Name: a rat lung transplantation model of warm ischemia/reperfusion injury: optimizations to improve outcomes
Uploaded: 2021-10-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes Video at JoVE.com

Erkek Sprague-Dawley sıçanları (180-270 g vücut ağırlığı) ticari olarak satın alındı (örneğin, Envigo) ve Ohio State Üniversitesi Hayvan Tesisi'nde patojensiz koşullar altında barındırıldı. Tüm prosedürler, NIH ve Ulusal Araştırma Konseyi'nin Laboratuvar Hayvanlarının İnsancıl Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na göre ve Ohio State Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin (IACUC Protokolü # 2012A00000135-R2) onayıyla insancıl bir şekilde gerçekleştirilmiştir....

<ol>
	<li>Mizuta, T., Kawaguchi, A., Nakahara, K., Kawashima, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+using+a+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation using a cuff technique.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 97 (4), 578-581 (1989).</li><li>Zhai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+by+using+a+modified+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation by using a modified cuff technique.</a> Journal of Investigative Surgery. 21 (1), 33-37 (2008).</li><li>Goto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplified+rat+lung+transplantation+using+a+new+cuff+technique.">Simplified rat lung transplantation using a new cuff technique.</a> Annals of Thoracic Surgery. 93 (6), 2078-2080 (2012).</li><li>Guo, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvements+of+surgical+techniques+in+a+rat+model+of+an+orthotopic+single+lung+transplant.">Improvements of surgical techniques in a rat model of an orthotopic single lung transplant.</a> European Journal of Medical Research. 18, 1 (2013).</li><li>Tian, D., Shiiya, H., Sato, M., Nakajima, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+lung+transplantation+model:+modifications+of+the+cuff+technique.">Rat lung transplantation model: modifications of the cuff technique.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (6), 407 (2020).</li><li>Rajab, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anastomotic+techniques+for+rat+lung+transplantation.">Anastomotic techniques for rat lung transplantation.</a> World Journal of Transplantation. 8 (2), 38-43 (2018).</li><li>Reis, A., Giaid, A., Serrick, C., Shennib, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+outcome+of+rat+lung+transplantation+with+modification+of+the+nonsuture+external+cuff+technique.">Improved outcome of rat lung transplantation with modification of the nonsuture external cuff technique.</a> Journal of Heart and Lung Transplantation. 14 (2), 274-279 (1995).</li><li>Sugimoto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+orthotopic+lung+transplantation+model+in+rats+with+cold+storage.">Experimental orthotopic lung transplantation model in rats with cold storage.</a> Surgery Today. 39 (7), 641-645 (2009).</li><li>Santana Rodriguez, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+modifications+of+the+orthotopic+lung+transplantation+model+in+rats+with+brain-dead+donors.">Technical modifications of the orthotopic lung transplantation model in rats with brain-dead donors.</a> Archivos de Bronconeumolog&#237;a. 47 (10), 488-494 (2011).</li><li>Gielis, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+lung+ischemia+and+reperfusion+injury:+tricks+of+the+trade.">A murine model of lung ischemia and reperfusion injury: tricks of the trade.</a> Journal of Surgical Research. 194 (2), 659-666 (2015).</li><li>Rajab, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+lung+transplantation+in+the+rat.">Techniques for lung transplantation in the rat.</a> Experimental Lung Research. 45 (9-10), 267-274 (2019).</li><li>Iskender, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Warm+Versus+Cold+Ischemic+Donor+Lung+Preservation+on+the+Underlying+Mechanisms+of+Injuries+During+Ischemia+and+Reperfusion.">Effects of Warm Versus Cold Ischemic Donor Lung Preservation on the Underlying Mechanisms of Injuries During Ischemia and Reperfusion.</a> Transplantation. 102 (5), 760-768 (2018).</li><li>Lin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Five-year+update+on+the+mouse+model+of+orthotopic+lung+transplantation:+Scientific+uses,+tricks+of+the+trade,+and+tips+for+success.">Five-year update on the mouse model of orthotopic lung transplantation: Scientific uses, tricks of the trade, and tips for success.</a> Journal of Thoracic Disease. 4 (3), 247-258 (2012).</li><li>Song, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+bronchoalveolar+lavage+method+based+on+suction+frequency+number+and+lavage+fraction+number+using+rats.">Standardization of bronchoalveolar lavage method based on suction frequency number and lavage fraction number using rats.</a> Toxicological Research. 26 (3), 203-208 (2010).</li><li>Chang, J. E., Kim, H. J., Yi, E., Jheon, S., Kim, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+ischemia-reperfusion+injury+in+a+rat+lung+transplantation+model+by+low-concentration+GV1001.">Reduction of ischemia-reperfusion injury in a rat lung transplantation model by low-concentration GV1001.</a> European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 50 (5), 972-979 (2016).</li><li>De Backer, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+variability+in+upper+and+lower+airway+morphology+in+Sprague-Dawley+rats+using+modern+micro-CT+scan-based+segmentation+techniques.">Study of the variability in upper and lower airway morphology in Sprague-Dawley rats using modern micro-CT scan-based segmentation techniques.</a> Anatomical Record. 292 (5), 720-727 (2009).</li><li>Nelson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+of+isolated+ex+vivo+lung+perfusion+in+a+rat+model:+lessons+learned+from+developing+a+rat+EVLP+program.">Method of isolated ex vivo lung perfusion in a rat model: lessons learned from developing a rat EVLP program.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e52309 (2015).</li><li>Suzuki, H., Fan, L., Wilkes, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+obliterative+bronchiolitis+in+a+murine+model+of+orthotopic+lung+transplantation.">Development of obliterative bronchiolitis in a murine model of orthotopic lung transplantation.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3947 (2012).</li><li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+acute+lung+injury+by+targeting+MG53-mediated+cell+membrane+repair.">Treatment of acute lung injury by targeting MG53-mediated cell membrane repair.</a> Nature Communications. 5, 4387 (2014).</li><li>Kim, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pegylated-Catalase+Is+Protective+in+Lung+Ischemic+Injury+and+Oxidative+Stress.">Pegylated-Catalase Is Protective in Lung Ischemic Injury and Oxidative Stress.</a> Annals of Thoracic Surgery. , (2020).</li><li>Beal, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=D-Ala(2),+D-Leu(5)]+Enkephalin+Improves+Liver+Preservation+During+Normothermic+Ex+Vivo+Perfusion.">D-Ala(2), D-Leu(5)] Enkephalin Improves Liver Preservation During Normothermic Ex Vivo Perfusion.</a> Journal of Surgical Research. 241 (2), 323-335 (2019).</li><li>Akateh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrahepatic+Delivery+of+Pegylated+Catalase+Is+Protective+in+a+Rat+Ischemia/Reperfusion+Injury+Model.">Intrahepatic Delivery of Pegylated Catalase Is Protective in a Rat Ischemia/Reperfusion Injury Model.</a> Journal of Surgical Research. 238, 152-163 (2019).</li></ol>

