Name: a simple microfluidic chip for long-term growth and imaging of caenorhabditis elegans
Uploaded: 2022-04-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Microfluidic Chip for Long-Term Growth and Imaging of Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Vi tackar CIFF imaging facility, NCBS för användningen av konfokalmikroskopen som stöds av DST - Centre for Nanotechnology (nr. SR/55/NM-36-2005). Vi tackar forskningsfinansiering från DBT (SPK), CSIR-UGC (JD), DST (SM), DBT (SM), snurrskiva som stöds av DAE-PRISM 12-R&D-IMS-5.02.0202 (SPK och Gautam Menon) och HHMI-IECS grant number 55007425 (SPK). HB101-, PS3239- och wdIs51-stammarna tillhandahölls av Caenorhabditis Genetics Center (CGC), som finansieras av NIH Office of Research Infrastructure Programs (P40 OD010440). S.P.K. gjorde jsIs609 i Mike Nonets laboratorium.

1. Tillverkning av tillväxt- och bildåtergivningsapparat
<ol><li>SU8 mögel tillverkning<ol><li>Designa mönster 1 (flödeslager) och 2 (kontrollskikt) med rektangulära former i ett ordbehandlingsprogram (eller ett datorstödd design-CAD-programvara) och skriv ut fotomaskerna med hjälp av en laserplotter med en minsta funktionsstorlek på 8 μm på polyesterbaserad film (figur 1).</li>
		<li>Skär kiselskivor i 2,5 cm × 2,5 cm bitar och rengör dem med 20% KOH i 1 min...

