Name: a simple microfluidic chip for long-term growth and imaging of caenorhabditis elegans
Uploaded: 2022-04-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Microfluidic Chip for Long-Term Growth and Imaging of Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Vi takker CIFF imaging facility, NCBS for brug af de konfokale mikroskoper støttet af DST - Center for Nanoteknologi (nr. SR/55/NM-36-2005). Vi takker forskningsmidler fra DBT (SPK), CSIR-UGC (JD), DST (SM), DBT (SM), spinningskive understøttet af DAE-PRISM 12-R&D-IMS-5.02.0202 (SPK og Gautam Menon) og HHMI-IECS-tilskudsnummer 55007425 (SPK). HB101, PS3239 og wdIs51 stammer blev leveret af Caenorhabditis Genetics Center (CGC), som er finansieret af NIH Office of Research Infrastructure Programs (P40 OD010440). S.P.K. lavede jsIs609 i Mike Nonets laboratorium.

1. Fremstilling af vækst- og billeddannelsesenhed
<ol><li>SU8 fremstilling af skimmelsvamp<ol><li>Design mønstre 1 (flowlag) og 2 (kontrollag) ved hjælp af rektangulære former i en tekstbehandlingssoftware (eller en computerstøttet design CAD-software) og udskriv fotomaskerne ved hjælp af en laserplotter med en mindste funktionsstørrelse på 8 μm på polyesterbaseret film (figur 1).</li>
		<li>Skær siliciumskiver i stykker på 2,5 cm × 2,5 cm og rengør dem med 2...

