Name: non-destructive evaluation of regional cell density within tumor aggregates following drug treatment
Uploaded: 2022-06-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Destructive Evaluation of Regional Cell Density Within Tumor Aggregates Following Drug Treatment at JoVE.com

تم دعم هذه الدراسة من قبل NIH R01 BRG CA207725 (MB / DTC) و NIH R01 CA233188 (MB). نود أن نشكر صيدلية AMC على Trastuzumab المقدمة لهذه التجارب.

تم استخدام خطوط خلايا سرطان الثدي AU565 (HER2+) و MDA-MB-231 لهذه الدراسة (انظر جدول المواد).
1. إعداد مجاميع الورم
<ol><li>تحضير وسائط نمو خلايا سرطان الثدي AU565 (HER2+) باستخدام معهد روزويل بارك التذكاري (RPMI) 1640 وسط قاعدي (+) في L-glutamine مكمل بمصل بقري جنيني بنسبة 10٪ (v / v) و 1٪ بنس?...

<ol>
	<li>Sutherland, R., JA, M., Inch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+multicell+spheroids+in+tissue+culture+as+a+model+of+nodular+carcinomas.">Growth of multicell spheroids in tissue culture as a model of nodular carcinomas.</a> Journal of the National Cancer Institute. 46 (1), 113-120 (1971).</li><li>Sachs, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+living+biobank+of+breast+cancer+organoids+captures+disease+heterogeneity.">A living biobank of breast cancer organoids captures disease heterogeneity.</a> Cell. 172 (1-2), 373-386 (2018).</li><li>Nagelkerke, A., Bussink, J., Sweep, F. C. G. J., Span, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+multicellular+tumor+spheroids+of+breast+cancer+cells:+How+to+go+three-dimensional.">Generation of multicellular tumor spheroids of breast cancer cells: How to go three-dimensional.</a> Analytical Biochemistry. 437 (1), 17-19 (2013).</li><li>Kunz-Schughart, L. A., Freyer, J. P., Hofstaedter, F., Ebner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+3-D+cultures+for+high-throughput+screening:+The+multicellular+spheroid+model.">The use of 3-D cultures for high-throughput screening: The multicellular spheroid model.</a> Journal of Biomolecular Screening. 9 (4), 273-285 (2004).</li><li>Hirschhaeuser, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+tumor+spheroids:+An+underestimated+tool+is+catching+up+again.">Multicellular tumor spheroids: An underestimated tool is catching up again.</a> Journal of Biotechnology. 148 (1), 3-15 (2010).</li><li>Jiang, Y., Pjesivac-Grbovic, J., Cantrell, C., Freyer, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multiscale+model+for+avascular+tumor+growth.">A multiscale model for avascular tumor growth.</a> Biophysical Journal. 89 (6), 3884-3894 (2005).</li><li>Freyei, J. P., Sutherland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+growth+saturation+and+development+of+necrosisin+EMT6/R0+multicellular+spheroids+by+the+glucose+and+oxygen+supply.">Regulation of growth saturation and development of necrosisin EMT6/R0 multicellular spheroids by the glucose and oxygen supply.</a> Cancer Research. 46 (7), 3504-3512 (1986).</li><li>Desoize, B., Jardillier, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+resistance:+a+paradigm+for+clinical+resistance.">Multicellular resistance: a paradigm for clinical resistance.</a> Critical Reviews in Oncology Hematology. 36 (2-3), 193-207 (2000).</li><li>Mellor, H. R., Ferguson, D. J. P., Callaghan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+quiescent+tumour+microregions+for+evaluating+multicellular+resistance+to+chemotherapeutic+drugs.">A model of quiescent tumour microregions for evaluating multicellular resistance to chemotherapeutic drugs.</a> British Journal of Cancer. 93 (3), 302-309 (2005).</li><li>Roberge, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-destructive+tumor+aggregate+morphology+and+viability+quantification+at+cellular+resolution,+during+development+and+in+response+to+drug.">Non-destructive tumor aggregate morphology and viability quantification at cellular resolution, during development and in response to drug.</a> Acta Biomaterialia. 117, 322-334 (2020).</li><li>Piccinini, F., Tesei, A., Bevilacqua, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-image+based+methods+used+for+non-invasive+volume+estimation+of+cancer+spheroids+a+practical+assessing+approach+based+on+entry-level+equipment.">Single-image based methods used for non-invasive volume estimation of cancer spheroids a practical assessing approach based on entry-level equipment.</a> Computer Methods and Programs in Biomedicine. 135, 51-60 (2016).</li><li>Imamura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+2D-+and+3D-culture+models+as+drug-testing+platforms+in+breast+cancer.">Comparison of 2D- and 3D-culture models as drug-testing platforms in breast cancer.</a> Oncology Reports. 33 (4), 1837-1843 (2015).</li><li>Song, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+multicellular+tumor+spheroids+towards+optimized+treatment+for+patients+with+hepatocellular+carcinoma.">Patient-derived multicellular tumor spheroids towards optimized treatment for patients with hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Experimental &amp; Clinical Cancer Research. 37 (1), 1-13 (2018).</li><li>LaBarbera, D. V., Reid, B. G., Yoo, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multicellular+tumor+spheroid+model+for+high-throughput+cancer+drug+discovery.">The multicellular tumor spheroid model for high-throughput cancer drug discovery.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 7 (9), 819-830 (2012).</li><li>Hakanson, M., Textor, M., Charnley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+3D+environments+to+elucidate+the+effect+of+environmental+parameters+on+drug+response+in+cancer.">Engineered 3D environments to elucidate the effect of environmental parameters on drug response in cancer.</a> Integrative Biology. 3 (1), 31-38 (2011).</li><li>Pickl, M., Ries, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+3D+and+2D+tumor+models+reveals+enhanced+HER2+activation+in+3D+associated+with+an+increased+response+to+trastuzumab.">Comparison of 3D and 2D tumor models reveals enhanced HER2 activation in 3D associated with an increased response to trastuzumab.