Name: autofluorescence imaging to evaluate cellular metabolism
Uploaded: 2021-11-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Autofluorescence Imaging to Evaluate Cellular Metabolism at JoVE.com

Financieringsbronnen zijn onder meer het Cancer Prevention and Research Institute of Texas (CPRIT RP200668) en Texas A & M University. Figuur 1 is gemaakt met BioRender.com.

1. Cell plating voor beeldvorming
<ol><li>Zuig het medium op uit een 80-90% confluent T-75 kolf van MCF-7 cellen, spoel de cellen met 10 ml steriele fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) en voeg 2 ml 0,25% trypsine (1x) toe om de cellen los te maken van de kolfbodem.</li>
	<li>Incubeer de kolf bij 37 °C gedurende ~4 min. Controleer de cellen onder de microscoop om de onthechting te bevestigen.</li>
	<li>Voeg onmiddellijk 8 ml kweekmedium toe om de trypsine te deactiveren.</li>
	<li>Verzamel de cellen...

Autofluorescentie-intensiteit en levenslange beeldvorming zijn op grote schaal gebruikt om het metabolisme in cellen te beoordelen21,55. FLIM heeft een hoge resolutie en lost daarom afzonderlijke cellen op, wat belangrijk is voor kankerstudies omdat cellulaire heterogeniteit bijdraagt aan tumoragressie en medicijnresistentie7,39,41,44,45,46,58.<sup class="xref...

