Name: mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice
Uploaded: 2022-02-18T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice at JoVE.com

GM stöds av ett NDSEG Graduate Fellowship. VLT stöds av NIH NIGMS anslag #GM137906 och Rita Allen Foundation. AJS stöds av försvarsdepartementets bidrag W81XWH-20-1-0277, W81XWH-21-1-0197 och Rita Allen Foundation. Vi är tacksamma för Dr. Alexxai Kravitz vid Washington University School of Medicine för att designa och göra fritt tillgängliga 3D-skrivarfiler för kammaren 2 golv och sondplatta.

Alla experiment som involverar användning av möss och de förfaranden som följs däri godkändes av institutionala djurvårds- och användningskommittéer vid MD Anderson Cancer Center och Stanford University, i strikt överensstämmelse med National Institutes of Health's Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.
1. MCA-konstruktion
<ol><li>Konstruktionskammare 1 med följande mått: 125 mm x 125 mm x 125 mm (bredd x djup x höjd) från ogenomskinlig vit...

<ol>
	<li>Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+and+sensitive+method+for+measuring+thermal+nociception+in+cutaneous+hyperalgesia.">A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia.</a> Pain. 32 (1), 77-88 (1988).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li><li>Sheahan, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+nerve+injury+minimally+affect+mouse+voluntary+behaviors+proposed+as+indicators+of+pain.">Inflammation and nerve injury minimally affect mouse voluntary behaviors proposed as indicators of pain.</a> Neurobiology of Pain. 2, 1-12 (2017).</li><li>Wodarski, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-centre+replication+of+suppressed+burrowing+behaviour+as+an+ethologically+relevant+pain+outcome+measure+in+the+rat:+a+prospective+multicentre+study.">Cross-centre replication of suppressed burrowing behaviour as an ethologically relevant pain outcome measure in the rat: a prospective multicentre study.</a> Pain. 157 (10), 2350-2365 (2016).</li><li>King, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unmasking+the+tonic-aversive+state+in+neuropathic+pain.">Unmasking the tonic-aversive state in neuropathic pain.</a> Nature Neuroscience. 12 (11), 1364-1366 (2009).</li><li>Harte, S. E., Meyers, J. B., Donahue, R. R., Taylor, B. K., Morrow, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+Conflict+System:+A+Novel+Operant+Method+for+the+Assessment+of+Nociceptive+Behavior.">Mechanical Conflict System: A Novel Operant Method for the Assessment of Nociceptive Behavior.</a> PLoS One. 11 (2), 0150164 (2016).</li><li>Pahng, A. R., Edwards, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Pain+Avoidance-Like+Behavior+in+Drug-Dependent+Rats.">Measuring Pain Avoidance-Like Behavior in Drug-Dependent Rats.</a> Current Protocols in Neuroscience. 85 (1), 53 (2018).</li><li>Odem, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sham+surgeries+for+central+and+peripheral+neural+injuries+persistently+enhance+pain-avoidance+behavior+as+revealed+by+an+operant+conflict+test.">Sham surgeries for central and peripheral neural injuries persistently enhance pain-avoidance behavior as revealed by an operant conflict test.</a> Pain. 160 (11), 2440-2455 (2019).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+behavioral+test+paradigm+to+measure+the+aversive+quality+of+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+rats.">A behavioral test paradigm to measure the aversive quality of inflammatory and neuropathic pain in rats.</a> Experimental Neurology. 163 (2), 490-494 (2000).</li><li>LaBuda, C. J., Fuchs, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphine+and+gabapentin+decrease+mechanical+hyperalgesia+and+escape/avoidance+behavior+in+a+rat+model+of+neuropathic+pain.">Morphine and gabapentin decrease mechanical hyperalgesia and escape/avoidance behavior in a rat model of neuropathic pain.</a> Neuroscience Letters. 290 (2), 137-140 (2000).</li><li>Vichaya, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motivational+changes+that+develop+in+a+mouse+model+of+inflammation-induced+depression+are+independent+of+indoleamine+2,3+dioxygenase.">Motivational changes that develop in a mouse model of inflammation-induced depression are independent of indoleamine 2,3 dioxygenase.</a> Neuropsychopharmacology. 44 (2), 364-371 (2019).</li><li>Hasco&#235;t, M., Bourin, M., Nic Dhonnchadha, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+light-dark+paradigm:+a+review.">The mouse light-dark paradigm: a review.</a> Progress in Neuropsychopharmacology &amp; Biological Psychiatry. 25 (1), 141-166 (2001).</li><li>Shepherd, A. J., Mohapatra, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+validation+of+voluntary+gait+and+mechanical+sensitivity+assays+associated+with+inflammatory+and+neuropathic+pain+in+mice.">Pharmacological validation of voluntary gait and mechanical sensitivity assays associated with inflammatory and neuropathic pain in mice.</a> Neuropharmacology. 130, 18-29 (2018).</li><li>Huck, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+Contribution+of+Myeloid-Lineage+TLR4+to+the+Transition+to+Chronic+Pain:+A+Focus+on+Sex+Differences.">Temporal Contribution of Myeloid-Lineage TLR4 to the Transition to Chronic Pain: A Focus on Sex Differences.</a> Journal of Neuroscience. 41 (19), 4349-4365 (2021).</li><li>Pitzer, C., La Porta, C., Treede, R. D., Tappe-Theodor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+and+neuropathic+pain+conditions+do+not+primarily+evoke+anxiety-like+behaviours+in+C57BL/6+mice.">Inflammatory and neuropathic pain conditions do not primarily evoke anxiety-like behaviours in C57BL/6 mice.</a> European Journal of Pain. 23 (2), 285-306 (2019).</li><li>Sieberg, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathic+pain+drives+anxiety+behavior+in+mice,+results+consistent+with+anxiety+levels+in+diabetic+neuropathy+patients.">Neuropathic pain drives anxiety behavior in mice, results consistent with anxiety levels in diabetic neuropathy patients.</a> Pain Reports. 3 (3), 651 (2018).</li><li>Meuwissen, K. P. V., van Beek, M., Joosten, E. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burst+and+Tonic+Spinal+Cord+Stimulation+in+the+Mechanical+Conflict-Avoidance+System:+Cognitive-Motivational+Aspects.">Burst and Tonic Spinal Cord Stimulation in the Mechanical Conflict-Avoidance System: Cognitive-Motivational Aspects.</a> Neuromodulation. 23 (5), 605-612 (2020).</li></ol>