<ol>
	<li>Doitsidou, M., Poole, R. J., Sarin, S., Bigelow, H., Hobert, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+Mutant+Identification+with+a+One-Step+Whole-Genome-Sequencing+and+SNP+Mapping+Strategy.">C. elegans Mutant Identification with a One-Step Whole-Genome-Sequencing and SNP Mapping Strategy.</a> PloS One. 5 (11), 15435 (2010).</li><li>Hobert, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Neurogenesis in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> WormBook. The C. elegans. Research Community, WormBook. , (2010).</li><li>Mondal, S., Ahlawat, S., Rau, K., Venkataraman, V., Koushika, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+in+vivo+neuronal+transport+in+genetic+model+organisms+using+microfluidic+devices.">Imaging in vivo neuronal transport in genetic model organisms using microfluidic devices.</a> Traffic. 12 (4), 372-385 (2011).</li><li>Steele, L. M., Sedensky, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approaches+to+Anesthetic+Mechanisms:+The+C.+elegans+Model.">Approaches to Anesthetic Mechanisms: The C. elegans Model.</a> Methods in Enzymology. 602, 133-151 (2018).</li><li>San-Miguel, A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidics+as+a+tool+for+C.+elegans+research.">Microfluidics as a tool for C. elegans research.</a> WormBook. The C. elegans. Research Community, WormBook. , (2013).</li><li>C&#225;ceres, I. C., Valmas, N., Hilliard, M. A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laterally+orienting+C.+elegans+using+geometry+at+microscale+for+high-throughput+visual+screens+in+neurodegeneration+and+neuronal+development+studies.">Laterally orienting C. elegans using geometry at microscale for high-throughput visual screens in neurodegeneration and neuronal development studies.</a> PloS One. 7 (4), 35037 (2012).</li><li>Ai, X., Zhuo, W., Liang, Q., McGrath, P. T., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+device+for+size+based+separation+of+C.+elegans+developmental+stages.">A high-throughput device for size based separation of C. elegans developmental stages.</a> Lab on a Chip. 14 (10), 1746-1752 (2014).</li><li>Chung, K., Crane, M. M., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+on-chip+rapid+microscopy,+phenotyping+and+sorting+of+C.+elegans.">Automated on-chip rapid microscopy, phenotyping and sorting of C. elegans.</a> Nature Methods. 5 (7), 637-643 (2008).</li><li>Desta, I. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+and+Trapping+of+a+Single+C.+elegans+Worm+in+a+Microfluidic+Chip+for+Automated+Microplate+Dispensing.">Detecting and Trapping of a Single C. elegans Worm in a Microfluidic Chip for Automated Microplate Dispensing.</a> SLAS Technology. 22 (4), 431-436 (2017).</li><li>Ben-Yakar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Content+and+High-Throughput+In+Vivo+Drug+Screening+Platforms+Using+Microfluidics.">High-Content and High-Throughput In Vivo Drug Screening Platforms Using Microfluidics.</a> Assay and Drug Development Technologies. 17 (1), 8-13 (2019).</li><li>Mondal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+microfluidics+providing+high-resolution+and+high-throughput+screening+of+Caenorhabditis+elegans+poly-glutamine+aggregation+model.">Large-scale microfluidics providing high-resolution and high-throughput screening of Caenorhabditis elegans poly-glutamine aggregation model.</a> Nature Communications. 7, 13023 (2016).</li><li>Fehlauer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+a+Microfluidics+Device+for+Mechanical+Stimulation+and+High+Resolution+Imaging+of+C.+Elegant.">Using a Microfluidics Device for Mechanical Stimulation and High Resolution Imaging of C. Elegant.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (132), e56530 (2018).</li><li>Saberi-Bosari, S., Huayta, J., San-Miguel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+platform+for+lifelong+high-resolution+and+high+throughput+imaging+of+subtle+aging+phenotypes+in+C.+elegans.">A microfluidic platform for lifelong high-resolution and high throughput imaging of subtle aging phenotypes in C. elegans.</a> Lab on a Chip. 18 (20), 3090-3100 (2018).</li><li>Cornaglia, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+microfluidic+platform+for+C.+elegans+embryo+arraying,+phenotyping,+and+long-term+live+imaging.">An automated microfluidic platform for C. elegans embryo arraying, phenotyping, and long-term live imaging.</a> Scientific Reports. 5, 10192 (2015).</li><li>Suzuki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+ultra-thin+chips+for+immobilization+of+Caenorhabditis+elegans+in+microfluidic+channels+during+irradiation+and+selection+of+buffer+solution+to+prevent+dehydration.">Development of ultra-thin chips for immobilization of Caenorhabditis elegans in microfluidic channels during irradiation and selection of buffer solution to prevent dehydration.</a> Journal of Neuroscience Methods. 306, 32-37 (2018).</li><li>Hulme, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifespan-on-a-chip:+microfluidic+chambers+for+performing+lifelong+observation+of+C.+elegans.">Lifespan-on-a-chip: microfluidic chambers for performing lifelong observation of C. elegans.</a> Lab on a Chip. 10 (5), 589-597 (2010).</li><li>Chronis, N., Zimmer, M., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidics+for+in+vivo+imaging+of+neuronal+and+behavioral+activity+in+Caenorhabditis+elegans.">Microfluidics for in vivo imaging of neuronal and behavioral activity in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Methods. 4 (9), 727-731 (2007).</li><li>Lagoy, R. C., Albrecht, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+Devices+for+Behavioral+Analysis,+Microscopy,+and+Neuronal+Imaging+in+Caenorhabditis+Elegans.">Microfluidic Devices for Behavioral Analysis, Microscopy, and Neuronal Imaging in Caenorhabditis Elegans.</a> Methods in Molecular Biology. 1327, 159-179 (2015).</li><li>Levine, E., Lee, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+approaches+for+Caenorhabditis+elegans+research.">Microfluidic approaches for Caenorhabditis elegans research.</a> Animal Cells and Systems. 24 (6), 311-320 (2020).</li><li>Rahman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NemaLife+chip:+a+micropillar-based+microfluidic+culture+device+optimized+for+aging+studies+in+crawling+C.+elegans.">NemaLife chip: a micropillar-based microfluidic culture device optimized for aging studies in crawling C. elegans.</a> Scientific Reports. 10 (1), 16190 (2020).</li><li>Allen, P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-synapse+ablation+and+long-term+imaging+in+live+C.