Metabolisme is het cellulaire proces van het produceren van energie. Cellulair metabolisme omvat meerdere routes, waaronder glycolyse, oxidatieve fosforylering en glutaminolyse. Gezonde cellen gebruiken deze metabole routes om energie te genereren voor proliferatie en functie, zoals de productie van cytokines door immuuncellen. Veel ziekten, waaronder metabole stoornissen, kanker en neurodegeneratie, worden gekenmerkt door een veranderd cellulair metabolisme1. Sommige soorten kankercellen hebben bijvoorbeeld verhoogde glycolysesnelheden, zelfs in de aanwezigheid van zuurstof, om moleculen te genereren voor de synthese van nucleïnezuren, eiwitten en lipiden2,3. Dit fenomeen, bekend als het Warburg-effect, is een kenmerk van vele soorten kanker, waaronder borstkanker, longkanker en glioblastomen4. Vanwege de veranderingen van het cellulaire metabolisme geassocieerd met kankerprogressie, kan cellulair metabolisme een surrogaatbiomarker zijn voor medicijnrespons5,6. Bovendien is het begrijpen van de werkzaamheid van geneesmiddelen op cellulair niveau cruciaal, omdat celheterogeniteit kan leiden tot verschillende geneesmiddelresponsen bij individuen7,8.
Technologieën die veranderingen in het cellulaire metabolisme identificeren en kwantificeren, zijn essentieel voor studies naar kanker en medicijnrespons. Chemische en eiwitanalyses worden gebruikt om het metabolisme van cellen of weefsels te evalueren, maar missen eencellige resolutie en ruimtelijke informatie. Metabole plaatlezer-gebaseerde assays kunnen de pH en het zuurstofverbruik in het monster in de loop van de tijd en de daaropvolgende metabole verstoring door chemicaliën meten. De pH kan worden gebruikt om de extracellulaire verzuringssnelheid (ECAR) te berekenen, wat inzicht geeft in de glycolytische activiteit van de cellen9. Beeldvormingsmethoden voor het hele lichaam, waaronder 2-[fluor-18] fluor-D-glucose positronemissietomografie (FDG PET) en magnetische resonantiespectroscopie (MRS), zijn niet-invasieve beeldvormingsmodaliteiten die klinisch worden gebruikt om tumorrecidief en werkzaamheid van geneesmiddelen te identificeren door middel van metabole metingen10,11,12,13,14.
FDG-PET brengt de weefselopname van FDG in beeld, een radioactief gelabeld glucose-analoog. Verhoogde opname van FDG-PET door tumoren ten opzichte van het omliggende weefsel is te wijten aan het Warburg-effect12,13. MRS toont gemeenschappelijke kernen van moleculen die worden gebruikt voor het metabolisme, zoals 13C en 31P, en kan dynamische informatie verkrijgen over hoe het metabolisme verandert als reactie op stimuli, zoals lichaamsbeweging of eten14. Hoewel FDG-PET en MRS klinisch kunnen worden gebruikt, missen deze technologieën de ruimtelijke resolutie om intratumorale heterogeniteit op te lossen. Evenzo worden metingen van het zuurstofverbruik uitgevoerd op een bulkpopulatie van cellen. Autofluorescentie beeldvorming overwint het ruimtelijke resolutie obstakel van deze technologieën en biedt een niet-invasieve methode voor het kwantificeren van cellulair metabolisme.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63282/63282fig01v2.jpg"> Figuur 1: NADH en FAD in gemeenschappelijke metabole routes. NADH en FAD zijn co-enzymen die worden gebruikt in glycolyse, de Krebs-cyclus en de elektronentransportketen. Autofluorescentie beeldvorming van deze moleculen geeft informatie over cellulair metabolisme. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63282/63282fig01largev2.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
Gereduceerd nicotinamide-adenine (fosfaat) dinucleotide (NAD (P)H) en geoxideerd flavine adenine dinucleotide (FAD) zijn co-enzymen van metabole reacties, waaronder glycolyse, oxidatieve fosforylering en glutaminolyse (figuur 1). Zowel NAD(P)H als FAD zijn autofluorescent en bieden endogene contrast voor fluorescentiebeeldvorming1,15. NADPH heeft vergelijkbare fluorescerende eigenschappen als NADH. Daarom wordt NAD(P)H vaak gebruikt om het gecombineerde signaal van NADH en NADPH2,16 weer te geven.
