Name: a simple microfluidic chip for long-term growth and imaging of caenorhabditis elegans
Uploaded: 2022-04-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Microfluidic Chip for Long-Term Growth and Imaging of Caenorhabditis elegans at JoVE.com

CIFF görüntüleme tesisi NCBS'ye, DST - Nanoteknoloji Merkezi tarafından desteklenen konfokal mikroskopların kullanımı için teşekkür ederiz (Hayır. SR/55/NM-36-2005). DBT (SPK), CSIR-UGC (JD), DST (SM), DBT (SM), DAE-PRISM 12-R&D-IMS-5.02.0202 (SPK ve Gautam Menon) tarafından desteklenen eğirme diski ve HHMI-IECS hibe numarası 55007425 (SPK) tarafından sağlanan araştırma fonlarına teşekkür ederiz. HB101, PS3239 ve wdIs51 suşları, NIH Araştırma Altyapı Programları Ofisi (P40 OD010440) tarafından finanse edilen Caenorhabditis Genetik Merkezi (CGC) tarafından sağlanmıştır. S.P.K., Mike Nonet'in laboratuvarında jsIs609'u yaptı.

1. Büyüme ve görüntüleme cihazının imalatı
<ol><li>SU8 kalıp imalatı<ol><li>Bir kelime işlem yazılımında (veya bilgisayar destekli bir tasarım CAD yazılımında) dikdörtgen şekiller kullanarak 1 (akış katmanı) ve 2 (kontrol katmanı) desenlerini tasarlayın ve fotomaskeleri, polyester tabanlı film üzerinde minimum 8 μm özellik boyutuna sahip bir lazer plotter yardımıyla yazdırın (Şekil 1).</li>
		<li>Silikon gofretleri 2,5 cm × 2,5 cm'lik par...