<ol>
	<li>Doitsidou, M., Poole, R. J., Sarin, S., Bigelow, H., Hobert, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+Mutant+Identification+with+a+One-Step+Whole-Genome-Sequencing+and+SNP+Mapping+Strategy.">C. elegans Mutant Identification with a One-Step Whole-Genome-Sequencing and SNP Mapping Strategy.</a> PloS One. 5 (11), 15435 (2010).</li><li>Hobert, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Neurogenesis in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> WormBook. The C. elegans. Research Community, WormBook. , (2010).</li><li>Mondal, S., Ahlawat, S., Rau, K., Venkataraman, V., Koushika, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+in+vivo+neuronal+transport+in+genetic+model+organisms+using+microfluidic+devices.">Imaging in vivo neuronal transport in genetic model organisms using microfluidic devices.</a> Traffic. 12 (4), 372-385 (2011).</li><li>Steele, L. M., Sedensky, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approaches+to+Anesthetic+Mechanisms:+The+C.+elegans+Model.">Approaches to Anesthetic Mechanisms: The C. elegans Model.</a> Methods in Enzymology. 602, 133-151 (2018).</li><li>San-Miguel, A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidics+as+a+tool+for+C.+elegans+research.">Microfluidics as a tool for C. elegans research.</a> WormBook. The C. elegans. Research Community, WormBook. , (2013).</li><li>C&#225;ceres, I. C., Valmas, N., Hilliard, M. A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laterally+orienting+C.+elegans+using+geometry+at+microscale+for+high-throughput+visual+screens+in+neurodegeneration+and+neuronal+development+studies.">Laterally orienting C. elegans using geometry at microscale for high-throughput visual screens in neurodegeneration and neuronal development studies.</a> PloS One. 7 (4), 35037 (2012).</li><li>Ai, X., Zhuo, W., Liang, Q., McGrath, P. T., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+device+for+size+based+separation+of+C.+elegans+developmental+stages.">A high-throughput device for size based separation of C. elegans developmental stages.</a> Lab on a Chip. 14 (10), 1746-1752 (2014).</li><li>Chung, K., Crane, M. M., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+on-chip+rapid+microscopy,+phenotyping+and+sorting+of+C.+elegans.">Automated on-chip rapid microscopy, phenotyping and sorting of C. elegans.</a> Nature Methods. 5 (7), 637-643 (2008).</li><li>Desta, I. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+and+Trapping+of+a+Single+C.+elegans+Worm+in+a+Microfluidic+Chip+for+Automated+Microplate+Dispensing.">Detecting and Trapping of a Single C. elegans Worm in a Microfluidic Chip for Automated Microplate Dispensing.</a> SLAS Technology. 22 (4), 431-436 (2017).</li><li>Ben-Yakar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Content+and+High-Throughput+In+Vivo+Drug+Screening+Platforms+Using+Microfluidics.">High-Content and High-Throughput In Vivo Drug Screening Platforms Using Microfluidics.</a> Assay and Drug Development Technologies. 17 (1), 8-13 (2019).</li><li>Mondal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+microfluidics+providing+high-resolution+and+high-throughput+screening+of+Caenorhabditis+elegans+poly-glutamine+aggregation+model.">Large-scale microfluidics providing high-resolution and high-throughput screening of Caenorhabditis elegans poly-glutamine aggregation model.</a> Nature Communications. 7, 13023 (2016).</li><li>Fehlauer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+a+Microfluidics+Device+for+Mechanical+Stimulation+and+High+Resolution+Imaging+of+C.+Elegant.">Using a Microfluidics Device for Mechanical Stimulation and High Resolution Imaging of C. Elegant.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (132), e56530 (2018).</li><li>Saberi-Bosari, S., Huayta, J., San-Miguel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+platform+for+lifelong+high-resolution+and+high+throughput+imaging+of+subtle+aging+phenotypes+in+C.+elegans.">A microfluidic platform for lifelong high-resolution and high throughput imaging of subtle aging phenotypes in C. elegans.</a> Lab on a Chip. 18 (20), 3090-3100 (2018).</li><li>Cornaglia, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+microfluidic+platform+for+C.+elegans+embryo+arraying,+phenotyping,+and+long-term+live+imaging.">An automated microfluidic platform for C. elegans embryo arraying, phenotyping, and long-term live imaging.</a> Scientific Reports. 5, 10192 (2015).</li><li>Suzuki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+ultra-thin+chips+for+immobilization+of+Caenorhabditis+elegans+in+microfluidic+channels+during+irradiation+and+selection+of+buffer+solution+to+prevent+dehydration.">Development of ultra-thin chips for immobilization of Caenorhabditis elegans in microfluidic channels during irradiation and selection of buffer solution to prevent dehydration.</a> Journal of Neuroscience Methods. 306, 32-37 (2018).</li><li>Hulme, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifespan-on-a-chip:+microfluidic+chambers+for+performing+lifelong+observation+of+C.+elegans.">Lifespan-on-a-chip: microfluidic chambers for performing lifelong observation of C. elegans.</a> Lab on a Chip. 10 (5), 589-597 (2010).</li><li>Chronis, N., Zimmer, M., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidics+for+in+vivo+imaging+of+neuronal+and+behavioral+activity+in+Caenorhabditis+elegans.">Microfluidics for in vivo imaging of neuronal and behavioral activity in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Methods. 4 (9), 727-731 (2007).</li><li>Lagoy, R. C., Albrecht, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+Devices+for+Behavioral+Analysis,+Microscopy,+and+Neuronal+Imaging+in+Caenorhabditis+Elegans.">Microfluidic Devices for Behavioral Analysis, Microscopy, and Neuronal Imaging in Caenorhabditis Elegans.</a> Methods in Molecular Biology. 1327, 159-179 (2015).</li><li>Levine, E., Lee, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+approaches+for+Caenorhabditis+elegans+research.">Microfluidic approaches for Caenorhabditis elegans research.</a> Animal Cells and Systems. 24 (6), 311-320 (2020).</li><li>Rahman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NemaLife+chip:+a+micropillar-based+microfluidic+culture+device+optimized+for+aging+studies+in+crawling+C.+elegans.">NemaLife chip: a micropillar-based microfluidic culture device optimized for aging studies in crawling C. elegans.</a> Scientific Reports. 10 (1), 16190 (2020).</li><li>Allen, P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-synapse+ablation+and+long-term+imaging+in+live+C.