Name: a three-dimensional spheroid model to investigate the tumor-stromal interaction in hepatocellular carcinoma
Uploaded: 2021-09-30T13:30:00
Duration: 12 min 24 s
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MYWZ को ब्रिटेन के आधिकारिक विकास सहायता "ओडीए" और न्यूटन फंड के हिस्से के रूप में व्यापार, ऊर्जा और औद्योगिक रणनीति के लिए राज्य सचिव और न्यूटन पुरस्कार 2020 द्वारा वित्त पोषित किया जाता है। एसएस कैंसर रिसर्च यूके उन्नत चिकित्सक वैज्ञानिक फैलोशिप C53575 / A29959 द्वारा समर्थित है। एसएस, एफओ, और एचआर हंटर के हिस्से के रूप में धन प्राप्त करते हैं, जो कैंसर रिसर्च यूके, फोंडाज़ियोन एआईआरसी, और फंडासियन साइंटिफिका डे ला एसोसियासिओन एस्पेनोला कॉन्ट्रा एल कैंसर के बीच साझेदारी के माध्यम से वित्त पोषित है।

एफओ फाइब्रोफिंड लिमिटेड का एक निदेशक और शेयरधारक है।

जिस संदर्भ में प्रयोगात्मक सेल लाइनें बढ़ती हैं, वे उनके जीन अभिव्यक्ति प्रोफ़ाइल, मार्ग विश्लेषण और कार्यात्मक मानदंडों को प्रभावित करती हैं। उदाहरण के लिए, स्तन कैंसर कोशिकाओं में, विभिन्न ऑन्कोजेनिक मार्गों के बीच समन्वय केवल तभी बनाए रखा जाता है जब कैंसर कोशिकाओं को 3 डी संरचना 27 में उगाया जाता है। 3 डी मेलेनोमा और स्तन कैंसर गोलाकार में विनियमित जीन, लेकिन मोनोलेयर कोशिकाओं में नहीं, विवो मानव ट्यूमर 28,29 में अधिक प्रासंगिक हैं। उदाहरण के लिए, स्तन उपकला कोशिकाओं और ट्यूमर समकक्षों में π1 इंटीग्रिन का स्तर 2 डी प्रारूप 29 में उगाए गए स्तरों की तुलना में कम था। इसके अलावा, 3 डी संरचनाओं में फाइब्रोब्लास्ट प्लास्टिक 30 पर सुसंस्कृत लोगों की तुलना में आकृति विज्ञान और गति के संदर्भ में स्पष्ट रूप से माइग्रेट करते हैं। इसके अलावा, विकास सब्सट्रेट की यांत्रिक कठोरता विशिष्ट मार्गों को सक्रिय करती है जो उपकला कोशिकाओं में बाह्य कोशिकीय सिग्नल-विनियमित किनेज (ईआरके)/ Rho के विनियमन के माध्यम से सामान्य उपकला कोशिकाओं के घातक परिवर्तन को प्रोत्साहित करती है31। ये कारक पारंपरिक 2 डी संस्कृति से 3 डी गोलाकार मॉडल में संक्रमण का पक्ष लेते हैं, क्योंकि 3 डी संस्कृतियां मानव रोग को ध्यान में रखते हुए अधिक हैं।