<ol>
	<li>Doitsidou, M., Poole, R. J., Sarin, S., Bigelow, H., Hobert, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+Mutant+Identification+with+a+One-Step+Whole-Genome-Sequencing+and+SNP+Mapping+Strategy.">C. elegans Mutant Identification with a One-Step Whole-Genome-Sequencing and SNP Mapping Strategy.</a> PloS One. 5 (11), 15435 (2010).</li><li>Hobert, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Neurogenesis in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> WormBook. The C. elegans. Research Community, WormBook. , (2010).</li><li>Mondal, S., Ahlawat, S., Rau, K., Venkataraman, V., Koushika, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+in+vivo+neuronal+transport+in+genetic+model+organisms+using+microfluidic+devices.">Imaging in vivo neuronal transport in genetic model organisms using microfluidic devices.</a> Traffic. 12 (4), 372-385 (2011).</li><li>Steele, L. M., Sedensky, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approaches+to+Anesthetic+Mechanisms:+The+C.+elegans+Model.">Approaches to Anesthetic Mechanisms: The C. elegans Model.</a> Methods in Enzymology. 602, 133-151 (2018).</li><li>San-Miguel, A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidics+as+a+tool+for+C.+elegans+research.">Microfluidics as a tool for C. elegans research.</a> WormBook. The C. elegans. Research Community, WormBook. , (2013).</li><li>C&#225;ceres, I. C., Valmas, N., Hilliard, M. A., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laterally+orienting+C.+elegans+using+geometry+at+microscale+for+high-throughput+visual+screens+in+neurodegeneration+and+neuronal+development+studies.">Laterally orienting C. elegans using geometry at microscale for high-throughput visual screens in neurodegeneration and neuronal development studies.</a> PloS One. 7 (4), 35037 (2012).</li><li>Ai, X., Zhuo, W., Liang, Q., McGrath, P. T., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+device+for+size+based+separation+of+C.+elegans+developmental+stages.">A high-throughput device for size based separation of C. elegans developmental stages.</a> Lab on a Chip. 14 (10), 1746-1752 (2014).</li><li>Chung, K., Crane, M. M., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+on-chip+rapid+microscopy,+phenotyping+and+sorting+of+C.+elegans.">Automated on-chip rapid microscopy, phenotyping and sorting of C. elegans.</a> Nature Methods. 5 (7), 637-643 (2008).</li><li>Desta, I. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+and+Trapping+of+a+Single+C.+elegans+Worm+in+a+Microfluidic+Chip+for+Automated+Microplate+Dispensing.">Detecting and Trapping of a Single C. elegans Worm in a Microfluidic Chip for Automated Microplate Dispensing.</a> SLAS Technology. 22 (4), 431-436 (2017).</li><li>Ben-Yakar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Content+and+High-Throughput+In+Vivo+Drug+Screening+Platforms+Using+Microfluidics.">High-Content and High-Throughput In Vivo Drug Screening Platforms Using Microfluidics.</a> Assay and Drug Development Technologies. 17 (1), 8-13 (2019).</li><li>Mondal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+microfluidics+providing+high-resolution+and+high-throughput+screening+of+Caenorhabditis+elegans+poly-glutamine+aggregation+model.">Large-scale microfluidics providing high-resolution and high-throughput screening of Caenorhabditis elegans poly-glutamine aggregation model.</a> Nature Communications. 7, 13023 (2016).</li><li>Fehlauer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+a+Microfluidics+Device+for+Mechanical+Stimulation+and+High+Resolution+Imaging+of+C.+Elegant.">Using a Microfluidics Device for Mechanical Stimulation and High Resolution Imaging of C. Elegant.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (132), e56530 (2018).</li><li>Saberi-Bosari, S., Huayta, J., San-Miguel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+platform+for+lifelong+high-resolution+and+high+throughput+imaging+of+subtle+aging+phenotypes+in+C.+elegans.">A microfluidic platform for lifelong high-resolution and high throughput imaging of subtle aging phenotypes in C. elegans.</a> Lab on a Chip. 18 (20), 3090-3100 (2018).</li><li>Cornaglia, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+microfluidic+platform+for+C.+elegans+embryo+arraying,+phenotyping,+and+long-term+live+imaging.">An automated microfluidic platform for C. elegans embryo arraying, phenotyping, and long-term live imaging.</a> Scientific Reports. 5, 10192 (2015).</li><li>Suzuki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+ultra-thin+chips+for+immobilization+of+Caenorhabditis+elegans+in+microfluidic+channels+during+irradiation+and+selection+of+buffer+solution+to+prevent+dehydration.">Development of ultra-thin chips for immobilization of Caenorhabditis elegans in microfluidic channels during irradiation and selection of buffer solution to prevent dehydration.</a> Journal of Neuroscience Methods. 306, 32-37 (2018).</li><li>Hulme, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lifespan-on-a-chip:+microfluidic+chambers+for+performing+lifelong+observation+of+C.+elegans.">Lifespan-on-a-chip: microfluidic chambers for performing lifelong observation of C. elegans.</a> Lab on a Chip. 10 (5), 589-597 (2010).</li><li>Chronis, N., Zimmer, M., Bargmann, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidics+for+in+vivo+imaging+of+neuronal+and+behavioral+activity+in+Caenorhabditis+elegans.">Microfluidics for in vivo imaging of neuronal and behavioral activity in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Methods. 4 (9), 727-731 (2007).</li><li>Lagoy, R. C., Albrecht, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+Devices+for+Behavioral+Analysis,+Microscopy,+and+Neuronal+Imaging+in+Caenorhabditis+Elegans.">Microfluidic Devices for Behavioral Analysis, Microscopy, and Neuronal Imaging in Caenorhabditis Elegans.</a> Methods in Molecular Biology. 1327, 159-179 (2015).</li><li>Levine, E., Lee, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+approaches+for+Caenorhabditis+elegans+research.">Microfluidic approaches for Caenorhabditis elegans research.</a> Animal Cells and Systems. 24 (6), 311-320 (2020).</li><li>Rahman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NemaLife+chip:+a+micropillar-based+microfluidic+culture+device+optimized+for+aging+studies+in+crawling+C.+elegans.">NemaLife chip: a micropillar-based microfluidic culture device optimized for aging studies in crawling C. elegans.</a> Scientific Reports. 10 (1), 16190 (2020).</li><li>Allen, P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-synapse+ablation+and+long-term+imaging+in+live+C.