Name: non-destructive evaluation of regional cell density within tumor aggregates following drug treatment
Uploaded: 2022-06-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Destructive Evaluation of Regional Cell Density Within Tumor Aggregates Following Drug Treatment at JoVE.com

מחקר זה נתמך על ידי NIH R01 BRG CA207725 (MB/DTC) ו-NIH R01 CA233188 (MB). ברצוננו להודות לבית המרקחת AMC על הטרסטוזומאב שסופק לניסויים אלה.

AU565 (HER2+) ו-MDA-MB-231 קווי תאי סרטן השד שימשו למחקר הנוכחי (ראו טבלת חומרים).
1. הכנת אגרגטים לגידולים
<ol><li>הכן AU565 (HER2+) מדיה לצמיחת תאי סרטן השד באמצעות מכון הזיכרון רוזוול פארק (RPMI) 1640 מדיום בסיסי (+) ב- L-גלוטמין בתוספת 10% (v/v) סרום בקר עוברי ו-1% פניצילין/סטרפטומיצין (...

<ol>
	<li>Sutherland, R., JA, M., Inch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+multicell+spheroids+in+tissue+culture+as+a+model+of+nodular+carcinomas.">Growth of multicell spheroids in tissue culture as a model of nodular carcinomas.</a> Journal of the National Cancer Institute. 46 (1), 113-120 (1971).</li><li>Sachs, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+living+biobank+of+breast+cancer+organoids+captures+disease+heterogeneity.">A living biobank of breast cancer organoids captures disease heterogeneity.</a> Cell. 172 (1-2), 373-386 (2018).</li><li>Nagelkerke, A., Bussink, J., Sweep, F. C. G. J., Span, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+multicellular+tumor+spheroids+of+breast+cancer+cells:+How+to+go+three-dimensional.">Generation of multicellular tumor spheroids of breast cancer cells: How to go three-dimensional.</a> Analytical Biochemistry. 437 (1), 17-19 (2013).</li><li>Kunz-Schughart, L. A., Freyer, J. P., Hofstaedter, F., Ebner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+3-D+cultures+for+high-throughput+screening:+The+multicellular+spheroid+model.">The use of 3-D cultures for high-throughput screening: The multicellular spheroid model.</a> Journal of Biomolecular Screening. 9 (4), 273-285 (2004).</li><li>Hirschhaeuser, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+tumor+spheroids:+An+underestimated+tool+is+catching+up+again.">Multicellular tumor spheroids: An underestimated tool is catching up again.</a> Journal of Biotechnology. 148 (1), 3-15 (2010).</li><li>Jiang, Y., Pjesivac-Grbovic, J., Cantrell, C., Freyer, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multiscale+model+for+avascular+tumor+growth.">A multiscale model for avascular tumor growth.</a> Biophysical Journal. 89 (6), 3884-3894 (2005).</li><li>Freyei, J. P., Sutherland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+growth+saturation+and+development+of+necrosisin+EMT6/R0+multicellular+spheroids+by+the+glucose+and+oxygen+supply.">Regulation of growth saturation and development of necrosisin EMT6/R0 multicellular spheroids by the glucose and oxygen supply.</a> Cancer Research. 46 (7), 3504-3512 (1986).</li><li>Desoize, B., Jardillier, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+resistance:+a+paradigm+for+clinical+resistance.">Multicellular resistance: a paradigm for clinical resistance.</a> Critical Reviews in Oncology Hematology. 36 (2-3), 193-207 (2000).</li><li>Mellor, H. R., Ferguson, D. J. P., Callaghan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+quiescent+tumour+microregions+for+evaluating+multicellular+resistance+to+chemotherapeutic+drugs.">A model of quiescent tumour microregions for evaluating multicellular resistance to chemotherapeutic drugs.</a> British Journal of Cancer. 93 (3), 302-309 (2005).</li><li>Roberge, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-destructive+tumor+aggregate+morphology+and+viability+quantification+at+cellular+resolution,+during+development+and+in+response+to+drug.">Non-destructive tumor aggregate morphology and viability quantification at cellular resolution, during development and in response to drug.</a> Acta Biomaterialia. 117, 322-334 (2020).