Name: a rat lung transplantation model of warm ischemia/reperfusion injury: optimizations to improve outcomes
Uploaded: 2021-10-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes Video at JoVE.com

Никакой.

Самцы крыс Sprague-Dawley (масса тела 180-270 г) были приобретены на коммерческой основе (например, Envigo) и содержались в условиях, свободных от патогенов, в Центре для животных Университета штата Огайо. Все процедуры были гуманно выполнены в соответствии с Руководством NIH и Национального исследова...

<ol>
	<li>Mizuta, T., Kawaguchi, A., Nakahara, K., Kawashima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+using+a+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation using a cuff technique.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 97 (4), 578-581 (1989).</li><li>Zhai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+by+using+a+modified+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation by using a modified cuff technique.</a> Journal of Investigative Surgery. 21 (1), 33-37 (2008).</li><li>Goto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+using+a+new+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation using a new cuff technique.</a> Annals of Thoracic Surgery. 93 (6), 2078-2080 (2012).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvements+of+surgical+techniques+in+a+rat+model+of+an+orthotopic+single+lung+transplant.">Improvements of surgical techniques in a rat model of an orthotopic single lung transplant.</a> European Journal of Medical Research. 18, 1 (2013).</li><li>Tian, D., Shiiya, H., Sato, M., Nakajima, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+lung+transplantation+model:+modifications+of+the+cuff+technique.">Rat lung transplantation model: modifications of the cuff technique.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (6), 407 (2020).</li><li>Rajab, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anastomotic+techniques+for+rat+lung+transplantation.">Anastomotic techniques for rat lung transplantation.</a> World Journal of Transplantation. 8 (2), 38-43 (2018).</li><li>Reis, A., Giaid, A., Serrick, C., Shennib, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+outcome+of+rat+lung+transplantation+with+modification+of+the+nonsuture+external+cuff+technique.">Improved outcome of rat lung transplantation with modification of the nonsuture external cuff technique.</a> Journal of Heart and Lung Transplantation. 14 (2), 274-279 (1995).</li><li>Sugimoto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+orthotopic+lung+transplantation+model+in+rats+with+cold+storage.">Experimental orthotopic lung transplantation model in rats with cold storage.</a> Surgery Today. 39 (7), 641-645 (2009).</li><li>Santana Rodriguez, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+modifications+of+the+orthotopic+lung+transplantation+model+in+rats+with+brain-dead+donors.">Technical modifications of the orthotopic lung transplantation model in rats with brain-dead donors.</a> Archivos de Bronconeumolog&#237;a. 47 (10), 488-494 (2011).</li><li>Gielis, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+lung+ischemia+and+reperfusion+injury:+tricks+of+the+trade.">A murine model of lung ischemia and reperfusion injury: tricks of the trade.</a> Journal of Surgical Research. 194 (2), 659-666 (2015).</li><li>Rajab, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+lung+transplantation+in+the+rat.">Techniques for lung transplantation in the rat.</a> Experimental Lung Research. 45 (9-10), 267-274 (2019).</li><li>Iskender, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Warm+Versus+Cold+Ischemic+Donor+Lung+Preservation+on+the+Underlying+Mechanisms+of+Injuries+During+Ischemia+and+Reperfusion.">Effects of Warm Versus Cold Ischemic Donor Lung Preservation on the Underlying Mechanisms of Injuries During Ischemia and Reperfusion.</a> Transplantation. 102 (5), 760-768 (2018).</li><li>Lin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Five-year+update+on+the+mouse+model+of+orthotopic+lung+transplantation:+Scientific+uses,+tricks+of+the+trade,+and+tips+for+success.">Five-year update on the mouse model of orthotopic lung transplantation: Scientific uses, tricks of the trade, and tips for success.</a> Journal of Thoracic Disease. 4 (3), 247-258 (2012).</li><li>Song, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+bronchoalveolar+lavage+method+based+on+suction+frequency+number+and+lavage+fraction+number+using+rats.">Standardization of bronchoalveolar lavage method based on suction frequency number and lavage fraction number using rats.</a> Toxicological Research. 26 (3), 203-208 (2010).</li><li>Chang, J. E., Kim, H. J., Yi, E., Jheon, S., Kim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+ischemia-reperfusion+injury+in+a+rat+lung+transplantation+model+by+low-concentration+GV1001.">Reduction of ischemia-reperfusion injury in a rat lung transplantation model by low-concentration GV1001.</a> European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 50 (5), 972-979 (2016).</li><li>De Backer, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+variability+in+upper+and+lower+airway+morphology+in+Sprague-Dawley+rats+using+modern+micro-CT+scan-based+segmentation+techniques.">Study of the variability in upper and lower airway morphology in Sprague-Dawley rats using modern micro-CT scan-based segmentation techniques.</a> Anatomical Record. 292 (5), 720-727 (2009).</li><li>Nelson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+of+isolated+ex+vivo+lung+perfusion+in+a+rat+model:+lessons+learned+from+developing+a+rat+EVLP+program.">Method of isolated ex vivo lung perfusion in a rat model: lessons learned from developing a rat EVLP program.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e52309 (2015).</li><li>Suzuki, H., Fan, L., Wilkes, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+obliterative+bronchiolitis+in+a+murine+model+of+orthotopic+lung+transplantation.">Development of obliterative bronchiolitis in a murine model of orthotopic lung transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3947 (2012).</li><li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+acute+lung+injury+by+targeting+MG53-mediated+cell+membrane+repair.">Treatment of acute lung injury by targeting MG53-mediated cell membrane repair.</a> Nature Communications. 5, 4387 (2014).</li><li>Kim, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pegylated-Catalase+Is+Protective+in+Lung+Ischemic+Injury+and+Oxidative+Stress.">Pegylated-Catalase Is Protective in Lung Ischemic Injury and Oxidative Stress.</a> Annals of Thoracic Surgery. , (2020).</li><li>Beal, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=D-Ala(2),+D-Leu(5)]+Enkephalin+Improves+Liver+Preservation+During+Normothermic+Ex+Vivo+Perfusion.">D-Ala(2), D-Leu(5)] Enkephalin Improves Liver Preservation During Normothermic Ex Vivo Perfusion.</a> Journal of Surgical Research. 241 (2), 323-335 (2019).</li><li>Akateh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrahepatic+Delivery+of+Pegylated+Catalase+Is+Protective+in+a+Rat+Ischemia/Reperfusion+Injury+Model.">Intrahepatic Delivery of Pegylated Catalase Is Protective in a Rat Ischemia/Reperfusion Injury Model.</a> Journal of Surgical Research. 238, 152-163 (2019).</li></ol>