+elegans.">Single-synapse ablation and long-term imaging in live C. elegans.</a> Journal of Neuroscience Methods. 173 (1), 20-26 (2008).</li><li>Guo, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femtosecond+laser+nanoaxotomy+lab-on-a-chip+for+in+vivo+nerve+regeneration+studies.">Femtosecond laser nanoaxotomy lab-on-a-chip for in vivo nerve regeneration studies.</a> Nature Methods. 5 (6), 531-533 (2008).</li><li>Mondal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+Mitochondrial+Density+and+Positioning+along+a+Growing+Neuronal+Process+in+Individual+C.+elegans+Neuron+Using+a+Long-Term+Growth+and+Imaging+Microfluidic+Device.">Tracking Mitochondrial Density and Positioning along a Growing Neuronal Process in Individual C. elegans Neuron Using a Long-Term Growth and Imaging Microfluidic Device.</a> eNeuro. 8 (4), (2021).</li><li>Keil, W., Kutscher, L. M., Shaham, S., Siggia, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Term+High-Resolution+Imaging+of+Developing+C.+elegans+Larvae+with+Microfluidics.">Long-Term High-Resolution Imaging of Developing C. elegans Larvae with Microfluidics.</a> Developmental Cell. 40 (2), 202-214 (2017).</li><li>Gritti, N., Kienle, S., Filina, O., Van Zon, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+time-lapse+microscopy+of+C.+Elegans+post-embryonic+development.">Long-term time-lapse microscopy of C. Elegans post-embryonic development.</a> Nature Communications. 7, 12500 (2016).</li><li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biostable,+anti-fouling+zwitterionic+polyurethane-urea+based+on+PDMS+for+use+in+blood-contacting+medical+devices.">A biostable, anti-fouling zwitterionic polyurethane-urea based on PDMS for use in blood-contacting medical devices.</a> Journal of materials chemistry B. 8 (36), 8305-8314 (2020).</li><li>Peterson, S. L., McDonald, A., Gourley, P. L., Sasaki, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(dimethylsiloxane)+thin+films+as+biocompatible+coatings+for+microfluidic+devices:+cell+culture+and+flow+studies+with+glial+cells.">Poly(dimethylsiloxane) thin films as biocompatible coatings for microfluidic devices: cell culture and flow studies with glial cells.</a> Journal of Biomedical Materials ResearchPart A. 72 (1), 10-18 (2005).</li><li>Folch, A., Toner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+micropatterns+on+biocompatible+materials.">Cellular micropatterns on biocompatible materials.</a> Biotechnology Progress. 14 (3), 388-392 (1998).</li><li>Leclerc, E., Sakai, Y., Fujii, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+PDMS+(polydimethylsiloxane)+bioreactor+for+large-scale+culture+of+hepatocytes.">Microfluidic PDMS (polydimethylsiloxane) bioreactor for large-scale culture of hepatocytes.</a> Biotechnology Progress. 20 (3), 750-755 (2004).</li><li>Mehta, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+measurement+and+control+of+oxygen+levels+in+microfluidic+poly(dimethylsiloxane)+bioreactors+during+cell+culture.">Quantitative measurement and control of oxygen levels in microfluidic poly(dimethylsiloxane) bioreactors during cell culture.</a> Biomedical Microdevices. 9 (2), 123-134 (2007).</li><li>Palchesko, R. N., Zhang, L., Sun, Y., Feinberg, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+polydimethylsiloxane+substrates+with+tunable+elastic+modulus+to+study+cell+mechanobiology+in+muscle+and+nerve.">Development of polydimethylsiloxane substrates with tunable elastic modulus to study cell mechanobiology in muscle and nerve.</a> PloS One. 7 (12), 51499 (2012).</li><li>Inoue, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+markers+for+Caenorhabditis+elegans+vulval+cells.">Gene expression markers for Caenorhabditis elegans vulval cells.</a> Mechanisms of Development. 119, 203-209 (2002).</li><li>Fatouros, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Tau+aggregation+in+a+novel+caenorhabditis+elegans+model+of+tauopathy+mitigates+proteotoxicity.">Inhibition of Tau aggregation in a novel caenorhabditis elegans model of tauopathy mitigates proteotoxicity.</a> Human Molecular Genetics. 21 (16), 3587-3603 (2012).</li><li>Smith, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-lapse+imaging+and+cell-speci+fi+c+expression+pro+fi+ling+reveal+dynamic+branching+and+molecular+determinants+of+a+multi-dendritic+nociceptor+in+C.+elegans.">Time-lapse imaging and cell-speci fi c expression pro fi ling reveal dynamic branching and molecular determinants of a multi-dendritic nociceptor in C. elegans.</a> Developmental Biology. 345 (1), 18-33 (2010).</li><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li><li>Oren-Suissa, M., Hall, D. H., Treinin, M., Shemer, G., Podbilewicz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fusogen+EFF-I+controls+sculpting+of+mechanosensory+dendrites.">The fusogen EFF-I controls sculpting of mechanosensory dendrites.</a> Science. 328 (5983), 1285-1288 (2010).</li><li>Smith, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+neuron+fates+are+distinguished+by+a+transcriptional+switch+that+regulates+dendrite+branch+stabilization.">Sensory neuron fates are distinguished by a transcriptional switch that regulates dendrite branch stabilization.</a> Neuron. 79 (2), 266-280 (2013).</li><li>Shrestha, B. R., Grueber, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+morphogenesis:+worms+get+an+EFF+in+dendritic+arborization.">Neuronal morphogenesis: worms get an EFF in dendritic arborization.</a> Current Biology: CB. 20 (16), 673-675 (2010).</li><li>Rao, G. N., Kulkarni, S. S., Koushika, S. P., Rau, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+nanosecond+laser+axotomy:+cavitation+dynamics+and+vesicle+transport.">In vivo nanosecond laser axotomy: cavitation dynamics and vesicle transport.</a> Optics Express. 16 (13), 9884-9894 (2008).</li><li>Sure, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=UNC-16/JIP3+and+UNC-76/FEZ1+limit+the+density+of+mitochondria+in+C.+elegans+neurons+by+maintaining+the+balance+of+anterograde+and+retrograde+mitochondrial+transport.">UNC-16/JIP3 and UNC-76/FEZ1 limit the density of mitochondria in C. elegans neurons by maintaining the balance of anterograde and retrograde mitochondrial transport.</a> Scientific Reports. 8 (1), 8938 (2018).</li><li>Awasthi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulated+distribution+of+mitochondria+in+touch+receptor+neurons+of+C.+elegans+influences+touch+response.">Regulated distribution of mitochondria in touch receptor neurons of C. elegans influences touch response.</a> bioRxiv. , (2020).</li></ol>