+elegans.">Single-synapse ablation and long-term imaging in live C. elegans.</a> Journal of Neuroscience Methods. 173 (1), 20-26 (2008).</li><li>Guo, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femtosecond+laser+nanoaxotomy+lab-on-a-chip+for+in+vivo+nerve+regeneration+studies.">Femtosecond laser nanoaxotomy lab-on-a-chip for in vivo nerve regeneration studies.</a> Nature Methods. 5 (6), 531-533 (2008).</li><li>Mondal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+Mitochondrial+Density+and+Positioning+along+a+Growing+Neuronal+Process+in+Individual+C.+elegans+Neuron+Using+a+Long-Term+Growth+and+Imaging+Microfluidic+Device.">Tracking Mitochondrial Density and Positioning along a Growing Neuronal Process in Individual C. elegans Neuron Using a Long-Term Growth and Imaging Microfluidic Device.</a> eNeuro. 8 (4), (2021).</li><li>Keil, W., Kutscher, L. M., Shaham, S., Siggia, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Term+High-Resolution+Imaging+of+Developing+C.+elegans+Larvae+with+Microfluidics.">Long-Term High-Resolution Imaging of Developing C. elegans Larvae with Microfluidics.</a> Developmental Cell. 40 (2), 202-214 (2017).</li><li>Gritti, N., Kienle, S., Filina, O., Van Zon, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+time-lapse+microscopy+of+C.+Elegans+post-embryonic+development.">Long-term time-lapse microscopy of C. Elegans post-embryonic development.</a> Nature Communications. 7, 12500 (2016).</li><li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biostable,+anti-fouling+zwitterionic+polyurethane-urea+based+on+PDMS+for+use+in+blood-contacting+medical+devices.">A biostable, anti-fouling zwitterionic polyurethane-urea based on PDMS for use in blood-contacting medical devices.</a> Journal of materials chemistry B. 8 (36), 8305-8314 (2020).</li><li>Peterson, S. L., McDonald, A., Gourley, P. L., Sasaki, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(dimethylsiloxane)+thin+films+as+biocompatible+coatings+for+microfluidic+devices:+cell+culture+and+flow+studies+with+glial+cells.">Poly(dimethylsiloxane) thin films as biocompatible coatings for microfluidic devices: cell culture and flow studies with glial cells.</a> Journal of Biomedical Materials ResearchPart A. 72 (1), 10-18 (2005).</li><li>Folch, A., Toner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+micropatterns+on+biocompatible+materials.">Cellular micropatterns on biocompatible materials.</a> Biotechnology Progress. 14 (3), 388-392 (1998).</li><li>Leclerc, E., Sakai, Y., Fujii, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+PDMS+(polydimethylsiloxane)+bioreactor+for+large-scale+culture+of+hepatocytes.">Microfluidic PDMS (polydimethylsiloxane) bioreactor for large-scale culture of hepatocytes.</a> Biotechnology Progress. 20 (3), 750-755 (2004).</li><li>Mehta, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+measurement+and+control+of+oxygen+levels+in+microfluidic+poly(dimethylsiloxane)+bioreactors+during+cell+culture.">Quantitative measurement and control of oxygen levels in microfluidic poly(dimethylsiloxane) bioreactors during cell culture.</a> Biomedical Microdevices. 9 (2), 123-134 (2007).</li><li>Palchesko, R. N., Zhang, L., Sun, Y., Feinberg, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+polydimethylsiloxane+substrates+with+tunable+elastic+modulus+to+study+cell+mechanobiology+in+muscle+and+nerve.">Development of polydimethylsiloxane substrates with tunable elastic modulus to study cell mechanobiology in muscle and nerve.</a> PloS One. 7 (12), 51499 (2012).</li><li>Inoue, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+markers+for+Caenorhabditis+elegans+vulval+cells.">Gene expression markers for Caenorhabditis elegans vulval cells.</a> Mechanisms of Development. 119, 203-209 (2002).</li><li>Fatouros, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Tau+aggregation+in+a+novel+caenorhabditis+elegans+model+of+tauopathy+mitigates+proteotoxicity.">Inhibition of Tau aggregation in a novel caenorhabditis elegans model of tauopathy mitigates proteotoxicity.</a> Human Molecular Genetics. 21 (16), 3587-3603 (2012).</li><li>Smith, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-lapse+imaging+and+cell-speci+fi+c+expression+pro+fi+ling+reveal+dynamic+branching+and+molecular+determinants+of+a+multi-dendritic+nociceptor+in+C.+elegans.">Time-lapse imaging and cell-speci fi c expression pro fi ling reveal dynamic branching and molecular determinants of a multi-dendritic nociceptor in C. elegans.</a> Developmental Biology. 345 (1), 18-33 (2010).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li><li>Oren-Suissa, M., Hall, D. H., Treinin, M., Shemer, G., Podbilewicz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fusogen+EFF-I+controls+sculpting+of+mechanosensory+dendrites.">The fusogen EFF-I controls sculpting of mechanosensory dendrites.</a> Science. 328 (5983), 1285-1288 (2010).</li><li>Smith, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+neuron+fates+are+distinguished+by+a+transcriptional+switch+that+regulates+dendrite+branch+stabilization.">Sensory neuron fates are distinguished by a transcriptional switch that regulates dendrite branch stabilization.</a> Neuron. 79 (2), 266-280 (2013).</li><li>Shrestha, B. R., Grueber, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+morphogenesis:+worms+get+an+EFF+in+dendritic+arborization.">Neuronal morphogenesis: worms get an EFF in dendritic arborization.</a> Current Biology: CB. 20 (16), 673-675 (2010).</li><li>Rao, G. N., Kulkarni, S. S., Koushika, S. P., Rau, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+nanosecond+laser+axotomy:+cavitation+dynamics+and+vesicle+transport.">In vivo nanosecond laser axotomy: cavitation dynamics and vesicle transport.</a> Optics Express. 16 (13), 9884-9894 (2008).</li><li>Sure, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=UNC-16/JIP3+and+UNC-76/FEZ1+limit+the+density+of+mitochondria+in+C.+elegans+neurons+by+maintaining+the+balance+of+anterograde+and+retrograde+mitochondrial+transport.">UNC-16/JIP3 and UNC-76/FEZ1 limit the density of mitochondria in C. elegans neurons by maintaining the balance of anterograde and retrograde mitochondrial transport.</a> Scientific Reports. 8 (1), 8938 (2018).</li><li>Awasthi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulated+distribution+of+mitochondria+in+touch+receptor+neurons+of+C.+elegans+influences+touch+response.">Regulated distribution of mitochondria in touch receptor neurons of C. elegans influences touch response.</a> bioRxiv. , (2020).</li></ol>