Som med alla beteendetester är korrekt hantering, randomisering och blindning för behandling av djur avgörande hela tiden. Med tanke på de multifaktoriella ingångarna i komplexa beteenden och beslutsfattande är det absolut nödvändigt att djur hanteras, vanes och testas så konsekvent som möjligt samtidigt som nöd minimeras. Försiktighet bör också vidtas för att reproducera tidpunkten för musplacering i kammare 1, slå på LED-lamporna och ta bort barriären, eftersom skillnader här kan påverka efterfölj...

Smärta är en komplex upplevelse med sensoriska och affektiva komponenter. En minskning av tröskeln för smärtuppfattning och överkänslighet mot termiska och / eller mekaniska stimuli är viktiga funktioner i denna upplevelse, vilka stimulansframkallade smärtbeteendetester kan fånga (som Hargreaves test av värmekänslighet och von Frey-testet av mekanisk känslighet)1,2. Även om sådana tester ger robusta och reproducerbara resultat, begränsas de av deras beroende av reflexivt tillbakadragande från en uppfattad skadlig stimulans. Detta har ifrågasatt ett pågående beroende av smärtforskning på dessa tester ensam. För detta ändamål har smärtforskare i flera år undersökt alternativa / kompletterande beteendetester för användning i gnagare smärtmodeller i ett försök att fånga mer av de affektiva och / eller motiverande komponenterna i smärta. Dessa o-framkallade, frivilliga eller icke-reflexiva åtgärder (t.ex. hjullöpning, grävningsaktivitet, konditionerad platspreferens 3,4,5) genomförs i ett försök att förbättra översättningsbarheten av preklinisk smärtforskning.
Den mekaniska konfliktundvikande (MCA) -analysen beskrevs ursprungligen av Harte et al. 20166, används främst hos råttor 7,8 och representerar en modifiering av ett tidigare tillvägagångssätt - platsflykt-undvikande paradigm. I detta tillvägagångssätt utförs en skadlig stimulans av baktassen i en annars önskvärd (mörk) kammare för att driva målmedvetet beteende hos djuret för att fly / undvika sådan stimulering 9,10. Istället för att förlita sig på manuell skadlig stimulering av baktassen av en observatör, tvingar MCA-analysen möss att förhandla om en potentiellt skadlig stimulans för att undkomma en aversiv miljö och nå den mörka kammaren. Konflikten /undvikandet som ger analysen sitt namn härrör från dessa två konkurrerande motiv: fly från starkt upplysta områden och undvik skadlig stimulering av tassarna. MCA-analysen delar också funktioner med konditionerad platspreferenstestning, där parningen av smärtlindring med miljösignaler driver förändringar i beteende som återspeglar en preferens för det smärtlindrande / givande sammanhanget11.
I grund och främst delar alla dessa analyser ett liknande tillvägagångssätt: att använda ett skifte i ett djurs preferens för en aversiv miljö framför en annan som en indikator på deras affektiva / motiverande tillstånd. MCA-analysen är ett 3-kammarparadigm som består av en starkt upplyst kammare följt av en mörk mittkammare med justerbara höjdsonder och en mörk tredje kammare utan några aversiva stimuli. En oskadad mus är vanligtvis motiverad att fly till en mörkare kammare, med tanke på gnagarnas medfödda motvilja mot starkt ljus12. I det här exemplet övervinner den naturliga motivationen att fly från en starkt upplyst miljö oviljor att stöta på bakpotstimulering (de justerbara höjdsonderna), som uteslutande förekommer i den mörka miljön. Däremot kan en mus som upplever smärta (till exempel på grund av inflammation eller neuropati) välja att spendera mer tid i den starkt upplysta miljön, eftersom det finns motivation att undvika den obehagliga taktila upplevelsen av de mekaniska sonderna i inställningen av pågående taktil överkänslighet.