+elegans.">Single-synapse ablation and long-term imaging in live C. elegans.</a> Journal of Neuroscience Methods. 173 (1), 20-26 (2008).</li><li>Guo, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femtosecond+laser+nanoaxotomy+lab-on-a-chip+for+in+vivo+nerve+regeneration+studies.">Femtosecond laser nanoaxotomy lab-on-a-chip for in vivo nerve regeneration studies.</a> Nature Methods. 5 (6), 531-533 (2008).</li><li>Mondal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+Mitochondrial+Density+and+Positioning+along+a+Growing+Neuronal+Process+in+Individual+C.+elegans+Neuron+Using+a+Long-Term+Growth+and+Imaging+Microfluidic+Device.">Tracking Mitochondrial Density and Positioning along a Growing Neuronal Process in Individual C. elegans Neuron Using a Long-Term Growth and Imaging Microfluidic Device.</a> eNeuro. 8 (4), (2021).</li><li>Keil, W., Kutscher, L. M., Shaham, S., Siggia, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Term+High-Resolution+Imaging+of+Developing+C.+elegans+Larvae+with+Microfluidics.">Long-Term High-Resolution Imaging of Developing C. elegans Larvae with Microfluidics.</a> Developmental Cell. 40 (2), 202-214 (2017).</li><li>Gritti, N., Kienle, S., Filina, O., Van Zon, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+time-lapse+microscopy+of+C.+Elegans+post-embryonic+development.">Long-term time-lapse microscopy of C. Elegans post-embryonic development.</a> Nature Communications. 7, 12500 (2016).</li><li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biostable,+anti-fouling+zwitterionic+polyurethane-urea+based+on+PDMS+for+use+in+blood-contacting+medical+devices.">A biostable, anti-fouling zwitterionic polyurethane-urea based on PDMS for use in blood-contacting medical devices.</a> Journal of materials chemistry B. 8 (36), 8305-8314 (2020).</li><li>Peterson, S. L., McDonald, A., Gourley, P. L., Sasaki, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(dimethylsiloxane)+thin+films+as+biocompatible+coatings+for+microfluidic+devices:+cell+culture+and+flow+studies+with+glial+cells.">Poly(dimethylsiloxane) thin films as biocompatible coatings for microfluidic devices: cell culture and flow studies with glial cells.</a> Journal of Biomedical Materials ResearchPart A. 72 (1), 10-18 (2005).</li><li>Folch, A., Toner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+micropatterns+on+biocompatible+materials.">Cellular micropatterns on biocompatible materials.</a> Biotechnology Progress. 14 (3), 388-392 (1998).</li><li>Leclerc, E., Sakai, Y., Fujii, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+PDMS+(polydimethylsiloxane)+bioreactor+for+large-scale+culture+of+hepatocytes.">Microfluidic PDMS (polydimethylsiloxane) bioreactor for large-scale culture of hepatocytes.</a> Biotechnology Progress. 20 (3), 750-755 (2004).</li><li>Mehta, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+measurement+and+control+of+oxygen+levels+in+microfluidic+poly(dimethylsiloxane)+bioreactors+during+cell+culture.">Quantitative measurement and control of oxygen levels in microfluidic poly(dimethylsiloxane) bioreactors during cell culture.</a> Biomedical Microdevices. 9 (2), 123-134 (2007).</li><li>Palchesko, R. N., Zhang, L., Sun, Y., Feinberg, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+polydimethylsiloxane+substrates+with+tunable+elastic+modulus+to+study+cell+mechanobiology+in+muscle+and+nerve.">Development of polydimethylsiloxane substrates with tunable elastic modulus to study cell mechanobiology in muscle and nerve.</a> PloS One. 7 (12), 51499 (2012).</li><li>Inoue, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+markers+for+Caenorhabditis+elegans+vulval+cells.">Gene expression markers for Caenorhabditis elegans vulval cells.</a> Mechanisms of Development. 119, 203-209 (2002).</li><li>Fatouros, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Tau+aggregation+in+a+novel+caenorhabditis+elegans+model+of+tauopathy+mitigates+proteotoxicity.">Inhibition of Tau aggregation in a novel caenorhabditis elegans model of tauopathy mitigates proteotoxicity.</a> Human Molecular Genetics. 21 (16), 3587-3603 (2012).</li><li>Smith, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-lapse+imaging+and+cell-speci+fi+c+expression+pro+fi+ling+reveal+dynamic+branching+and+molecular+determinants+of+a+multi-dendritic+nociceptor+in+C.+elegans.">Time-lapse imaging and cell-speci fi c expression pro fi ling reveal dynamic branching and molecular determinants of a multi-dendritic nociceptor in C. elegans.</a> Developmental Biology. 345 (1), 18-33 (2010).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li><li>Oren-Suissa, M., Hall, D. H., Treinin, M., Shemer, G., Podbilewicz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fusogen+EFF-I+controls+sculpting+of+mechanosensory+dendrites.">The fusogen EFF-I controls sculpting of mechanosensory dendrites.</a> Science. 328 (5983), 1285-1288 (2010).</li><li>Smith, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+neuron+fates+are+distinguished+by+a+transcriptional+switch+that+regulates+dendrite+branch+stabilization.">Sensory neuron fates are distinguished by a transcriptional switch that regulates dendrite branch stabilization.</a> Neuron. 79 (2), 266-280 (2013).</li><li>Shrestha, B. R., Grueber, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+morphogenesis:+worms+get+an+EFF+in+dendritic+arborization.">Neuronal morphogenesis: worms get an EFF in dendritic arborization.</a> Current Biology: CB. 20 (16), 673-675 (2010).</li><li>Rao, G. N., Kulkarni, S. S., Koushika, S. P., Rau, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+nanosecond+laser+axotomy:+cavitation+dynamics+and+vesicle+transport.">In vivo nanosecond laser axotomy: cavitation dynamics and vesicle transport.</a> Optics Express. 16 (13), 9884-9894 (2008).</li><li>Sure, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=UNC-16/JIP3+and+UNC-76/FEZ1+limit+the+density+of+mitochondria+in+C.+elegans+neurons+by+maintaining+the+balance+of+anterograde+and+retrograde+mitochondrial+transport.">UNC-16/JIP3 and UNC-76/FEZ1 limit the density of mitochondria in C. elegans neurons by maintaining the balance of anterograde and retrograde mitochondrial transport.</a> Scientific Reports. 8 (1), 8938 (2018).</li><li>Awasthi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulated+distribution+of+mitochondria+in+touch+receptor+neurons+of+C.+elegans+influences+touch+response.">Regulated distribution of mitochondria in touch receptor neurons of C. elegans influences touch response.</a> bioRxiv. , (2020).</li></ol>