В этом отчете мы вмешались на нескольких важных этапах протокола трансплантации легких крысы, чтобы оптимизировать процедуру. Несмотря на то, что сообщалось о различных методах манжеты для трансплантации легких крысы 1,2,3,4,5,6,7,8,9,15<sup cla...

На протяжении более трех десятилетий исследователи модифицировали и улучшали модели трансплантации легких крыс, чтобы полученные данные были более последовательными и более отражали фактическое клиническое состояние. За время работы нашей лаборатории с этой моделью мы определили четыре области улучшения: методы манжеты для анастомозов, идентификация4-го межреберья реципиента, раздувание легких и закрытие раны во время процедуры реципиента, а также сбор образцов для анализа.
Модификации техники манжеты для анастомозов могут улучшить всю процедуру трансплантации, сократив время обработки донорского легкого 1,2,3,4,5,6 и сделав процедуру анастомоза более быстрой и технически простой для микрохирурга. Несмотря на то, что крайне важно использовать манжеты правильного размера для подачи необходимой крови и воздушного потока в трансплантированное легкое, существует ограниченное руководство относительно того, как следует выбирать размер манжет для легочной вены (PV), легочной артерии (PA) или бронха (Br)5,7,8,9. Поскольку диаметры PV, PA и Br связаны с массой тела крыс-доноров и реципиентов, мы предлагаем, чтобы размер манжеты основывался на массе тела. В этом отчете представлено руководство по размеру манжет, основанное на массе тела крысы (от 180 г до более 270 г), которое служит для оптимизации кровоснабжения и подачи воздуха в трансплантированное легкое (таблица 1).
В то время как новый микрохирург может успешно и легко получить донорское легкое во время донорской процедуры, трансплантация легкого во время процедуры реципиента является более сложной и зависит от опыта микрохирурга. Попытки найти4-е межреберье для доступа к левому легкому реципиента являются одним из наиболее сложных шагов, который имеет некоторую субъективность и может увеличить время процедуры. Поэтому мы представляем простой и объективный метод, помогающий определить местоположение4-го межреберья с помощью измерений грудной клетки и сердцебиения, чтобы найти правильную область грудной стенки для рассечения 4,5,6,10,11,12.
Мы также предлагаем улучшить инфляцию донорских легких, которая является потенциальным источником повреждения органа. Донорское легкое сдувается до тех пор, пока не начнется реперфузия. При ушивании4-го межреберья донорское легкое обычно раздувают за счет увеличения PEEP с 2 см H 2 O до6 см H2O. Чтобы свести к минимуму повреждение легких из-за чрезмерного надувания, мы предлагаем технику, при которой три нейлоновых шва 6-0 накладываются вокруг4-го ребра, уступающего5-му ребру, с помощью простых двойных узлов. Когда приходит время закрытия раны, концы трех швов удерживаются гемостатами в обеих руках, рана закрывается сразу, подтягиваясь с каждой стороны, и PEEP немедленно уменьшается до 2 см H2O. Таким образом, легкое может расширяться в течение максимально короткого времени10.
В конце эксперимента исследователь часто хочет собрать много типов образцов для многих типов анализа из каждой трансплантации. Например, замороженная ткань, фиксированная ткань формалина, ткань для соотношения веса влажного и сухого для определения отека легких и жидкость бронхоальвелололярного лаважа (BAL) могут быть использованы для оценки того, насколько хорошо прошла трансплантация. Традиционный метод сбора жидкости BAL позволяет получить смешанный объединенный образец как из родных долей реципиента, так и из трансплантированной доли донора13,14,15. Чтобы преодолеть это, мы представляем метод зажима прикорневых областей, который может дать более точное представление о состоянии трансплантированных и родных легких. Кроме того, важно учитывать объем PBS, используемый для сбора жидкости BAL с каждой стороны легких, поскольку жидкость BAL содержит множество растворимых факторов, таких как цитокины и хемокины, которые измеряются концентрацией. Нормализация объема закапываемой жидкости до предполагаемого объема емкости легких может помочь в сравнении. С четырьмя лепестками с правой стороны и одной долей с левой стороны, каждая из пяти долей крысы имеет разный объем и площадь поверхности16. Согласно предыдущему исследованию по измерению объема долей легких, проведенному Backer et al., из общего объема всего легкого объем правых долей составляет 63% (4400мм3), а левая доля - 37% (2500 мм3). Поэтому мы рекомендуем, чтобы объем PBS, используемый для сбора жидкости BAL, рассчитывался как удвоенный дыхательный объем (7,2 мл / кг), умноженный на 63% для правого легкого и 37% для левого легкого. Используя этот подход, можно лучше контролировать такие переменные, как масса тела и время10,16.