I den här artikeln beskrivs en modifierad version av MCA-analysen. Vi har anpassat den ursprungliga metoden (som utfördes på råttor6) för användning på möss. Vi har också minskat antalet testade sondhöjder från sex till tre (0, 2 och 5 mm över golvhöjd) för att effektivisera datainsamlingen. Detta tillvägagångssätt har testats över flera smärtmodeller och validerats med kända smärtstillande medel, vilket indikerar att smärtöverkänslighet och / eller tillhörande affektiva och motiverande förändringar driver dessa förändringar i beteende. Detta tillvägagångssätt är relativt snabbt att genomföra och anpassningsbart jämfört med andra icke-reflexiva åtgärder, vilket kan ta många dagar av tillvänjning och träning 1,2. I samklang med andra mått på smärta kan MCA generera värdefulla insikter i de affektiva och motiverande aspekterna av smärta.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>32.8ft 3000K-6000K Tunable White LED Strip Lights, Dimmable Super Bright LED Tape Lights with 600 SMD 2835 LEDs</td>
			<td>Lepro</td>
			<td>SKU: 410087-DWW-US</td>
			<td>For lighting chamber 1. https://www.lepro.com/32ft-dimmable-tunable-white-led-strip-lights.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D printed &#39;spike bed&#39; and &#39;chamber 2 floor&#39;</td>
			<td>Shapeways</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes as an alternative to blunted map pins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean MCA between mice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acryl-Hinge 2</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>for attaching chamber lids to rear walls. https://www.tapplastics.com/product/plastics/handles_hinges_latches/acryl_hinge_2/122</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Acrylic Sheet, Clear</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For front wall of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_cast_clear/510</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Cast Transparent Colored Acrylic, Transparent Dark Red - 50%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. 50% light transmission. For walls and lids of chambers 2 and 3. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_transparent_colors/519</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemcast Translucent &#38; Opaque Colored Cast Acrylic, Sign Opaque White - 0.1%</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>3mm thick. For side walls and lid of chamber 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_color/341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disinfectant (e.g. Quatricide)</td>
			<td>Pharmacal Research Laboratories, Inc.</td>
			<td>65020F</td>
			<td>To disinfect MCA at the end of a testing session.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry-erase markers and board</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To add experimental info to the beginning of video footage.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Map pins</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Optional, for mechanical probes. Use sandpaper to blunt sharp points before use. Can be used in place of 3D-printed parts.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper towels</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To clean/disinfect MCA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SCIGRIP Weld-On #3 Acrylic Cement</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For assembling acrylic sheets into chambers and affixing hinges. https://www.tapplastics.com/product/repair_products/plastic_adhesives/weld_on_3_cement/131</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To record escape latencies/dwell times in real-time or from recorded video.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Timer</td>
			<td>Various</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To ensure LED turn-on, barrier removal and test completion are timed consistently.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Video camera</td>
			<td>Various</td>
			<td>HDRCX405 Handycam Camcorder</td>
			<td>To record mouse behavior in the MCA device. Can be substituted with any consumer-grade video camera capable of 1080p resolution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tripod</td>
			<td>Famall</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Any tripod that can hold the camera at bench height for recording MCA footage is acceptable.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mechanical conflict-avoidance assay to measure pain behavior in mice