Bu yazıda, sürekli gıda arzı ve gelişimi sırasında tek bir hayvanın yüksek çözünürlüklü görüntülenmesi ile C. elegans yetiştirmek için basit bir mikroakışkan cihazın üretimi ve kullanımı için bir protokol tanımlanmıştır. Bu üretim süreci basittir ve steril olmayan bir ortamda yapılabilir. Tozsuz bir ortam, üretim aşamalarında kritik öneme sahiptir. Toz parçacıklarının varlığı, iki yapıştırma yüzeyi arasında yanlış temasa yol açacak ve C. elegans harek...

Caenorhabditis elegans, hücre biyolojisini, yaşlanmayı, gelişim biyolojisini ve nörobiyolojiyi incelemek için güçlü bir model organizma olduğunu kanıtlamıştır. Şeffaf gövdesi, kısa yaşam döngüsü, kolay bakımı, tanımlanmış sayıda hücre, birkaç insan genine sahip homoloji ve iyi çalışılmış genetiği gibi avantajlar, C. elegans'ın hem temel biyoloji keşifleri hem de uygulamalı araştırmalar için popüler bir model haline gelmesine yol açmıştır 1,2. Hücrenin biyolojik ve gelişimsel süreçlerini, bireysel hayvanların tekrarlanan uzun vadeli gözlemlerinden anlamak, faydalı olabilir. Geleneksel olarak, C. elegans agar pedleri üzerinde anestezi altına alınır ve mikroskop altında görüntülenir. Anesteziklerin hayvan sağlığı üzerindeki olumsuz etkileri, aynı hayvanın uzun süreli ve tekrarlanan aralıklı görüntülemesi için anestezi uygulanan hayvanların kullanımını sınırlandırmaktadır 3,4. Mikroakışkan teknolojilerdeki son gelişmeler ve ihmal edilebilir sağlık tehlikeleri olan C. elegans'ın anestezik olmayan tuzaklanması için adaptasyonları, aynı hayvanın kısa ve uzun bir süre boyunca yüksek çözünürlüklü görüntülenmesini sağlar.
Mikroakışkan çipler, C. elegans'ın 5 yüksek verimli tarama 6,7,8, yakalama ve dağıtma9, ilaç taraması10,11, yüksek çözünürlüklü görüntüleme ile nöron stimülasyonu 12 ve hayvanın yüksek çözünürlüklü görüntülenmesi 12,13,14 için tasarlanmıştır. Slaytlarda immobilizasyon için ultra ince mikroakışkan levhalar da geliştirilmiştir15. C. elegans'ın uzun vadeli çalışmaları, sıvı kültüründe büyüyen hayvanların düşük çözünürlüklü görüntüleri kullanılarak büyümeyi, kalsiyum dinamiklerini, davranışları üzerindeki ilaç etkilerini16,17,18,19, uzun ömürlülüklerini ve20 yaşlarını gözlemlemek için gerçekleştirilmiştir. Sinaptik gelişimi değerlendirmek için yüksek çözünürlüklü mikroskopi kullanan uzun süreli çalışmalar21, nöronal rejenerasyon22 ve mitokondriyal ilaveyi23 olarak değerlendirmiştir. Çok kanallı cihazlarda uzun süreli yüksek çözünürlüklü görüntüleme ve hücre kaderi ve farklılaşmasının takibi24,25 olarak yapılmıştır. Birkaç hücresel ve hücre altı olay, birkaç saatlik zaman ölçeklerinde meydana gelir ve hücresel dinamikleri in vivo anlamak için süreçteki tüm ara adımları karakterize etmek için gelişimleri sırasında aynı bireyin farklı zaman noktalarında yakalanmasını gerektirir. Organogenez, nöronal gelişim ve hücre göçü gibi biyolojik süreçleri görüntülemek için, hayvanın birden fazla zaman noktasında aynı yönde hareketsiz hale getirilmesi gerekir. Daha önce, dokunma reseptör nöronları (TRN'ler) boyunca mitokondrilerin nereye eklendiğini belirlemek için 36 saatten fazla C. elegans'ın yüksek çözünürlüklü görüntülenmesi için bir protokol yayınlamıştık23.
Bu makale, tekrarlanan yüksek çözünürlüklü görüntüleme için mikroakışkan tabanlı bir metodoloji oluşturmak için bir protokol sunmaktadır. Tek bir akış kanalına sahip bu cihaz, cihaz başına tek bir hayvanın tekrarlanan görüntülenmesi için en uygun olanıdır. Verimi artırmak ve aynı anda birçok hayvanı görüntülemek için, aynı basınç hattına birden fazla cihaz bağlanabilir, ancak her cihazda tek bir hayvanı kontrol eden ayrı üç yönlü konektörlerle bağlanabilir. Tasarım, embriyonik sonrası gelişimsel süreçler, hücre göçü, organel taşınması, gen ekspresyon çalışmaları gibi yüksek çözünürlüklü hızlandırılmış görüntüler gerektiren çalışmalar için kullanışlıdır. Teknoloji, birçok geç evre hayvanın paralel büyümesini ve görüntülenmesini gerektiren yaşam süresi ve yaşlanma çalışmaları gibi bazı uygulamalar için sınırlayıcı olabilir. Polidimetilsiloksan (PDMS) elastomeri, biyostabilitesi26, biyouyumluluk27,28, gaz geçirgenliği 29,30 ve ayarlanabilir elastik modülü 31 nedeniyle bu cihazın üretimi için kullanılmıştır. Bu iki katmanlı cihaz, mikroakışkan bir kanalda sürekli gıda tedariki olan hayvanların büyümesine ve azot gazı kullanılarak PDMS membran sıkıştırması yoluyla bireysel C. elegans'ın yakalanmasına izin verir. Bu cihaz, sürekli bir gıda kaynağı altında mikrokanalda aynı hayvanı büyütme ve görüntüleme avantajı ile daha önce yayınlanmış cihazın bir uzantısıdır3. Ek izolasyon membran ağı ve 2 mm genişliğinde bir yakalama membranı, gelişmekte olan hayvanların verimli bir şekilde immobilizasyonunu sağlar. Cihaz, duyusal PVD nöronlarında nöronal gelişimi, vulval gelişimi ve dendritik arborizasyonu gözlemlemek için kullanılmıştır. Hayvanlar, cihazda olumsuz sağlık etkileri olmadan büyür ve gelişimi sırasında aynı hayvandaki hücre altı olayların görüntülenmesini kolaylaştırmak için tekrar tekrar hareketsiz hale getirilebilir.
Tüm protokol beş bölüme ayrılmıştır. Bölüm 1, büyüme ve görüntüleme çipi için cihaz imalatını açıklamaktadır. Bölüm 2, bireysel C. elegans'ı hareketsiz hale getirmek ve izole etmek için PDMS membran sapması için bir basınç sisteminin nasıl kurulacağını açıklamaktadır. Bölüm 3, cihaz görüntüleme için bir nematod büyüme ortamı (NGM) plakası üzerinde C. elegans'ın nasıl senkronize edileceğini açıklamaktadır. Bölüm 4, cihaza tek bir hayvanın nasıl yükleneceğini ve hayvanın birkaç gün boyunca mikroakışkan cihazın içinde nasıl yetiştirileceğini açıklar. Bölüm 5, bireysel bir hayvanın birden fazla zaman noktasında nasıl hareketsiz hale getirileceğini, farklı hedefler kullanarak yüksek çözünürlüklü görüntülerin nasıl yakalanacağını ve Fiji'yi kullanarak görüntülerin nasıl analiz edileceğini açıklar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>18 G needles</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Bangalore, India</td>
			<td>Gauge 18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-way stopcock</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>WW-30600-02</td>
