Name: a rat lung transplantation model of warm ischemia/reperfusion injury: optimizations to improve outcomes
Uploaded: 2021-10-28T14:00:00
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Las ratas Sprague-Dawley macho (180-270 g de peso corporal) se compraron comercialmente (por ejemplo, Envigo) y se alojaron en condiciones libres de patógenos en el Centro de Animales de la Universidad Estatal de Ohio. Todos los procedimientos se realizaron de manera humanitaria de acuerdo con el NIH y la Guía del Consejo Nacional de Investigación para el Cuidado y Uso Humanitario de Animales de Laboratorio y con la aprobación del Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Estatal de Ohio (P...

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	<li>Mizuta, T., Kawaguchi, A., Nakahara, K., Kawashima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+using+a+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation using a cuff technique.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 97 (4), 578-581 (1989).</li><li>Zhai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+by+using+a+modified+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation by using a modified cuff technique.</a> Journal of Investigative Surgery. 21 (1), 33-37 (2008).</li><li>Goto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+using+a+new+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation using a new cuff technique.</a> Annals of Thoracic Surgery. 93 (6), 2078-2080 (2012).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvements+of+surgical+techniques+in+a+rat+model+of+an+orthotopic+single+lung+transplant.">Improvements of surgical techniques in a rat model of an orthotopic single lung transplant.</a> European Journal of Medical Research. 18, 1 (2013).</li><li>Tian, D., Shiiya, H., Sato, M., Nakajima, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+lung+transplantation+model:+modifications+of+the+cuff+technique.">Rat lung transplantation model: modifications of the cuff technique.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (6), 407 (2020).</li><li>Rajab, T. 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F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+lung+ischemia+and+reperfusion+injury:+tricks+of+the+trade.">A murine model of lung ischemia and reperfusion injury: tricks of the trade.</a> Journal of Surgical Research. 194 (2), 659-666 (2015).</li><li>Rajab, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+lung+transplantation+in+the+rat.">Techniques for lung transplantation in the rat.</a> Experimental Lung Research. 45 (9-10), 267-274 (2019).</li><li>Iskender, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Warm+Versus+Cold+Ischemic+Donor+Lung+Preservation+on+the+Underlying+Mechanisms+of+Injuries+During+Ischemia+and+Reperfusion.">Effects of Warm Versus Cold Ischemic Donor Lung Preservation on the Underlying Mechanisms of Injuries During Ischemia and Reperfusion.</a> Transplantation. 102 (5), 760-768 (2018).</li><li>Lin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Five-year+update+on+the+mouse+model+of+orthotopic+lung+transplantation:+Scientific+uses,+tricks+of+the+trade,+and+tips+for+success.">Five-year update on the mouse model of orthotopic lung transplantation: Scientific uses, tricks of the trade, and tips for success.</a> Journal of Thoracic Disease. 4 (3), 247-258 (2012).</li><li>Song, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+bronchoalveolar+lavage+method+based+on+suction+frequency+number+and+lavage+fraction+number+using+rats.">Standardization of bronchoalveolar lavage method based on suction frequency number and lavage fraction number using rats.</a> Toxicological Research. 26 (3), 203-208 (2010).</li><li>Chang, J. E., Kim, H. J., Yi, E., Jheon, S., Kim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+ischemia-reperfusion+injury+in+a+rat+lung+transplantation+model+by+low-concentration+GV1001.">Reduction of ischemia-reperfusion injury in a rat lung transplantation model by low-concentration GV1001.</a> European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 50 (5), 972-979 (2016).</li><li>De Backer, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+variability+in+upper+and+lower+airway+morphology+in+Sprague-Dawley+rats+using+modern+micro-CT+scan-based+segmentation+techniques.">Study of the variability in upper and lower airway morphology in Sprague-Dawley rats using modern micro-CT scan-based segmentation techniques.</a> Anatomical Record. 292 (5), 720-727 (2009).</li><li>Nelson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+of+isolated+ex+vivo+lung+perfusion+in+a+rat+model:+lessons+learned+from+developing+a+rat+EVLP+program.">Method of isolated ex vivo lung perfusion in a rat model: lessons learned from developing a rat EVLP program.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e52309 (2015).</li><li>Suzuki, H., Fan, L., Wilkes, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+obliterative+bronchiolitis+in+a+murine+model+of+orthotopic+lung+transplantation.">Development of obliterative bronchiolitis in a murine model of orthotopic lung transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3947 (2012).</li><li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+acute+lung+injury+by+targeting+MG53-mediated+cell+membrane+repair.">Treatment of acute lung injury by targeting MG53-mediated cell membrane repair.</a> Nature Communications. 5, 4387 (2014).</li><li>Kim, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pegylated-Catalase+Is+Protective+in+Lung+Ischemic+Injury+and+Oxidative+Stress.">Pegylated-Catalase Is Protective in Lung Ischemic Injury and Oxidative Stress.</a> Annals of Thoracic Surgery. , (2020).</li><li>Beal, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=D-Ala(2),+D-Leu(5)]+Enkephalin+Improves+Liver+Preservation+During+Normothermic+Ex+Vivo+Perfusion.">D-Ala(2), D-Leu(5)] Enkephalin Improves Liver Preservation During Normothermic Ex Vivo Perfusion.</a> Journal of Surgical Research. 241 (2), 323-335 (2019).</li><li>Akateh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrahepatic+Delivery+of+Pegylated+Catalase+Is+Protective+in+a+Rat+Ischemia/Reperfusion+Injury+Model.">Intrahepatic Delivery of Pegylated Catalase Is Protective in a Rat Ischemia/Reperfusion Injury Model.</a> Journal of Surgical Research. 238, 152-163 (2019).</li></ol>