Smärta består av både sensoriska (nociceptiva) och affektiva (obehagliga) dimensioner. I prekliniska modeller har smärta traditionellt bedömts med hjälp av reflexiva tester som möjliggör slutsatser om smärtans nociceptiva komponent men ger lite information om den affektiva eller motiverande komponenten av smärta. Att utveckla tester som fångar dessa komponenter av smärta är därför translationellt viktigt. Därför måste forskare använda icke-reflexiva beteendeanalyser för att studera smärtuppfattning på den nivån. Mekanisk konfliktundvikande (MCA) är en etablerad frivillig icke-reflexiv beteendeanalys för att studera motiverande svar på en skadlig mekanisk stimulans i ett 3-kammarparadigm. En förändring i en mus platspreferens, när den står inför konkurrerande skadliga stimuli, används för att härleda den upplevda obehagligheten hos starkt ljus kontra taktil stimulering av tassarna. Detta protokoll beskriver en modifierad version av MCA-analysen som smärtforskare kan använda för att förstå affektiva motivationssvar i en mängd olika mussmärtmodeller. Även om det inte specifikt beskrivs här, använder våra exempel MCA-data det intraplantära fullständiga Freunds adjuvans (CFA), skonad nervskada (SNI) och en fraktur / gjutningsmodell som smärtmodeller för att illustrera MCA-proceduren.

MCA-analysen har använts framgångsrikt med flera mekaniskt distinkta mussmärtmodeller. Figur 2 visar data där utfallsmåttet för valet passerade mittpunkten i kammare 2 (figur 2A). De data som erhållits genom att använda halvvägspunkten kontra flykten in i kammare 3 är mycket lika, ~ 40 s för halvvägs mot ~ 45 s för kammare 3 flykt i den sparade nervskadan (SNI) -modellen av neuropatisk smärta med 5 mm sondhöjd13.
<p cla...

Watch this Scientific Journal Video about Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice at JoVE.com

Mechanical Conflict-Avoidance Assay to Measure Pain Behavior in Mice

Den mekaniska konfliktundvikande analysen används som en icke-reflexiv avläsning av smärtkänslighet hos möss som kan användas för att bättre förstå affektiva motivationssvar i en mängd olika mussmärtmodeller.

