Name: a rat lung transplantation model of warm ischemia/reperfusion injury: optimizations to improve outcomes
Uploaded: 2021-10-28T14:00:00
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Les rats Sprague-Dawley mâles (180 à 270 g de poids corporel) ont été achetés dans le commerce (p. ex. Envigo) et ont été hébergés dans des conditions exemptes d’agents pathogènes à l’installation animalière de l’Ohio State University. Toutes les procédures ont été effectuées sans cruauté conformément au Guide for the Humane Care and Use of Laboratory Animals des NIH et du Conseil national de recherches du Canada et avec l’approbation du Comité institutionnel de soin et d’utilisation des anim...

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	<li>Mizuta, T., Kawaguchi, A., Nakahara, K., Kawashima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+using+a+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation using a cuff technique.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 97 (4), 578-581 (1989).</li><li>Zhai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+by+using+a+modified+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation by using a modified cuff technique.</a> Journal of Investigative Surgery. 21 (1), 33-37 (2008).</li><li>Goto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+using+a+new+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation using a new cuff technique.</a> Annals of Thoracic Surgery. 93 (6), 2078-2080 (2012).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvements+of+surgical+techniques+in+a+rat+model+of+an+orthotopic+single+lung+transplant.">Improvements of surgical techniques in a rat model of an orthotopic single lung transplant.</a> European Journal of Medical Research. 18, 1 (2013).</li><li>Tian, D., Shiiya, H., Sato, M., Nakajima, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+lung+transplantation+model:+modifications+of+the+cuff+technique.">Rat lung transplantation model: modifications of the cuff technique.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (6), 407 (2020).</li><li>Rajab, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anastomotic+techniques+for+rat+lung+transplantation.">Anastomotic techniques for rat lung transplantation.</a> World Journal of Transplantation. 8 (2), 38-43 (2018).</li><li>Reis, A., Giaid, A., Serrick, C., Shennib, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+outcome+of+rat+lung+transplantation+with+modification+of+the+nonsuture+external+cuff+technique.">Improved outcome of rat lung transplantation with modification of the nonsuture external cuff technique.</a> Journal of Heart and Lung Transplantation. 14 (2), 274-279 (1995).</li><li>Sugimoto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+orthotopic+lung+transplantation+model+in+rats+with+cold+storage.">Experimental orthotopic lung transplantation model in rats with cold storage.</a> Surgery Today. 39 (7), 641-645 (2009).</li><li>Santana Rodriguez, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+modifications+of+the+orthotopic+lung+transplantation+model+in+rats+with+brain-dead+donors.">Technical modifications of the orthotopic lung transplantation model in rats with brain-dead donors.</a> Archivos de Bronconeumolog&#237;a. 47 (10), 488-494 (2011).</li><li>Gielis, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+lung+ischemia+and+reperfusion+injury:+tricks+of+the+trade.">A murine model of lung ischemia and reperfusion injury: tricks of the trade.</a> Journal of Surgical Research. 194 (2), 659-666 (2015).</li><li>Rajab, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+lung+transplantation+in+the+rat.">Techniques for lung transplantation in the rat.</a> Experimental Lung Research. 45 (9-10), 267-274 (2019).</li><li>Iskender, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Warm+Versus+Cold+Ischemic+Donor+Lung+Preservation+on+the+Underlying+Mechanisms+of+Injuries+During+Ischemia+and+Reperfusion.">Effects of Warm Versus Cold Ischemic Donor Lung Preservation on the Underlying Mechanisms of Injuries During Ischemia and Reperfusion.</a> Transplantation. 102 (5), 760-768 (2018).</li><li>Lin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Five-year+update+on+the+mouse+model+of+orthotopic+lung+transplantation:+Scientific+uses,+tricks+of+the+trade,+and+tips+for+success.">Five-year update on the mouse model of orthotopic lung transplantation: Scientific uses, tricks of the trade, and tips for success.</a> Journal of Thoracic Disease. 4 (3), 247-258 (2012).</li><li>Song, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+bronchoalveolar+lavage+method+based+on+suction+frequency+number+and+lavage+fraction+number+using+rats.">Standardization of bronchoalveolar lavage method based on suction frequency number and lavage fraction number using rats.</a> Toxicological Research. 26 (3), 203-208 (2010).</li><li>Chang, J. E., Kim, H. J., Yi, E., Jheon, S., Kim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+ischemia-reperfusion+injury+in+a+rat+lung+transplantation+model+by+low-concentration+GV1001.">Reduction of ischemia-reperfusion injury in a rat lung transplantation model by low-concentration GV1001.</a> European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 50 (5), 972-979 (2016).</li><li>De Backer, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+variability+in+upper+and+lower+airway+morphology+in+Sprague-Dawley+rats+using+modern+micro-CT+scan-based+segmentation+techniques.">Study of the variability in upper and lower airway morphology in Sprague-Dawley rats using modern micro-CT scan-based segmentation techniques.</a> Anatomical Record. 292 (5), 720-727 (2009).</li><li>Nelson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+of+isolated+ex+vivo+lung+perfusion+in+a+rat+model:+lessons+learned+from+developing+a+rat+EVLP+program.">Method of isolated ex vivo lung perfusion in a rat model: lessons learned from developing a rat EVLP program.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e52309 (2015).</li><li>Suzuki, H., Fan, L., Wilkes, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+obliterative+bronchiolitis+in+a+murine+model+of+orthotopic+lung+transplantation.">Development of obliterative bronchiolitis in a murine model of orthotopic lung transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3947 (2012).</li><li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+acute+lung+injury+by+targeting+MG53-mediated+cell+membrane+repair.">Treatment of acute lung injury by targeting MG53-mediated cell membrane repair.</a> Nature Communications. 5, 4387 (2014).</li><li>Kim, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pegylated-Catalase+Is+Protective+in+Lung+Ischemic+Injury+and+Oxidative+Stress.">Pegylated-Catalase Is Protective in Lung Ischemic Injury and Oxidative Stress.</a> Annals of Thoracic Surgery. , (2020).</li><li>Beal, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=D-Ala(2),+D-Leu(5)]+Enkephalin+Improves+Liver+Preservation+During+Normothermic+Ex+Vivo+Perfusion.">D-Ala(2), D-Leu(5)] Enkephalin Improves Liver Preservation During Normothermic Ex Vivo Perfusion.</a> Journal of Surgical Research. 241 (2), 323-335 (2019).</li><li>Akateh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrahepatic+Delivery+of+Pegylated+Catalase+Is+Protective+in+a+Rat+Ischemia/Reperfusion+Injury+Model.">Intrahepatic Delivery of Pegylated Catalase Is Protective in a Rat Ischemia/Reperfusion Injury Model.</a> Journal of Surgical Research. 238, 152-163 (2019).</li></ol>