En este informe, hemos intervenido en varios pasos críticos en un protocolo de trasplante de pulmón de rata para optimizar el procedimiento. Si bien se han reportado varias técnicas de manguito para el trasplante de pulmón de rata 1,2,3,4,5,6,7,8,9,15<sup clas...

Durante más de tres décadas, los investigadores han estado modificando y mejorando los modelos de trasplante de pulmón de ratas para que los datos generados sean más consistentes y reflejen mejor la condición clínica real. En el tiempo que nuestro laboratorio realiza este modelo, hemos determinado cuatro áreas de mejora: técnicas de manguito para anastomosis, identificación del4º espacio intercostal del receptor, inflado pulmonar y cierre de la herida durante el procedimiento del receptor, y la recolección de muestras para su análisis.
Las modificaciones de la técnica de manguito para anastomosis pueden mejorar todo el procedimiento de trasplante al acortar el tiempo de manipulación del pulmón del donante 1,2,3,4,5,6 y hacer que el procedimiento de anastomosis sea más rápido y técnicamente más fácil para el microcirujano. Si bien es fundamental usar los manguitos del tamaño adecuado para suministrar la sangre y el flujo de aire necesarios al pulmón trasplantado, existe una orientación limitada con respecto a cómo se debe elegir el tamaño de los manguitos para la vena pulmonar (PV), la arteria pulmonar (PA) o el bronquio (Br)5,7,8,9. Dado que los diámetros de PV, PA y Br están relacionados con el peso corporal de las ratas donantes y receptoras, proponemos que el tamaño del manguito se base en el peso corporal. Este informe proporciona una guía de tamaño para los manguitos basada en el peso corporal de una rata (180 g a más de 270 g) que sirve para optimizar el suministro de sangre y aire al pulmón trasplantado (Tabla 1).
Si bien un microcirujano más nuevo puede obtener con éxito y facilidad un pulmón de un donante durante el procedimiento del donante, trasplantar el pulmón durante el procedimiento del receptor es más complicado y depende de la experiencia del microcirujano. Los intentos de encontrar el4º espacio intercostal para acceder al pulmón izquierdo del receptor es uno de los pasos más difíciles que contiene cierta subjetividad y puede aumentar el tiempo del procedimiento. Por lo tanto, introducimos un método simple y objetivo para ayudar en la identificación de la4ª ubicación del espacio intercostal mediante el uso de mediciones de tórax y las palpitaciones del corazón para encontrar el área correcta de la pared torácica para diseccionar 4,5,6,10,11,12.
También proponemos una mejora en la inflación pulmonar del donante, que es una fuente potencial de lesión en el órgano. El pulmón del donante se desinfla hasta que comienza la reperfusión. Al suturar el4º espacio intercostal, el pulmón del donante se infla comúnmente aumentando la PEEP de 2 cmH 2O a 6 cmH2O. Con el fin de minimizar la lesión pulmonar por sobreinflado, proponemos una técnica en la que se colocan tres suturas de nylon 6-0 alrededor de la4ª costilla inferior a la5ª costilla con nudos dobles simples. Cuando llega el momento del cierre de la herida, los extremos de las tres suturas se sostienen con hemostáticos en ambas manos, la herida se cierra de una vez tirando hacia arriba a cada lado y la PEEP se reduce inmediatamente a 2 cmH2O. De esta manera, se permite que el pulmón se expanda durante el menor tiempo posible10.
Al final de un experimento, el investigador a menudo quiere recolectar muchos tipos de muestras para muchos tipos de análisis de cada trasplante. Por ejemplo, el tejido congelado a presión, el tejido fijo de formalina, el tejido para la relación de peso húmedo a seco para determinar el edema pulmonar y el líquido de lavado broncoalvelolar (BAL) se pueden usar para evaluar qué tan bien fue el trasplante. El método tradicional de recolección de líquido BAL permite una muestra combinada mixta tanto de los lóbulos nativos del receptor como del lóbulo trasplantado del donante13,14,15. Para superar esto, presentamos un método de pinzamiento de las áreas hiliares que puede proporcionar una visión más precisa de la condición de los pulmones trasplantados y nativos. Además, es importante considerar el volumen de PBS utilizado para recolectar líquido BAL de cada lado de los pulmones porque el líquido BAL contiene numerosos factores solubles como citoquinas y quimiocinas que se miden por concentración. Normalizar el volumen del líquido instilado al volumen estimado de capacidad pulmonar puede ayudar con la comparación. Con cuatro lóbulos en el lado derecho y un lóbulo en el lado izquierdo, cada uno de los cinco lóbulos de la rata tiene un volumen y área de superficie diferente16. Según un estudio previo sobre la medición del volumen de los lóbulos pulmonares realizado por Backer et al., del volumen total de todo el pulmón el volumen de los lóbulos derechos es del 63% (4400 mm 3) y el lóbulo izquierdo es del 37% (2500 mm3). Por lo tanto, recomendamos que el volumen de PBS utilizado para recolectar líquido BAL se calcule como el doble del volumen corriente (7,2 ml / kg) multiplicado por 63% para el pulmón derecho y 37% para el pulmón izquierdo. Al usar este enfoque, se puede controlar mejor variables como el peso corporal y el tiempo10,16.