Mekanisk konfliktundvikande analys för att mäta smärtbeteende hos möss

Pain comprises of both sensory (nociceptive) and affective (unpleasant) dimensions. In preclinical models, pain has traditionally been assessed using ...

Denna metod kan hjälpa till att svara på frågor om djurens effektiva eller motiverande tillstånd under olika smärtförhållanden. Det är ett viktigt steg för att förbättra översättningen av preklinisk forskning. Den största fördelen med denna teknik är att den är relativt snabb och enkel att utföra, men ändå bedömer komplexa motivationer som påverkar smärtrelaterat beteende.Börja med att konstruera sidoväggarna, golvet och taket i kammare ett med en ogenomskinlig vit tre millimeter tjock akryl. För den främre väggen, använd en klar tre millimeter tjock akryl. Fäst locket på kammare ett med ett gångjärn så att möss enkelt kan placeras i och hämtas från kammaren.Fäst sedan självhäftande lysdiodtejp på lockets inre yta för att ge belysning på cirka 4 800 lux. Skjut ett ogenomskinligt akrylark in och ut ur läge för att stänga kammare ett från resten av MCA-enheten. Konstruera sedan en 270 millimeter lång oupplyst kammare två, MCA-testkammaren, med genomskinlig mörkröd akryl på alla sidor med ett gångjärnslock ovanpå.Placera sedan ett 13 x 31 rutnät med två millimeter hål på kammarens golv genom vilket en rad trubbiga sonder med 0,5 millimeter diameterspetsar kan skjuta ut. Justera sondernas höjd genom att placera ytterligare akrylplåtar under sondens basplatta. Med den här metoden konfigurerar du enheten med noll-, två- och fem millimeter sondhöjder.Som ett alternativ till trubbiga kartstift eller liknande material, använd 3D-skrivarfilerna för att skriva ut golvet i kammare två och sondplattan med ett tvättbart och biokompatibelt material som nylon 12-plast. Slutligen konstruera en mörk kammare tre med genomskinlig mörkröd akryl på alla sidor med ett gångjärnslock som liknar kamrarna ett och två. Placera den i motsatt ände av kammare ett för att fungera som ett mörkt flyktområde från de mekaniska sonderna i kammare två.En dag innan du schemalägger baslinjetestningen, acklimatisera mössen till MCA-enheten i 5 till 15 minuter med sina burkamrater för att underlätta social utforskning av hela enheten. Se till att lysdioderna i kammare ett är avslagna, barriären mellan kamrarna ett och två hålls öppen och sonderna inte sticker ut genom golvet i kammare två. Ställ sedan in en videokamera som kan spela in 1080 pixelfilmer på ett stativ med en sidovänd vy av hela MCA-enheten.Justera synfältet så att MCA fyller den inspelade bilden. När inspelningen börjar, håll en handhållen torr raderingstavla i kamerans fältvy för att märka början av videon med identifierande information om djurets testkörning. För den första körningen, ställ in sondhöjden till noll och överför musen som ska testas från sin hembur till kammare ett med barriärdörren på plats.Starta en timer som syns i de inspelade bilderna. Efter 10 sekunder, slå på kammaren en lysdioder. När musen har varit i den upplysta kammaren i 20 sekunder, dra tillbaka barriären mellan kamrarna ett och två.Observera djuret i två minuter och mät latenser eller uppehållstider med ett stoppur medan testet pågår. Registrera latensen till den första ingången till kammare två, latens för att korsa mer än halvvägs över kammare två, den totala uppehållstiden i kammare två, latensen för att nå kammare tre och den totala uppehållstiden i varje kammare inom två minuter och konvertera dem till proportioner. När testningen är klar, sätt tillbaka musen till sin hembur.Rengör MCA-kamrarna med 70% etanol och låt den torka helt. Efter att ha kört alla möss i kohorten med sondhöjden inställd på noll, sätt in ett tre millimeter akrylark under den mekaniska sondbasplattan och upprepa körningen med en sondhöjd på två millimeter. Efter att ha kört alla möss med sondhöjden inställd på två millimeter, sätt in ytterligare tre millimeter akrylplåt under sondens basplatta och upprepa körningen med en sondhöjd på fem millimeter.Utför en slutrengöring med ett desinfektionsmedel i slutet av testsessionen. I den kompletta Freunds adjuvansinducerade inflammatoriska smärtmodell förändrar en saltlösningsinjektion inte flyktlatens jämfört med baslinjen. Möss injicerade med adjuvansen visade en signifikant ökning av flyktlatens fyra dagar efter injektionen, men endast när sondhöjden höjdes till fem millimeter.Denna ökade latens sågs inte hos möss som fick karprofen 90 minuter före testets början. Den sparade nervskademodellen av neuropatisk smärta ökade signifikant latensen för att fly jämfört med baslinjen när sondhöjden var inställd på fem millimeter. Denna ökning förhindrades genom administrering av opioidanalgetika buprenorfin 90 minuter före testning.Ökad flyktlatens observerades också hos möss som inte genomgick en baslinjerunda av MCA-testning före nervskada. Den ökade flyktfördröjningen hos skonade nervskademöss vid fem millimeter förhindrades av gabapentin administrerat 90 minuter före testning. I fraktur- eller gjutningsmodellen ökade latensen för att fly från kammare ett proportionellt mot sondens höjd före skada.Efter skadan förblev latensen oförändrad vid noll millimeter, men ökade signifikant vid två millimeter och fem millimeter sondhöjd för män och fem millimeter sondhöjd för kvinnor jämfört med baslinjen. Det viktigaste att komma ihåg när man försöker denna procedur är att se till att alla möss är vana vid MCA-enheten och att upprätthålla korrekt randomisering och blindning under hela studien. Denna metod kan användas tillsammans med andra mått på smärtkänslighet inklusive von Frey eller villkorlig platspreferens.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods to Assay Drosophila Behavior