</a> Oncogene. 28 (3), 461-468 (2009).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+HHS+public+access.">Optical coherence tomography HHS public access.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li><li>Zhong, H. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+permeability+of+glycerol+with+ultrasound+in+human+normal+and+cancer+breast+tissues+in+vitro+using+optical+coherence+tomography.">Enhancement of permeability of glycerol with ultrasound in human normal and cancer breast tissues in vitro using optical coherence tomography.</a> Laser Physics Letters. 7 (5), 388-395 (2010).</li><li>Fujimoto, J., Swanson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development,+commercialization,+and+impact+of+optical+coherence+tomography.">The development, commercialization, and impact of optical coherence tomography.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (9), (2016).</li><li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+detects+necrotic+regions+and+volumetrically+quantifies+multicellular+tumor+spheroids.">Optical coherence tomography detects necrotic regions and volumetrically quantifies multicellular tumor spheroids.</a> Cancer Research. 77 (21), 6011-6020 (2017).</li><li>Hari, N., Patel, P., Ross, J., Hicks, K., Vanholsbeeck, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+complements+confocal+microscopy+for+investigation+of+multicellular+tumour+spheroids.">Optical coherence tomography complements confocal microscopy for investigation of multicellular tumour spheroids.</a> Scientific Reports. 9 (1), 1-11 (2019).</li><li>El-Sadek, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+dynamics+optical+coherence+tomography+for+tumor+spheroid+evaluation.">Three-dimensional dynamics optical coherence tomography for tumor spheroid evaluation.</a> Biomedical Optics Express. 12 (11), 6844 (2021).</li><li>Kingsley, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-based+3D+bioprinting+for+spatial+and+size+control+of+tumor+spheroids+and+embryoid+bodies.">Laser-based 3D bioprinting for spatial and size control of tumor spheroids and embryoid bodies.</a> Acta Biomateralia. 95, 357-370 (2019).</li><li>Absher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemocytometer+counting.">Hemocytometer counting.</a> Tissue Culture. , 395-397 (1973).</li><li>Roberge, C. L., Rudkouskaya, A., Barroso, M., Corr, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal,+label-free+assessment+of+cell+density+and+viability+in+multicellular+tumor+spheroids+via+optical+coherence+tomography.">Longitudinal, label-free assessment of cell density and viability in multicellular tumor spheroids via optical coherence tomography.</a> Summer Biomechanics, Bioengineering, and Biotransport Conference. , (2020).</li><li>Bellotti, C., Duchi, S., Bevilacqua, A., Lucarelli, E., Piccinini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+morphological+characterization+of+mesenchymal+stromal+cells+3D+spheroids+built+with+a+rapid+method+based+on+entry-level+equipment.">Long term morphological characterization of mesenchymal stromal cells 3D spheroids built with a rapid method based on entry-level equipment.</a> Cytotechnology. 68 (6), 2479-2490 (2016).</li><li>Noto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stearoyl-CoA+desaturase-1+is+a+key+factor+for+lung+cancer-initiating+cells.">Stearoyl-CoA desaturase-1 is a key factor for lung cancer-initiating cells.</a> Cell Death &amp; Disease. 4 (12), 947 (2013).</li><li>Riffle, S., Hegde, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+tumor+cell+adaptations+to+hypoxia+in+multicellular+tumor+spheroids.">Modeling tumor cell adaptations to hypoxia in multicellular tumor spheroids.</a> Journal of Experimental &amp; Clinical Cancer Research. 36, 102 (2017).</li><li>Wilson, W. R., Hay, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+hypoxia+in+cancer+therapy.">Targeting hypoxia in cancer therapy.</a> Nature Reviews Cancer. 11, 393-410 (2011).</li><li>Grimes, D. R., Kelly, C., Bloch, K., Partridge, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+estimating+the+oxygen+consumption+rate+in+multicellular+tumour+spheroids.">A method for estimating the oxygen consumption rate in multicellular tumour spheroids.</a> Journal of the Royal Society Interface. 11 (92), 20131124 (2014).</li><li>Nath, S., Devi, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+systems+in+cancer+research:+Focus+on+tumor+spheroid+model.">Three-dimensional culture systems in cancer research: Focus on tumor spheroid model.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 163, 94-108 (2016).</li><li>Pozzi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meet+me+halfway:+Are+in+vitro+3D+cancer+models+on+the+way+to+replace+in+vivo+models+for+nanomedicine+development.">Meet me halfway: Are in vitro 3D cancer models on the way to replace in vivo models for nanomedicine development.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 175, 113760 (2021).</li><li>. High throughput screening format identifies synthetic mimics of matrigel for tubulogenesis screening Available from: <a target="_blank" href="https://abstracts.biomaterials.org/data/papers/2015/abstracts/547.pdf">https://abstracts.biomaterials.org/data/papers/2015/abstracts/547.pdf</a> (2015)</li><li>Duchnowska, R., Szczylik, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+nervous+system+metastases+in+breast+cancer+patients+administered+trastuzumab.">Central nervous system metastases in breast cancer patients administered trastuzumab.</a> Cancer Treatment Reviews. 31 (4), 312-318 (2005).</li><li>Zazo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation,+characterization,+and+maintenance+of+trastuzumab-resistant+HER2++breast+cancer+cell+lines.">Generation, characterization, and maintenance of trastuzumab-resistant HER2+ breast cancer cell lines.</a> American Journal of Cancer Research. 6 (11), 2661-2678 (2016).</li></ol>