I detta dokument beskrivs ett protokoll för tillverkning och användning av en enkel mikrofluidisk anordning för odling av C. elegans med konstant matförsörjning och högupplöst avbildning av ett enda djur under dess utveckling. Denna tillverkningsprocess är enkel och kan göras i en icke-steril miljö. En dammfri miljö är avgörande under tillverkningsstegen. Närvaron av dammpartiklar skulle leda till felaktig kontakt mellan de två bindningsytorna, vilket resulterar i dålig bindning och läckage av e...

Caenorhabditis elegans har visat sig vara en kraftfull modellorganism för att studera cellbiologi, åldrande, utvecklingsbiologi och neurobiologi. Fördelar som dess transparenta kropp, korta livscykel, enkelt underhåll, ett definierat antal celler, homologi med flera mänskliga gener och välstuderad genetik har lett till att C. elegans blivit en populär modell både för grundläggande biologiska upptäckter och tillämpad forskning 1,2. Att förstå cellens biologiska och utvecklingsprocesser från upprepad långtidsobservation av enskilda djur kan visa sig vara fördelaktigt. Konventionellt bedövas C. elegans på agarkuddar och avbildas under mikroskopet. Negativa effekter av anestetika på djurens hälsa begränsar användningen av bedövade djur för långvarig och upprepad intermittent avbildning av samma djur 3,4. De senaste framstegen inom mikrofluidisk teknik och deras anpassning för anestesifri fångst av C. elegans med försumbara hälsorisker möjliggör högupplöst avbildning av samma djur under en kort och lång tidsperiod.
Mikrofluidiska chips har utformats för C. elegans'5 high throughput screening 6,7,8, trapping and dispensing9, drug screening 10,11, neuronstimulering med högupplöst avbildning 12 och högupplöst avbildning av djuret 12,13,14. Ultratunna mikrofluidiska ark för immobilisering på glidbanor har också utvecklats15. Långtidsstudier av C. elegans har utförts med hjälp av lågupplösta bilder av djur som växer i flytande kultur för att observera tillväxt, kalciumdynamik, läkemedelseffekter på deras beteende16,17,18,19, deras livslängd och åldrande20. Långtidsstudier med högupplöst mikroskopi har utförts för att bedöma synaptisk utveckling21, neuronal regenerering 22 och mitokondriell addition23. Långvarig högupplöst avbildning och spårning av cellöde och differentiering har gjorts i flerkanaliga enheter24,25. Flera cellulära och subcellulära händelser inträffar under tidsskalorna på flera timmar och kräver att samma individ fångas vid olika tidpunkter under deras utveckling för att karakterisera alla mellanliggande steg i processen för att förstå cellulär dynamik in vivo. För att avbilda biologisk process som organogenes, neuronal utveckling och cellmigration måste djuret immobiliseras i samma riktning vid flera tidpunkter. Vi har tidigare publicerat ett protokoll för högupplöst avbildning av C. elegans i över 36 timmar för att bestämma var mitokondrier tillsätts längs beröringsreceptorneuronerna (TRN)23.
Detta dokument tillhandahåller ett protokoll för att upprätta en mikrofluidikbaserad metod för upprepad högupplöst avbildning. Denna enhet, med en enda flödeskanal, passar bäst för upprepad avbildning av ett enda djur per enhet. För att förbättra genomströmningen och avbilda många djur samtidigt kan flera enheter anslutas till samma tryckledning men med separata trevägskontakter som styr ett enda djur i varje enhet. Designen är användbar för studier som kräver högupplösta time-lapse-bilder som post-embryonala utvecklingsprocesser, cellmigration, organelltransport, genuttrycksstudier etc. Tekniken kan vara begränsande för vissa applikationer som livslängds- och åldrandestudier som kräver parallell tillväxt och avbildning av många djur i sent stadium. Polydimetylsiloxan (PDMS) elastomer användes för att tillverka denna anordning på grund av dess biostabilitet26, biokompatibilitet 27,28, gaspermeablilitet 29,30 och avstämbar elastisk modul 31. Denna tvåskiktsanordning möjliggör tillväxt av djur med kontinuerlig matförsörjning i en mikrofluidisk kanal och fångst av enskilda C. elegans via PDMS-membrankompression med användning av kvävgas. Denna enhet är en förlängning av den tidigare publicerade enheten med fördelen att odla och avbilda samma djur i mikrokanalen under en kontinuerlig matförsörjning3. Det extra isoleringsmembrannätverket och ett 2 mm brett fångstmembran möjliggör effektiv immobilisering av utvecklande djur. Enheten har använts för att observera neuronal utveckling, vulvalutveckling och dendritisk arborisering i sensoriska PVD-neuroner. Djuren växer utan negativa hälsoeffekter i enheten och kan upprepas immobiliseras för att underlätta avbildning av subcellulära händelser hos samma djur under dess utveckling.
Hela protokollet är uppdelat i fem delar. Del 1 beskriver enhetstillverkning för tillväxt- och bildchipet. Del 2 beskriver hur man ställer in ett trycksystem för PDMS-membranavböjning för att immobilisera och isolera enskilda C. elegans. Del 3 beskriver hur man synkroniserar C. elegans på en nematodtillväxtmedium (NGM) platta för avbildning av enheter. Del 4 beskriver hur man laddar ett enda djur i enheten och odlar djuret inuti mikrofluidikanordningen i flera dagar. Del 5 beskriver hur man immobiliserar ett enskilt djur vid flera tidpunkter, tar högupplösta bilder med olika mål och analyserar bilderna med Fiji.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>18 G needles</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Bangalore, India</td>
			<td>Gauge 18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way stopcock</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>WW-30600-02</td>
			<td>Masterflex fitting with luer lock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CCD camera</td>
			<td>Andor Technology</td>
