de fluorescencia adicional, ejecute la muestra de control solo DAPI. Ejecute el control NeuN Alexa fluor 555-only para determinar el corte para la tinción NeuN-positiva en el canal Alexa fluor 555. Ejecute el control pax6 apc-only para determinar el corte de la tinción PAX6-positiva en el canal APC.Después de que se hayan ejecutado todos los controles, cierre las células NeuN-positivas para recolectar las neuronas y puerta las células PAX6-positivas con la población NeuN-negativa para recolectar los astrocitos. Gate y recolecte cualquier población glial adicional de interés de la población PAX6 negativa NeuN negativa. Para la secuenciación de ARN de un solo núcleo a granel, después de recolectar de 50, 000 a 500, 000 núcleos en PBS suplementado con BSA al 0.04%, agregue dos mililitros de solución de sacarosa, 50 microlitros de cloruro de calcio molar y 30 microlitros de acetato de magnesio monolar a la muestra.Lleve el volumen final de la suspensión hasta 10 mililitros con PBS. Mezclar el contenido del tubo por inversión e incubar la reacción en hielo durante 15 minutos. Granular los núcleos por centrifugación y resuspendir los núcleos en un mililitro de reactivo de extracción de ARN.Luego, vórtice el tubo, congele la muestra en hielo seco y almacene los núcleos a menos 80 grados centígrados. Para la secuenciación de cromatina aceptable para la transposasa de un solo núcleo a granel, recolecte de 50, 000 a 75, 000 núcleos en PBS suplementado con BSA al 0.04% en un tubo de microcentrífuga recubierto con 5% de BSA y congele los núcleos hasta su análisis aguas abajo. Las poblaciones de núcleos progenitores neuronales, de astrocitos y oligodendrocitos se pueden clasificar a partir de una muestra fresca de neocórtex temporal humano postmortem congelado, como se ha demostrado.Los estudios de secuenciación de ARN de un solo núcleo priorizaron aún más PAX6 como un factor de transcripción nuclear expresado diferencialmente en las subpoblaciones de astrocitos adultos protoplásmicos y fibrosos. Después de la clasificación, se pueden caracterizar alteraciones del transcriptoma específico del tipo celular en el neocórtex de epilepsia patológica primaria. En este análisis, los análisis transcriptómicos confirmaron que las poblaciones PAX6 positivas neun-negativas se enriquecieron robustamente para los marcadores de panastrocitos y se agotaron para los marcadores neuronales.La tinción por inmunofluorescencia se puede utilizar para confirmar la colocalización de PAX6 con proteína ácida fibrilar glial en astrocitos corticales humanos. Los intervalos postmortem más cortos se asocian con una mayor recuperación de núcleos intactos a partir de muestras de tejido fresco. Un alto rendimiento de núcleos intactos se puede recuperar del tejido congelado hasta 24 horas después de la autopsia, pero a las 30 horas, se pueden recuperar muy pocos núcleos intactos.Lo más importante a recordar es obtener la población PAX6 positiva de la población NeuN negativa, porque hay neuronas que también expresan PAX6, y queremos excluirlas. Esta técnica también permitió el estudio de astrocitos en muestras cerebrales quirúrgicas de epilepsia, dilucidando aún más la desregulación molecular de los astrocitos humanos en el contexto de un nicho patológico específico.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

An Optimized Procedure for Fluorescence-activated Cell Sorting (FACS) Isolation of Autonomic Neural Progenitors from Visceral Organs of Fetal Mice

An Optimized Procedure for Fluorescence-activated Cell Sorting FACS Isolation of Autonomic Neural Progenitors from Visceral Organs of Fetal Mice

Un procedimiento optimizado para el activado por fluorescencia de células de clasificación (FACS) El aislamiento de progenitores neurales autónomas de los órganos viscerales de los fetos de ratones

During development neural crest (NC)-derived neuronal progenitors migrate away from the neural tube to form autonomic ganglia in visceral organs like the ...

Investigación

Neurociencias

Functional Imaging of Auditory Cortex in Adult Cats using High-field fMRI

Imágenes funcionales de la corteza auditiva en los gatos adultos el uso de alto campo fMRI

Current knowledge of sensory processing in the mammalian auditory system is mainly derived from electrophysiological studies in a variety of animal ...

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El aislamiento de las poblaciones celulares distinto del cerebelo en desarrollo por Microdissection

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Utilizando fluorescencia clasificación de células activadas para examinar Cell-tipo-específica la expresión génica en el tejido de cerebro de rata

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Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) and Gene Expression Analysis of Fos-expressing Neurons from Fresh and Frozen Rat Brain Tissue

Fluorescence Activated Cell Sorting FACS and Gene Expression Analysis of Fos-expressing Neurons from Fresh and Frozen Rat Brain Tissue

La fluorescencia de células activadas (FACS) y análisis de expresión génica de las neuronas que expresan Fos-Fresco y de tejido congelado de cerebro de rata

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Isolation of Adult Spinal Cord Nuclei for Massively Parallel Single-nucleus RNA Sequencing

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Fluorescence-Activated Cell Sorting-Radioligand Treated Tissue FACS-RTT to Determine the Cellular Origin of Radioactive Signal

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