En total, en este informe demostraremos algunas modificaciones al modelo experimental estándar de trasplante de pulmón de rata que pueden hacer que el procedimiento sea más eficiente y aumentar la capacidad de generar datos más precisos y abundantes de cada experimento.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12 Gauge angio-catheter</td>
			<td>BD</td>
			<td>382277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4251717-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4252586-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4251679-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4252527-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 silk suture</td>
			<td>Surgical Specialties Corp.</td>
			<td>SP116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 nylon suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>S-N618R13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 nylon suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>S-N718SP13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 nylon suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>XXS-N807T6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Spray</td>
			<td>Avrio Health L.P</td>
			<td>UPC 367618160039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clippers</td>
			<td>VWR</td>
			<td>MSPP-023326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo micro dissecting spring scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-5668</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrocautery</td>
			<td>Macan</td>
			<td>MV-7A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotracheal intubation kit</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>ETI-MSE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11027-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsted-mosquito hemostat</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-7112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Fresnius Medical Care</td>
			<td>C504701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>B328446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl Alcohol Swabs</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Hikma Pharmaceuticals PLC</td>
			<td>NDC 0413-9505-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dieffenbach Bulldog Clamp</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>WPI14117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder/Forceps, Curved</td>
			<td>Micrins</td>
			<td>MI1542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder/Forceps, Straight</td>
			<td>Micrins</td>
			<td>MI1540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfadex Plus (Organ Preservation Solution)</td>
			<td>XVIVO Perfusion AB</td>
			<td>REF# 19950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhysioSuite</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>PS-MSTAT-RT</td>
			<td>Used to check SpO2 and heartbeat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractor</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-6560</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>PP Pharmaceuticals LLC</td>
			<td>NDC 63323-186-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SomnoSuite Small Animal Anesthesia System</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SS-MVG-Module</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile&#160; Cotton Gauze Pad</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-415-469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M500-N w/ OHS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas-Tubingen Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15008-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Korn Pharmaceuticals Corp</td>
			<td>NDC 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil Clamp</td>
			<td>Aesculap, Inc</td>
			<td>FT351T</td>
			<td>Used to clamp bronchus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil Clamp</td>
			<td>Aesculap, Inc</td>
			<td>FT261T</td>
			<td>Used to clamp hilum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil Clamp Applicator</td>
			<td>Aesculap, Inc</td>
			<td>FT484T</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rat lung transplantation model of warm ischemia/reperfusion injury: optimizations to improve outcomes