			<td>Masterflex fitting with luer lock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CCD camera</td>
			<td>Andor Technology</td>
			<td>EMCCD C9100-13no</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circuit board film</td>
			<td>Fine Line Imaging, Colorado, USA</td>
			<td></td>
			<td>The designs are printed with 65,024 dots per inch (DPI)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Convection Oven</td>
			<td>Meta-Lab Scientific Industries, India</td>
			<td>MSI-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Blue stat microscopic cover glass</td>
			<td></td>
			<td>22mm x 10Gms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Hi media</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris uni-core puncher 1mm</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>Z708801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexamethyldisilazane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Bangalore, India</td>
			<td>440191</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>&#160;IKA</td>
			<td>RCT B S 22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>26895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOH</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Scanning Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>LSM 5 LIVE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette tips</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td></td>
			<td>0.5-10 &#181;L micropipette tips are used for food supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Negative Photoresist-1</td>
			<td>Microchem</td>
			<td>SU8-2025</td>
			<td>http://www.microchem.com/Prod-SU82000.htm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Negative Photoresist-2</td>
			<td>Microchem</td>
			<td>SU8-2050</td>
			<td>http://www.microchem.com/Prod-SU82000.htm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrogen gas</td>
			<td>Local Supplier</td>
			<td>Commercial nitrogen gas</td>
			<td>Cylinder volume of 7 cubic meter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDMS (Curing solution)</td>
			<td>Dow Corning Corporation, MI, USA</td>
			<td>&#160;Sylgard curing solution</td>
			<td>curing agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri plates</td>
			<td>Praveen Scientific Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma cleaner</td>
			<td>Harrick Plasma, NY, USA</td>
			<td>&#160;PDC-32G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor and blades</td>
			<td>Lister surgical Blade</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon Elastomer (Base)</td>
			<td>Dow Corning Corporation, MI, USA</td>
			<td>Sylgard 184 base</td>
			<td>elastomer base</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Plastic tubes with the inner diameter 1.59 mm and the outer diameter 3.18 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon wafer</td>
			<td>University Wafer, MA, USA</td>
			<td>[100] orientation, 4-inch diameter</td>
			<td>Small pieces (2 mm &#215; 2 mm) were cut from 100 mm diameter wafer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spin Coater</td>
			<td>SPS-Europe B.V., The Netherlands</td>
			<td>SPIN 150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning Disk microscope</td>
			<td>Perkin Elmer ultra-view VOX system</td>
			<td>CSU-X1-A3 N</td>
			<td>The system was equipped with four (405/488/561/640 nm) lasers and controlled with the Volocity software package.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU8 developer</td>
			<td>Microchem, MA, USA</td>
			<td>SU8 Developer</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloro (1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyl) silane</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Bangalore, India</td>
			<td>448931</td>
			<td>Trichloro (1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyl) silane vapor is toxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV lamp</td>
			<td>Oriel Instruments, Bangalore, India</td>
			<td></td>
			<td>200 Watt and collimated UV light source</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volocity software</td>
			<td>Perkin-Elmer</td>
			<td></td>
			<td>Image analysis</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple microfluidic chip for long-term growth and imaging of caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans (C. elegans), gelişimsel ve hücre biyolojik süreçlerini incelemek için değerli bir model sistem olduğunu kanıtlamıştır. Bu biyolojik süreçleri anlamak genellikle aynı hayvanın uzun süreli ve tekrarlanan görüntülenmesini gerektirir. Agar pedleri üzerinde yapılan geleneksel immobilizasyon yöntemleriyle ilişkili uzun iyileşme süreleri, hayvan sağlığı üzerinde zararlı etkilere sahiptir ve aynı hayvanı uzun süre boyunca tekrar tekrar görüntülemeyi uygun hale getirmez. Bu yazıda mikroakışkan çip tasarımı, üretim yöntemi, çip üzerinde C. elegans kültürleme protokolü ve bireysel hayvanlarda gelişimsel süreçleri incelemek için üç uzun vadeli görüntüleme örneği açıklanmaktadır. Polidimetilsiloksan ile imal edilen ve bir kapak camına bağlanan çip, azot gazı kullanılarak saptırılan elastomerik bir membran kullanarak hayvanları bir cam substrat üzerinde hareketsiz hale getirir. C. elegans'ın tamamen immobilizasyonu, hücresel ve hücre altı olayların anesteziz bir şekilde sağlam bir hızlandırılmış görüntülenmesini sağlar. Büyük bir kesitli bir kanal geometrisi, hayvanın kısmen kapatılmış iki izolasyon membranı içinde serbestçe hareket etmesini sağlayarak sürekli bir gıda kaynağı ile kanalda büyümeye izin verir. Bu basit çipi kullanarak, hayvan kanalın içinde büyüdükçe, PVD duyusal nöronlarında nöronal süreç büyümesi, vulval gelişim ve dendritik arborizasyon gibi gelişimsel olayların görüntülenmesi gerçekleştirilebilir. Uzun vadeli büyüme ve görüntüleme çipi, tek bir basınç hattı ile çalışır, harici valf içermez, ucuz akışkan sarf malzemeleri kullanır ve C. elegans kullanan diğer laboratuvarlar tarafından kolayca uyarlanabilen standart sonsuz taşıma protokollerini kullanır.