वर्तमान अध्ययन में 3 डी ट्यूमर गोलाकार मॉडल का उत्पादन करने के लिए पारंपरिक प्रयोगशाला उपकरणों और आपूर्ति का उपयोग किया गया था। गठित गोलाकार ने फाइब्रोब्लास्ट से आने वाले प्रसार संकेतों का जवाब दिया, जैसा कि उनके काफी वृद्धि वाले विकास से दिखाया गया है। यह मॉडल बहुकोशिकीय ट्यूमर गोलाकार श्रेणी से संबंधित है। 3 डी ट्यूमर गोलाकार की तीन अन्य श्रेणियां हैं, जिनमें ट्यूमरोस्फीयर 32, ऊतक-व्युत्पन्न ट्यूमर क्षेत्र 33,34, और ऑर्गेनोटाइपिक बहुकोशिकीय गोलाकार 35 शामिल हैं। बहुकोशिकीय ट्यूमर गोलाकार में, ट्यूमर कोशिकाओं को कम आसंजन स्थितियों में निलंबित कर दिया जाता है ताकि उन्हें संस्कृति पोत 36 के तल को छूने के बिना गोले बनाने के लिए एक साथ एकत्रित करने की अनुमति मिल सके। इस एंकरेज-स्वतंत्र तकनीक को वितरित करने के लिए कई दृष्टिकोणों को नियोजित किया गया है, जिसमें घूर्णन प्रणाली, तरल ओवरले तकनीक, और अनकोटेड अल्ट्रा-कम अनुलग्नक यू-आकार की प्लेटें 37 शामिल हैं। एचसीसी में, इन विट्रो गोलाकार संस्कृतियों में से अधिकांश गोल गोलाकार 18,19,20,21,22 बनाने के लिए अल्ट्रा-लो अटैचमेंट 24- या 96-वेल प्लेटों का उपयोग करते हैं। हालांकि, यह तकनीक लागत प्रभावी नहीं है और किसी भी आकस्मिक सेल-प्लास्टिक संपर्क को बाहर नहीं करती है। अन्य प्रणालियां जिगर के सूक्ष्म ऊतकों का उत्पादन करने के लिए ट्रांस-वेल्स 23 या यकृत स्लाइस 12 का उपयोग करती हैं। ट्रांसलेशनल काम में मानव ऊतकों का उपयोग करना सोने का मानक है लेकिन कई शोध समूहों द्वारा हमेशा उपलब्ध या सुलभ नहीं है। वर्तमान दृष्टिकोण को फांसी की बूंदों के सिद्धांत से लाभ हुआ। सेल निलंबन जोड़ा जाता है ताकि ट्यूमर गोलाकार एकल गोल क्षेत्रों को बनाने के लिए एक सुलभ तरल-हवा इंटरफ़ेस में बनाया जा सके। इस तकनीक का उपयोग करने के फायदे किसी भी सेल-प्लास्टिक संपर्क की कमी और ट्यूमर और फाइब्रोब्लास्ट कोशिकाओं के बीच ऑटोक्राइन और पैराक्राइन क्रॉसस्टॉक का अध्ययन करने में आसानी है। इस मॉडल को एक अन्य अध्ययन में आगे मान्य किया गया था, जिसमें एचसीसी विकास 39 से जिगर की रक्षा में गैर-पैरेन्काइमल TREM2 के महत्व को समझाया गया था। इस काम से पता चला है कि Hep3B और PLC / PRF5 गोलाकार दोनों की मात्रा नियंत्रण LX2 CM बनाम TREM2-overexpressing LX2 CM को WNT-निर्भर तरीके से 39 में अधिक थी।