Bu yazıda, prosedürü optimize etmek için bir sıçan akciğer nakli protokolünde birkaç kritik adımda müdahale ettik. Sıçan akciğer transplantasyonu için çeşitli kelepçeleme teknikleri bildirilmiş olsa da 1,2,3,4,5,6,7,8,9,15, mikrocerrahlar için işlem hala öznel ve zor olabilir.<sup class="xref...

Otuz yılı aşkın bir süredir, araştırmacılar sıçan akciğer nakli modellerini değiştirmekte ve geliştirmektedir, böylece üretilen veriler daha tutarlı ve gerçek klinik durumu daha yansıtmaktadır. Laboratuvarımızın bu modeli uyguladığı dönemde, dört iyileştirme alanı belirledik: anastomozlar için kelepçeleme teknikleri, alıcının 4. interkostal boşluğunun tanımlanması, alıcının prosedürü sırasında akciğer şişirmesi ve yara kapanması ve analiz için örneklerin toplanması.
Anastomozlar için kelepçeleme tekniği modifikasyonları, donör akciğerin 1,2,3,4,5,6 işlem süresini kısaltarak ve anastomoz prosedürünü mikrocerrah için daha hızlı ve teknik olarak daha kolay hale getirerek tüm transplantasyon prosedürünü iyileştirebilir. Nakledilen akciğere gerekli kan ve hava akışını sağlamak için uygun boyutta manşetlerin kullanılması kritik olmakla birlikte, pulmoner ven (PV), pulmoner arter (PA) veya bronş (Br) için manşetlerin boyutunun nasıl seçilmesi gerektiği konusunda sınırlı rehberlik vardır5,7,8,9. PV, PA ve Br'nin çapları donör ve alıcı sıçanların vücut ağırlığı ile ilişkili olduğundan, manşet boyutunun vücut ağırlığına dayanmasını öneriyoruz. Bu rapor, nakledilen akciğere kan ve hava beslemesini optimize etmeye yarayan bir sıçanın vücut ağırlığına (180 g ila 270 g'ın üzerinde) dayanan manşetler için bir boyut kılavuzu sunmaktadır (Tablo 1).
Yeni bir mikrocerrah, donör prosedürü sırasında bir donör akciğeri başarılı ve kolay bir şekilde temin edebilirken, alıcının prosedürü sırasında akciğerin nakli daha karmaşıktır ve mikrocerrahın deneyimine bağlıdır. Alıcının sol akciğerine erişmek için 4. interkostal boşluğu bulma girişimleri, biraz öznellik taşıyan ve işlem süresini artırabilen daha zor adımlardan biridir. Bu nedenle, göğüs ölçümlerini vekalbin çarpıntılarını kullanarak 4. interkostal boşluk yerinin belirlenmesine yardımcı olacak basit ve objektif bir yöntem sunarak 4,5,6,10,11,12 diseke edilecek doğru alanı göğüs duvarını bulmayı amaçlıyoruz.
Ayrıca, organda potansiyel bir yaralanma kaynağı olan donör akciğer enflasyonunda bir iyileşme öneriyoruz. Donör akciğer, reperfüzyon başlayana kadar söndürülür. 4. interkostal boşluğu dikerken, donör akciğer genellikle PEEP'i 2 cmH 2 O'dan 6 cmH2O'ya yükselterek şişirilir. Aşırı enflasyondan kaynaklanan akciğer hasarını en aza indirmek için, basit çift düğümlü 4. kaburganın 5. kaburganın altına üç adet 6-0 naylon dikişin yerleştirildiği bir teknik öneriyoruz. Yara kapanma zamanı geldiğinde, üç dikişin uçları her iki elde hemostatlarla tutulur, yara her iki taraftan yukarı çekilerek bir kerede kapatılır ve PEEP hemen 2 cmH2O'ya düşürülür. Bu şekilde, akciğerin mümkün olan en kısa sürede genişlemesine izin verilir10.
Bir deneyin sonunda, araştırmacı genellikle her nakilden birçok analiz türü için birçok örnek türü toplamak ister. Örneğin, dondurulmuş doku, formalin sabit dokusu, pulmoner ödemi belirlemek için ıslak-kuru ağırlık oranı için doku ve bronkoalveloler lavaj (BAL) sıvısı, naklin ne kadar iyi gittiğini değerlendirmek için kullanılabilir. BAL sıvısını toplamanın geleneksel yöntemi, hem alıcının doğal loblarından hem de donörün nakledilen lobundan13,14,15 karışık bir havuzlanmış numuneye izin verir. Bunun üstesinden gelmek için, nakledilen ve doğal akciğerlerin durumu hakkında daha kesin bir fikir verebilecek hilar alanları sıkıştırmak için bir yöntem sunuyoruz. Ek olarak, akciğerlerin her iki tarafından BAL sıvısını toplamak için kullanılan PBS'nin hacmi dikkate alınması önemlidir, çünkü BAL sıvısı, konsantrasyonla ölçülen sitokinler ve kemokinler gibi çok sayıda çözünür faktör içerir. Akciğer kapasitesinin tahmini hacmine aşılanan sıvının hacmini normalleştirmek, karşılaştırmaya yardımcı olabilir. Sağ tarafta dört lob ve sol tarafta bir lob ile, sıçanın beş lobunun her biri farklı bir hacme ve yüzey alanına sahiptir16. Backer ve ark. tarafından akciğer loblarının hacim ölçümü üzerine yapılan önceki bir araştırmaya göre, tüm akciğerin toplam hacminin sağ loblarının hacmi% 63 (4400 mm 3) ve sol lob% 37'dir (2500 mm3). Bu nedenle, BAL sıvısını toplamak için kullanılan PBS hacminin, sağ akciğer için% 63 ve sol akciğer için% 37 ile çarpılan tidal hacmin (7.2 mL / kg) iki katı olarak hesaplanmasını öneririz. Bu yaklaşımı kullanarak, vücut ağırlığı ve zamanlama10,16 gibi değişkenleri daha iyi kontrol edebilirsiniz.