A partir de nuestra experiencia con el trasplante de pulmón de rata, hemos encontrado varias áreas de mejora. La información en la literatura existente con respecto a los métodos para elegir los tamaños apropiados del manguito para la vena pulmonar (PV), la arteria pulmonar (AP) o el bronquio (Br) es variada, lo que hace que la determinación del tamaño adecuado del manguito durante el trasplante de pulmón de rata sea un ejercicio de prueba y error. Al estandarizar la técnica de manguito para usar el manguito efectivo más pequeño apropiado para el tamaño del vaso o bronquio, se puede hacer que el procedimiento de trasplante sea más seguro, más rápido y más exitoso. Dado que los diámetros de PV, PA y Br están relacionados con el peso corporal de la rata, presentamos una estrategia para elegir un tamaño apropiado utilizando una guía basada en el peso. Dado que el volumen pulmonar también está relacionado con el peso corporal, recomendamos que esta relación también se considere al elegir el volumen adecuado de aire para la inflación pulmonar del donante durante la isquemia caliente, así como para el volumen adecuado de PBS que se instilará durante la recolección de líquido del lavado broncoalveolar (BAL). También describimos métodos para la4ª disección del espacio intercostal, el cierre de la herida y la recolección de muestras de los lóbulos nativos y trasplantados.

Para medir el edema pulmonar, se calculó la relación peso húmedo a seco. El lóbulo nativo del donante, el lóbulo trasplantado y el lóbulo nativo del receptor se recolectaron como se describe en el protocolo y se pesaron inmediatamente para el peso húmedo, se secaron a 60 ° C durante 48 h y luego se pesaron nuevamente para el peso seco. Un aumento de la proporción de peso húmedo a seco sería indicativo de edema pulmonar. Nuestros resultados indican que el lóbulo trasplantado sí tu...

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A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes Video (Video) | JoVE

Aquí, presentamos optimizaciones para un modelo de trasplante de pulmón de rata que sirven para mejorar los resultados. Proporcionamos una guía de tamaño para los puños basada en el peso corporal, una estrategia de medición para determinar el4º espacio intercostal y métodos de cierre de heridas y recolección de líquido y tejido BAL (lavado broncoalveolar).

Un modelo de trasplante de pulmón de rata de lesión por isquemia/reperfusión caliente: optimizaciones para mejorar los resultados

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...