Dans ce rapport, nous sommes intervenus à plusieurs étapes critiques d’un protocole de transplantation pulmonaire de rat afin d’optimiser la procédure. Bien que diverses techniques de brassard pour la transplantation de poumon de rat aient été signalées 1,2,3,4,5,6,7,8,9,15<sup class="xre...

Depuis plus de trois décennies, les chercheurs modifient et améliorent les modèles de transplantation pulmonaire de rats afin que les données générées soient plus cohérentes et reflètent mieux l’état clinique réel. Au cours de la réalisation de ce modèle par notre laboratoire, nous avons déterminé quatre domaines d’amélioration: les techniques de brassard pour les anastomoses, l’identification du 4eespace intercostal du receveur, le gonflage pulmonaire et la fermeture de la plaie pendant la procédure du receveur, et le prélèvement d’échantillons pour analyse.
Les modifications de la technique de brassard pour les anastomoses peuvent améliorer l’ensemble de la procédure de transplantation en raccourcissant le temps de manipulation du poumon donneur 1,2,3,4,5,6 et en rendant la procédure d’anastomose plus rapide et techniquement plus facile pour le microchirurgien. Bien qu’il soit essentiel d’utiliser les brassards de la bonne taille pour fournir le sang et le flux d’air nécessaires au poumon transplanté, il existe peu de directives sur la façon de choisir la taille des brassards pour la veine pulmonaire (PV), l’artère pulmonaire (PA) ou les bronches (Br)5,7,8,9. Étant donné que les diamètres du PV, du PA et du Br sont liés au poids corporel des rats donneurs et receveurs, nous proposons que la taille du brassard soit basée sur le poids corporel. Ce rapport fournit un guide des tailles pour les brassards basé sur le poids corporel du rat (180 g à plus de 270 g) qui sert à optimiser l’apport de sang et d’air au poumon transplanté (tableau 1).
Alors qu’un microchirurgien plus récent peut obtenir avec succès et facilement un poumon de donneur pendant la procédure de donneur, la transplantation du poumon pendant la procédure du receveur est plus compliquée et dépend de l’expérience du microchirurgien. Les tentatives de trouver le 4èmeespace intercostal pour accéder au poumon gauche du receveur est l’une des étapes les plus difficiles qui contient une certaine subjectivité et peut augmenter le temps de procédure. Par conséquent, nous introduisons une méthode simple et objective pour aider à l’identification de la 4ème localisationspatiale intercostale en utilisant les mesures thoraciques et les palpitations du cœur pour trouver la bonne zone de paroi thoracique à disséquer4,5,6,10,11,12.
Nous proposons également une amélioration de l’inflation pulmonaire du donneur, qui est une source potentielle de lésions de l’organe. Le poumon du donneur est dégonflé jusqu’à ce que la reperfusion commence. Lors de la suture du 4èmeespace intercostal, le poumon donneur est généralement gonflé en augmentant la PEP de 2cmH2Oà 6cmH2O. Afin de minimiser les lésions pulmonaires dues au surgonflage, nous proposons une technique où trois sutures en nylon 6-0 sont placées autour de la 4ème côte inférieure à la 5èmecôte avec des doubles nœuds simples. Au moment de la fermeture de la plaie, les extrémités des trois sutures sont maintenues avec des hémostatiques dans les deux mains, la plaie est fermée d’un seul coup en tirant de chaque côté et la PEP est immédiatement réduite à 2 cmH2O. De cette façon, le poumon est autorisé à se dilater le moins longtemps possible10.
À la fin d’une expérience, le chercheur souhaite souvent prélever de nombreux types d’échantillons pour de nombreux types d’analyse de chaque greffe. Par exemple, le tissu congelé à pression, le tissu fixe au formol, le tissu pour le rapport de poids humide à sec pour déterminer l’œdème pulmonaire et le liquide de lavage broncho-alvéolaire (BAL) peuvent tous être utilisés pour évaluer le déroulement de la greffe. La méthode traditionnelle de prélèvement du liquide BAL permet d’obtenir un échantillon mélangé à partir des lobes natifs du receveur et du lobe transplanté du donneur13,14,15. Pour surmonter cela, nous présentons une méthode de serrage des zones hilaires qui peut donner un aperçu plus précis de l’état des poumons transplantés et natifs. De plus, le volume de PBS utilisé pour recueillir le liquide BAL de chaque côté des poumons est important à considérer, car le liquide BAL contient de nombreux facteurs solubles tels que les cytokines et les chimiokines qui sont mesurés par concentration. La normalisation du volume de liquide instillé au volume estimé de la capacité pulmonaire peut aider à la comparaison. Avec quatre lobes du côté droit et un lobe du côté gauche, chacun des cinq lobes du rat a un volume et une surface différents16. Selon une étude antérieure sur la mesure du volume des lobes pulmonaires par Backer et al., du volume total du poumon entier, le volume des lobes droits est de 63% (4400 mm 3) et le lobe gauche est de 37% (2500 mm3). Par conséquent, nous recommandons que le volume de PBS utilisé pour recueillir le liquide BAL soit calculé comme le double du volume courant (7,2 mL/kg) multiplié par 63 % pour le poumon droit et 37 % pour le poumon gauche. En utilisant cette approche, on peut mieux contrôler des variables telles que le poids corporel et le moment10,16.