اهميه الكرويات الورم متعدد الخلايا (MCTSs) هي نماذج قوية ثلاثية الأبعاد في المختبر لدراسة تطور الورم وفحص المخدرات1،2،3. يعتمد تطوير فائدة هذه النماذج الإجمالية البسيطة نسبيا بشكل كبير على توصيف سماتها الرئيسية ، مثل التشكل ?...

تحول الباحثون إلى حد كبير إلى ثقافة 3D على مقاعد البدلاء في الأنظمة المختبرية لدراسة بعض السمات الرئيسية لتطور الورم. وقد قاد الكثير من هذا البحث من خلال عودة ظهور الأورام الكروية متعددة الخلايا (MCTSs) والمواد العضوية الأكثر تعقيدا 1,2. على الرغم من أن هذه النماذج هي الأوعية الدموية ، إلا أنها توفر أداة قوية لتلخيص العمليات الفسيولوجية والمرضية التي تحدث في الجسم الحي3،4،5. على وجه الخصوص ، يمكن للنماذج متوسطة الحجم (قطرها 300-500 ميكرومتر) محاكاة ميزات الورم الرئيسية مثل بنية 3D ، والتدرجات الفسيولوجية المرضية ، والإشارات النقيلية بسبب نقص الأكسجة داخل القلب. من الموثق جيدا أن هذه النماذج تعرض الطبقات متحدة المركز المميزة التي شوهدت في أورام الأوعية الدموية في الجسم الحي ، وهي طبقة خارجية من الخلايا التكاثرية ، وطبقة انتقالية من الخلايا الشائخة / الهادئة ، والخلايا التي تعاني من نقص الأكسجة في القلب3،6،7،8،9 . يمكن الحصول على رؤية فريدة من نوعها من هذه النماذج من خلال توصيف سلوك الخلايا داخل هذه الطبقات ، أثناء التطوير والاستجابة للدواء. ومع ذلك ، فإن حجم MCTS المطلوب ، الضروري لتطوير التدرجات التي تجعلها قوية في النماذج المختبرية ، يحد بشكل كبير من الأدوات المستخدمة في التقييم غير المدمر. والواقع أن أحد أكبر التحديات التي تواجه التحليل غير المدمر للمركبات المتوسطة الأجل يتمثل في تحديد التفاصيل على نطاق الخلايا. يتم استخدام المجهر الساطع المجال وتباين الطور بشكل روتيني لتقييم نمو وتطوير 3D MCTSs بشكل غير مدمر. ومع ذلك ، تقتصر هذه الطرائق على إسقاطات ثنائية الأبعاد ، تفتقر إلى القدرة على تصور الهيكل ثلاثي الأبعاد الحاسم لهذه النماذج10،11،12،13. عادة ما يتم جمع المعلومات حول السمية الخلوية وتكاثر الخلايا من خلال التصوير الفلوري (أي المجهر الضوئي ، المجهر البؤري) أو التلطيخ المناعي خارج الجسم الحي 14،15،16. في حين أن هذه الأساليب توفر معلومات قيمة وعالية الدقة عن بنية الأنسجة والكثافة الخلوية والوظيفة الخلوية ، فإنها غالبا ما تتطلب إعداد عينات مثل التطهير البصري أو التثبيت / التلطيخ أو التضمين الذي يمنع التحليلات الطولية.
التصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT) هو طريقة تصوير هيكلي غير مدمرة لديها القدرة على التغلب على بعض التحديات المذكورة أعلاه. إنه يتميز بدقة خلوية ومجال رؤية واسع بما فيه الكفاية (يصل إلى 10 مم × 10 مم) قادر على تصور المجاميع متعددة الخلايا بالكامل17،18،19. الأهم من ذلك ، نظرا للطبيعة المرئية للضوء المستخدم ، فإن هذه التقنية غير مدمرة تماما وخالية من الملصقات17. أيضا ، يمكن تصوير العينات في الموقع دون الحاجة إلى إعداد العينات ، بحيث يمكن أخذ العينات مباشرة من الحاضنة ، ومسحها ضوئيا بسرعة باستخدام OCT (مدة المسح ~ 5-10 دقائق) ، ثم إعادتها إلى الحاضنة ، مما يتيح التوصيف الطولي. ظهرت مؤخرا العديد من الدراسات التي تسعى إلى استخدام OCT لتحليل السلوك الكروي للورم. في واحدة من أكثر العروض إثارة ، استخدم هوانغ وآخرون OCT للكشف عن النوى الميتة بشكل غير مدمر داخل النماذج الكروية الكبيرة للورم ، مع ملاحظة أن مناطق الخلايا الحية والميتة تمتلك اختلافات ملحوظة في التوهين البصري ، والتي يمكن استخدامها لمراقبة الجدوى الخالية من الملصقات20. وبالمثل ، أجرى هاري وآخرون قياسات معامل الانكسار (RI) لسرطان القولون البشري (HCT116) الكروية التي تم تصويرها باستخدام OCT لدراسة وجود نقص الأكسجة داخل العينات21. لم تكن قياساتهم كافية للاستدلالات المباشرة ، على الرغم من أنهم لاحظوا انخفاض المثيل المحجوز في المواقع التي ترتبط بالموقع ، وإن لم يكن الحجم ، للنوى الميتة ، والتي تم تحديدها لاحقا عن طريق المجهر البؤري. استخدم عبد الصادق وآخرون OCT لتصور وقياس جدوى الأنسجة الإقليمية لنماذج أورام سرطان الثدي22. أبلغوا عن طريقتين قائمتين على OCT لتصور ديناميكيات الأنسجة وأظهروا علاقة معتدلة بين الاختلافات في هذه المقاييس والمناطق المحددة بالفحص المجهري للخلايا الحية / الميتة.