वर्तमान अध्ययन में, इस सह-संस्कृति के प्रोलिफेरेटिव प्रभाव की जांच करने के लिए गोलाकार गठन से पहले फाइब्रोब्लास्ट्स को ट्यूमर कोशिकाओं के साथ मिलाया गया था। दूसरों ने ट्यूमर 40,41 में स्ट्रोमल सेल माइग्रेशन का अध्ययन करने के लिए ट्यूमर गोलाकार बनाने के बाद ट्यूमर सेल निलंबन के साथ फाइब्रोब्लास्ट, एंडोथेलियल कोशिकाओं और प्रतिरक्षा कोशिकाओं को जोड़ा है। वर्तमान हेटरोटाइपिक गोलाकार मॉडल ने पहले रिपोर्ट किए गए मॉडल और विवो ट्यूमर में मूल के समान विकास पैटर्न दिखाया; गोलाकार एक विलंबित विकास चरण के बाद घातीय विकास दिखाते हैं, शायद पोषक तत्वों की कमी और परिगलित कोर 42 के विस्तार के कारण। गोलाकार गठन में मदद करने के लिए विकास कारकों और माइटोजेन को जोड़ने के बजाय, इस अध्ययन ने फाइब्रोब्लास्ट सीएम में फाइब्रोब्लास्ट या उनके स्राव के साथ सीधे संपर्क से इन विकास कारकों को होने से अधिक शारीरिक दृष्टिकोण का उपयोग किया। यह उल्लेख करना आवश्यक है कि LX2 कोशिकाओं को TGFπ1 या PDGF43 के साथ इलाज करके आगे सक्रिय किया जा सकता है। LX2 कोशिकाओं को विभिन्न प्रयोगात्मक सेटिंग्स के लिए मीडिया को हटाने से पहले 48 घंटे के लिए 10 ng / mL TGFπ1 के साथ इलाज किया गया है। एलएक्स 2 कोशिकाओं को पीबीएस के साथ तीन बार धोया गया था (किसी भी प्रत्यक्ष टीजीएफ 1 प्रभाव को बाहर करने के लिए), और फिर सीएम को इकट्ठा करने से पहले ताजा मीडिया को एक और 24 घंटे के लिए जोड़ा गया था। TGF 1-प्रेरित LX2 से एकत्र किए गए मुख्यमंत्री ने नियंत्रण LX2 (डेटा नहीं दिखाया गया है) से मुख्यमंत्री की तुलना में उच्च दर पर हेप 3 बी गोलाकार के विकास को प्रेरित किया। यह लचीली प्रणाली विभिन्न कैंसर कोशिकाओं की सह-संस्कृतियों के साथ-साथ फाइब्रोब्लास्ट्स के साथ-साथ रोगी-व्युत्पन्न लाइनों को उधार दे सकती है। यह दवाओं के लिए एक मध्यम-थ्रूपुट स्क्रीनिंग परख भी प्रदान कर सकता है जिसे जल्दी से अपनाया जा सकता है और विवो अध्ययनों में खुराक को सूचित करने के लिए एक ट्रांसलेशनल दवा खोज पाइपलाइन में डाला जा सकता है।
वर्तमान अध्ययन की एक सीमा ताजा अलग एचसीसी ट्यूमर कोशिकाओं और कैंसर से जुड़े फाइब्रोब्लास्ट के बजाय गोलाकार गठन में अमर सेल लाइनों का उपयोग है। एक अन्य सीमा एलएक्स 2 से सीएम के बीच होमोटाइपिक हेप 3 बी गोलाकार के विकास की तुलना कर रही है और अन्य गैर-फाइब्रोब्लास्ट सेल लाइनों से सीएम के बजाय ताजा मीडिया में। उत्तरार्द्ध सीमा को फाइब्रोब्लास्ट में रुचि के जीन के आनुवंशिक संशोधन द्वारा संबोधित किया जा सकता है, जिसके बाद सीएम को जंगली प्रकार बनाम आनुवंशिक रूप से इंजीनियर फाइब्रोब्लास्ट से होमोटाइपिक गोलाकार में लागू किया जा सकता है।