Dans l’ensemble, dans ce rapport, nous démontrerons quelques modifications au modèle expérimental standard de transplantation pulmonaire de rat qui peuvent rendre la procédure plus efficace et augmenter la capacité de générer des données plus précises et abondantes à partir de chaque expérience.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12 Gauge angio-catheter</td>
			<td>BD</td>
			<td>382277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4251717-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4252586-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4251679-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4252527-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 silk suture</td>
			<td>Surgical Specialties Corp.</td>
			<td>SP116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 nylon suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>S-N618R13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 nylon suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>S-N718SP13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 nylon suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>XXS-N807T6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Spray</td>
			<td>Avrio Health L.P</td>
			<td>UPC 367618160039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clippers</td>
			<td>VWR</td>
			<td>MSPP-023326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo micro dissecting spring scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-5668</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrocautery</td>
			<td>Macan</td>
			<td>MV-7A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotracheal intubation kit</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>ETI-MSE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11027-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsted-mosquito hemostat</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-7112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Fresnius Medical Care</td>
			<td>C504701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>B328446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl Alcohol Swabs</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Hikma Pharmaceuticals PLC</td>
			<td>NDC 0413-9505-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dieffenbach Bulldog Clamp</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>WPI14117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder/Forceps, Curved</td>
			<td>Micrins</td>
			<td>MI1542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder/Forceps, Straight</td>
			<td>Micrins</td>
			<td>MI1540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfadex Plus (Organ Preservation Solution)</td>
			<td>XVIVO Perfusion AB</td>
			<td>REF# 19950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhysioSuite</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>PS-MSTAT-RT</td>
			<td>Used to check SpO2 and heartbeat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractor</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-6560</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>PP Pharmaceuticals LLC</td>
			<td>NDC 63323-186-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SomnoSuite Small Animal Anesthesia System</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SS-MVG-Module</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile&#160; Cotton Gauze Pad</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-415-469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M500-N w/ OHS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas-Tubingen Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15008-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Korn Pharmaceuticals Corp</td>
			<td>NDC 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil Clamp</td>
			<td>Aesculap, Inc</td>
			<td>FT351T</td>
			<td>Used to clamp bronchus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil Clamp</td>
			<td>Aesculap, Inc</td>
			<td>FT261T</td>
			<td>Used to clamp hilum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil Clamp Applicator</td>
			<td>Aesculap, Inc</td>
			<td>FT484T</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rat lung transplantation model of warm ischemia/reperfusion injury: optimizations to improve outcomes