Cihaz karakterizasyonu: Büyüme ve görüntüleme cihazı, geri dönüşümsüz plazma bağı kullanılarak birbirine bağlanmış iki PDMS katmanından oluşur (Şekil 1). 10 mm uzunluğunda ve 40 μm veya 80 μm yüksekliğinde olan akış tabakası (desen 1), hayvanı sıvı kültürde büyütmemizi sağlar (Şekil 1A). Yakalama tabakası (desen 2), yüksek çözünürlüklü görüntüleme için hayvanı hareketsiz hale getirmek için 2 mm...

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Microfluidic Chip for Long-Term Growth and Imaging of Caenorhabditis elegans at JoVE.com

A Simple Microfluidic Chip for Long-Term Growth and Imaging of Caenorhabditis elegans

Protokol, 36 saate kadar sürekli bir gıda arzı varlığında C. elegans yetiştirmek için kullanılan basit bir mikroakışkan çip tasarımını ve mikrofabrikasyon metodolojisini açıklamaktadır. Büyüme ve görüntüleme cihazı ayrıca, birkaç gün boyunca geliştirme sırasında hücresel ve hücre altı süreçlerin aralıklı uzun süreli yüksek çözünürlüklü görüntülenmesini sağlar.

Caenorhabditis elegans'ın Uzun Süreli Büyümesi ve Görüntülenmesi için Basit Bir Mikroakışkan Çip

Caenorhabditis elegans (C. elegans) have proved to be a valuable model system for studying developmental and cell biological processes. Understanding ...