Sonuçta, bu raporda, sıçan akciğer transplantasyonunun standart deneysel modelinde, prosedürü daha verimli hale getirebilecek ve her deneyden daha doğru ve bol miktarda veri üretme yeteneğini artırabilecek birkaç değişiklik göstereceğiz.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12 Gauge angio-catheter</td>
			<td>BD</td>
			<td>382277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4251717-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4252586-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4251679-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 Gauge angio-catheter</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4252527-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 silk suture</td>
			<td>Surgical Specialties Corp.</td>
			<td>SP116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 nylon suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>S-N618R13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 nylon suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>S-N718SP13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 nylon suture</td>
			<td>AD Surgical</td>
			<td>XXS-N807T6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Spray</td>
			<td>Avrio Health L.P</td>
			<td>UPC 367618160039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clippers</td>
			<td>VWR</td>
			<td>MSPP-023326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo micro dissecting spring scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-5668</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrocautery</td>
			<td>Macan</td>
			<td>MV-7A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotracheal intubation kit</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>ETI-MSE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11027-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsted-mosquito hemostat</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-7112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Fresnius Medical Care</td>
			<td>C504701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>B328446</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl Alcohol Swabs</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Hikma Pharmaceuticals PLC</td>
			<td>NDC 0413-9505-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dieffenbach Bulldog Clamp</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>WPI14117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder/Forceps, Curved</td>
			<td>Micrins</td>
			<td>MI1542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder/Forceps, Straight</td>
			<td>Micrins</td>
			<td>MI1540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfadex Plus (Organ Preservation Solution)</td>
			<td>XVIVO Perfusion AB</td>
			<td>REF# 19950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhysioSuite</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>PS-MSTAT-RT</td>
			<td>Used to check SpO2 and heartbeat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractor</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co</td>
			<td>RS-6560</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>PP Pharmaceuticals LLC</td>
			<td>NDC 63323-186-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SomnoSuite Small Animal Anesthesia System</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SS-MVG-Module</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile&#160; Cotton Gauze Pad</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-415-469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M500-N w/ OHS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 5mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>309646</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas-Tubingen Spring Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15008-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Korn Pharmaceuticals Corp</td>
			<td>NDC 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil Clamp</td>
			<td>Aesculap, Inc</td>
			<td>FT351T</td>
			<td>Used to clamp bronchus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil Clamp</td>
			<td>Aesculap, Inc</td>
			<td>FT261T</td>
			<td>Used to clamp hilum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil Clamp Applicator</td>
			<td>Aesculap, Inc</td>
			<td>FT484T</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rat lung transplantation model of warm ischemia/reperfusion injury: optimizations to improve outcomes