जिगर की बीमारी और अधिकांश अन्य प्रकार के कैंसर के उपचार में प्रगति के बावजूद जिगर के कैंसर से वैश्विक घटनाओं और मृत्यु दर में वृद्धि जारी रही है। 2018 में, यकृत कैंसर ने कोलोरेक्टल और पेट के कैंसर को पार कर लिया और वैश्विक स्तर पर कैंसर से संबंधित मौत का दूसरा सबसे आम कारण बन गया। 2020 में, 9,00,000 से अधिक नए निदान थे, जो दुनिया भर में कुल कैंसर के मामलों का 4.7% था। यह विशेष रूप से निराशाजनक है, यह देखते हुए कि एचसीसी के विकास के लिए महत्वपूर्ण जोखिम कारक, यकृत कैंसर का सबसे आम रूप, अच्छी तरह से विशेषता है2। सिरोसिस एचसीसी के विकास के लिए सबसे आम जोखिम कारक है, जिसमें 80% मामले स्थापित सिरोसिस 2 की पृष्ठभूमि पर विकसित होते हैं। क्रोनिक जिगर की बीमारियां, जो सिरोसिस में प्रगति करती हैं, और परिणामस्वरूप एचसीसी, में हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी), हेपेटाइटिस सी वायरस (एचसीवी), शराब से संबंधित यकृत रोग (एआरएलडी), गैर-अल्कोहल फैटी लिवर रोग (एनएएफएलडी) शामिल हैं - बाद में मोटापे और टाइप 2 मधुमेह मेलिटस (टी 2 डीएम) 2,3 के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता है। एचसीसी के लिए वर्तमान प्रबंधन प्रोटोकॉल चरण-निर्भर हैं और उन्नत कैंसर वाले लोगों के लिए सीमित हैं, जिनके पास अक्सर खराब परिणाम होते हैं4। किनेज अवरोधकों का उपयोग करके महत्वपूर्ण प्रगति हुई है और हाल ही में, प्रतिरक्षा-ऑन्कोलॉजी उपचार, हालांकि वास्तविक रूप से, उन्नत यकृत कैंसर वाले रोगियों के केवल एक अल्पसंख्यक को लाभ पहुंचाते हैं5। इसके अलावा, इस बात की चिंता है कि एनएएफएलडी वाले रोगियों में उत्पन्न होने वाले एचसीसी - सबसे तेजी से बढ़ते अंतर्निहित कारण, पश्चिमी देशों में नए निदान किए गए एचसीसी मामलों के 50% से अधिक के लिए लेखांकन, क्रमादेशित मृत्यु 1 (पीडी 1) चेकपॉइंट इनहिबिटर थेरेपी 6 के लिए अधिक प्रतिरोधी हो सकता है।
एचसीसी वाले रोगियों के लिए नैदानिक परीक्षणों में बड़े पैमाने पर निवेश किया गया है, जिसमें नैदानिक परीक्षणों और उनके समापन बिंदु 7 में महत्वपूर्ण सुधार शामिल हैं। विफलताओं के एक दशक के बाद, इन निवेशों ने रोगियों के लिए अवसरों को बदलना शुरू कर दिया है। हालांकि, वास्तविकता यह है कि उत्तरदाताओं का समग्र अनुपात अपेक्षाकृत खराब रहता है, परीक्षणों में भर्ती किए गए रोगियों को अक्सर क्लिनिकों में देखभाल करने वालों का खराब प्रतिनिधित्व होता है। खतरा यह है कि अग्रिम महंगे हैं और कई के बजाय कुछ को लाभ पहुंचाते हैं। जैसा कि एकल-उपयोग या संयोजन के लिए अधिक उम्मीदवार उपचार उभरते हैं, विवो प्रतिक्रियाओं में प्रीक्लिनिकल मॉडल को अधिक भविष्यवाणी करना आवश्यक है। ये ऐसे मॉडल होने की संभावना है जो रोगी प्रतिक्रियाओं में देखी जाने वाली परिवर्तनशीलता में योगदान देने वाले अतिरिक्त कारकों को शामिल करते हैं जो मानव एचसीसी विषमता और रोग जटिलता को बेहतर ढंग से प्रतिबिंबित करते हैं। एचसीसी की इन विवो pathophysiological स्थितियों को फिर से बनाने वाली प्रणालियों को ट्यूमर विकास, विकास और प्रगति के जीव विज्ञान को समझने में मदद करने के लिए आवश्यक है। क्रोनिक जिगर की बीमारियों और एचसीसी के मौजूदा प्रयोगात्मक मॉडल आमतौर पर तीन मुख्य श्रेणियों के तहत आते हैं: विवो पशु-आधारित मॉडल (9 में समीक्षा की गई), इन विट्रो संस्कृतियों 10, और पूर्व विवो 11,12 मॉडल में। एचसीसी सहित पुरानी जिगर की बीमारियों का अध्ययन करने के लिए पशु-आधारित दृष्टिकोणों का बड़े पैमाने पर उपयोग किया जाता है; हालांकि, आनुवांशिक परिवर्तनशीलता, उच्च चलने वाली लागत, और प्रजातियों के बीच विभिन्न प्रतिरक्षा प्रणाली इस तरह के मॉडल को लागू करने के लिए मुख्य सीमाओं में से एक हैं। जबकि कुछ पूर्व विवो मॉडल अन्य इन विट्रो सेल लाइन मॉडल की तुलना में मानव ऊतकों पर ध्यान केंद्रित करने के लिए एक उत्कृष्ट उपकरण प्रदान करते हैं, ऊतक की उपलब्धता और सीमित प्रयोगात्मक समय पाठ्यक्रम बड़े पैमाने पर उनके उपयोग में बाधा डालते हैं।
दूसरी ओर, इन विट्रो सेल लाइन मॉडल सीमित संसाधनों के साथ काम करने वाले वैज्ञानिकों के लिए एक अच्छा विकल्प बने हुए हैं, जिसमें ताजा मानव ऊतकों की निरंतर आपूर्ति की कम आवश्यकता होती है। ये मॉडल एक उपकरण भी प्रदान करते हैं जिसका उपयोग विवो मॉडल में अधिक जटिल होने से पहले दवा चयन के लक्ष्य सत्यापन में मदद करने के लिए पहली स्क्रीन के रूप में किया जा सकता है। 3 डी संस्कृतियों में पारंपरिक 2 डी मोनोलेयर संस्कृतियों के हाल के संशोधन ने इन इन विट्रो मॉडल13,14 की प्रभावकारिता में सुधार किया है।