В целом, в этом отчете мы продемонстрируем несколько модификаций стандартной экспериментальной модели трансплантации легких крысы, которые могут сделать процедуру более эффективной и увеличить возможности получения более точных и обильных данных из каждого эксперимента.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12 Gauge angio-catheter</td>
			<td>BD</td>
			<td>382277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4251717-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4252586-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4251679-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4252527-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 silk suture</td>
			<td>Surgical Specialties Corp.</td>
			<td>SP116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 nylon suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>S-N618R13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 nylon suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>S-N718SP13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 nylon suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>XXS-N807T6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Spray</td>
			<td>Avrio Health L.P</td>
			<td>UPC 367618160039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clippers</td>
			<td>VWR</td>
			<td>MSPP-023326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo micro dissecting spring scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-5668</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrocautery</td>
			<td>Macan</td>
			<td>MV-7A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotracheal intubation kit</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>ETI-MSE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11027-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsted-mosquito hemostat</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-7112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Fresnius Medical Care</td>
			<td>C504701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>B328446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl Alcohol Swabs</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Hikma Pharmaceuticals PLC</td>
			<td>NDC 0413-9505-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dieffenbach Bulldog Clamp</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>WPI14117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder/Forceps, Curved</td>
			<td>Micrins</td>
			<td>MI1542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder/Forceps, Straight</td>
			<td>Micrins</td>
			<td>MI1540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfadex Plus (Organ Preservation Solution)</td>
			<td>XVIVO Perfusion AB</td>
			<td>REF# 19950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhysioSuite</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>PS-MSTAT-RT</td>
			<td>Used to check SpO2 and heartbeat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractor</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-6560</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>PP Pharmaceuticals LLC</td>
			<td>NDC 63323-186-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SomnoSuite Small Animal Anesthesia System</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SS-MVG-Module</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile&#160; Cotton Gauze Pad</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-415-469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M500-N w/ OHS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas-Tubingen Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15008-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Korn Pharmaceuticals Corp</td>
			<td>NDC 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil Clamp</td>
			<td>Aesculap, Inc</td>
			<td>FT351T</td>
			<td>Used to clamp bronchus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil Clamp</td>
			<td>Aesculap, Inc</td>
			<td>FT261T</td>
			<td>Used to clamp hilum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil Clamp Applicator</td>
			<td>Aesculap, Inc</td>
			<td>FT484T</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rat lung transplantation model of warm ischemia/reperfusion injury: optimizations to improve outcomes

