Трансплантация поджелудочной железы является лечебным лечением для людей с диабетом. Однако органов не хватает, и необходимы стратегии по улучшению пула доноров. Нормотермическая перфузия ex vivo уже была успешной для других органов, которые потенциально могут позволить оценить и восстановить аллотрансплантаты поджелудочной железы.
Поджелудочная железа является наиболее часто органом, выбрасываемым для трансплантации. Этот метод имеет потенциал для увеличения пула органов для людей, которые живут с осложненным диабетом. Этот метод также позволит нам лучше понять ишемию-реперфузионное повреждение и идентифицировать биомаркеры повреждения поджелудочной железы.
Настройка может быть немного сложной, и, учитывая, что поджелудочная железа является очень чувствительным органом, необходима практика для ее извлечения. Для начала продезинфицируйте и накройте операционное поле. Выполните разрез по средней линии от мечевидной кости до лобкового симфиза и расширьте операционное поле левым боковым разрезом для лучшего воздействия.
Рассекают нижнюю полую вену от брюшной аорты. Далее освобождают аорту от окружающих тканей и перевязывают небольшие поясничные ветви аорты. Определите и поместите лигатуры вокруг обеих почечных артерий.
Как только задняя часть аорты освободится, проведите вокруг нее две лигатуры, где нижняя лигатура в конечном итоге будет перевязана чуть выше бифуркации подвздошной артерии, а верхняя лигатура будет перевязана на пять сантиметров выше предыдущей связки. После рассечения печеночной шишки перевяжите все артерии как можно ближе к печени. Затем определяют общий желчный проток.
Поместите две лигатуры близко к печени и разделите структуру. Затем определите и рассеките вокруг надпеченочной части аорты и наложите на нее галстук. Затем откройте меньший мешок, чтобы лед охладил поджелудочную железу и как можно меньше мобилизовал поджелудочную железу перед промывкой.
Затем вводят 500 международных единиц гепарина на килограмм донорского веса через центральную линию и начинают сбор крови в цитратные, фосфатные, декстрозные, физиологические растворы, аденины, глюкозу и маннит с помощью яремного катетера. После перевязывания нижней лигатуры аорты канюлируют аорту линией заподлицо над бифуркационным галстуком подвздошной кости. Закрепите канюлю верхней галстуком и перевязайте обе почечные артерии.
Как только будет собрано достаточное количество крови, перевяжите наджелудочную аорту и поместите зажим над галстуком. Затем инициируйте промывку с помощью раствора для консервации Университета Висконсина. Затем вырежьте отверстие в воротной вене и каве для вентиляции.
После промывания одним литром раствора Университета Висконсина оцените хвост поджелудочной железы и С-образную петлю двенадцатиперстной кишки. И после адекватного промывания начните рассечение с выявления и пережатия брыжеечных сосудов. Извлеките трансплантат поджелудочной железы и сегмент полой или подвздошной вены для расширения воротной вены.
И поместите орган в органный мешок, который помещается в бассейн, наполненный льдом. После удаления линии смыва из дистальной части аорты закройте ее галстуком и наполните органный мешок оставшимся раствором UW. Затем выполните расширение воротной вены, используя ранее восстановленную полую или подвздошную вену с 6-0 проленом, и канюляцию воротной вены и проксимального отдела аорты с помощью одного четвертого редуктора 3/8.
Затем канюлируют дистальную часть двенадцатиперстной кишки с помощью катетера Малекота и завязывают. Далее зажимают конец катетера, чтобы избежать пролития содержимого двенадцатиперстной кишки, и перекрывают брыжеечные сосуды проленом 4-0. После регистрации веса трансплантата храните трансплантат в статическом холодильном хранилище до начала перфузии поджелудочной железы Ex Vivo.
Поместите камеру поджелудочной железы на стол Майонеза и введите артериальную и венозную трубку через отверстия, предназначенные для этой цели. Подключите и включите внешний нагревательный блок. После размещения всасывающей трубки внутри роликового насоса подсоедините один конец к трубке, выходящей из камеры, для сбора жидкости, а другой конец к венозному резервуару, чтобы собрать всю потерю перфузата органами.
Затем подсоедините кислородную трубку к газовому баллону, содержащему углеродную смесь и оксигенатор. Затем подсоедините трубку насосного агрегата нагревателя к оксигенатору. Зажмите линии артериального и венозного оттока, а также оттока венозного резервуара.
После заполнения венозного резервуара перфузатом, с помощью одного шприцевого насоса непрерывно вводят сосудорасширяющее средство со скоростью восемь миллилитров в час в артериальную линию. Затем, используя второй шприцевой насос, непрерывно вводите ингибитор фермента непосредственно в венозный резервуар. После включения аппарата искусственного кровообращения запустите панели давления, температуры и таймера.
Затем включите насос нагревателя, чтобы нагреть перфузионный раствор до 38 градусов по Цельсию, и откройте подачу кислорода углекислого газа. Затем снимите зажим трубки, размещенный на выходе из венозного резервуара, и запустите центробежный насос, разогнав его до 1 500 об/мин. Далее зажмите трубку в обход артериального фильтра.
И выпустить воздух из артериального фильтра. После этого обнулите линии артериального и венозного давления. После вскрытия органного мешка, где хранится поджелудочная железа, промыть 200 миллилитрами альбумина через артериальную канюлю.
Затем извлеките поджелудочную железу изо льда и поместите ее в камеру органа, убедившись, что артериальная и венозная трубки свободны от воздуха. Далее, отпустив зажим со стороны артерии, зажмите короткий путь между артериальной и венозной трубкой. Как только кровь начнет выходить из артериальной трубки, подключите линию к артериальной канюле.
Затем установите артериальное давление на 20-25 миллиметров ртутного столба, регулируя скорость центробежного насоса, и подключите венозную трубку, как только кровь начнет выходить из венозной канюли. Затем введите один флакон верапамила непосредственно в артериальную сторону, когда поджелудочная железа полностью соединена и не наблюдается кровотечений. После записи различных параметров, как описано в рукописи.
Возьмите пробы для анализа. Отсоедините артериальную и венозную трубки, когда перфузия закончится. после извлечения трансплантата из камеры органа промыть холодным раствором Университета Висконсина и взвесить.
Затем хранят трансплантат на льду в стерильном органном мешочке до момента пересадки. Давление и поток были измерены на протяжении всей перфузии, и результаты показали, что она остается стабильной. Метаболическую активность оценивали путем расчета среднего потребления кислорода трансплантатом.
Результаты показывают, что измерения pH, натрия, кальция и бикарбоната находились в пределах физиологических значений в течение всей перфузии. Было замечено, что уровни лактата и калия снижались во время перфузии и достигали близких к нормальным значений через три часа. Поскольку контур представляет собой замкнутую систему, ожидалось, что уровни амилазы и липазы будут увеличиваться во время перфузии.
Однако повышение уровня, по-видимому, не коррелирует с повреждением трансплантата. Очень важно помнить, что поджелудочной железой нужно манипулировать как можно меньше перед промыванием и во время удаления. Мы надеемся, что в будущем эта модель позволит проводить терапевтические вмешательства для восстановления органов, не пригодных для трансплантации.
Этот метод позволит исследователям продолжить изучение ишемии-реперфузионного повреждения поджелудочной железы, сохранение, оценку и, в конечном итоге, восстановление.