I dette papir er en protokol til fremstilling og brug af en simpel mikrofluidisk enhed til dyrkning af C. elegans med konstant fødevareforsyning og højopløsningsbilleddannelse af et enkelt dyr under dets udvikling blevet beskrevet. Denne fremstillingsproces er enkel og kan udføres i et ikke-sterilt miljø. Et støvfrit miljø er kritisk under fabrikationstrin. Tilstedeværelsen af støvpartikler ville føre til forkert kontakt mellem de to bindingsflader, hvilket resulterer i dårlig binding og lækage af en...

Caenorhabditis elegans har vist sig at være en stærk modelorganisme til at studere cellebiologi, aldring, udviklingsbiologi og neurobiologi. Fordele som dens gennemsigtige krop, korte livscyklus, nem vedligeholdelse, et defineret antal celler, homologi med flere menneskelige gener og velundersøgt genetik har ført til, at C. elegans er blevet en populær model både for grundlæggende biologiske opdagelser og anvendt forskning 1,2. At forstå cellens biologiske og udviklingsmæssige processer fra gentagen langtidsobservation af individuelle dyr kan vise sig at være gavnligt. Konventionelt bedøves C. elegans på agarpuder og afbildes under mikroskopet. Anæstetikas skadelige virkninger på dyrs sundhed begrænser brugen af bedøvede dyr til langvarig og gentagen intermitterende billeddannelse af det samme dyr 3,4. De seneste fremskridt inden for mikrofluidiske teknologier og deres tilpasning til bedøvelsesfri fældefangst af C. elegans med ubetydelige sundhedsfarer muliggør billeddannelse i høj opløsning af det samme dyr over en kort og lang periode.
Mikrofluidiske chips er designet til C. elegans'5 high throughput screening 6,7,8, trapping og dispensering 9, drug screening 10,11, neuron stimulering med høj opløsning billeddannelse 12, og høj opløsning billeddannelse af dyret12,13,14. Ultratynde mikrofluidiske ark til immobilisering på dias er også blevet udviklet15. Langsigtede undersøgelser af C. elegans er blevet udført ved hjælp af lavopløsningsbilleder af dyr, der vokser i flydende kultur for at observere vækst, calciumdynamik, lægemiddeleffekter på deres adfærd16,17,18,19, deres levetid og aldring20. Langtidsundersøgelser med mikroskopi med høj opløsning er blevet udført for at vurdere synaptisk udvikling21, neuronal regenerering 22 og mitokondrietilsætning23. Langsigtet højopløsningsbilleddannelse og sporing af celleskæbne og differentiering er blevet udført i multikanalsenheder24,25. Flere cellulære og subcellulære hændelser forekommer over tidsskalaer på flere timer og kræver fangst af det samme individ på forskellige tidspunkter under deres udvikling for at karakterisere alle mellemliggende trin i processen for at forstå cellulær dynamik in vivo. For at afbilde biologisk proces som organogenese, neuronal udvikling og cellemigration skal dyret immobiliseres i samme orientering på flere tidspunkter. Vi har tidligere offentliggjort en protokol for højopløsningsbilleddannelse af C. elegans i over 36 timer for at bestemme, hvor mitokondrier tilsættes langs berøringsreceptorneuronerne (TRN'er)23.
Dette papir indeholder en protokol til etablering af en mikrofluidikbaseret metode til gentagen billeddannelse i høj opløsning. Denne enhed med en enkelt flowkanal er bedst egnet til gentagen billeddannelse af et enkelt dyr pr. Enhed. For at forbedre gennemstrømningen og afbilde mange dyr på én gang kan flere enheder tilsluttes den samme trykledning, men med separate trevejsstik, der styrer et enkelt dyr i hver enhed. Designet er nyttigt til undersøgelser, der kræver time-lapse-billeder i høj opløsning, såsom postembryonale udviklingsprocesser, cellemigration, organelletransport, genekspressionsundersøgelser osv. Teknologien kan være begrænsende for nogle applikationer såsom levetid og aldringsundersøgelser, der kræver parallel vækst og billeddannelse af mange dyr i sen fase. Polydimethylsiloxan (PDMS) elastomer blev brugt til fremstilling af denne enhed på grund af dens biostabilitet26, biokompatibilitet 27,28, gaspermeablilitet 29,30 og justerbar elastisk modul 31. Denne to-lags enhed tillader vækst af dyr med kontinuerlig fødeforsyning i en mikrofluidisk kanal og fangst af individuelle C. elegans via PDMS-membrankompression ved hjælp af nitrogengas. Denne enhed er en udvidelse af den tidligere offentliggjorte enhed med fordelen ved at dyrke og billeddanne det samme dyr i mikrokanalen under en kontinuerlig fødevareforsyning3. Det ekstra isolationsmembrannetværk og en 2 mm bred fangstmembran muliggør effektiv immobilisering af udviklende dyr. Enheden er blevet brugt til at observere neuronal udvikling, vulvaludvikling og dendritisk arborisering i sensoriske PVD-neuroner. Dyrene vokser uden sundhedsskadelige virkninger i enheden og kan gentagne gange immobiliseres for at lette billeddannelse af subcellulære hændelser i det samme dyr under dets udvikling.
Hele protokollen er opdelt i fem dele. Del 1 beskriver enhedsfremstilling til vækst- og billedchippen. Del 2 beskriver, hvordan man opretter et tryksystem til PDMS-membranafbøjningen for at immobilisere og isolere individuelle C. elegans. Del 3 beskriver, hvordan man synkroniserer C. elegans på en nematodevækstmedium (NGM) plade til enhedsbilleddannelse. Del 4 beskriver, hvordan man indlæser et enkelt dyr i enheden og dyrker dyret inde i den mikrofluidiske enhed i flere dage. Del 5 beskriver, hvordan man immobiliserer et enkelt dyr på flere tidspunkter, tager billeder i høj opløsning ved hjælp af forskellige mål og analyserer billederne ved hjælp af Fiji.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>18 G needles</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Bangalore, India</td>
			<td>Gauge 18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way stopcock</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>WW-30600-02</td>
			<td>Masterflex fitting with luer lock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CCD camera</td>