D’après notre expérience avec la transplantation pulmonaire de rat, nous avons trouvé plusieurs domaines d’amélioration. Les informations contenues dans la littérature existante concernant les méthodes de choix des tailles de brassard appropriées pour la veine pulmonaire (PV), l’artère pulmonaire (PA) ou les bronches (Br) sont variées, ce qui fait de la détermination de la taille appropriée de la coiffe pendant la transplantation pulmonaire de rat un exercice d’essais et d’erreurs. En standardisant la technique de brassard pour utiliser le plus petit brassard efficace approprié à la taille du vaisseau ou de la bronche, on peut rendre la procédure de transplantation plus sûre, plus rapide et plus réussie. Étant donné que les diamètres du PV, du PA et du Br sont liés au poids corporel du rat, nous présentons une stratégie pour choisir une taille appropriée à l’aide d’un guide basé sur le poids. Étant donné que le volume pulmonaire est également lié au poids corporel, nous recommandons que cette relation soit également prise en compte lors du choix du volume d’air approprié pour l’inflation pulmonaire du donneur pendant l’ischémie chaude ainsi que pour le volume approprié de PBS à instiller pendant le lavage broncho-alvéolaire (BAL) collecte de liquide. Nous décrivons également des méthodes pour la 4e dissectionspatiale intercostale, la fermeture de la plaie et le prélèvement d’échantillons dans les lobes natifs et transplantés.

