Denna metod kan hjälpa till att svara på frågor om djurens effektiva eller motiverande tillstånd under olika smärtförhållanden. Det är ett viktigt steg för att förbättra översättningen av preklinisk forskning. Den största fördelen med denna teknik är att den är relativt snabb och enkel att utföra, men ändå bedömer komplexa motivationer som påverkar smärtrelaterat beteende.
Börja med att konstruera sidoväggarna, golvet och taket i kammare ett med en ogenomskinlig vit tre millimeter tjock akryl. För den främre väggen, använd en klar tre millimeter tjock akryl. Fäst locket på kammare ett med ett gångjärn så att möss enkelt kan placeras i och hämtas från kammaren.
Fäst sedan självhäftande lysdiodtejp på lockets inre yta för att ge belysning på cirka 4 800 lux. Skjut ett ogenomskinligt akrylark in och ut ur läge för att stänga kammare ett från resten av MCA-enheten. Konstruera sedan en 270 millimeter lång oupplyst kammare två, MCA-testkammaren, med genomskinlig mörkröd akryl på alla sidor med ett gångjärnslock ovanpå.
Placera sedan ett 13 x 31 rutnät med två millimeter hål på kammarens golv genom vilket en rad trubbiga sonder med 0,5 millimeter diameterspetsar kan skjuta ut. Justera sondernas höjd genom att placera ytterligare akrylplåtar under sondens basplatta. Med den här metoden konfigurerar du enheten med noll-, två- och fem millimeter sondhöjder.
Som ett alternativ till trubbiga kartstift eller liknande material, använd 3D-skrivarfilerna för att skriva ut golvet i kammare två och sondplattan med ett tvättbart och biokompatibelt material som nylon 12-plast. Slutligen konstruera en mörk kammare tre med genomskinlig mörkröd akryl på alla sidor med ett gångjärnslock som liknar kamrarna ett och två. Placera den i motsatt ände av kammare ett för att fungera som ett mörkt flyktområde från de mekaniska sonderna i kammare två.
En dag innan du schemalägger baslinjetestningen, acklimatisera mössen till MCA-enheten i 5 till 15 minuter med sina burkamrater för att underlätta social utforskning av hela enheten. Se till att lysdioderna i kammare ett är avslagna, barriären mellan kamrarna ett och två hålls öppen och sonderna inte sticker ut genom golvet i kammare två. Ställ sedan in en videokamera som kan spela in 1080 pixelfilmer på ett stativ med en sidovänd vy av hela MCA-enheten.
Justera synfältet så att MCA fyller den inspelade bilden. När inspelningen börjar, håll en handhållen torr raderingstavla i kamerans fältvy för att märka början av videon med identifierande information om djurets testkörning. För den första körningen, ställ in sondhöjden till noll och överför musen som ska testas från sin hembur till kammare ett med barriärdörren på plats.
Starta en timer som syns i de inspelade bilderna. Efter 10 sekunder, slå på kammaren en lysdioder. När musen har varit i den upplysta kammaren i 20 sekunder, dra tillbaka barriären mellan kamrarna ett och två.
Observera djuret i två minuter och mät latenser eller uppehållstider med ett stoppur medan testet pågår. Registrera latensen till den första ingången till kammare två, latens för att korsa mer än halvvägs över kammare två, den totala uppehållstiden i kammare två, latensen för att nå kammare tre och den totala uppehållstiden i varje kammare inom två minuter och konvertera dem till proportioner. När testningen är klar, sätt tillbaka musen till sin hembur.
Rengör MCA-kamrarna med 70% etanol och låt den torka helt. Efter att ha kört alla möss i kohorten med sondhöjden inställd på noll, sätt in ett tre millimeter akrylark under den mekaniska sondbasplattan och upprepa körningen med en sondhöjd på två millimeter. Efter att ha kört alla möss med sondhöjden inställd på två millimeter, sätt in ytterligare tre millimeter akrylplåt under sondens basplatta och upprepa körningen med en sondhöjd på fem millimeter.
Utför en slutrengöring med ett desinfektionsmedel i slutet av testsessionen. I den kompletta Freunds adjuvansinducerade inflammatoriska smärtmodell förändrar en saltlösningsinjektion inte flyktlatens jämfört med baslinjen. Möss injicerade med adjuvansen visade en signifikant ökning av flyktlatens fyra dagar efter injektionen, men endast när sondhöjden höjdes till fem millimeter.
Denna ökade latens sågs inte hos möss som fick karprofen 90 minuter före testets början. Den sparade nervskademodellen av neuropatisk smärta ökade signifikant latensen för att fly jämfört med baslinjen när sondhöjden var inställd på fem millimeter. Denna ökning förhindrades genom administrering av opioidanalgetika buprenorfin 90 minuter före testning.
Ökad flyktlatens observerades också hos möss som inte genomgick en baslinjerunda av MCA-testning före nervskada. Den ökade flyktfördröjningen hos skonade nervskademöss vid fem millimeter förhindrades av gabapentin administrerat 90 minuter före testning. I fraktur- eller gjutningsmodellen ökade latensen för att fly från kammare ett proportionellt mot sondens höjd före skada.
Efter skadan förblev latensen oförändrad vid noll millimeter, men ökade signifikant vid två millimeter och fem millimeter sondhöjd för män och fem millimeter sondhöjd för kvinnor jämfört med baslinjen. Det viktigaste att komma ihåg när man försöker denna procedur är att se till att alla möss är vana vid MCA-enheten och att upprätthålla korrekt randomisering och blindning under hela studien. Denna metod kan användas tillsammans med andra mått på smärtkänslighet inklusive von Frey eller villkorlig platspreferens.