			<td>EMCCD C9100-13no</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circuit board film</td>
			<td>Fine Line Imaging, Colorado, USA</td>
			<td></td>
			<td>The designs are printed with 65,024 dots per inch (DPI)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Convection Oven</td>
			<td>Meta-Lab Scientific Industries, India</td>
			<td>MSI-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Blue stat microscopic cover glass</td>
			<td></td>
			<td>22mm x 10Gms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Hi media</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris uni-core puncher 1mm</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>Z708801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethyldisilazane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Bangalore, India</td>
			<td>440191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>&#160;IKA</td>
			<td>RCT B S 22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>26895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOH</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Scanning Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>LSM 5 LIVE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette tips</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td></td>
			<td>0.5-10 &#181;L micropipette tips are used for food supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Negative Photoresist-1</td>
			<td>Microchem</td>
			<td>SU8-2025</td>
			<td>http://www.microchem.com/Prod-SU82000.htm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Negative Photoresist-2</td>
			<td>Microchem</td>
			<td>SU8-2050</td>
			<td>http://www.microchem.com/Prod-SU82000.htm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrogen gas</td>
			<td>Local Supplier</td>
			<td>Commercial nitrogen gas</td>
			<td>Cylinder volume of 7 cubic meter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDMS (Curing solution)</td>
			<td>Dow Corning Corporation, MI, USA</td>
			<td>&#160;Sylgard curing solution</td>
			<td>curing agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri plates</td>
			<td>Praveen Scientific Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma cleaner</td>
			<td>Harrick Plasma, NY, USA</td>
			<td>&#160;PDC-32G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor and blades</td>
			<td>Lister surgical Blade</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon Elastomer (Base)</td>
			<td>Dow Corning Corporation, MI, USA</td>
			<td>Sylgard 184 base</td>
			<td>elastomer base</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Plastic tubes with the inner diameter 1.59 mm and the outer diameter 3.18 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon wafer</td>
			<td>University Wafer, MA, USA</td>
			<td>[100] orientation, 4-inch diameter</td>
			<td>Small pieces (2 mm &#215; 2 mm) were cut from 100 mm diameter wafer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin Coater</td>
			<td>SPS-Europe B.V., The Netherlands</td>
			<td>SPIN 150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning Disk microscope</td>
			<td>Perkin Elmer ultra-view VOX system</td>
			<td>CSU-X1-A3 N</td>
			<td>The system was equipped with four (405/488/561/640 nm) lasers and controlled with the Volocity software package.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU8 developer</td>
			<td>Microchem, MA, USA</td>
			<td>SU8 Developer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloro (1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyl) silane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Bangalore, India</td>
			<td>448931</td>
			<td>Trichloro (1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyl) silane vapor is toxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV lamp</td>
			<td>Oriel Instruments, Bangalore, India</td>
			<td></td>
			<td>200 Watt and collimated UV light source</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volocity software</td>
			<td>Perkin-Elmer</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple microfluidic chip for long-term growth and imaging of caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans (C. elegans) har visat sig vara ett värdefullt modellsystem för att studera utvecklings- och cellbiologiska processer. Att förstå dessa biologiska processer kräver ofta långvarig och upprepad avbildning av samma djur. Långa återhämtningstider i samband med konventionella immobiliseringsmetoder gjorda på agarkuddar har skadliga effekter på djurhälsan vilket gör det olämpligt att upprepade gånger avbilda samma djur under långa tidsperioder. Detta papper beskriver en mikrofluidisk chipdesign, tillverkningsmetod, on-chip C. elegans odlingsprotokoll och tre exempel på långsiktig avbildning för att studera utvecklingsprocesser hos enskilda djur. Chipet, tillverkat med polydimetylsiloxan och bundet på ett täckglas, immobiliserar djur på ett glassubstrat med hjälp av ett elastomermembran som avböjs med hjälp av kvävgas. Fullständig immobilisering av C. elegans möjliggör robust time-lapse-avbildning av cellulära och subcellulära händelser på ett bedövningsfritt sätt. En kanalgeometri med ett stort tvärsnitt gör det möjligt för djuret att röra sig fritt inom två delvis förseglade isoleringsmembran som möjliggör tillväxt i kanalen med kontinuerlig mattillförsel. Med hjälp av detta enkla chip kan avbildning av utvecklingsfenomen som neuronal processtillväxt, vulvalutveckling och dendritisk arborisering i PVD-sensoriska neuroner, när djuret växer inuti kanalen, utföras. Det långsiktiga tillväxt- och bildchipet arbetar med en enda tryckledning, inga externa ventiler, billiga flytande förbrukningsvaror och använder standardprotokoll för maskhantering som enkelt kan anpassas av andra laboratorier som använder C. elegans.