عملنا المنشور باستخدام OCT مبني على هذه الأدبيات السابقة لإنشاء نهج كمي وغير مدمر لقياس مورفولوجيا 3D وعدد الخلايا داخل نماذج سرطان الثدي MCTSs أثناء التطوير10,23. باستخدام برنامج تحليل الصور Imaris 3D لحساب عدد الكائنات بحجم الخلية (أي البقع) التي تم تصويرها ضمن عمليات مسح حجم OCT ، تم قياس عدد الخلايا بشكل غير مدمر في MCTSs التي كانت مشابهة إحصائيا لتلك التي تم تحديدها عبر مقياس الدم عند الانفصال الكلي. ومع ذلك ، نظرا للطبيعة الهيكلية ل OCT ، فإن أغشية الخلايا التي لا تزال موجودة بعد موت الخلايا عن طريق النخر قد تحسب خطأ على أنها خلايا حية. وعلاوة على ذلك، تم توسيع نطاق هذا التوصيف ليشمل بقاء الخلايا غير المدمرة داخل المجاميع الفردية الخاضعة لنظام دوائي مع نجاح واعد10. الأهم من ذلك ، لوحظ أنه تم الإبلاغ عن صلاحية خلية مماثلة من نهجنا OCT-Imaris مع ما تم قياسه داخل هذه العينات عند الانفصال. يتيح نهج الخلايا غير المدمر والخالي من الملصقات حساب الخلايا داخل هياكل 3D والمجاميع الكثيفة طوليا دون التضحية ببنية البناء / الركام.
يشير هذا العمل إلى نهج محسن لتحديد كثافة الخلايا الإقليمية مباشرة داخل المجاميع الكثيفة من خلال الاستفادة من قدرة OCT-Imaris على قياس كل من مورفولوجيا المجموع 3D وعدد الخلايا. يوفر هذا التقدم المنهجي صورة أكثر تفصيلا للتوزيع المكاني للخلايا وانتشارها داخل الطبقات متحدة المركز المميزة لنماذج MCTSs. بدلا من مجرد حساب المتوسط الكلي لكثافة الخلايا الكلية ، يمكن أن تكشف قياسات الكثافة المحلية هذه عن تدرجات كثافة الخلية ، مثل تلك المرتبطة بالضغط. ويطبق هذا التقييم الإقليمي أيضا على المجاميع المعالجة بالعلاج الكيميائي لتقييم الاستجابة الإقليمية للأدوية، كما تقاس بالتغيرات في كثافة الخلايا المحلية. يوفر هذا المزيج من OCT وطرق تحليل التصوير المتقدمة تقديرا كميا لصلاحية الخلايا الإقليمية ، والتي يمكن استخدامها لاستكشاف تغلغل الدواء بناء على المناطق التي تشهد انخفاضا في كثافة الخلايا. هذا هو التقرير الأول الذي يحدد بشكل غير مدمر كثافة الخلايا الإقليمية وقابليتها للحياة استجابة للدواء داخل الأنسجة الخلوية الكثيفة وقياسه طوليا. مثل هذا التوصيف لكثافة الخلايا ثلاثية الأبعاد والتوزيع المكاني في جميع أنحاء MCTSs بأكملها قد يساعد في تحسين توصيل الأدوية في علاج السرطان وتحسين فهم تطور نموذج السرطان.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96 well plates</td>
			<td>Greiner Bio-One&#160;</td>
			<td>650970</td>
			<td>CellStar Cell-Repellent Surface, https://shop.gbo.com/en/usa/products/bioscience/cell-culture-products/cellstar-cell-repellent-surface/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% trypsin, 2.21 mM EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-053-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AU565 breast cancer cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI software</td>
			<td>open-source</td>
			<td>(Fiji Is Just) ImageJ v2.1/1.5.3j</td>
			<td>Downloaded from https://imagej.net/software/fiji/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>0267151B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris image analysis software</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td>Current version 9.8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-605E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231 breast cancer cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Z1 AxioVision</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin streptomycin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-0002CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI medium 1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875-085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectral Domain Optical Coherence Tomography</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>TEL220C1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 cell culture flasks</td>
			<td>Greiner Bio-One&#160;</td>
			<td>658175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trastuzumab</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Remnant clinical samples of Trastuzumab were used in this study, generously gifted by the Albany Medical College Pharmacy.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-destructive evaluation of regional cell density within tumor aggregates following drug treatment