Исходя из нашего опыта трансплантации легких крыс, мы нашли несколько областей для улучшения. Информация в существующей литературе о методах выбора подходящих размеров манжеты для легочной вены (PV), легочной артерии (PA) или бронха (Br) разнообразна, что делает определение правильного размера манжеты во время трансплантации легких крысы методом проб и ошибок. Стандартизировав технику манжеты, чтобы использовать наименьшую эффективную манжету, соответствующую размеру сосуда или бронха, можно сделать процедуру трансплантации более безопасной, быстрой и успешной. Поскольку диаметры PV, PA и Br связаны с массой тела крысы, мы представляем стратегию выбора подходящего размера с использованием руководства на основе веса. Поскольку объем легких также связан с массой тела, мы рекомендуем учитывать эту взаимосвязь при выборе правильного объема воздуха для надувания донорских легких во время теплой ишемии, а также для правильного объема PBS, который будет закапываться во время сбора жидкости бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ). Описаны методы рассечения4-го межреберья, закрытия раны и забора образцов как из нативных, так и из трансплантированных долей.

Для измерения отека легких было рассчитано отношение массы влажных и сухих веществ. Родную долю донора, трансплантированную долю и родную долю реципиента собирали, как описано в протоколе, и немедленно взвешивали для влажного веса, сушили при 60 ° C в течение 48 часов, а зат...

Watch this Scientific Journal Video about A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes Video at JoVE.com

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes Video (Video) | JoVE

Здесь мы представляем оптимизацию модели трансплантации легких крысы, которая служит для улучшения результатов. Мы предоставляем руководство по размеру манжет на основе массы тела, стратегию измерения для определения4-го межреберья, а также методы закрытия раны и сбора жидкости и тканей BAL (бронхоальвеолярный лаваж).

Модель трансплантации легких крысы при теплой ишемии/реперфузионной травме: оптимизация для улучшения исходов

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...