Afin de mesurer l’œdème pulmonaire, le rapport de poids humide-sec a été calculé. Le lobe natif du donneur, le lobe transplanté et le lobe natif du receveur ont été prélevés comme décrit dans le protocole et pesés immédiatement pour le poids humide, séchés à 60 °C pendant 48 h, puis pesés à nouveau pour le poids sec. Une augmentation du rapport de poids humide à sec indiquerait un œdème pulmonaire. Nos résultats indiquent que le lobe transplanté a eu une augmentation...

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Ici, nous présentons des optimisations à un modèle de transplantation pulmonaire de rat qui servent à améliorer les résultats. Nous fournissons un guide des tailles pour les brassards basé sur le poids corporel, une stratégie de mesure pour déterminer le 4èmeespace intercostal , et des méthodes de fermeture de la plaie et de collecte de liquide et de tissu BAL (lavage broncho-alvéolaire).

Un modèle de transplantation pulmonaire chez le rat de lésions d’ischémie chaude / reperfusion : optimisations pour améliorer les résultats

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...

Ce protocole identifie quatre domaines clés pour aider à améliorer la méthodologie et avoir une transplantation pulmonaire fiable. La première est une technique de brassard reproductible. Deuxièmement, il faut identifier avec précision et reproductibilité le quatrième espace intercostal, une fermeture complète de la plaie, puis comment récupérer et obtenir des échantillons pour analyse.Ces techniques permettent de développer une méthode fiable de transplantation pulmonaire pour travailler sur les mécanismes moléculaires et développer des interventions thérapeutiques. Commencez par la configuration du dispositif chirurgical en allumant l’équipement de surveillance de la fréquence cardiaque / saturation en oxygène et en réchauffant la planche à 42 degrés Celsius. Allumez également l’appareil de ventilation et d’anesthésie pour préchauffer l’évaporateur d’isoflurane.Remplissez une seringue d’anesthésie avec 10 millilitres d’isoflurane liquide et montez la seringue sur l’appareil de ventilation et d’anesthésie. Ensuite, allumez le microscope chirurgical avec la hauteur et la mise au point ajustées aux préférences et démarrez l’appareil d’électrocautérisation. De même, préparez et disposez les outils chirurgicaux.Déterminez la taille correcte de la jauge de l’angiocathéter à utiliser pour fabriquer les menottes en fonction du poids corporel du rat en vous référant au tableau un. Après avoir préparé les brassards pour l’artère pulmonaire, les bronches et la veine pulmonaire, placez l’angiocathéter de la taille appropriée sur une surface stérile sous le microscope chirurgical. Ensuite, utilisez une lame chirurgicale numéro 11 pour couper l’angio-cathéter à un angle de 90 degrés pour former un corps de brassard de deux millimètres de long avec une largeur et une hauteur d’un millimètre au sommet du corps du brassard.Après avoir préparé l’enveloppement pour la chirurgie, faites une incision cutanée médiane de trois à quatre centimètres de long, mi-cou, avec les ciseaux, et disséquez soigneusement les tissus sous-cutanés et les muscles à l’aide de forceps. Pour l’intubation endotrachéale, enfilez une suture de soie 4-0 autour de la trachée. Ensuite, insérez un angiocathéter de calibre 16 dans la trachée et attachez fermement la suture autour de la trachée avec un double nœud, suivi d’un seul nœud pour maintenir l’angio-cathéter en place.Connectez l’angio-cathéter au ventilateur pour maintenir un plan chirurgical d’anesthésie chez le rat avec 1 à 2% d’isoflurane. Utilisez les ciseaux pour effectuer une laparo-sternotomie, comme une incision médiane et transversale combinée. Ensuite, injectez 1 000 unités par kilogramme d’héparine avec une seringue à insuline via la veine cave inférieure, ou IVC, et attendez 10 minutes pour la circulation systémique.Pendant que les poumons sont ventilés, coupez les oreillettes droite et gauche avec des ciseaux à ressort à microdissection, puis introduisez un angiocathéter de calibre 18 à travers l’artère pulmonaire pour rincer les poumons par gravité avec 20 millilitres de solution de conservation