Bu tekniğin temel avantajı, hayvanın cihazın içinde serbestçe büyüyebilmesi ve yüksek çözünürlüklü görüntüleme için sıkışıp kalabilmesidir. Cihaz birkaç kez yeniden kullanılabilir. Cihaz yapılırken temizlik, cihaz işlemleri sırasında sızıntıyı önlemek için tozsuz cihazlar üretebilmek için en önemli faktördür.Bir kelime işlem yazılımında dikdörtgen şekiller kullanarak akış katmanı için bir ve kontrol katmanı için iki desen tasarlamaya başlamak ve polyester bazlı film üzerinde minimum sekiz mikrometre özellik boyutuna sahip bir lazer plotter yardımıyla fotoğraf maskelerini yazdırmak. Silikon gofretleri yükseklik ve genişlikte 2,5 santimetrelik kare parçalar halinde kesin. Bir dakika boyunca% 20 potasyum hidroksit ile temizleyin ve gofretleri deiyonize suda durulayın.Akış için bir gofret ve kontrol katmanı için başka bir gofret kullanın. Parçaları 14 adet P-S-I sıkıştırılmış azot gazı ile kurutun ve ardından dört saat boyunca 120 santigrat derecede sıcak bir plakada dehidrasyon yapın. Soğuduktan sonra bir silikon parça alın, bir spin kodlayıcının mandren üzerine koyun ve gofreti yerinde tutmak için vakumu açın.Silikon parçaya yaklaşık 20 mikrolitre hekzametildisilan koyun ve spin kodlayıcıyı kullanarak beş saniye boyunca 500 R-P-M'de ve ardından 3000 R-P-M'de 30 saniye boyunca kaplayın. Akış katmanına özgü yaklaşık 40 mikrometrelik düzgün bir fotodirenç kalınlığı elde etmek için, silikon gofreti yaklaşık 1,5 mililitre negatif fotodirenç ile kaplayın, beş saniye boyunca 500 R-P-M'de bir spin kodlayıcı kullanın ve ardından 30 saniye boyunca 2000 R-P-M kullanın. Kontrol katmanına özgü yaklaşık 40 mikrometrelik düzgün bir fotodirenç kalınlığı elde etmek için silikon parçasının kaplamasını ikinci gofret için hekzametildisilan ve negatif fotodirenç ile tekrarlayın.Alternatif olarak, yaşlı hayvanlar için akış tabakasının kalınlığını yaklaşık 80 mikrometreye çıkarmak için, silikon gofretleri yaklaşık 1,5 mililitre negatif fotorezistli iki ile kaplayın, beş saniye boyunca 500 R-P-M'de spin kodlayıcıyı ve ardından 30 saniye boyunca 2000 R-P-M'yi kullanın. Daha önce fotodirenç kaplı silikon parçaların her ikisini de bir dakika boyunca 65 santigrat derecede sıcak bir plaka üzerinde pişirin ve ardından 10 dakika boyunca 95 santigrat derece pişirin. Soğuduktan sonra, yumuşak pişmiş silikon parçaları, U-V aydınlatıcısının pozlama aşamasına, fotodirenç kaplı yüzeyi U-V lambasına bakacak şekilde yerleştirin.Sırasıyla akış ve kontrol katmanları elde etmek için bir ve iki desenli bir fotoğraf maskesi aracılığıyla 200 watt'lık bir lamba kullanarak iki parçayı ayrı ayrı U-V'ye 15 saniye boyunca maruz bırakın. Açıkta kalan iki silikon parçayı daha önce tarif edildiği gibi, kaplanmış katmanlar yukarı bakacak şekilde pişirin. Parçaları soğuttuktan sonra, silikon parçaları fotodirenç geliştirici çözümünde 20 dakika bekleterek desenleri geliştirin.Desen göründüğünde, parçaları saf izopropil alkol ile durulayın ve azot gazı kullanarak hafifçe kurulayın. Silikon parçalarını, kaplanmış yüzeyi yukarı bakacak şekilde bir kurutucuda tutun. Bir cam kızağa 50 mikrolitre saf T-C-P-F-O-S dökerek parçaları silan buharlarına maruz bırakın.Slaytı bir kurutucunun içine yerleştirin ve iki saat boyunca inkübe edin. P-D-M-S'yi elastomer tabanı kürleme maddesi ile karıştırarak plastik bir kapta yapın ve üç dakika boyunca sürekli karıştırın. P-D-M-S karışımını, tüm hava kabarcıklarını gidermek için 30 dakika boyunca bir kurutucuda gazdan arındırın.Kontrol katmanı silikon gofretlerini bir Petri kabına yerleştirin ve silikon parçaların üzerine beş milimetre kalınlığında bir P-D-M-S karışım tabakası dökün. P-D-M-S dökme işleminden sonra, P-D-M-S karışımının gazını giderme işlemini tekrarlayın. Silikon gofreti, 200 ila 500 militorr vakum basıncı uygulayan iplikçi kamyona bakan akış katmanı olacak şekilde yerleştirin.Silikon gofrete yaklaşık bir mililitre P-D-M-S dökün. Yaklaşık 80 mikrometre kalınlığında bir tabaka elde etmek için bir spin kaplayıcı kullanarak kodlayın. İki silikon gofreti spin kaplı P-D-M-S ile pişirin ve P-D-M-S katmanlarını altı saat boyunca sıcak hava konveksiyonlu bir fırında 50 santigrat derecede dökün.Parçalar soğuduktan sonra, keskin bir bıçak kullanarak kontrol tabakasının etrafındaki silikon parçadan beş milimetre kalınlığındaki P-D-M-S tabakasını kesin ve silikon substrattan soyun. P-D-M-S membran sapmaları için immobilizasyon kanalını ve izolasyon kanalı girişlerini gaz hatlarına bağlamak üzere P-D-M-S bloğunun rezervuarında bir Harris zımba kullanarak yaklaşık bir milimetre çapında iki delik açın. Silikon parçayı, kaplamalı P-D-M-S katmanıyla, P-D-M-S kaplamalı yüzeyi plastik bir tepsi üzerine bakacak şekilde birinci desene yerleştirin.Delinmiş P-D-M-S bloğunu, kalıplanmış tarafı yukarı bakacak şekilde tepside ikinci desenli olarak tutun. Plastik tepsiyi bir plazma temizleyicinin içinde tutun ve düşük vakum uygulayarak iki P-D-M-S yüzeyini iki dakika boyunca 18 watt hava plazmasına maruz bırakın. Plazma ile işlenmiş iki bloğu çıkarın ve plazma ile işlenmiş bir ve iki desenin yüzeylerine birlikte bastırarak blokları nazikçe bağlayın.Yapıştırılmış desenleri sıcak hava konveksiyonlu fırında iki saat boyunca 50 santigrat derecede pişirin. Yapıştırılmış cihazı fırından çıkardıktan sonra, silikon gofretten desen bir ve desen iki ile kesin ve Harris zımbayı kullanarak akış katmanının giriş ve çıkış rezervuarlarında delikler açın. Yapıştırılmış P-D-M-S bloğunu, akış tabakası yukarı bakacak şekilde plastik bir tepsiye yerleştirin ve aynı tepside temiz bir kapak camı bulundurun.Kapak camındaki blokları iki dakika boyunca 18 watt hava plazmasına maruz bırakın. Menekşe bir oda görmek için vakum basıncını ayarlayın. Plazmaya maruz kalan P-D-M-S bloğunu kapak camına yerleştirin ve yapıştırılmış yapıyı iki saat boyunca 50 santigrat derecede bir fırında pişirin.Gelecekteki herhangi bir deney için cihazı temiz bir odada saklayın. Cihazı alın, stereo mikroskopa koyun ve tüpleri takın. Bir microflex tüpü sıkıştırılmış azot gazı hattına ve diğer ucunda üç yönlü bir konektöre bağlayın.Üç konektörlerden bir ve iki boruyu sırasıyla membranları izole eden tuzağa bağlayın. İki microflex boruyu üç yönlü stopcock'un iki çıkış portuna bağlayın. İki tüpün diğer ucunu sekiz milimetre uzunluğunda 18 gauge iğneye bağlayın.Giriş portundan bir mikro pipet kullanarak akış katmanını M-9 tamponu ile doldurun. Her iki tüpü de iğneye bağlı uçtan deiyonize suyla doldurun. İki iğneyi, izolasyon ve yakalama membranını birbirine bağlayan delinmiş deliklere yerleştirin.Azot gazı regülatörünü 14 P-S-I'de açın ve suyu kontrol katmanlarındaki mikroakışkan kanallardan, yani tuzak ve izolasyon membranlarından cihaza itmek için üç vanayı bir tüpten çevirin. Kanallar suyla doldurulduktan ve astarlandıktan sonra üç yönlü stopcock'u kullanarak basıncı serbest bırakın. Akış kanalından ek ortam akıtarak kabarcıkları çıkarın.Şekil, mikroakışkan çipin içinde büyüyen ve floresan görüntüleri yakalamak için her sekiz ila 10 saatte bir hareketsiz hale getirilen P-S-3-2-3-9'un görüntülerini göstermektedir. İfade paternindeki varyasyon, aynı genin gelişimin farklı aşamalarında farklı hücrelerde eksprese edildiği zamansal gen düzenlemesinin bir örneğini temsil eder. Caenorhabditis elegans'ın bireysel W-D-I-S-5-1 genotipinin görüntülenmesi, sırasıyla L-2, Geç L-2, L-3 ve L-4 gelişim aşamalarında birincil, ikincil üçüncül ve kuaterner süreçleri içeren her P-V-D nöronunda menorah benzeri dallanmış dendritik mimariyi göstermektedir.Buradaki şekil, P-V-D gelişimi ve cihaz tarafından yetiştirilen hayvanları ve N-G-M plakalarında yetiştirilenleri karşılaştırmaktadır. Solucan gelişiminin farklı aşamalarındaki S-P ve Q-P sayıları yaşla birlikte artmıştır. Caenorhabditis elegans, yüksek çözünürlüklü görüntüleme için gerekli yeterli felce neden olmak için üç milimolar levamisol damlası ile tedavi edildi.S-P değerleri, N-G-M plakalarında yetiştirilen benzer evreli hayvanlardan ölçüldüğünde ve bir Agar slaytında üç milimolar levamisol kullanılarak görüntülendiğinde önemli ölçüde farklı değildi. Ayrıca, biri kuyrukta bulunan ve ikincisi vulvanın yakınında bulunan iki P-V-C hücre gövdesi arasındaki mesafe, hem cihazda yetişen hayvanlarda hem de N-G-M plakalarında yetiştirilenlerde birbirinden ayrıldıkça artar. Şekil, mikroakışkan cihazın içinde büyüyen hayvanlardan gelen dokunma reseptör nöronlarının yüksek çözünürlüklü görüntüsünü temsil etmektedir.Montaj, mitokondri ve nöronal süreci vurgulayan ardışık zaman noktalarında tüm P-L-M-R nöronal sürecini temsil eder. Grafik, saatte 10.4 mikrometrelik bir eğimle arttığı gözlenen toplam nöronal süreç uzunluğunu temsil etmektedir. Mikrofabrikasyon cihaz, yüksek çözünürlüklü görüntüleme için C-eleganları hareketsiz hale getirmek ve yerinde tutmak için yüksek basınçlı azot gazı varlığında saptırılmış ince bir P-D-M-S membranı kullanır.Bu prosedür, C-elegans'ta uzun bir süre boyunca aralıklı gözlemlere ihtiyaç duyan hücresel ve hücre altı süreçlerin uzunlamasına çalışmalarını sağlayabilir.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