Karakterisering av enheten: Tillväxt- och avbildningsanordningen består av två PDMS-lager bundna ihop (figur 1) med irreversibel plasmabindning. Flödesskiktet (mönster 1) som är 10 mm långt och 40 μm eller 80 μm i höjd gör att vi kan odla djuret i flytande kultur (Figur 1A). Fångstskiktet (mönster 2) har ett 2 mm brett membran (figur 1B) för immobilisering av djuret för högupplöst avbildning. Maske...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Microfluidic Chip for Long-Term Growth and Imaging of Caenorhabditis elegans at JoVE.com

A Simple Microfluidic Chip for Long-Term Growth and Imaging of Caenorhabditis elegans

Protokollet beskriver en enkel mikrofluidisk chipdesign och mikrofabrikationsmetodik som används för att odla C. elegans i närvaro av en kontinuerlig livsmedelsförsörjning i upp till 36 timmar. Tillväxt- och bildbehandlingsenheten möjliggör också intermittent långsiktig högupplöst avbildning av cellulära och subcellulära processer under utveckling i flera dagar.

Ett enkelt mikrofluidiskt chip för långsiktig tillväxt och avbildning av Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans (C. elegans) have proved to be a valuable model system for studying developmental and cell biological processes. Understanding ...

Den största fördelen med denna teknik är att djuret kan växa fritt inuti enheten och kan fångas för högupplöst avbildning. Enheten kan återanvändas flera gånger. När du tillverkar enheten är renhet den viktigaste faktorn för att kunna tillverka dammfria enheter för att undvika läckage under enhetens drift.För att börja designa mönster ett för flödesskiktet och mönster två för kontrollskiktet med rektangulära former i ett ordbehandlingsprogram och skriva ut fotomaskerna med hjälp av en laserplotter med en minsta funktionsstorlek på åtta mikrometer på polyesterbaserad film. Skär kiselskivor i fyrkantiga bitar på 2,5 centimeter i höjd och bredd. Rengör dem med 20% kaliumhydroxid i en minut och skölj skivorna i avjoniserat vatten.Använd en skiva för flödet och den andra för kontrollskiktet. Torka bitarna med 14 P-S-I komprimerad kvävgas följt av uttorkning på en värmeplatta vid 120 grader Celsius i fyra timmar. Efter kylning ta en kiselbit, lägg den på chucken på en snurrkodare och sätt på vakuumet för att hålla skivan på plats.Lägg cirka 20 mikroliter hexametyldisilan på kiselbiten och täck den med spinnkodaren vid 500 R-P-M i fem sekunder följt av 3000 R-P-M i 30 sekunder. För att få en enhetlig fotoresisttjocklek på cirka 40 mikrometer som är specifik för flödesskiktet, belägg kiselskivan med cirka 1,5 ml negativ fotoresist med en med en spinnkodare vid 500 R-P-M i fem sekunder följt av 2000 R-P-M i 30 sekunder. Upprepa beläggningen av kiselstycket med hexametyldisilan och negativ fotoresist en för den andra skivan för att erhålla en enhetlig fotoresisttjocklek på cirka 40 mikrometer som är specifik för kontrollskiktet.Alternativt, för att öka tjockleken på flödesskiktet till cirka 80 mikrometer för äldre djur, täcker kiselskivor med cirka 1,5 ml negativ fotoresist två, med hjälp av spinnkodaren vid 500 R-P-M i fem sekunder följt av 2000 R-P-M i 30 sekunder. Grädda båda de tidigare fotoresistbelagda silikonbitarna på en kokplatta vid 65 grader Celsius i en minut följt av 95 grader Celsius i 10 minuter. Efter kylning, sätt mjuka bakade silikonbitar på exponeringssteget för U-V-belysningen med den fotoresistbelagda ytan mot U-V-lampan.Exponera de två bitarna separat för U-V i 15 sekunder med en 200 watts lampa genom en fotomask med mönster ett och två för att få flödes- respektive kontrollskikt. Grädda de två exponerade silikonbitarna som tidigare beskrivits med belagda lager uppåt. Efter kylning av bitar, utveckla mönstren genom att blötlägga silikonbitarna i fotoresistutvecklarlösningen i 20 minuter.När mönstret är synligt, skölj bitarna med ren isopropylalkohol och föna försiktigt med kvävgas. Förvara silikonbitarna i en exsickator med den belagda ytan uppåt. Utsätt bitarna för silanångor genom att hälla 50 mikroliter ren T-C-P-F-O-S på en glasskiva.Placera bilden inuti en exsickator och inkubera i två timmar. Gör P-D-M-S i en plastkopp genom att blanda elastomerbasen med härdningsmedlet och rör om hela tiden i tre minuter. Avgasa P-D-M-S-blandningen i en exsickator i 30 minuter för att ta bort alla luftbubblor.Placera kontrollskiktets kiselskivor i en petriskål och häll ett fem millimeter tjockt P-D-M-S-blandningsskikt på kiselbitarna. Efter P-D-M-S-hällningsprocessen, upprepa avgasningen av P-D-M-S-blandningen. Placera kiselskivan med flödesskiktet mot spinnaren och applicera 200 till 500 ml vakuumtryck.Häll ungefär en milliliter P-D-M-S på kiselskivan. Koda den med en spinnbeläggning för att få ett cirka 80 mikrometer tjockt lager. Grädda de två kiselskivorna