Methods to Assay Drosophila Behavior

Metoder för analys Drosophila Behavior

Drosophila melanogaster, the fruit fly, has been used to study molecular mechanisms of a wide range of human diseases such as cancer, cardiovascular ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

A Single-fly-analys för födosöksbeteende i<em&gt; Drosophila</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Membrane Potential Dye Imaging of Ventromedial Hypothalamus Neurons From Adult Mice to Study Glucose Sensing

Membranpotential Dye avbildning av ventromediala Hypothalamus nervceller från vuxna möss för att studera Glucose Sensing

Studies of neuronal activity are often performed using neurons from rodents less than 2 months of age due to the technical difficulties associated with ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

En enkel och billig metod för bestämning Cold Känslighet och anpassning hos möss

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Assays to Detect UV-reflecting Structures and Determine their Importance in Mate Preference using the Sailfin Molly Poecilia latipinna

Analyser för att detektera UV reflekterande strukturer och bestämma deras betydelse i Mate preferens använder Sailfin Molly<em&gt; Poecilia latipinna</em

Many organisms use cues and signals beyond human sensitivity during social interactions. It is important to take into account how organisms perceive their ...

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

Ett enkelt sätt att mäta förändringar i belöning sökande beteende genom<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Analys för att mäta nukleocytoplasmisk transport i realtid inom motor neuronliknande NSC-34-celler

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay

Hög genomströmning analys av rörelseapparaten beteende i Drosophila ön analysen

Advances in next-generation sequencing technologies contribute to the identification of (candidate) disease genes for movement disorders and other ...

Optogenetic Entrainment of Hippocampal Theta Oscillations in Behaving Mice

Optogenetic ångan av hippocampus Theta svängningar i beter sig möss

Extensive data on relationships of neural network oscillations to behavior and organization of neuronal discharge across brain regions call for new tools ...