Sıçan akciğer nakli ile ilgili deneyimlerimizden, iyileştirilmesi gereken birkaç alan bulduk. Pulmoner ven (PV), pulmoner arter (PA) veya bronş (Br) için uygun manşet boyutlarını seçme yöntemlerine ilişkin mevcut literatürdeki bilgiler çeşitlidir, bu nedenle sıçan akciğer transplantasyonu sırasında uygun manşet boyutunun belirlenmesi deneme yanılma egzersizi haline getirilmiştir. Kelepçeleme tekniğini, damarın veya bronşun boyutuna uygun en küçük etkili manşeti kullanacak şekilde standartlaştırarak, transplantasyon prosedürünü daha güvenli, daha hızlı ve daha başarılı hale getirebiliriz. PV, PA ve Br'nin çapları sıçanın vücut ağırlığı ile ilişkili olduğundan, ağırlığa dayalı bir kılavuz kullanarak uygun bir boyut seçmek için bir strateji sunuyoruz. Akciğer hacmi vücut ağırlığı ile de ilişkili olduğundan, sıcak iskemi sırasında donör akciğer enflasyonu için uygun hava hacmini seçerken ve bronkoalveoler lavaj (BAL) sıvı toplanması sırasında aşılanacak uygun PBS hacmi için bu ilişkinin de göz önünde bulundurulmasını öneririz. Ayrıca 4. interkostal boşluk diseksiyonu, yara kapatma ve hem doğal hem de transplante loblardan örnek toplama yöntemlerini de tanımladık.