3 डी इन विट्रो मॉडल मानव सामान्य और रोग संबंधी स्थितियों में देखी जाने वाली महत्वपूर्ण विशेषताओं को दोहरा सकते हैं। शारीरिक परिस्थितियों के तहत, सिग्नल ट्रांसडक्शन सेलुलर क्रॉसस्टॉक और अन्य संयोजी ऊतक अणुओं के साथ बातचीत के माध्यम से शुरू किया जाता है, अर्थात्, एक्स्ट्रासेल्युलर मैट्रिक्स (ईसीएम) प्रोटीन, एक 3 डी इंटरैक्शन नेटवर्क 15,16 बनाते हैं। ट्यूमर घातक परिवर्तन के दौरान एक 3 डी गोलाकार रूप में विकसित होता है, जिसके लिए ऑक्सीजन और पोषक तत्व गैर-ट्यूमर / ट्यूमर इंटरफेज़ में आसानी से प्रचुर मात्रा में होते हैं। उसी समय, ट्यूमर कोर पर हाइपोक्सिक स्थितियां प्रबल होती हैं। पोषक तत्वों की उपलब्धता में इस विषमता के परिणामस्वरूप स्थानिक रूप से अलग-अलग सिग्नलिंग और चयापचय मार्गों की सक्रियता होती है जो कि नियंत्रित करते हैं। इन स्थितियों को पारंपरिक 2 डी मोनोलेयर संस्कृतियों 14 में खराब रूप से पुनरावृत्ति की जाती है, जिसमें कोशिकाएं शारीरिक रूप से अप्रासंगिक फैशन में कठोर संस्कृति प्लास्टिक पर बढ़ती हैं। कैंसर कोशिकाएं अन्य गैर-पैरेन्काइमल कोशिकाओं के साथ भी संवाद करती हैं, जो ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट के भीतर ईसीएम, विकास और आक्रमण सिग्नलिंग का प्राथमिक स्रोत है। 2 डी संस्कृतियों के विपरीत, 3 डी इन विट्रो मॉडल इस ट्यूमर-स्ट्रोमल इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए एक अधिक उपयुक्त मंच प्रदान कर सकते हैं।
एचसीसी क्षेत्र में 3 डी मॉडल का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, और वे सूक्ष्म ऊतक के गठन के तरीके में भिन्न होते हैं18,19,20,21,22,23। इनमें से अधिकांश मॉडलों ने गोलाकार गठन की प्रक्रिया में या तो अल्ट्रा-लो बाइंडिंग प्लेट18,19,20,21,22 या ट्रांस-वेल्स 23 का उपयोग किया। वर्णित प्रोटोकॉल एक वैकल्पिक, प्लास्टिक मुक्त, और लागत प्रभावी इन विट्रो 3 डी ट्यूमर गोलाकार मॉडल के रूप में फांसी की बूंद तकनीक का परिचय देता है। यह एक 3 डी प्रारूप में ट्यूमर कोशिकाओं के प्रसार पर फाइब्रोब्लास्ट की पैराक्राइन और ऑटोक्राइन भूमिकाओं का आकलन करने की सुविधा प्रदान कर सकता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1x Trypsin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>59429C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biorender</td>
			<td>Biorender.com</td>
			<td>Online</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Class II laminar flow BioMAT2 hood</td>
			<td>Medair Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s modified Eagle&#8217;s medium (DMEM)</td>
			<td>Biosera</td>
			<td>M-D1107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel sofware</td>
			<td>Microsoft office 365</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad prism sofware</td>
			<td>GraphPad software</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat deactivated fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>life tech</td>
			<td>105000064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J software</td>
			<td>Fiji</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G7513-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin (100 unit/ml penicillin and 100 &#956;g/ml streptomycin)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P0781-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish 90 mm, triple vented</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>633175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon&#8482; Broad Spectrum Disinfectant, 5kg Bucket</td>
			<td>Rely+On&#8482;</td>
			<td>SCI-129999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ziess inverted microscope</td>
			<td>Ziess</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a three-dimensional spheroid model to investigate the tumor-stromal interaction in hepatocellular carcinoma