			<td>Andor Technology</td>
			<td>EMCCD C9100-13no</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circuit board film</td>
			<td>Fine Line Imaging, Colorado, USA</td>
			<td></td>
			<td>The designs are printed with 65,024 dots per inch (DPI)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Convection Oven</td>
			<td>Meta-Lab Scientific Industries, India</td>
			<td>MSI-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Blue stat microscopic cover glass</td>
			<td></td>
			<td>22mm x 10Gms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Hi media</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris uni-core puncher 1mm</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>Z708801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethyldisilazane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Bangalore, India</td>
			<td>440191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>&#160;IKA</td>
			<td>RCT B S 22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>26895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOH</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Scanning Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>LSM 5 LIVE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette tips</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td></td>
			<td>0.5-10 &#181;L micropipette tips are used for food supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Negative Photoresist-1</td>
			<td>Microchem</td>
			<td>SU8-2025</td>
			<td>http://www.microchem.com/Prod-SU82000.htm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Negative Photoresist-2</td>
			<td>Microchem</td>
			<td>SU8-2050</td>
			<td>http://www.microchem.com/Prod-SU82000.htm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrogen gas</td>
			<td>Local Supplier</td>
			<td>Commercial nitrogen gas</td>
			<td>Cylinder volume of 7 cubic meter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDMS (Curing solution)</td>
			<td>Dow Corning Corporation, MI, USA</td>
			<td>&#160;Sylgard curing solution</td>
			<td>curing agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri plates</td>
			<td>Praveen Scientific Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma cleaner</td>
			<td>Harrick Plasma, NY, USA</td>
			<td>&#160;PDC-32G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor and blades</td>
			<td>Lister surgical Blade</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon Elastomer (Base)</td>
			<td>Dow Corning Corporation, MI, USA</td>
			<td>Sylgard 184 base</td>
			<td>elastomer base</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Plastic tubes with the inner diameter 1.59 mm and the outer diameter 3.18 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon wafer</td>
			<td>University Wafer, MA, USA</td>
			<td>[100] orientation, 4-inch diameter</td>
			<td>Small pieces (2 mm &#215; 2 mm) were cut from 100 mm diameter wafer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin Coater</td>
			<td>SPS-Europe B.V., The Netherlands</td>
			<td>SPIN 150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning Disk microscope</td>
			<td>Perkin Elmer ultra-view VOX system</td>
			<td>CSU-X1-A3 N</td>
			<td>The system was equipped with four (405/488/561/640 nm) lasers and controlled with the Volocity software package.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU8 developer</td>
			<td>Microchem, MA, USA</td>
			<td>SU8 Developer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloro (1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyl) silane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Bangalore, India</td>
			<td>448931</td>
			<td>Trichloro (1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyl) silane vapor is toxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV lamp</td>
			<td>Oriel Instruments, Bangalore, India</td>
			<td></td>
			<td>200 Watt and collimated UV light source</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volocity software</td>
			<td>Perkin-Elmer</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple microfluidic chip for long-term growth and imaging of caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans (C. elegans) har vist sig at være et værdifuldt modelsystem til undersøgelse af udviklings- og cellebiologiske processer. At forstå disse biologiske processer kræver ofte langvarig og gentagen billeddannelse af det samme dyr. Lange restitutionstider forbundet med konventionelle immobiliseringsmetoder udført på agarpuder har skadelige virkninger på dyresundheden, hvilket gør det upassende at gentagne gange forestille sig det samme dyr over lange perioder. Dette papir beskriver et mikrofluidisk chipdesign, fremstillingsmetode, on-chip C. elegans dyrkningsprotokol og tre eksempler på langsigtet billeddannelse for at studere udviklingsprocesser hos individuelle dyr. Chippen, fremstillet med polydimethylsiloxan og bundet på et dækglas, immobiliserer dyr på et glassubstrat ved hjælp af en elastomerisk membran, der afbøjes ved hjælp af nitrogengas. Komplet immobilisering af C. elegans muliggør robust time-lapse-billeddannelse af cellulære og subcellulære hændelser på en bedøvelsesfri måde. En kanalgeometri med et stort tværsnit gør det muligt for dyret at bevæge sig frit inden for to delvist forseglede isolationsmembraner, der tillader vækst i kanalen med en kontinuerlig fødevareforsyning. Ved hjælp af denne enkle chip kan billeddannelse af udviklingsfænomener som neuronal procesvækst, vulvaludvikling og dendritisk arborisering i PVD-sensoriske neuroner, når dyret vokser inde i kanalen, udføres. Den langsigtede vækst- og billedbehandlingschip fungerer med en enkelt trykledning, ingen eksterne ventiler, billige fluidiske forbrugsstoffer og bruger standard ormhåndteringsprotokoller, der let kan tilpasses af andre laboratorier ved hjælp af C. elegans.