Pulmoner ödemi ölçmek için ıslak-kuru ağırlık oranı hesaplandı. Donörün doğal lobu, nakledilen lob ve alıcının doğal lobu protokolde açıklandığı gibi toplandı ve ıslak ağırlık için hemen tartıldı, 48 saat boyunca 60 ° C'de kurutuldu ve daha sonra kuru ağırlık için tekrar tartıldı. Islak-kuru ağırlık oranının artması, pulmoner ödemin göstergesi olacaktır. Sonuçlarımız, nakledilen lobun ıslak-kuru ağırlık oranında donörün veya alıcının ...

Watch this Scientific Journal Video about A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes Video at JoVE.com

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes Video (Video) | JoVE

Burada, sonuçları iyileştirmeye hizmet eden bir sıçan akciğer nakli modeline optimizasyonlar sunuyoruz. Vücut ağırlığına göre manşetler için bir boyut kılavuzu, 4. interkostal boşluğu belirlemek için bir ölçüm stratejisi ve yara kapatma ve BAL (bronkoalveoler lavaj) sıvı ve doku toplama yöntemleri sunuyoruz.

Sıcak iskemi / reperfüzyon hasarının bir sıçan akciğer transplantasyon modeli: sonuçları iyileştirmek için optimizasyonlar

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...