Этот протокол определяет четыре ключевые области, которые помогут улучшить методологию и обеспечить надежную трансплантацию легких. Во-первых, это воспроизводимая техника манжеты. Во-вторых, это точная и воспроизводимая идентификация четвертого межреберья, тщательное закрытие раны, а затем как восстановить и получить образцы для анализа.Эти методы помогают разработать надежный метод трансплантации легких для работы над молекулярными механизмами и разработки терапевтических вмешательств. Начните с настройки хирургического устройства, включив оборудование для мониторинга частоты сердечных сокращений / насыщения кислородом и прогрев доски до 42 градусов по Цельсию. Кроме того, включите аппарат вентиляции и анестезии, чтобы предварительно разогреть испаритель изофлурана.Наполните анестезиологический шприц 10 миллилитрами жидкого изофлурана и установите шприц на аппарат вентиляции легких и анестезии. Затем включите хирургический микроскоп с высотой и фокусом, отрегулированными в соответствии с предпочтениями, и запустите электрокоагулянт. Точно так же подготовьте и разложите хирургические инструменты.Определите правильный размер ангиокатетера, который будет использоваться для изготовления манжет, исходя из массы тела крысы, обратившись к первой таблице. После подготовки манжет для легочной артерии, бронха и легочной вены поместите ангиокатетер соответствующего размера на стерильную поверхность под хирургическим микроскопом. Затем используйте хирургическое лезвие реберной спинки No 11, чтобы разрезать ангиокатетер под углом 90 градусов, чтобы сформировать корпус манжеты длиной два миллиметра с шириной и высотой в один миллиметр в верхней части корпуса манжеты.После подготовки обертывания к операции сделайте ножницами разрез средней линии кожи на средней линии шеи длиной три-четыре сантиметра и тщательно рассеките подкожные ткани и мышцы с помощью щипцов. Для эндотрахеальной интубации наденьте шелковый шов 4-0 вокруг трахеи. Затем вставьте ангиокатетер 16 калибра в трахею и плотно завяжите шов вокруг трахеи двойным узлом, а затем одним узлом, чтобы удерживать ангиокатетер на месте.Подключите ангиокатетер к аппарату искусственной вентиляции легких для поддержания хирургической плоскости анестезии у крысы с 1-2% изофлурана. Используйте ножницы для выполнения лапаро-стернотомии, как комбинированный срединный и поперечный разрез. Затем введите 1000 единиц гепарина на килограмм инсулиновым шприцем через нижнюю полую вену или IVC и подождите 10 минут для системного кровообращения.Пока легкие вентиляционно, разрежьте правую и левую ушные раковины микрорассекающими пружинными ножницами, а затем введите ангиокатетер 18 калибра через легочную артерию, чтобы гравитационно промыть легкие 20 миллилитрами консервирующего раствора в шприце, подвешенном на 28 сантиметрах воды, соединенном с трубкой и ангиокатетером. Отсоедините аппарат искусственной вентиляции легких от эндотрахеальной трубки, чтобы подключить его к пятимиллилитровому шприцу, наполненному соответствующим объемом воздуха в зависимости от массы тела. После одного часа теплой ишемии иссеките блокаду сердца и легких с помощью микрорассекающих пружинных ножниц и щипцов и поместите на стерильную марлю, смоченную ледяным PBS, на стерильную чашку Петри на льду.Аккуратно обрежьте прикорневую область левого легкого пружинными ножницами Vannas-Tubingen и обработайте левую легочную вену, легочную артерию и бронх. Используйте противомоскитный гемостат, чтобы захватить язычок манжеты. Затем возьмите дистальный конец легочной вены, легочной артерии или бронха через соответствующий корпус манжеты и выверните лишнюю ткань вокруг манжеты, прежде чем закрепить 8-0 нейлоновый шов.После этого используйте пружинные ножницы Vannas-Tubingen, чтобы обрезать лишнюю ткань и манжету вокруг корпуса манжеты. Чтобы подготовить крысу-реципиента, проведите линию на груди крысы от надгрудинной выемки до мечевидного отростка. В середине этой линии проведите линию вдоль левой стороны грудной клетки, которая измеряет половину измерения от надгрудинной выемки до мечевидного отростка.Используя оптоволоконный кабель, подключенный к светодиодной лампе из набора для эндотрахеальной интубации, визуализируйте и интубируйте реципиента с помощью ангиокатетера 16 калибра. После того, как легкие будут вытащены, поместите стерильную марлю вокруг левого легкого, удерживая ее бульдожьим зажимом Диффенбаха, и наложите зажим Ясаргила на прикорневую область левого легкого как можно ближе. Когда крыса будет подготовлена, приступайте к анастомозу легочной вены, наложив нейлоновый шов 7-0 на легочную вену реципиента.Разрезайте легочную вену реципиента с помощью пружинных ножниц Vannas-Tubingen, поперечно разрезав верхнюю и нижнюю сегментарные вены как можно дистальнее, и промойте кровь 0,2 миллилитра одной международной единицы на миллилитр гепаринизированного физиологического раствора с помощью инсулинового шприца. Поместите донорское легкое, обернутое ледяной, влажной, стерильной марлей, в грудную полость и вставьте легочную вену донора с манжетой в легочную вену реципиента, прежде чем закрепить анастомоз с помощью предварительно установленного нейлонового шва 7-0. При анастомозе бронхов или бронхов наложите нейлоновый шов 7-0 на бронх реципиента, прежде чем разрезать бронх реципиента, поперечно разрезая верхнюю и нижнюю сегментарные дыхательные пути как можно дистальнее.После введения донорского бронха в манжету в бронх реципиента закрепите анастомоз предварительно позиционированным нейлоновым швом 7-0. Далее выполняют анастомоз легочной артерии, как описано ранее. Чтобы обеспечить репродуктивную терапию и вентиляцию трансплантированного донорского легкого, снимите зажим Ясаргила на головоломке, а затем закройте торакотомический разрез нейлоновым швом 6-0.Соберите жидкость BAL из нативных или пересаженных легких по желанию. Соотношение влажного и сухого веса долей было рассчитано для измерения отека легких. Трансплантированная доля показала значительное увеличение соотношения влажного и сухого веса по сравнению с родной долей донора или реципиента, что указывает на отсутствие отека легких.По нашему мнению, два важнейших шага этой процедуры заключаются в том, чтобы, во-первых, точно использовать анатомические ориентиры для идентификации четвертого межреберья, а во-вторых, выбрать и соответствующим образом использовать манжеты, чтобы иметь воспроизводимую технику манжеты. Модель трансплантации легких крысы, которая является одновременно воспроизводимой и последовательной, является основой для молекулярных исследований ишемии, репрофузии и трансплантации в целом.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury Video (Video) | JoVE