Fluorescence lifetime imaging (FLIM) kwantificeert de fluorescentielevensduur of de tijd waarvoor een fluorofoor zich in de aangeslagen toestand bevindt. Fluorescentielevensduur reageert op de micro-omgeving van de fluoroforen en geeft informatie over cellulair metabolisme17. NAD(P)H en FAD kunnen in cellen bestaan in eiwitgebonden of vrije conformaties, die elk een andere levensduur hebben. Vrije NAD(P)H heeft een kortere levensduur dan eiwitgebonden NAD(P)H; omgekeerd heeft vrije FAD een langere levensduur dan gebonden FAD18,19. De levensduur en het gewicht van de levensduurcomponenten kunnen worden gekwantificeerd op basis van gegevens over het levensduurverval van fluorescentie via Eq. (1)20:
I(t) = α 1e-t/τ1 + α 2e-t/τ2 + C (1)
Eq (1) vertegenwoordigt de genormaliseerde fluorescentie-intensiteit als functie van de tijd. De α 1 en α 2 in deze vergelijking vertegenwoordigen de proportionele componenten van korte en lange levensduur (respectievelijk α 1+ α 2=1), respectievelijk τ1 en τ2 vertegenwoordigen respectievelijk de korte en lange levensduur, en C is goed voor achtergrondlicht7,20. De amplitudegewogen levensduur, hier weergegeven als τm, wordt berekend met eq. (2).
τm= α 1τ1+ α 2τ2 (2)
Een gemiddelde levensduur kan worden berekend door het gemiddelde van "t" over het intensiteitsverval van de fluorofoor, wat voor een twee-exponentieel verval wordt aangetoond door Eq. (3)17,21.
τ*m= (α 1τ12+ α 2τ22)/ (α 1τ1+ α 2τ2) (3)
Een fluorescentie-intensiteitsbeeld kan worden berekend uit het levensduurbeeld door het fluorescentielevensverval te integreren. Autofluorescentie beeldvorming is een niet-destructieve en labelvrije methode die kan worden gebruikt om het metabolisme van levende cellen met een subcellulaire resolutie te karakteriseren. De optische redoxverhouding biedt een optische analoge metriek van de chemische redoxtoestand van de cel en wordt berekend als de verhouding van NAD(P)H- en FAD-intensiteiten. Hoewel de formule voor het berekenen van de optische redoxverhouding niet gestandaardiseerd is22,23,24,25, wordt deze hier gedefinieerd als de intensiteit van FAD over de gecombineerde intensiteiten van NAD(P)H en FAD. Deze definitie wordt gebruikt omdat de opgetelde intensiteit in de noemer de metriek tussen 0 en 1 normaliseert, en het verwachte resultaat van de cyanideremming een afname van de redoxverhouding is. De fluorescentielevensduur van vrije NAD(P)H en FAD geeft inzicht in veranderingen in de micro-omgeving van het metabole oplosmiddel, waaronder pH, temperatuur, nabijheid van zuurstof en osmolariteit17.
Veranderingen in de fluorescentielevensduur van de gebonden fracties van NAD(P)H en FAD kunnen wijzen op het gebruik van metabole routes en substraatspecifiek metabolisme26. Componentgewichten kunnen worden geïnterpreteerd voor veranderingen in de vrije tot de gebonden fractie van de co-enzymen18,19. Al met al maken deze kwantitatieve autofluorescentielevensduurmetingen de analyse van cellulair metabolisme mogelijk, en autofluorescentiebeeldvorming is gebruikt voor het identificeren van neoplasmata uit normale weefsels27,28, het karakteriseren van stamcellen29,30, het evalueren van de immuuncelfunctie31,32,33,34,35, het meten van neurologische activiteit36, 37,38, en inzicht in de werkzaamheid van geneesmiddelen bij kankersoorten zoals borstkanker en hoofd-halskanker21,39,40,41,42. Hoge-resolutie autofluorescentie beeldvorming kan worden gecombineerd met beeldsegmentatie voor eencellige analyse en kwantificering van intrapopulatie heterogeniteit43,44,45,46,47.
NAD(P)H en FAD kunnen worden afgebeeld op fluorescentiemicroscopen met één foton of multifotonen die zijn geconfigureerd voor intensiteits- of levenslange beeldvorming. Voor microscopen met één foton worden NAD(P)H en FAD meestal geëxciteerd op golflengten van respectievelijk 375-405 nm en 488 nm, als gevolg van gemeenschappelijke laserbronnen op deze golflengten48. Bij fluorescentie-excitatie van twee fotonen zullen NAD(P)H en FAD exciteren op golflengten van respectievelijk ongeveer 700 tot 750 nm en 700 tot 900 nm, 15,49. Zodra de fluoroforen zijn geëxciteerd, zenden NAD(P)H en FAD fotonen uit op golflengten tussen respectievelijk ~410 nm tot ~490 nm en ~510 nm tot ~640 nm15. De NAD(P)H en FAD maxima emissie golflengten zijn respectievelijk ongeveer 450 nm en 535 nm48.