Este protocolo identifica cuatro áreas clave para ayudar a mejorar la metodología y tener un trasplante de pulmón confiable. La primera es una técnica de manguito reproducible. El segundo es identificar de manera precisa y reproducible el cuarto espacio intercostal, un cierre completo de la herida y luego cómo recuperar y obtener muestras para su análisis.Estas técnicas ayudan a desarrollar un método confiable de trasplante de pulmón para trabajar los mecanismos moleculares y desarrollar intervenciones terapéuticas. Comience con la configuración del dispositivo quirúrgico encendiendo el equipo de monitoreo de frecuencia cardíaca / saturación de oxígeno y calentando la placa a 42 grados centígrados. Además, encienda la máquina de ventilación y anestesia para precalentar el evaporador de isoflurano.Llene una jeringa de anestesia con 10 mililitros de isoflurano líquido y monte la jeringa en la máquina de ventilación y anestesia. A continuación, encienda el microscopio quirúrgico con la altura y el enfoque ajustados a las preferencias y encienda el dispositivo de electrocauterio. Del mismo modo, prepare y coloque las herramientas quirúrgicas.Determine el tamaño de calibre correcto del angiocatéter que se utilizará para hacer los manguitos en función del peso corporal de la rata consultando la tabla uno. Después de preparar los manguitos para la arteria pulmonar, el bronquio y la vena pulmonar, coloque el angiocatéter del tamaño apropiado sobre una superficie estéril bajo el microscopio quirúrgico. Luego, use una cuchilla quirúrgica número 11 en la parte posterior de la costilla para cortar el angiocatéter en un ángulo de 90 grados para formar un cuerpo de manguito de dos milímetros de largo con un ancho y altura de un milímetro en la parte superior del cuerpo del manguito.Después de preparar la envoltura para la cirugía, haga una incisión cutánea de tres a cuatro centímetros de largo, en la mitad del cuello, con las tijeras, y diseccione cuidadosamente los tejidos y músculos subcutáneos con fórceps. Para la intubación endotraqueal, enhebra una sutura de seda 4-0 alrededor de la tráquea. Luego, inserte un angiocatéter de calibre 16 en la tráquea y ate la sutura alrededor de la tráquea firmemente con un nudo doble, seguido de un solo nudo para mantener el angiocatéter en su lugar.Conecte el angiocatéter al ventilador para mantener un plano quirúrgico de anestesia en la rata con 1 a 2% de isoflurano. Use las tijeras para realizar una laparoesternotomía, como una incisión combinada de línea media y transversal. Luego, inyecte 1, 000 unidades por kilogramo de heparina con una jeringa de insulina a través de la vena cava inferior, o IVC, y espere 10 minutos para la circulación sistémica.Mientras los pulmones están ventilando, corte las aurículas derecha e izquierda con tijeras de resorte de micro disección y luego introduzca un angiocatéter de calibre 18 a través de la arteria pulmonar para enjuagar los pulmones por gravedad con 20 mililitros de solución de preservación en una jeringa que cuelga a 28 centímetros de agua, conectada al tubo y al angiocatéter. Desconecte el ventilador del tubo endotraqueal para conectarlo a una jeringa de cinco mililitros llena con un volumen adecuado de aire basado en el peso corporal. Después de una hora de isquemia tibia, extirpe el bloqueo corazón-pulmón con las tijeras de resorte y fórceps de micro disección y colóquelo en una gasa estéril humedecida con PBS helado en una placa de Petri estéril sobre hielo.Recorte cuidadosamente el área hiliar del pulmón izquierdo con una tijera de resorte Vannas-Tubingen y obtenga la vena pulmonar izquierda, la arteria pulmonar y el bronquio. Use un hemostático de mosquitos para agarrar la lengüeta del manguito. Luego, tome el extremo distal de la vena pulmonar, la arteria pulmonar o el bronquio a través del cuerpo apropiado del manguito y evert el tejido adicional alrededor del manguito antes de asegurarlo con 8-0 sutura de nylon.Una vez hecho esto, use tijeras de resorte Vannas-Tubingen para recortar el tejido adicional y el manguito alrededor del cuerpo del manguito. Para preparar a la rata receptora, dibuje una línea en el pecho de la rata desde la muesca supraesternal hasta el proceso xifoides. En el centro de esta línea, dibuje una línea a lo largo del lado izquierdo del tórax que mida la mitad de la medición desde la muesca supraesternal hasta el proceso xifoides.Usando el cable de fibra óptica conectado a una luz LED del kit de intubación endotraqueal, visualice e intube al receptor con un angiocatéter de calibre 16. Una vez que se extraigan los pulmones, coloque una gasa estéril alrededor del pulmón izquierdo mientras la sostiene con una pinza de bulldog Dieffenbach y aplique una pinza Yasargil en el área hiliar del pulmón izquierdo lo más proximal posible. Cuando la rata esté preparada, proceda a la anastomosis de la vena pulmonar colocando una sutura de nylon 7-0 alrededor de la vena pulmonar del receptor.Incise la vena pulmonar del receptor con las tijeras de resorte Vannas-Tubingen cortando transversalmente las venas segmentarias superior e inferior lo más distalmente posible, y elimine la sangre con 0,2 mililitros de una unidad internacional por mililitro de solución salina heparinizada con una jeringa de insulina. Coloque el pulmón del donante envuelto con una gasa helada, húmeda y estéril en la cavidad torácica, e inserte la vena pulmonar con manguito del donante en la vena pulmonar del receptor antes de asegurar la anastomosis con la sutura de nylon 7-0 preposicionada. Para la anastomosis bronquial o bronquial, coloque una sutura de nylon 7-0 alrededor del bronquio del receptor antes de incidir el bronquio del receptor cortando transversalmente las vías respiratorias segmentarias superior e inferior lo más distalmente posible.Después de insertar el bronquio esposado del donante en el bronquio del receptor, asegure la anastomosis con la sutura de nylon 7-0 preposicionada. A continuación, realice la anastomosis de la arteria pulmonar como se describió anteriormente. Para permitir la reprofusión y ventilación del pulmón del donante trasplantado, retire la pinza Yasargil en el hilio, seguido de cerrar la incisión de toracotomía con una sutura de nylon 6-0.Recoja el líquido BAL de los pulmones nativos o trasplantados según lo desee. La relación peso húmedo a seco de los lóbulos se calculó para medir el edema pulmonar. El lóbulo trasplantado mostró un aumento significativo en la relación peso húmedo a seco en comparación con el lóbulo nativo del donante o receptor, lo que indica que no hay edema pulmonar.En nuestra opinión, los dos pasos críticos de este procedimiento son uno, usar con precisión puntos de referencia anatómicos para identificar el cuarto espacio intercostal, y luego dos, seleccionar y usar adecuadamente los puños para tener una técnica de manguito reproducible. Un modelo de trasplante de pulmón de rata que sea reproducible y consistente es una base para las investigaciones moleculares sobre la reprofusión de isquemia y el trasplante en general.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury Video (Video) | JoVE