med den spinnbelagda P-D-M-S och häll P-D-M-S-skikten vid 50 grader Celsius i en varmluftskonvektionsugn i sex timmar.Efter kylning skär bitarna det fem millimeter tjocka P-D-M-S-skiktet från kiselbiten runt kontrollskiktet med ett vasst blad och skalar bort det från kiselsubstratet. Stansa två hål med ungefär en millimeters diameter med hjälp av en Harris-puncher vid behållaren i P-D-M-S-blocket för att ansluta immobiliseringskanalen och isoleringskanalinloppen till gasledningarna för P-D-M-S-membranböjningar. Placera kiselbiten med det spinnbelagda P-D-M-S-skiktet på mönster ett med den P-D-M-S-belagda ytan uppåt på en plastbricka.Håll det stansade P-D-M-S-blocket med mönster två på brickan med gjuten sida uppåt. Förvara plastbrickan inuti en plasmarengörare och utsätt de två P-D-M-S-ytorna för 18 watt luftplasma i två minuter genom att applicera lågt vakuum. Ta ut de två plasmabehandlade blocken och bind försiktigt blocken genom att trycka ihop de plasmabehandlade ytorna av mönster ett och två.Grädda de bundna mönstren vid 50 grader Celsius i två timmar i en varmluftskonvektionsugn. Efter att ha tagit den bundna enheten ur ugnen, skär den ur kiselskivan med mönster ett och mönster två och stansa hål i flödesskiktets inlopps- och utloppsbehållare med Harris puncher. Placera det bundna P-D-M-S-blocket med flödesskiktet uppåt på en plastbricka och förvara ett rent täckglas på samma bricka.Utsätt blocken i täckglaset för 18 watt luftplasma i två minuter. Justera vakuumtrycket för att se en violett kammare. Placera det plasmaexponerade P-D-M-S-blocket på täckglaset och baka den bundna strukturen i en ugn vid 50 grader Celsius i två timmar.Förvara enheten i en ren kammare för framtida experiment. Ta enheten, sätt den på ett stereomikroskop och fäst slangarna. Anslut ett mikroflexrör till en komprimerad kvävgasledning och en trevägskontakt i andra änden.Anslut rör ett respektive två av trevägskontakterna till fällan i isolerande membran. Anslut två microflex-rör till de två utloppsportarna på trevägsstoppkranen. Anslut den andra änden av de två rören till en åtta millimeter lång 18 gauge nål.Fyll flödesskiktet med M-9-buffert med en mikropipett genom inloppsporten. Fyll båda rören med avjoniserat vatten genom änden ansluten till nålen. Sätt in de två nålarna i de stansade hålen som förbinder isolerings- och fångstmembranet.Öppna kvävgasregulatorn vid 14 P-S-I och vrid trevägsventilen från rör ett för att trycka in vattnet i enheten genom de mikrofluidiska kanalerna i kontrollskikten, nämligen fällan och isoleringsmembranen. Släpp trycket med hjälp av trevägs stoppkranen, när kanalerna är fyllda med vatten och grundade. Ta bort bubblorna genom att flöda ytterligare media genom flödeskanalen.Figuren visar bilder av P-S-3-2-3-9, djur som växer inuti det mikrofluidiska chipet och immobiliseras var åttonde till 10: e timme för att fånga fluorescensbilder. Variation i uttrycksmönster representerar ett exempel på temporal genreglering där samma gen uttrycks i olika celler i olika utvecklingsstadier. Avbildning av individuell W-D-I-S-5-1-genotyp av caenorhabditis elegans visar menorah-liknande grenad dendritisk arkitektur i varje P-V-D-neuron som omfattar primära, sekundära tertiära och kvartära processer vid L-2, Late L-2, L-3 respektive L-4 utvecklingsstadier.Figuren häri jämför P-V-D-utveckling och enhetsodlade djur och de som odlas på N-G-M-plattor. Antalet S-P och Q-P i olika stadier av maskutvecklingen ökade med åldern. Caenorhabditis elegans behandlades med en droppe av tre millimolära levamisol för att orsaka tillräcklig förlamning som krävs för högupplöst avbildning.S-P-värdena skilde sig inte signifikant när de mättes från liknande iscensatta djur som odlades på N-G-M-plattor och avbildades med tre millimolära levamisol på en Agar-bild. Vidare ökar avståndet mellan de två P-V-C-cellkropparna, en närvarande i svansen och den andra närvarande nära vulva, när de rör sig isär hos både djur som odlas i enheten och de som odlas på N-G-M-plattor. Figuren representerar den högupplösta bilden av beröringsreceptorneuroner från djur som växer inuti den mikrofluidiska enheten.Montaget representerar hela P-L-M-R-neuronala processen vid successiva tidpunkter som belyser mitokondrier och den neuronala processen. Grafen representerar total neuronal processlängd som observerades öka med en lutning på 10,4 mikrometer per timme. Den mikrotillverkade enheten använder ett tunt P-D-M-S-membran avböjt i närvaro av högtryckskvävgas för att immobilisera och hålla C-elegans på plats för högupplöst avbildning.Denna procedur kan möjliggöra longitudinella studier av cellulära och subcellulära processer i C-elegans som behöver intermittenta observationer under en lång tidsperiod.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