जिगर के कैंसर के प्रमुख रूप उन्नत हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा (एचसीसी) के लिए अच्छी तरह से सहन किए गए और व्यापक रूप से प्रभावी उपचारों की आक्रामकता और कमी, कैंसर से संबंधित मृत्यु के दूसरे सबसे आम कारण के रूप में अपनी रैंक को तर्कसंगत बनाती है। प्रीक्लिनिकल मॉडल को नैदानिक विकास के लिए सर्वोत्तम चिकित्सीय उम्मीदवारों का चयन करने और व्यक्तिगत दवा के वितरण में सहायता करने के लिए मानव स्थितियों को दोहराने के लिए अनुकूलित करने की आवश्यकता है। त्रि-आयामी (3 डी) सेलुलर गोलाकार मॉडल दो आयामी (2 डी) मोनोलेयर संस्कृतियों के लिए एक उभरते हुए इन विट्रो विकल्प के रूप में वादा दिखाते हैं। यहां, हम एक 3 डी ट्यूमर गोलाकार मॉडल का वर्णन करते हैं जो लटकने वाली बूंदों में बनाए रखने पर अलग-अलग कोशिकाओं की कुल होने की क्षमता का शोषण करता है, और मानक मोनोलेयर्स की तुलना में विवो वातावरण में अधिक प्रतिनिधि है। इसके अलावा, 3 डी गोलाकार होमोटाइपिक या हेटरोटाइपिक कोशिकाओं के संयोजन से उत्पादित किया जा सकता है, विवो में सेलुलर विषमता का अधिक प्रतिबिंबित करता है, संभावित रूप से पर्यावरणीय इंटरैक्शन के अध्ययन को सक्षम करता है जो प्रगति और उपचार प्रतिक्रियाओं को प्रभावित कर सकता है। वर्तमान शोध ने मानक 10 सेमी 3 पेट्री व्यंजनों के ढक्कन पर सेल निलंबन को स्थिर करके 3 डी होमोटाइपिक और हेटरोटाइपिक ट्यूमर गोलाकार बनाने के लिए सेल घनत्व को अनुकूलित किया। अनुदैर्ध्य विश्लेषण होमोटाइपिक बनाम हेटरोटाइपिक ट्यूमर / फाइब्रोब्लास्ट्स गोलाकार के लिए विकास वक्र उत्पन्न करने के लिए किया गया था। अंत में, होमोटाइपिक ट्यूमर (हेप 3 बी) गोलाकार पर फाइब्रोब्लास्ट (सीओएस 7 कोशिकाओं) और यकृत मायोफाइब्रोब्लास्ट्स (एलएक्स 2) के प्रोलिफेरेटिव प्रभाव की जांच की गई थी। 3,000 कोशिकाओं (20 μL मीडिया में) के एक सीडिंग घनत्व ने सफलतापूर्वक Huh7 / COS7 हेटरोटाइपिक गोलाकार उत्पन्न किया, जिसने संस्कृति दिन 8 तक आकार में स्थिर वृद्धि प्रदर्शित की, जिसके बाद विकास मंदता हुई। इस खोज की पुष्टि LX2 (मानव यकृत ताराकार सेल लाइन) वातानुकूलित माध्यम (सीएम) में सुसंस्कृत हेप 3 बी होमोटाइपिक गोलाकार का उपयोग करके की गई थी। LX2 सीएम नियंत्रण ट्यूमर गोलाकार की तुलना में Hep3B गोलाकार के प्रसार को ट्रिगर किया। अंत में, इस प्रोटोकॉल से पता चला है कि 3 डी ट्यूमर गोलाकार का उपयोग ट्यूमर-स्ट्रोमल इंटरैक्शन का अधिक व्यापक रूप से अध्ययन करने के लिए विट्रो टूल में एक सरल, किफायती और प्रीस्क्रीन के रूप में किया जा सकता है।