Bu protokol, metodolojinin geliştirilmesine yardımcı olmak ve güvenilir akciğer transplantasyonuna sahip olmak için dört temel alanı tanımlamaktadır. Birincisi, tekrarlanabilir bir kelepçeleme tekniğidir. İkincisi, dördüncü interkostal boşluğun, yaranın tamamen kapatılmasının ve daha sonra analiz için numunelerin nasıl geri kazanılacağı ve elde edileceğinin doğru ve tekrarlanabilir bir şekilde tanımlanmasıdır.Bu teknikler, moleküler mekanizmalar üzerinde çalışmak ve terapötik müdahaleler geliştirmek için güvenilir bir akciğer nakli yöntemi geliştirilmesine yardımcı olur. Kalp atış hızı/oksijen doygunluğu izleme ekipmanını açarak ve kartı 42 santigrat dereceye kadar ısıtarak cerrahi cihaz kurulumuna başlayın. Ayrıca, izofluran evaporatörünü önceden ısıtmak için havalandırma ve anestezi makinesini açın.Bir anestezi şırıngasını 10 mililitre sıvı izofluran ile doldurun ve şırıngayı havalandırma ve anestezi makinesine monte edin. Ardından, cerrahi mikroskobu tercihlere göre ayarlanmış yükseklik ve odak ile açın ve elektrokoter cihazını başlatın. Aynı şekilde, cerrahi aletleri hazırlayın ve yerleştirin.Birinci tabloya başvurarak sıçanın vücut ağırlığına göre manşetleri yapmak için kullanılacak anjiyo-kateterin doğru ölçer boyutunu belirleyin. Pulmoner arter, bronş ve pulmoner ven için manşetleri hazırladıktan sonra, uygun boyuttaki anjiyo-kateteri cerrahi mikroskop altında steril bir yüzeye yerleştirin. Daha sonra, manşet gövdesinin tepesinde bir milimetre genişliğinde ve yüksekliğinde iki milimetre uzunluğunda bir manşet gövdesi oluşturmak için anjiyo-kateteri 90 derecelik bir açıyla kesmek için 11 numaralı bir kaburga sırtı cerrahi bıçak kullanın.Ameliyat için sargıyı hazırladıktan sonra, makasla üç ila dört santimetre uzunluğunda orta hat cilt kesisi, orta boyun yapın ve forseps kullanarak deri altı dokuları ve kasları dikkatlice inceleyin. Endotrakeal entübasyon için, trakea etrafına 4-0 ipek bir dikiş ipliği yerleştirin. Daha sonra, trakeaya 16 gauge anjiyo-kateter yerleştirin ve dikişi trakea etrafına çift düğümle sıkıca bağlayın, ardından anjiyo-kateteri yerinde tutmak için tek bir düğümle takip edin.Sıçanda% 1 ila% 2 izofluran ile cerrahi bir anestezi düzlemini korumak için anjiyo-kateteri ventilatöre bağlayın. Makası laparo-sternotomi, kombine orta hat ve enine insizyon olarak kullanın. Daha sonra, inferior vena kava veya IVC yoluyla bir insülin şırıngası ile kilogram heparin başına 1.000 ünite enjekte edin ve sistemik dolaşım için 10 dakika bekleyin.Akciğerler havalandırılırken, sağ ve sol kulak kepçelerini mikro diseksiyon yay makası ile kesin ve daha sonra pulmoner arterden yerçekimine 18 gauge anjiyo-kateter sokun, akciğerleri 28 santimetre suda asılı bir şırıngada 20 mililitre koruma çözeltisi ile yıkayın, tüpe ve anjiyo-katetere bağlı. Vücut ağırlığına bağlı olarak uygun miktarda hava ile doldurulmuş beş mililitrelik bir şırıngaya bağlanmak için ventilatörün endotrakeal tüpten bağlantısını kesin. Sıcak iskemiden bir saat sonra, kalp-akciğer bloğunu mikro diseksiyon yay makası ve forseps ile eksize edin ve buz üzerinde steril bir Petri kabı üzerinde buz gibi soğuk PBS ile nemlendirilmiş steril bir gazlı bez üzerine yerleştirin.Sol akciğer hilar bölgesini Vannas-Tübingen yay makası ile dikkatlice kesin ve sol pulmoner ven, pulmoner arter ve bronşu temin edin. Manşet tırnağını kapmak için bir sivrisinek hemostatı kullanın. Daha sonra, pulmoner venin, pulmoner arterin veya bronşun distal ucunu uygun manşet gövdesinden alın ve 8-0 ile sabitlemeden önce manşetin etrafındaki ekstra dokuyu aşındırın naylon dikiş.İşiniz bittiğinde, ekstra dokuyu ve manşet gövdesinin etrafındaki manşeti kesmek için Vannas-Tubingen yay makası kullanın. Alıcı sıçanı hazırlamak için, sıçanın göğsüne suprasternal çentikten ksifoid sürece kadar bir çizgi çizin. Bu çizginin ortasında, göğsün sol tarafı boyunca, ölçümün yarısını suprasternal çentikten ksifoid sürece kadar ölçen bir çizgi çizin.Endotrakeal entübasyon kitinden bir LED ışığına bağlı fiber optik kabloyu kullanarak, alıcıyı 16 gauge anjiyo-kateter ile görselleştirin ve entübe edin. Akciğerler dışarı çekildikten sonra, Dieffenbach bulldog kelepçesi ile tutarken sol akciğerin etrafına steril bir gazlı bez yerleştirin ve sol akciğer hiler bölgesine mümkün olduğunca yakın bir Yasargil kelepçesi uygulayın. Sıçan hazırlandığında, alıcının pulmoner veninin etrafına 7-0 naylon sütür yerleştirerek pulmoner ven anastomozuna devam edin.Üst ve alt segmental damarları mümkün olduğunca distal olarak enine keserek Vannas-Tübingen yay makası kullanarak alıcının pulmoner venini kesin ve bir insülin şırıngası kullanarak mililitre heparinize salin başına 0.2 mililitre bir uluslararası birim ile kanı temizleyin. Donör akciğerini buz gibi soğuk, ıslak, steril bir gazlı bezle sarılmış olarak göğüs boşluğuna yerleştirin ve anastomozu önceden konumlandırılmış 7-0 naylon sütür ile sabitlemeden önce donörün kelepçeli pulmoner damarını alıcının pulmoner damarına yerleştirin. Bronşiyal veya bronş anastomozu için, üst ve alt segmental hava yollarını mümkün olduğunca distal olarak enine keserek alıcının bronşunu kesmeden önce alıcının bronşunun etrafına 7-0 naylon bir sütür yerleştirin.Donörün kelepçeli bronşunu alıcının bronşuna yerleştirdikten sonra, anastomozu önceden konumlandırılmış 7-0 naylon dikiş ile sabitleyin. Daha sonra, pulmoner arter anastomozunu daha önce açıklandığı gibi gerçekleştirin. Nakledilen donör akciğerin reprofüzyonuna ve ventilasyonuna izin vermek için, hilum üzerindeki Yaşargil kelepçesini çıkarın, ardından torakotomi insizyonunu 6-0 naylon bir dikişle kapatın.BAL sıvısını doğal veya nakledilen akciğerlerden istediğiniz gibi toplayın. Pulmoner ödemi ölçmek için lobların ıslak-kuru ağırlık oranı hesaplandı. Nakledilen lob, donörün veya alıcının doğal lobuna kıyasla ıslak-kuru ağırlık oranında önemli bir artış gösterdi ve pulmoner ödem olmadığını gösterdi.Bize göre, bu prosedürün iki kritik adımı bir, dördüncü interkostal boşluğu tanımlamak için anatomik işaretleri doğru bir şekilde kullanmak ve daha sonra iki, tekrarlanabilir bir kelepçeleme tekniğine sahip olmak için manşetleri seçmek ve uygun şekilde kullanmaktır. Hem tekrarlanabilir hem de tutarlı bir sıçan akciğer nakli modeli, genel olarak iskemi reprofüzyonu ve transplantasyonuna yönelik moleküler araştırmalar için bir temeldir.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury Video (Video) | JoVE