Karakterisering af enhed: Vækst- og billeddannelsesenheden består af to PDMS-lag bundet sammen (figur 1) ved hjælp af irreversibel plasmabinding. Strømningslaget (mønster 1), som er 10 mm langt og 40 μm eller 80 μm i højden, giver os mulighed for at dyrke dyret i flydende kultur (figur 1A). Fældelaget (mønster 2) har en 2 mm bred membran (figur 1B) til immobilisering af dyret til billeddannelse i høj opl...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Microfluidic Chip for Long-Term Growth and Imaging of Caenorhabditis elegans at JoVE.com

A Simple Microfluidic Chip for Long-Term Growth and Imaging of Caenorhabditis elegans

Protokollen beskriver et simpelt mikrofluidisk chipdesign og mikrofabrikationsmetode, der bruges til at dyrke C. elegans i nærvær af en kontinuerlig fødevareforsyning i op til 36 timer. Vækst- og billeddannelsesenheden muliggør også intermitterende langsigtet højopløsningsbilleddannelse af cellulære og subcellulære processer under udvikling i flere dage.

En simpel mikrofluidisk chip til langsigtet vækst og billeddannelse af Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans (C. elegans) have proved to be a valuable model system for studying developmental and cell biological processes. Understanding ...

Den største fordel ved denne teknik er, at dyret kan vokse frit inde i enheden og kan fanges til billeddannelse i høj opløsning. Enheden kan genbruges flere gange. Under fremstillingen af enheden er renlighed den vigtigste faktor for at kunne fremstille støvfrie enheder for at undgå lækage under enhedens drift.For at begynde at designe mønster et for flowlaget og mønster to for kontrollaget ved hjælp af rektangulære former i en tekstbehandlingssoftware og udskrive fotomaskerne ved hjælp af en laserplotter med en mindste funktionsstørrelse på otte mikrometer på polyesterbaseret film. Skær siliciumskiver i firkantede stykker på 2,5 centimeter i højde og bredde. Rengør dem med 20% kaliumhydroxid i et minut og skyl skiverne i deioniseret vand.Brug den ene wafer til flowet og den anden til kontrollaget. Tør stykkerne med 14 P-S-I komprimeret nitrogengas efterfulgt af dehydrering på en kogeplade ved 120 grader Celsius i fire timer. Efter afkøling skal du tage et siliciumstykke, læg det på chucken på en spinkoder og tænd vakuumet for at holde waferen på plads.Sæt ca. 20 mikroliter hexamethyldisilan på siliciumstykket og belæg det ved hjælp af spinkoderen ved 500 R-P-M i fem sekunder efterfulgt af 3000 R-P-M i 30 sekunder. For at få en ensartet fotoresisttykkelse på ca. 40 mikrometer, der er specifik for strømningslaget, skal du belægge siliciumskiven med ca. 1,5 ml negativ fotoresist en ved hjælp af en spin-koder ved 500 R-P-M i fem sekunder efterfulgt af 2000 R-P-M i 30 sekunder. Gentag belægningen af siliciumstykket med hexamethyldisilan og negativ fotoresist en for den anden wafer for at opnå en ensartet fotoresisttykkelse på ca. 40 mikrometer, der er specifik for kontrollaget.Alternativt at øge tykkelsen af strømningslaget til ca. 80 mikrometer for ældre dyr belægge siliciumskiver med ca. 1,5 ml negativ fotoresist to, ved hjælp af spinkoderen ved 500 R-P-M i fem sekunder efterfulgt af 2000 R-P-M i 30 sekunder. Bag begge de tidligere fotoresistbelagte silikonestykker på en kogeplade ved 65 grader Celsius i et minut efterfulgt af 95 grader Celsius i 10 minutter. Efter afkøling skal du lægge bløde bagte silikonestykker på eksponeringstrinnet for U-V-belysningen med den fotoresistbelagte overflade vendt mod U-V-lampen.Udsæt de to stykker separat for U-V i 15 sekunder ved hjælp af en 200 watt lampe gennem en fotomaske med mønstre et og to for at få henholdsvis flow- og kontrollag. Bag de to udsatte silikonestykker som tidligere beskrevet med belagte lag opad. Efter afkøling af stykker udvikles mønstrene ved at lægge silikonestykkerne i blød i fotoresistudviklerløsningen i 20 minutter.Når mønsteret er synligt, skylles stykkerne med ren isopropylalkohol og føntørres forsigtigt med nitrogengas. Opbevar silikonestykkerne i en tørremiddel med den belagte overflade opad. Udsæt stykkerne for silandampe ved at hælde 50 mikroliter ren T-C-P-F-O-S på et glasglas.Placer diaset inde i en udtørring og inkuber i to timer. Lav P-D-M-S i en plastikkop ved at blande elastomerbasen med hærdningsmidlet og rør konstant i tre minutter. Afgas P-D-M-S-blandingen i en udtørring i 30 minutter for at fjerne alle luftbobler.Læg kontrollagets siliciumskiver i en petriskål og hæld et fem millimeter tykt P-D-M-S-blandingslag på siliciumstykkerne. Efter P-D-M-S hældningsprocessen gentages afgasningen af P-D-M-S-blandingen. Placer siliciumskiven med flowlag vendt mod spinnertrucken, der anvender 200 til 500 millitorr vakuumtryk.Hæld cirka en milliliter P-D-M-S på siliciumskiven. Kod det ved hjælp af en spin coater for at få et cirka 80 mikrometer tykt lag. Bag de to siliciumskiver med de