Vanwege hun verschillende excitatie- en emissiegolflengten kan de fluorescentie van de twee metabole co-enzymen spectraal worden geïsoleerd. Een goed begrip van de spectrale kenmerken van NAD(P)H en FAD is noodzakelijk voor het ontwerp en de optimalisatie van autofluorescentie beeldvormingsprotocollen. Cyanide is een elektronentransportketen (ETC) complexe IV-remmer. De effecten van cyanide op het cellulair metabolisme en de autofluorescentie-intensiteiten en levensduur van NAD(P)H en FAD in cellen worden goed gekarakteriseerd27,40. Daarom is een cyanide perturbatie-experiment een effectief middel om NAD(P)H- en FAD-beeldvormingsprotocollen te valideren. Een succesvol cyanide-experiment geeft vertrouwen dat het NAD(P)H- en FAD-beeldvormingsprotocol kan worden gebruikt om het metabolisme van onbekende groepen of verstoringen te beoordelen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-deoxy-d-glucose (2-DG)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>AC111980000; AC111980010; AC111980050; AC111980250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic Antimicrobial (pen-strep)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15240096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Samples</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>N/A</td>
			<td>MCF-7 cancer line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellProfiler</td>
			<td>Broad Institute</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tube</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-664</td>
			<td>15 mL conical tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11965092</td>
			<td>Culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FAD dichroic mirror</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF495-Di03-25x36</td>
			<td>495 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FAD emission filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF01-550/88-25</td>
			<td>550/88 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FAD excitation filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF01-458/64-25</td>
			<td>458/64 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>16000036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence Lifetime Microscope</td>
			<td>3i</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom dish</td>
			<td>MatTek Corp</td>
			<td>P35G-1.0-14-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiphoton Laser</td>
			<td>Coherent</td>
			<td>N/A</td>
			<td>2P Coherent Laser, Tunable 680 nm-1080 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NAD(P)H dichroic mirror</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF409-Di03-25x36</td>
			<td>409 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NAD(P)H emission filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF02-447/60-25</td>
			<td>447/60 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NAD(P)H excitation filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td>FF01-357/44-25</td>
			<td>357/44 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>70011044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Cyanide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>380970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SlideBooks 6</td>
			<td>3i</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Image acquisition software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPCImage</td>
			<td>Becker &#38; Hickl GmbH</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Fluorescence lifetime analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stage Top Incubator</td>
			<td>okoLab</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Biosciences</td>
			<td>786-262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urea</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>U5128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>YG beads</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>19096-2</td>
			<td>Yg microspheres (20.0 &#181;m)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