Arresto normotérmica cardiaca y reanimación cardiopulmonar: un modelo de ratón de la lesión por isquemia-reperfusión

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Investigación

Medicina

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

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Trasplante de células madre en un In vitro Simulación de isquemia / reperfusión modelo

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

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In situ recto abdominal transverso colgajo miocutáneo: un modelo de rata de miocutáneo isquemia reperfusión

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

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La isquemia-reperfusión modelo de lesión renal aguda y post lesión fibrosis en ratones

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

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Un modelo murino de isquemia-reperfusión miocárdica lesión a través de la ligadura de la arteria descendente anterior

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program Video (Video) | JoVE

Método de aislados<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Perfusión pulmonar en un modelo de rata: Lecciones Aprendidas de Desarrollo de un Programa EVLP Rata

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts Video (Video) | JoVE

Inducción y Evaluación de la isquemia-reperfusión en perfundidos Langendorff corazones de ratas

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury Video (Video) | JoVE

Modelo murino de isquemia-reperfusión intestinal Lesiones

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure Video (Video) | JoVE

Un modelo murino de isquemia retiniana-reperfusión mediante la elevación de la presión intraocular

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats Video (Video) | JoVE

Evaluación de la Reserva de Flujo Coronario Después de la Reperfusión de Isquemia Miocárdica en Ratas

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...