spinbelagte P-D-M-S og hæld P-D-M-S lag ved 50 grader Celsius i en varmluftskonvektionsovn i seks timer.Efter afkøling skærer stykkerne det fem millimeter tykke P-D-M-S-lag fra siliciumstykket omkring kontrollaget ved hjælp af et skarpt blad og skræller det af siliciumsubstratet. Stans to huller med en diameter på ca. en millimeter ved hjælp af en Harris-stanser ved reservoiret i P-D-M-S-blokken for at forbinde immobiliseringskanalen og isolationskanalindløbene til gasledningerne til P-D-M-S-membranafbøjninger. Placer siliciumstykket med det spinbelagte P-D-M-S-lag på mønster et med P-D-M-S-belagt overflade opad på en plastbakke.Opbevar den stansede P-D-M-S-blok med mønster to på bakken med støbt side opad. Opbevar plastbakken inde i en plasmarenser, og udsæt de to P-D-M-S-overflader for 18 watt luftplasma i to minutter ved at anvende lavt vakuum. Tag de to plasmabehandlede blokke ud, og bind forsigtigt blokkene ved at trykke de plasmabehandlede overflader af mønstre et og to sammen.Bag de bundne mønstre ved 50 grader Celsius i to timer i en varmluftskonvektionsovn. Når du har taget den bundne enhed ud af ovnen, skal du skære den ud af siliciumskiven med mønster et og mønster to og stanse huller i strømningslagets indløbs- og udløbsreservoirer ved hjælp af Harris-stanseren. Placer den bundne P-D-M-S-blok med flowlaget opad på en plastbakke, og opbevar et rent dækglas på den samme bakke.Udsæt blokkene i dækglasset for 18 watt luftplasma i to minutter. Juster vakuumtrykket for at se et violet kammer. Placer den plasmaeksponerede P-D-M-S-blok på dækglasset, og bag den bundne struktur i en ovn ved 50 grader Celsius i to timer.Opbevar enheden i et rent kammer til ethvert fremtidigt eksperiment. Tag enheden, læg den på et stereomikroskop og fastgør slangerne. Tilslut et microflex-rør til en komprimeret nitrogengasledning og et trevejsstik i den anden ende.Tilslut rør et og to af trevejsstikkene til fælden i henholdsvis isolerende membraner. Tilslut to microflex-rør til de to udløbsporte på trevejs stophanen. Tilslut den anden ende af de to rør til en otte millimeter lang 18 gauge nål.Fyld flowlaget med M-9-buffer ved hjælp af en mikropipette gennem indløbsporten. Fyld begge rør med deioniseret vand gennem enden, der er forbundet med nålen. Indsæt de to nåle i de stansede huller, der forbinder isolerings- og fangstmembranen.Åbn nitrogengasregulatoren ved 14 P-S-I, og drej trevejsventilen fra rør et for at skubbe vandet ind i enheden gennem de mikrofluidiske kanaler i kontrollagene, nemlig fælden og isolationsmembranerne. Slip trykket ved hjælp af trevejs stophanen, når kanalerne er fyldt med vand og grundet. Fjern boblerne ved at flyde yderligere medier gennem flowkanalen.Figuren viser billeder af P-S-3-2-3-9, dyr, der vokser inde i den mikrofluidiske chip og immobiliseres hver ottende til 10. time for at fange fluorescensbilleder. Variation i ekspressionsmønster repræsenterer et eksempel på tidsmæssig genregulering, hvor det samme gen udtrykkes i forskellige celler på forskellige udviklingsstadier. Billeddannelse af individuel W-D-I-S-5-1 genotype af caenorhabditis elegans viser menorah-lignende forgrenet dendritisk arkitektur i hver P-V-D neuron, der omfatter primære, sekundære tertiære og kvaternære processer ved henholdsvis L-2, Sen L-2, L-3 og L-4 udviklingsstadier.Figuren heri sammenligner P-V-D-udvikling og enhedsdyrkede dyr og dem, der dyrkes på N-G-M-plader. Antallet af S-P og Q-P på forskellige stadier af ormens udvikling steg med alderen. Caenorhabditis elegans blev behandlet med en dråbe af tre millimolar levamisol for at forårsage tilstrækkelig lammelse, der kræves til billeddannelse i høj opløsning.S-P-værdierne var ikke signifikant forskellige, når de blev målt fra lignende iscenesatte dyr dyrket på N-G-M-plader og afbildet ved hjælp af tre millimolar levamisol på et Agar-dias. Endvidere øges afstanden mellem de to P-V-C-cellelegemer, den ene til stede i halen og den anden til stede nær vulvaen, når de bevæger sig fra hinanden i både dyr, der dyrkes i enheden, og dem, der dyrkes på N-G-M-plader. Figuren repræsenterer billedet i høj opløsning af berøringsreceptorneuroner fra dyr, der vokser inde i den mikrofluidiske enhed.Montagen repræsenterer hele P-L-M-R neuronal proces på successive tidspunkter, der fremhæver mitokondrier og neuronal proces. Grafen repræsenterer den samlede neuronale proceslængde, som blev observeret at stige med en hældning på 10,4 mikrometer i timen. Den mikrofremstillede enhed bruger en tynd P-D-M-S-membran afbøjet i nærvær af højtryks nitrogengas til at immobilisere og holde C-elegans på plads til billeddannelse i høj opløsning.Denne procedure kan muliggøre langsgående undersøgelser af cellulære og subcellulære processer i C-elegans, der har brug for intermitterende observationer over en lang periode.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