Normotermik Kardiyak Arrest ve Kardiyopulmoner Resusitasyon: İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model Video (Video) | JoVE

Bir Kök Hücre Nakli In vitro Simüle İskemi / Reperfüzyon Modeli

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury Video (Video) | JoVE

Miyokutanöz İskemi Reperfüzyon Hasarı Rat Modeli: in situ Enine Rektus abdominis kas deri Flap

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice Video (Video) | JoVE

Farelerde Akut Böbrek Hasarı ve Post Yaralanma Fibrozis iskemi-reperfüzyon Model

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery Video (Video) | JoVE

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program Video (Video) | JoVE

İzole Yöntemi<em&gt; Ex vivo</emBir Rat Modelinde&gt; Akciğer Perfüzyon: Sıçan EVLP Programı Geliştirme Öğrenilmiş Dersler

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts Video (Video) | JoVE

Langendorff-perfüze sıçan Hearts indüksiyon ve İskemi-reperfüzyon Hasarı Değerlendirilmesi

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury Video (Video) | JoVE

Bağırsak İskemi-reperfüzyon Hasarı Murin Modeli

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure Video (Video) | JoVE

Göz İçi Basıncı Yükselmesi ile Retina İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats Video (Video) | JoVE

Farelerde miyokardiyal Iskemi reperfüzyon sonrası koroner akış rezervi değerlendirilmesi

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...