أظهرت نماذج الورم الكروي متعدد الخلايا (MCTSs) فائدة متزايدة للدراسة في المختبر لتطور السرطان واكتشاف الأدوية. هذه التركيبات اللاوعائية البسيطة نسبيا تحاكي الجوانب الرئيسية للأورام في الجسم الحي ، مثل بنية 3D والتدرجات الفسيولوجية المرضية. يمكن أن توفر نماذج MCTSs رؤى ثاقبة حول سلوك الخلايا السرطانية أثناء التطور الكروي واستجابة للعقاقير. ومع ذلك ، فإن حجمها المطلوب يحد بشكل كبير من الأدوات المستخدمة في التقييم غير المدمر. يتم استكشاف التصوير الهيكلي للتصوير المقطعي بالتماسك البصري وبرنامج تحليل Imaris 3D لقياس سريع وغير مدمر وخالي من الملصقات لكثافة الخلايا الإقليمية داخل MCTSs. يستخدم هذا النهج لتقييم MCTSs على مدى فترة نضج مدتها 4 أيام وطوال فترة علاج ممتدة لمدة 5 أيام باستخدام Trastuzumab ، وهو دواء مضاد ل HER2 ذي صلة سريريا. باختصار ، تم إنشاء AU565 HER2 + سرطان الثدي MCTSs عن طريق تراكب السائل مع أو بدون إضافة Matrigel (مصفوفة غشاء قبوي) لاستكشاف مجاميع من مورفولوجيات مختلفة (أكثر سمكا ، مثل القرص 2.5D المجاميع أو المجاميع 2D مسطحة ، على التوالي). تميزت كثافة الخلايا داخل المنطقة الخارجية والمنطقة الانتقالية والنواة الداخلية في MCTSs الناضجة ، مما كشف عن تدرج كثافة الخلايا مع كثافات خلوية أعلى في المناطق الأساسية مقارنة بالطبقات الخارجية. أعادت إضافة المصفوفة توزيع كثافة الخلايا وعززت هذا التدرج ، مما قلل من كثافة المنطقة الخارجية وزاد من ضغط الخلايا في النوى. تم قياس كثافة الخلايا كميا بعد العلاج من تعاطي المخدرات (0 ساعة ، 24 ساعة ، 5 أيام) داخل مناطق أعمق تدريجيا 100 ميكرومتر لتقييم الاختلافات الإقليمية المحتملة في الاستجابة للعقاقير. وبحلول النقطة الزمنية الأخيرة، بدا أن جميع وفيات الخلايا تقريبا مقيدة ب 200 ميكرومتر من كل مجموعة، في حين بدت الخلايا الأعمق في المجموع غير متأثرة إلى حد كبير، مما يوضح الاختلافات الإقليمية في الاستجابة للدواء، ربما بسبب القيود المفروضة على تغلغل المخدرات. يوفر البروتوكول الحالي تقنية فريدة من نوعها لتحديد كثافة الخلايا الإقليمية داخل الأنسجة الخلوية الكثيفة بشكل غير مدمر وقياسها طوليا.

في منشور سابق ، تم إنشاء طريقة للقياس غير المدمر لكثافة الخلايا العالمية داخل المجاميع الخلوية باستخدامOCT 10. هنا ، يتم توسيع هذه التقنية لتقييم كثافة الخلايا الإقليمية لمجاميع الخلايا النامية. يوضح الشكل 1 مخططا لهذا الامتداد، حيث يمكن تقييم كثافة الخلايا في ?...

Watch this Scientific Journal Video about Non-Destructive Evaluation of Regional Cell Density Within Tumor Aggregates Following Drug Treatment at JoVE.com

Non-Destructive Evaluation of Regional Cell Density Within Tumor Aggregates Following Drug Treatment

يطور البروتوكول الحالي تقنية قائمة على الصور لقياس كثافة الخلايا الإقليمية السريعة وغير المدمرة والخالية من الملصقات وقابلية البقاء داخل مجاميع الأورام 3D. كشفت النتائج عن تدرج كثافة الخلايا، مع كثافات خلايا أعلى في المناطق الأساسية من الطبقات الخارجية في المجاميع النامية وموت الخلايا الطرفية في الغالب في مجاميع HER2+ المعالجة باستخدام Trastuzumab.