A Simple Microfluidic Chip for Long-Term Growth and Imaging of Caenorhabditis elegans

Fluorescence detection methods for microfluidic droplet platforms

Fluorescens detektionsmetoder för mikroflödessystem droppe plattformar

The development of microfluidic platforms for performing chemistry and biology has in large part been driven by a range of potential benefits that ...

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Enkla mikroflödessystem enheter för<em&gt; In vivo</em&gt; Avbildning av<em&gt; C. elegans</em&gt;,<em&gt; Drosophila</em&gt; Och zebrafisk

Micro fabricated fluidic devices provide an accessible micro-environment for in vivo studies on small organisms. Simple fabrication processes are ...

Microfluidic-based Electrotaxis for On-demand Quantitative Analysis of Caenorhabditis elegans' Locomotion

Microfluidic-based Electrotaxis for On-demand Quantitative Analysis of Caenorhabditis elegans' Locomotion

Mikroflödesbaserade Electrotaxis för On-demand kvantitativ analys av<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; &quot;Locomotion

The nematode Caenorhabditis elegans is a versatile model organism for biomedical research because of its conservation of disease-related genes and ...

Microfluidic Chip Fabrication and Method to Detect Influenza

Mikroflödessystem Chip Fabrication och metod för att upptäcka influensa

Fast  and effective diagnostics play an important role in controlling infectious  disease by enabling effective patient management and treatment. Here, we ...

A Microfluidic Chip for the Versatile Chemical Analysis of Single Cells

Ett mikroflödes Chip för Mångsidig kemisk analys av enskilda celler

We present a microfluidic device that enables the quantitative determination of intracellular biomolecules in multiple single cells in parallel. For this ...

Long-term Intravital Immunofluorescence Imaging of Tissue Matrix Components with Epifluorescence and Two-photon Microscopy

Långsiktig Intravital Immunofluorescence avbildning av Tissue Matrix Komponenter med epifluorescens och Två-foton mikroskopi

Besides being a physical scaffold to maintain tissue morphology, the extracellular matrix (ECM) is actively involved in regulating cell and tissue ...

A Microfluidic Chip for ICPMS Sample Introduction

En mikroflödes Chip för ICPMS Sample Introduktion

This protocol discusses the fabrication and usage of a disposable low cost microfluidic chip as sample introduction system for inductively coupled plasma ...

The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture

Multi-orgeln Chip - En mikroflödes Plattform för Långsiktig Flervävnads Coculture

The ever growing amount of new substances released onto the market and the limited predictability of current in vitro test systems has led to a high need ...

Electrotaxis Studies of Lung Cancer Cells using a Multichannel Dual-electric-field Microfluidic Chip

Electrotaxis Studier av lungcancerceller med användning av en Multichannel dubbla elektriskt fält mikroflödes Chip

The behavior of directional cell migration under a direct current electric-field (dcEF) is referred to as electrotaxis. The significant role of ...

Long-term Live Imaging Device for Improved Experimental Manipulation of Zebrafish Larvae

Långsiktiga levande Imaging enhet för förbättrad experimentella Manipulation av zebrafisk larver

The zebrafish larva is an important model organism for both developmental biology and wound healing. Further, the zebrafish larva is a valuable system for ...