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A Three-Dimensional Spheroid Model to Investigate the Tumor-Stromal Interaction in Hepatocellular Carcinoma

व्यापक इन विट्रो मॉडल जो प्रासंगिक मानव रोग को ईमानदारी से दोहराते हैं, की कमी है। वर्तमान अध्ययन तीन आयामी (3 डी) ट्यूमर गोलाकार निर्माण और संस्कृति प्रस्तुत करता है, जो मानव हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा में ट्यूमर-स्ट्रोमल इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए एक विश्वसनीय इन विट्रो उपकरण है।

हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा में ट्यूमर-स्ट्रोमल इंटरैक्शन की जांच करने के लिए एक त्रि-आयामी गोलाकार मॉडल

The aggressiveness and lack of well-tolerated and widely effective treatments for advanced hepatocellular carcinoma (HCC), the predominant form of liver ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Study of Viral Vectors in a Three-dimensional Liver Model Repopulated with the Human Hepatocellular Carcinoma Cell Line HepG2

मानव hepatocellular कार्सिनोमा सेल लाइन HepG2 के साथ एक तीन आयामी लिवर मॉडल repopulated में वायरल वैक्टर का अध्ययन

This protocol describes the generation of a three-dimensional (3D) ex vivo liver model and its application to the study and development of viral vector ...

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

ऊपर की ओर बढ़ रहा है: एक सरल और लचीले इन विट्रो में तीन आयामी आक्रमण परख प्रोटोकॉल

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Therapy Testing in a Spheroid-based 3D Cell Culture Model for Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

एक अंडाकार आकृति में चिकित्सा परीक्षण-सिर और गर्दन स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा के लिए 3 डी सेल संस्कृति मॉडल आधारित

Current treatment options for advanced and recurrent head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) enclose radiation and chemo-radiation approaches with ...

Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

अस्थिसार्कोमा के लिए तीन आयामी अस्थि कोशिकाबद्ध मैट्रिक्स मॉडल

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

Fully Human Tumor-based Matrix in Three-dimensional Spheroid Invasion Assay

पूरी तरह से मानव ट्यूमर आधारित मैट्रिक्स में तीन आयामी Spheroid आक्रमण परख

Two-dimensional cell culture-based assays are commonly used in in vitro cancer research. However, they lack several basic elements that form the tumor ...

Transradial Access Chemoembolization for Hepatocellular Carcinoma Patients

हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा रोगियों के लिए ट्रांसरारियल एक्सेस केमोम्बोलाइजेशन

Transarterial chemoembolization (TACE) is the most common modality for treatment of hepatocellular carcinoma (HCC) at the intermediate stage. TACE is ...

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Evaluating Cell Death Using Cell-Free Supernatant of Probiotics in Three-Dimensional Spheroid Cultures of Colorectal Cancer Cells

कोलोरेक्टल कैंसर कोशिकाओं की त्रि-आयामी स्फेरॉइड संस्कृतियों में प्रोबायोटिक्स के सेल-फ्री सुपरनेंट का उपयोग करके सेल डेथ का मूल्यांकन करना

This manuscript describes a protocol to evaluate cancer cell deaths in three dimensional (3D) spheroids of multicellular types of cancer cells using ...

A Three-dimensional Model of Spheroids to Study Colon Cancer Stem Cells

पेट के कैंसर स्टेम सेल का अध्ययन करने के लिए स्फेरॉइड का एक त्रि-आयामी मॉडल

Colorectal cancers are characterized by heterogeneity and a hierarchical organization comprising a population of cancer stem cells (CSCs) responsible for ...

A Mouse Model to Investigate the Role of Cancer-Associated Fibroblasts in Tumor Growth

ट्यूमर के विकास में कैंसर से जुड़े फाइब्रोब्लास्ट की भूमिका की जांच करने के लिए एक माउस मॉडल

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) can play an important role in tumor growth by creating a tumor-promoting microenvironment. Models to study the role ...

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

कोलेजन-आधारित मचानों का उपयोग करके न्यूरोब्लास्टोमा का त्रि-आयामी इन विट्रो बायोमिमेटिक मॉडल

Neuroblastoma is the most common extracranial solid tumor in children, accounting for 15% of overall pediatric cancer deaths. The native tumor tissue is a ...