تقييم غير مدمر لكثافة الخلايا الإقليمية داخل مجاميع الورم بعد العلاج بالعقاقير

Multicellular tumor spheroid (MCTSs) models have demonstrated increasing utility for in vitro study of cancer progression and drug discovery. These ...

يوفر هذا البروتوكول معلومات عن تطور نموذج الورم بطريقة غير مدمرة. كما أنه يعطي مؤشرات على الاستجابة العلاجية من خلال أنظمة الأدوية بأكملها داخل مجاميع فردية بدلا من الاعتماد على عينات مطابقة العمر. تتطلب الطرق التقليدية للحصول على كثافة الخلايا وقابليتها للحياة داخل المجاميع تثبيت العينات وتقسيمها ، بينما توفر طريقتنا بيانات غير مدمرة.لذلك ، يمكن تتبع التغييرات داخل مجموع واحد بمرور الوقت. ومن المتوقع أن تحسن هذه التقنية فهمنا للاستجابة للأدوية داخل المناطق السرية للنماذج المجمعة، مع ما يترتب على ذلك من آثار على مدى انعكاس هذه النماذج في استجابات الجسم الحي وتطبيقات فحص الأدوية. للبدء ، قم بإعداد 70 إلى 90٪ من مزارع خلايا الالتقاء من خطوط الخلايا المطلوبة في الظروف القياسية.تفصل الطبقات الأحادية للخلايا عن قوارير ثقافتها باتباع طريقة التربسين القياسية وتضيف تعليق الخلية إلى أنبوب جهاز طرد مركزي. أضف 10 ميكرولترات من تعليق الخلية إلى مقياس الدم وقم بالعد عبر الفحص المجهري لتحديد عدد الخلايا في التعليق. خلايا الكريات عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق الخلايا في الوسائط بالتركيز المطلوب من 2.5 في 10 إلى الخلايا الخامسة لكل ملليلتر.بالنسبة للمعلقات المعدة باستخدام مصفوفة الغشاء السفلي ، قم بإزالة قارورة المصفوفة من التخزين بدرجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر ووضعها في الثلاجة لتذوب بين عشية وضحاها. قم بإعداد حاوية مع وسائط النمو وضعها في الثلاجة لمدة 10 دقائق حتى تبرد. باستخدام طرف ماصة مجمد ، أضف المصفوفة إلى الوسائط المبردة بحيث يكون التركيز النهائي لهذا المحلول هو 5٪ أضف 50 ميكرولتر من هذا الوسط إلى كل بئر من صفيحة 96 ذات القاع المستدير غير الملتصق بحيث يكون التركيز النهائي للمصفوفة في هذه الآبار 2.5٪ بعد إضافة تعليق الخلية.بالنسبة للمعلقات المعدة بدون مصفوفة ، أضف 50 ميكرولتر من وسائط النمو العادية إلى كل بئر. قم بتوزيع 50 ميكرولتر من تعليق الخلايا في كل بئر. قم بالطرد المركزي للألواح عند 123 جم لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مباشرة بعد البذر لضمان جمع حبيبات الخلايا في قاع كل بئر.استخدام نظام OCT للتصوير الهيكلي. اضبط معدل المسح الضوئي A على 5.5 كيلوهرتز لجمع الصور عالية الدقة. اضبط مؤشر الانكسار على 1.33 للعينات في وسط سائل.في نافذة معلمات الصورة على الجانب الأيسر من الشاشة، قم بتعيين مجال الرؤية عن طريق إدخال قيم X و Y و Z بحيث يتم تضمين العينة داخل منطقة الاهتمام هذه. انقر فوق وضع الاستحواذ ثلاثي الأبعاد ثم انقر فوق سجل لجمع مسح حجم 3D للعينة. لإنشاء إعادة بناء وحدة التخزين ، افتح Imaris وانتقل إلى ملف TIF المحول داخل الساحة الخاصة بهم.انتقل إلى التحرير، ثم انقر على خصائص الصورة وأدخل حجم voxel من صورة OCT في مربعات XYZ المقابلة. بعد ذلك ، انقر فوق موافق. انقر فوق إضافة أسطح جديدة فوق شجرة الكائنات. في القائمة أسفل الشجرة ، انقر فوق تخطي الإنشاء التلقائي وقم بالتحرير يدويا.داخل نافذة ضبط الشاشة، حرك السهمين الأحمر والأسود يدويا لتحسين التباين بين العينة والخلفية وتحسين تصور العينة. اضبط موضع الشريحة على الشريحة الموجودة على حافة واحدة من العينة. استخدم مفتاح الهروب لتغيير الماوس من وضع التنقل إلى وضع التحديد ثم انقر فوق رسم.تتبع المخطط التفصيلي للمنطقة التي تعرض الإشارة يدويا. تقدم موضع الشريحة عن طريق إدخال الموضع التالي في مربع الإدخال. يجب أن يكون هذا الموضع التالي أقل من أو يساوي 100 شريحة في العينة أكثر من الموضع السابق.تتبع المنطقة التي تعرض الإشارة يدويا. كرر هذه الخطوة عبر سمك العينة حتى يتم الوصول إلى الحافة المقابلة للعينة. ثم انقر فوق إنشاء Surface والقائمة اليسرى لخياطة هذه الشرائح معا.أخيرا ، انقر فوق تحرير ، ثم انقر فوق تحديد قناع ، ثم انقر فوق موافق لإكمال إعادة بناء وحدة التخزين. للحصول على الكثافة الكلية لخلايا العينة، حدد إضافة بقع جديدة. في قائمة إعدادات الخوارزمية، قم بإلغاء تحديد جميع المربعات.انقر على السهم الأزرق للانتقال إلى شاشة القناة المصدر. من القائمة المنسدلة التي تظهر، حدد القناة المقنعة. أدخل متوسط قطر الخلية للعينة في مربع قطر XY.