A Simple Microfluidic Chip for Long-Term Growth and Imaging of Caenorhabditis elegans

Fluorescence detection methods for microfluidic droplet platforms

Fluorescenspåvisning metoder for mikrofluide dråbe platforme

The development of microfluidic platforms for performing chemistry and biology has in large part been driven by a range of potential benefits that ...

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Simple mikrofluidenheder for<em&gt; In vivo</em&gt; Scanning af<em&gt; C. elegans</em&gt;,<em&gt; Drosophila</em&gt; Og zebrafisk

Micro fabricated fluidic devices provide an accessible micro-environment for in vivo studies on small organisms. Simple fabrication processes are ...

Microfluidic-based Electrotaxis for On-demand Quantitative Analysis of Caenorhabditis elegans' Locomotion

Microfluidic-based Electrotaxis for On-demand Quantitative Analysis of Caenorhabditis elegans' Locomotion

Mikrofluid-baserede Electrotaxis for On-demand kvantitativ analyse af<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; &#39;Locomotion

The nematode Caenorhabditis elegans is a versatile model organism for biomedical research because of its conservation of disease-related genes and ...

Microfluidic Chip Fabrication and Method to Detect Influenza

Mikrofluid chip fabrikation og metode til at påvise Influenza

Fast  and effective diagnostics play an important role in controlling infectious  disease by enabling effective patient management and treatment. Here, we ...

A Microfluidic Chip for the Versatile Chemical Analysis of Single Cells

En Mikrofluid Chip til Alsidig kemisk analyse af enkelte celler

We present a microfluidic device that enables the quantitative determination of intracellular biomolecules in multiple single cells in parallel. For this ...

Long-term Intravital Immunofluorescence Imaging of Tissue Matrix Components with Epifluorescence and Two-photon Microscopy

Langsigtet Intravital Immunofluorescens Imaging af Tissue Matrix Komponenter med epifluorescens og to-foton mikroskopi

Besides being a physical scaffold to maintain tissue morphology, the extracellular matrix (ECM) is actively involved in regulating cell and tissue ...

A Microfluidic Chip for ICPMS Sample Introduction

En Mikrofluid Chip for ICPMS Sample Introduktion

This protocol discusses the fabrication and usage of a disposable low cost microfluidic chip as sample introduction system for inductively coupled plasma ...

The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture

Multi-orgel Chip - En Mikrofluid platform for langsigtet Multi-væv cokultur

The ever growing amount of new substances released onto the market and the limited predictability of current in vitro test systems has led to a high need ...

Electrotaxis Studies of Lung Cancer Cells using a Multichannel Dual-electric-field Microfluidic Chip

Electrotaxis Studier af lungecancerceller ved hjælp af en Multichannel Dual-elektriske-felt Mikrofluid Chip

The behavior of directional cell migration under a direct current electric-field (dcEF) is referred to as electrotaxis. The significant role of ...

Long-term Live Imaging Device for Improved Experimental Manipulation of Zebrafish Larvae

Langsigtet Live Imaging enhed for forbedret eksperimentelle manipulering af zebrafisk larver

The zebrafish larva is an important model organism for both developmental biology and wound healing. Further, the zebrafish larva is a valuable system for ...