autofluorescence imaging to evaluate cellular metabolism

Cellulair metabolisme is het proces waarbij cellen energie genereren en veel ziekten, waaronder kanker, worden gekenmerkt door een abnormaal metabolisme. Gereduceerd nicotinamide-adenine (fosfaat) dinucleotide (NAD(P)H) en geoxideerd flavine adenine dinucleotide (FAD) zijn co-enzymen van metabole reacties. NAD(P)H en FAD vertonen autofluorescentie en kunnen spectraal worden geïsoleerd door excitatie- en emissiegolflengten. Beide co-enzymen, NAD(P)H en FAD, kunnen bestaan in een vrije of eiwitgebonden configuratie, die elk een verschillende fluorescentielevensduur hebben - de tijd gedurende welke de fluorofoor in de aangeslagen toestand blijft. Fluorescentie lifetime imaging (FLIM) maakt kwantificering van de fluorescentie-intensiteit en levensduur van NAD(P)H en FAD mogelijk voor labelvrije analyse van cellulair metabolisme. Fluorescentie-intensiteit en levensduurmicroscopen kunnen worden geoptimaliseerd voor beeldvorming van NAD (P) H en FAD door de juiste excitatie- en emissiegolflengten te selecteren. Metabole verstoringen door cyanide verifiëren autofluorescentie beeldvormingsprotocollen om metabole veranderingen in cellen te detecteren. Dit artikel demonstreert de techniek van autofluorescentie beeldvorming van NAD(P)H en FAD voor het meten van cellulair metabolisme.

De epitheliale borstkanker cellijn, MCF-7, werd gekweekt in DMEM aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS) en 1% penicilline-streptomycine. Voor fluorescentiebeeldvorming werden de cellen gezaaid met een dichtheid van 4 × 105 cellen per 35 mm glazen bodembeeldschotel 48 uur vóór beeldvorming. De cellen werden voor en na de behandeling met cyanide in beeld gebracht met behulp van de hierboven vermelde protocollen. Het doel van het cyanide-experiment is om spectrale isolatie van NAD(P)H- en FAD-fluorescenti...