تأكد من التحقق من طرح الخلفية. انقر على السهم الأزرق للانتقال إلى شاشة تصنيف البقعة. في الرسم البياني في أسفل القائمة، انقر واسحب الحافة اليسرى للعتبة الصفراء إلى الحافة اليسرى للرسم البياني بحيث يتم تضمين جميع الكائنات في العتبة الصفراء المظللة.ثم انقر على السهم الأخضر لإكمال إنشاء البقعة. احصل على عدد الكائنات المحددة بالنقر فوق الإحصاءات. ثم انقر فوق إجمالي وأخيرا انقر فوق إجمالي عدد النقاط.انقر فوق السطح الذي تم إنشاؤه وانتقل إلى علامة التبويب جودة نمط الأسطح. قم بتغيير التحديد إلى نقطة الوسط وقم بتغيير عرض البكسل إلى أقل من 20 للحصول على أفضل رؤية. انتقل إلى الإحصاءات.ثم انقر على مفصل، متبوعا بالموضع وسجل الموقع في المركز الأوسط. حدد إضافة إطار مرجعي جديد من القائمة الموجودة أعلى شجرة الكائن. حدد المربعات المرئية والثابتة بجوار X و Y في القائمة.انقر واسحب مركز أيقونة الإطار المرجعي بحيث يكون متماشيا مع البقعة المركزية. قم بإلغاء تحديد مربعات XY المرئية وإصلاحها وحددها ل XZ. مرة أخرى ، انقر واسحب مركز رمز الإطار المرجعي بحيث يتماشى مع البقعة المركزية. أخيرا ، كرر هذا لمستوى YZ ، بالتناوب بين هذه المستويات الثلاثة الثابتة حتى يتوافق الإطار المرجعي تماما مع البقعة المركزية.انقر نقرا مزدوجا فوق الإطار المرجعي في شجرة الكائن وأعد تسميته في الوسط أو ما شابه ذلك. انقر على المواقع التي تم إنشاؤها وانتقل إلى الإحصاءات. ثم انقر فوق مفصل، متبوعا بالإطار المرجعي للموضع.انقر على الإطار المرجعي للموضع X حتى يتم فرزه من أعلى إلى أدنى قيمة. سجل أعلى قيمة للحصول على نصف قطر المجاميع. قم بإجراء حسابات يدوية لتحديد مواقع إضافية ذات أهمية.للقيام بذلك، أضف 100 ميكرومتر إلى قيمة مركز X ثم استخدم قيم Y و Z لنقطة المركز لتحديد الموقع الأول على طول محور المركز. حدد إضافة نقاط جديدة. ثم حدد تخطي تحرير الإنشاء التلقائي يدويا.اضغط مع الاستمرار على زر shift على لوحة المفاتيح وانقر في أي مكان على الشاشة لوضع مكان جديد. أدخل قيم موضع XYZ للموقع الأول للاهتمام. ثم حدد إضافة إطار مرجعي جديد وقم بمحاذاته فوق البقعة.أضف 100 ميكرومتر إلى كل موقع X متسلسل. ضع الإطار المرجعي الأخير على بعد أقل من 50 ميكرومتر من نصف القطر الخارجي للعينة. انقر على المواقع التي تم إنشاؤها وانتقل إلى الإحصاءات.في الزاوية السفلية اليسرى من القائمة ، انقر فوق تصدير جميع الإحصاءات إلى ملف واحفظ البيانات في جدول بيانات. افتح جدول البيانات. انتقل إلى علامة تبويب إطار مرجع المسافة من الأصل.استخدم الدالة mod لتعيين كل مسافة رقميا إلى إطارها المرجعي المقابل. قم بتصفية القيم في هذا العمود للعمل مع المسافات في كل إطار مرجعي. لكل إطار من الإطارات المرجعية، احسب عدد الكائنات داخل 50 ميكرومتر من الإطار باستخدام الدالة COUNTIF.تتوافق القيمة الناتجة مع عدد الخلايا في هذا القابس الإقليمي. اقسم هذه القيمة على حجم قابس 100 ميكرومتر للحصول على كثافة الخلية. كشف اختبار T للطالب عن كثافة خلايا أعلى بكثير في القلب الكروي مقارنة بالطبقات الانتقالية والخارجية لنماذج MDA-MB-231 الكروية.تشير النتيجة إلى الضغط في هذا القلب الكروي بعد أربعة أيام. ضمن كل من نماذج AU565 و MDA-MB-231 المجمعة ، لا يبدو أن إضافة المصفوفة تؤثر على الحجم أو عدد الخلايا ، وبالتالي يبدو أن لها تأثيرا ضئيلا على انتشار الخلايا. بدلا من ذلك ، يبدو أن إضافة المصفوفة تعيد توزيع كثافة الخلايا مما يعزز الضغط الأساسي الكبير ويقلل من كثافة الخلايا في الطبقات الخارجية.توفر هذه النتائج نظرة ثاقبة قيمة على الآليات الفيزيائية التي تمكن المصفوفة من خلالها من تجميع الخلايا في خطوط خلايا سرطان الثدي المختلفة. بالنظر بعد ذلك إلى أورام AU565 كروية محضرة باستخدام مصفوفة ، تمت معالجة الركام الناضج باستخدام تراستوزوماب وتم تقييم كثافة الخلايا الإقليمية من خلال نظام دوائي لمدة خمسة أيام. تم تعيين المقابس كل 100 ميكرومتر في جميع أنحاء سمك الركام.لوحظت تقلبات طفيفة في كثافة الخلايا بمرور الوقت داخل 500 ميكرومتر داخلي من كل مجموع مما يشير إلى الحد الأدنى من موت الخلايا. إن تصور موت الخلايا كاستجابة دوائية إرشادية في الغالب في الطبقات الخارجية من كرويات الورم يتسق مع قضايا اختراق المخدرات في تراستوزوماب. يمكننا الآن قياس صلاحية الخلايا بشكل غير مدمر في المجاميع دون التضحية بالهيكل.وهذا يتيح تقييم الاستجابة الطولية للأدوية في مجاميع الورم الفردية لتحديد الصفات الزمنية والاختراق للأدوية المرشحة المضادة للسرطان.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Sample Extraction and Simultaneous Chromatographic Quantitation of Doxorubicin and Mitomycin C Following Drug Combination Delivery in Nanoparticles to Tumor-bearing Mice