dans une seringue suspendue à 28 centimètres d’eau, reliée au tube et à l’angio-cathéter. Débranchez le ventilateur du tube endotrachéal pour le connecter à une seringue de cinq millilitres remplie d’un volume d’air approprié en fonction du poids corporel. Après une heure d’ischémie chaude, excisez le bloc cœur-poumon avec les ciseaux à ressort et les pinces à microdissection et placez-le sur une gaze stérile imbibée de PBS glacé sur une boîte de Petri stérile sur glace.Coupez soigneusement la zone hilaire du poumon gauche avec des ciseaux à ressort Vannas-Tubingen et procurez-vous la veine pulmonaire gauche, l’artère pulmonaire et les bronches. Utilisez un hémostatique de moustique pour saisir la languette du brassard. Ensuite, prenez l’extrémité distale de la veine pulmonaire, de l’artère pulmonaire ou de la bronche à travers le corps de brassard approprié et inversez le tissu supplémentaire autour du brassard avant de fixer avec 8-0 Suture en nylon.Une fois cela fait, utilisez des ciseaux à ressort Vannas-Tubingen pour couper le tissu supplémentaire et le brassard autour du corps du brassard. Pour préparer le rat receveur, tracez une ligne sur la poitrine du rat de l’encoche suprasternale au processus xiphoïde. Au milieu de cette ligne, tracez une ligne le long du côté gauche de la poitrine qui mesure la moitié de la mesure de l’encoche suprasternale au processus xiphoïde.À l’aide du câble à fibre optique connecté à une lumière LED du kit d’intubation endotrachéale, visualisez et intuberez le receveur avec un angio-cathéter de calibre 16. Une fois les poumons retirés, placez une gaze stérile autour du poumon gauche tout en le tenant avec une pince de bouledogue Dieffenbach et appliquez une pince Yasargil sur la zone hilaire du poumon gauche aussi proximale que possible. Lorsque le rat est préparé, procédez à l’anastomose de la veine pulmonaire en plaçant une suture en nylon 7-0 autour de la veine pulmonaire du receveur.Inciser la veine pulmonaire du receveur à l’aide des ciseaux à ressort Vannas-Tubingen en coupant transversalement les veines segmentaires supérieure et inférieure aussi distalement que possible, et rincer le sang avec 0,2 millilitre d’une unité internationale par millilitre de solution saline héparinée à l’aide d’une seringue à insuline. Placez le poumon du donneur enveloppé d’une gaze glacée, humide et stérile dans la cavité thoracique et insérez la veine pulmonaire brassée du donneur dans la veine pulmonaire du receveur avant de fixer l’anastomose avec la suture en nylon prépositionnée 7-0. Pour l’anastomose bronchique ou bronche, placez une suture en nylon 7-0 autour de la bronche du receveur avant d’inciser la bronche du receveur en coupant transversalement les voies respiratoires segmentaires supérieure et inférieure aussi distalement que possible.Après avoir inséré la bronche brassée du donneur dans la bronche du receveur, fixez l’anastomose avec la suture en nylon prépositionnée 7-0. Ensuite, effectuez l’anastomose de l’artère pulmonaire comme décrit précédemment. Pour permettre la reprofusion et la ventilation du poumon du donneur transplanté, retirez la pince Yasargil sur le hile, puis fermez l’incision de thoracotomie avec une suture en nylon 6-0.Recueillir le liquide BAL des poumons natifs ou transplantés comme vous le souhaitez. Le rapport poids humide/sec des lobes a été calculé pour mesurer l’œdème pulmonaire. Le lobe transplanté a montré une augmentation significative du rapport poids humide / sec par rapport au lobe natif du donneur ou du receveur, indiquant l’absence d’œdème pulmonaire.À notre avis, les deux étapes critiques de cette procédure sont d’une part, utiliser avec précision des repères anatomiques pour identifier le quatrième espace intercostal, puis deux, sélectionner et utiliser de manière appropriée les brassards pour avoir une technique de brassard reproductible. Un modèle de transplantation pulmonaire de rat à la fois reproductible et cohérent est une base pour les études moléculaires sur la reprofusion ischémique et la transplantation en général.

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Medicine

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