Нормотермической остановку сердца и сердечно-легочной реанимации: мышиной модели ишемии-реперфузии

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model Video (Video) | JoVE

Трансплантация стволовых клеток в В пробирке Имитация ишемии / реперфузии модели

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury Video (Video) | JoVE

На месте Прямая мышца живота Поперечная мышечно-кожный щитка: крысиной модели реперфузионных повреждений мышечно-кожный ишемии

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice Video (Video) | JoVE

Ишемии-реперфузии Модель острого почечного повреждения и фиброза после травмы у мышей

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery Video (Video) | JoVE

Мышиной модели ишемии миокарда-реперфузии через перевязки левой передней нисходящей артерии

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program Video (Video) | JoVE

Метод Изолированные<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Легких перфузии в крысиной модели: уроки, извлеченные из Разработка EVLP программы Rat

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts Video (Video) | JoVE

Индукция и оценка ишемии-реперфузии в Лангендорфа-перфузии сердца крыс

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury Video (Video) | JoVE

Мышиной модели кишечная ишемия-реперфузии

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure Video (Video) | JoVE

Мышь Модель Ретинального ишемией реперфузии через Elevation внутриглазного давления

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats Video (Video) | JoVE

Оценка коронарного потока резерва после миокарда ишемия Реперфузия у крыс

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...