Watch this Scientific Journal Video about Autofluorescence Imaging to Evaluate Cellular Metabolism at JoVE.com

Autofluorescence Imaging to Evaluate Cellular Metabolism

Dit protocol beschrijft fluorescentiebeeldvorming en analyse van de endogene metabole co-enzymen, gereduceerd nicotinamide-adenine (fosfaat) dinucleotide (NAD (P) H) en geoxideerd flavine-adenine dinucleotide (FAD). Autofluorescentie beeldvorming van NAD(P)H en FAD biedt een labelvrije, niet-destructieve methode om het cellulaire metabolisme te beoordelen.

Autofluorescentie beeldvorming om cellulair metabolisme te evalueren

Cellular metabolism is the process by which cells generate energy, and many diseases, including cancer, are characterized by abnormal metabolism. Reduced ...

ADH en FAD zijn endogene moleculen die autofluorescentie vertonen bij verschillende excitatie- en emissiegolflengten. Vanwege hun gebruik als co-enzymen van metabole reacties, kan autofluorescentiemicroscopie het cellulaire metabolisme beoordelen. Autofluorescentie beeldvorming van NADH en FAD vereist geen exogene labels en is een niet-destructieve methode met subcellulaire resolutie.Autofluorescentiemicroscopie kan worden gebruikt op levende monsters en voor tijdsverloopstudies. Autofluorescentie beeldvorming kan breed worden toegepast op alle levende cellen of weefsels. Autofluorescente beeldvorming is gebruikt op neuron-, kankercel-, tumor-, in-vivo-, stamcel- en immuuncellen.Linghao Hu, een afgestudeerde student van het Quantitative Optical Imaging Laboratory aan de Texas A & M University, demonstreert de procedure. Start het experiment door alle componenten van de multi-foton fluorescentielevensmicroscoop in te schakelen, inclusief de laserbron en de detectoren. Schakel voordat u het monster plaatst de felle veldlamp in en zorg ervoor dat het licht in het oculair gaat.Kies vervolgens een objectief voor de celbeeldvorming. Als u geen luchtdoel gebruikt, brengt u één druppel van het juiste onderdompelingsmedium bovenop het doel aan. Plaats de schaal met glazen bodem op de monsterhouder op het microscooppodium.Centreer vervolgens het monster met het doel met behulp van de X / Y-faseregeling Zorg ervoor dat het monster is beveiligd en niet zal bewegen tijdens het afbeelden. Als je klaar bent, kijk je in het oculair en beweeg je het objectief omhoog om je op de cellen te concentreren. Als de microscoop zich in een behuizing bevindt, sluit u de deur van de lichtbak.Open vervolgens de beeldacquisitiesoftware en klik op het tabblad Multi-photon Imaging om de multi-fotonbeeldvormingsparameters in te stellen zoals beschreven in het manuscript. Stel de versterking van de detector in op de optimale waarde voor de fluorescentielevensbeeldvorming of FILM. Wijzig vervolgens de verblijftijd van de laserbesteding bij elke pixel van het monster in de gewenste waarde.Voor nicotinamide adeninefosfaat dinucleotide, of NADPH, stel de multi-fotonenlaser in op 750 nanometer. Controleer vervolgens of de stroomregeling voor de laser op nul is ingesteld, zodat de cellen niet worden beschadigd bij het openen van de sluiter op de laser. Stel een emissiefilter in op 400 tot 500 nanometer.Wanneer de parameters zijn ingesteld, begint u met het maken van beelden op een focus- of liveweergave-manier om de beeldinstellingen te optimaliseren. Verhoog het laservermogen langzaam van drie naar acht milliwatt en zorg ervoor dat de cellen scherp zijn. Eenmaal aangepast, registreert u het maximale gebruikte vermogen.Gebruik de geregistreerde maximale vermogensinstelling voor de beeldvorming op andere segmenten van de petrischaal. Verzamel een NADPH-FILM-beeld met een beeldintegratietijd van 60 seconden en controleer of het beeld een voldoende aantal fotonen heeft, zoals een piek van 100 fotonen voor een cytoplasmapixel binnen de fluorescentielevensvervalcurve. Als het aantal fotonen te laag is, verhoogt u het laservermogen of de duur van de beeldacquisitie.Voor de flavine adenine dinucleotide, of FAD, beeldvorming, stel de multi-fotonlaser in op 890 nanometer en wacht tot de laser op de nieuwe golflengte in stand is. Zorg ervoor dat de vermogensregeling voor de laser in eerste instantie op nul is ingesteld. Stel een emissiefilter in op 500 tot 600 nanometer.Om de beeldinstellingen te optimaliseren, begint u met het maken van beelden op een focus- of liveweergave-manier door het laservermogen te verhogen tot 5 tot 10 milliwatt en het maximale gebruikte vermogen vast te leggen. Gebruik dezelfde energie-instelling voor de FAD-beeldvorming van volgende gezichtsvelden. Verzamel het FAD-FILM-beeld met een beeldintegratietijd van 60 seconden en controleer of het beeld voldoende fotonen heeft binnen de fluorescentielevensduurvervalcurve.Als het aantal fotonen te laag is, verhoogt u het laservermogen of de duur van de beeldacquisitie en herhaalt u de beeldvorming voor nog eens vier tot vijf gezichtsvelden of FOV's, waarbij elk beeld op twee FOV's afstand staat. Om een 80-millimolaire natriumcyanideoplossing te maken, lost u 130,24 milligram natriumcyanide op in 25 milliliter PBS. Zuig uit de kweekschaal 100 microliter kweekmedium op om te vervangen door 100 microliter natriumcyanideoplossing om een vier millimolaire concentratie cyanide in het gerecht te verkrijgen.Plaats de cellen vijf minuten in een couveuse om de cellen te laten reageren met de cyanide-oplossing. Na de cyanideblootstelling, verkrijg NADPH- en FAD-beelden van de cellen zoals eerder beschreven. De studie berekende de fluorescentielevensduurparameters met behulp van de gemeten instrumentresponsfunctie, of IRF, van ureum.De parameters werden gemiddeld over de pixels van het cytoplasma van elke cel die werd gebruikt voor segmentatie. Individuele cellen werden geïdentificeerd en gemaskeerd om achtergrondgeluiden te elimineren. Vervolgens werd de kern geïdentificeerd en geprojecteerd op het celmasker.Verder werden de cellen gefilterd om de gemaskeerde gebieden te verwijderen die niet passen bij de grootte van typische cellen. De multi-foton fluorescentie lifetime imaging van NADPH en FAD maakte visualisatie van celmorfologie en metabolisme voor en na cyanidebehandeling mogelijk. Er werd waargenomen dat nadph-levensduur afneemt met cyanidebehandeling, terwijl de FAD-levensduur toeneemt na cyanidebehandeling.De representatieve box plot gaf aan dat de optische redoxverhouding van MCF7-cellen afnam na behandeling met cyanide. De blootstelling aan cyanide verminderde de amplitudegewogen NADPH-levensduur van MCF7-cellen. De korte en lange levensduur nam af voor NADPH, maar nam toe voor NADPH alfa.Voor FAD nam de amplitudegewogen levensduur van MCF7-cellen toe na blootstelling aan cyanide. Zowel de korte als de lange levensduur namen toe voor FAD, maar daalden voor FAD alpha one. Het is belangrijk om voldoende laservermogen naar de monsters te hebben, maar onthoud dat te veel vermogen schade aan de cellen kan veroorzaken.Omdat autofluorescentie beeldvorming niet schadelijk is voor de cellen, kunnen latere biochemische assays op dezelfde monsters worden gebruikt.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

High-resolution Fiber-optic Microendoscopy for in situ Cellular Imaging

Hoge-resolutie Fiber-optic Microendoscopy voor In situ Cellular Imaging

Many biological and clinical studies require the longitudinal study and analysis of morphology and function with cellular level resolution.  ...