استخراج عينة والمتزامن كوانتيتيشن الكروماتوغرافي ميتوتريكسات وج ميتوميسين عقب تسليم تركيبة المخدرات في جسيمات نانوية للفئران الحاملة للورم

Combination chemotherapy is frequently used in the clinic for cancer treatment; however, associated adverse effects to normal tissue may limit its ...

Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

جيل الماغنيسيوم الفائق الورم ثلاثية الأبعاد لفحص المخدرات

Cancer cells have routinely been cultured in two dimensions (2D) on a plastic surface. This technique, however, lacks the true environment a tumor mass is ...

Evaluation of the Feasibility, Safety, and Accuracy of an Intraoperative High-intensity Focused Ultrasound Device for Treating Liver Metastases

وركز التقييم لجدوى والسلامة، ودقة عالية الكثافة الموضعية جهاز الموجات فوق الصوتية لعلاج الانبثاث الكبد

Today, the only potentially curative option in patients with colorectal liver metastases is surgery. However, liver resection is feasible in less than 20% ...

Neutrophil Extracellular Traps Generated by Low Density Neutrophils Obtained from Peritoneal Lavage Fluid Mediate Tumor Cell Growth and Attachment

الحصول على العَدلات الفخاخ خارج الخلية التي تم إنشاؤها بواسطة العَدلات منخفض الكثافة من الغسل البريتوني السوائل التوسط نمو الخلايا السرطانية والمرفقات

Activated neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which can capture and destroy microbes. Recent studies suggest that NETs are involved ...

Paramyxoviruses for Tumor-targeted Immunomodulation: Design and Evaluation Ex Vivo

باراميكسوفيروسيس لاستهداف الورم المرباة: التصميم والتقييم السابقين فيفو

Successful cancer immunotherapy has the potential to achieve long-term tumor control. Despite recent clinical successes, there remains an urgent need for ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

إينتراموكوسال تلقيح خلايا الخلايا الحرشفية في الفئران للورم التنميط المناعي وتقييم استجابة العلاج

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vitro Tumor Cell Rechallenge For Predictive Evaluation of Chimeric Antigen Receptor T Cell Antitumor Function

في ريتشالينجي خلية الورم المختبر للتقييم التنبؤي من مستضد تشيميريك مستقبلات خلية تي انتيتومور الدالة

The field of chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy is rapidly advancing with improvements in CAR design, gene-engineering approaches and ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

فحص المخدرات للمريض الأولي المشتقة الورم Xenografts في حمار وحشي

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

التحليل المرضي لنقائل الرئة بعد الحقن الجانبي الوريد الذيل من الخلايا السرطانية

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

العزل والتقييم الوظيفي للخلايا الجذعية لسرطان الثدي البشري من عينات الخلايا والأنسجة

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...