A Simple Microfluidic Chip for Long-Term Growth and Imaging of Caenorhabditis elegans

Fluorescence detection methods for microfluidic droplet platforms

Mikroakışkan damlacık platformları için Floresan algılama yöntemleri

The development of microfluidic platforms for performing chemistry and biology has in large part been driven by a range of potential benefits that ...

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Simple Microfluidic Devices for in vivo Imaging of C. elegans, Drosophila and Zebrafish

Için basit Mikroakışkan Cihazlar<em&gt; In vivo</emVe&gt; Görüntüleme<em&gt; C. elegans</em&gt;,<em&gt; Drosophila</em&gt; Ve Zebra balığı

Micro fabricated fluidic devices provide an accessible micro-environment for in vivo studies on small organisms. Simple fabrication processes are ...

Microfluidic-based Electrotaxis for On-demand Quantitative Analysis of Caenorhabditis elegans' Locomotion

Microfluidic-based Electrotaxis for On-demand Quantitative Analysis of Caenorhabditis elegans' Locomotion

On-talep Kantitatif Analiz için mikroakışkan tabanlı Electrotaxis<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; &#39;Locomotion

The nematode Caenorhabditis elegans is a versatile model organism for biomedical research because of its conservation of disease-related genes and ...

Microfluidic Chip Fabrication and Method to Detect Influenza

Mikroakışkan Chip İmalat ve İnfluenza Algılama Yöntemi

Fast  and effective diagnostics play an important role in controlling infectious  disease by enabling effective patient management and treatment. Here, we ...

A Microfluidic Chip for the Versatile Chemical Analysis of Single Cells

Tek Hücrelerinin yönlü Kimyasal Analiz için mikroakışkan Chip

We present a microfluidic device that enables the quantitative determination of intracellular biomolecules in multiple single cells in parallel. For this ...

Long-term Intravital Immunofluorescence Imaging of Tissue Matrix Components with Epifluorescence and Two-photon Microscopy

Epifluoresan ile Doku Matrix Bileşenler ve İki foton Mikroskopi uzun vadeli Intravital İmmünofloresan Görüntüleme

Besides being a physical scaffold to maintain tissue morphology, the extracellular matrix (ECM) is actively involved in regulating cell and tissue ...

A Microfluidic Chip for ICPMS Sample Introduction

ICPMS Numune Giriş için mikroakışkan Chip

This protocol discusses the fabrication and usage of a disposable low cost microfluidic chip as sample introduction system for inductively coupled plasma ...

The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture

Çok organ Chip - Uzun vadeli Çok doku kokültürü için mikroakışkan Platformu

The ever growing amount of new substances released onto the market and the limited predictability of current in vitro test systems has led to a high need ...

Electrotaxis Studies of Lung Cancer Cells using a Multichannel Dual-electric-field Microfluidic Chip

Bir Çok Kanallı Çift elektrik alan mikroakışkan Chip kullanarak Akciğer Kanseri Hücreleri Electrotaxis Çalışmaları

The behavior of directional cell migration under a direct current electric-field (dcEF) is referred to as electrotaxis. The significant role of ...

Long-term Live Imaging Device for Improved Experimental Manipulation of Zebrafish Larvae

Zebra balığı larva geliştirilmiş deneysel manipülasyon için uzun vadeli canlı görüntüleme aygıtı

The zebrafish larva is an important model organism for both developmental biology and wound healing. Further, the zebrafish larva is a valuable system for ...