Analyzing Cellular Internalization of Nanoparticles and Bacteria by Multi-spectral Imaging Flow Cytometry

Het analyseren van cellulaire internalisatie van nanodeeltjes en bacteriën door Multi-spectrale Imaging flowcytometrie

Nanoparticulate  systems have emerged as valuable tools in vaccine delivery through their  ability to efficiently deliver cargo, including proteins, to ...

Models and Methods to Evaluate Transport of Drug Delivery Systems Across Cellular Barriers

Modellen en methoden om vervoer van Drug Delivery Systems Across Cellular Barrières Evalueer

Sub-micrometer carriers (nanocarriers; NCs) enhance efficacy of drugs by improving solubility, stability, circulation time, targeting, and release. ...

Using Cell-substrate Impedance and Live Cell Imaging to Measure Real-time Changes in Cellular Adhesion and De-adhesion Induced by Matrix Modification

Met behulp van Cell-substraat Impedantie en live cell imaging naar Real-time veranderingen in de cellulaire adhesie en De-adhesie geïnduceerd door Matrix Wijziging Meet

Cell-matrix adhesion plays a key role in controlling cell morphology and signaling. Stimuli that disrupt cell-matrix adhesion (e.g., myeloperoxidase and ...

Initial Evaluation of Antibody-conjugates Modified with Viral-derived Peptides for Increasing Cellular Accumulation and Improving Tumor Targeting

Eerste beoordeling van antilichaam-geconjugeerde bewerkt met virale afkomstige peptiden voor verhoging van cellulaire accumulatie en verbetering van de Tumor gericht op

Antibody-conjugates (ACs) modified with virus-derived peptides are a potentially powerful class of tumor cell delivery agents for molecular payloads used ...

Calorespirometry: A Powerful, Noninvasive Approach to Investigate Cellular Energy Metabolism

Calorespirometry: Een krachtige, Noninvasive benadering onderzoeken van cellulaire energiemetabolisme

Many cell lines used in basic biological and biomedical research maintain energy homeostasis through a combination of both aerobic and anaerobic ...

Intra-cardiac Side-Firing Light Catheter for Monitoring Cellular Metabolism using Transmural Absorbance Spectroscopy of Perfused Mammalian Hearts

Intra-cardiale side-afvuren licht katheter voor het monitoren van cellulaire metabolisme met behulp van Transmural extinctie spectroscopie van Geperfectiongebruikt zoogdieren harten

Absorbance spectroscopy of cardiac muscle provides non-destructive assessment of cytosolic and mitochondrial oxygenation via myoglobin and cytochrome ...

3D Analysis of Multi-cellular Responses to Chemoattractant Gradients

3D-analyse van multi-cellulaire reacties op chemoattractant gradiënten

Various limitations of 2D cell culture systems have sparked interest in 3D cell culture and analysis platforms, which would better mimic the spatial and ...

Imaging Integrin Tension and Cellular Force at Submicron Resolution with an Integrative Tension Sensor

Imaging integrine spanning en cellulaire kracht bij Submicron resolutie met de Sensor van een integratieve spanning

Molecular tension transmitted by integrin-ligand bonds is the fundamental mechanical signal in the integrin pathway that plays significant roles in many ...

Preparation of Tunable Extracellular Matrix Microenvironments to Evaluate Schwann Cell Phenotype Specification

Voorbereiding van Tunable Extracellular Matrix Microenvironments om Schwann Cell Phenotype Specification te evalueren

Traumatic peripheral nervous system (PNS) injuries currently lack suitable treatments to regain full functional recovery. Schwann cells (SCs), as the ...