</li><li>Piccinini, F., Tesei, A., Bevilacqua, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-image+based+methods+used+for+non-invasive+volume+estimation+of+cancer+spheroids+a+practical+assessing+approach+based+on+entry-level+equipment.">Single-image based methods used for non-invasive volume estimation of cancer spheroids a practical assessing approach based on entry-level equipment.</a> Computer Methods and Programs in Biomedicine. 135, 51-60 (2016).</li><li>Imamura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+2D-+and+3D-culture+models+as+drug-testing+platforms+in+breast+cancer.">Comparison of 2D- and 3D-culture models as drug-testing platforms in breast cancer.</a> Oncology Reports. 33 (4), 1837-1843 (2015).</li><li>Song, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+multicellular+tumor+spheroids+towards+optimized+treatment+for+patients+with+hepatocellular+carcinoma.">Patient-derived multicellular tumor spheroids towards optimized treatment for patients with hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Experimental &amp; Clinical Cancer Research. 37 (1), 1-13 (2018).</li><li>LaBarbera, D. V., Reid, B. G., Yoo, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multicellular+tumor+spheroid+model+for+high-throughput+cancer+drug+discovery.">The multicellular tumor spheroid model for high-throughput cancer drug discovery.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 7 (9), 819-830 (2012).</li><li>Hakanson, M., Textor, M., Charnley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+3D+environments+to+elucidate+the+effect+of+environmental+parameters+on+drug+response+in+cancer.">Engineered 3D environments to elucidate the effect of environmental parameters on drug response in cancer.</a> Integrative Biology. 3 (1), 31-38 (2011).</li><li>Pickl, M., Ries, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+3D+and+2D+tumor+models+reveals+enhanced+HER2+activation+in+3D+associated+with+an+increased+response+to+trastuzumab.">Comparison of 3D and 2D tumor models reveals enhanced HER2 activation in 3D associated with an increased response to trastuzumab.</a> Oncogene. 28 (3), 461-468 (2009).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+HHS+public+access.">Optical coherence tomography HHS public access.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li><li>Zhong, H. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+permeability+of+glycerol+with+ultrasound+in+human+normal+and+cancer+breast+tissues+in+vitro+using+optical+coherence+tomography.">Enhancement of permeability of glycerol with ultrasound in human normal and cancer breast tissues in vitro using optical coherence tomography.</a> Laser Physics Letters. 7 (5), 388-395 (2010).</li><li>Fujimoto, J., Swanson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development,+commercialization,+and+impact+of+optical+coherence+tomography.">The development, commercialization, and impact of optical coherence tomography.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (9), (2016).</li><li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+detects+necrotic+regions+and+volumetrically+quantifies+multicellular+tumor+spheroids.">Optical coherence tomography detects necrotic regions and volumetrically quantifies multicellular tumor spheroids.</a> Cancer Research. 77 (21), 6011-6020 (2017).</li><li>Hari, N., Patel, P., Ross, J., Hicks, K., Vanholsbeeck, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+complements+confocal+microscopy+for+investigation+of+multicellular+tumour+spheroids.">Optical coherence tomography complements confocal microscopy for investigation of multicellular tumour spheroids.</a> Scientific Reports. 9 (1), 1-11 (2019).</li><li>El-Sadek, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+dynamics+optical+coherence+tomography+for+tumor+spheroid+evaluation.">Three-dimensional dynamics optical coherence tomography for tumor spheroid evaluation.</a> Biomedical Optics Express. 12 (11), 6844 (2021).</li><li>Kingsley, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-based+3D+bioprinting+for+spatial+and+size+control+of+tumor+spheroids+and+embryoid+bodies.">Laser-based 3D bioprinting for spatial and size control of tumor spheroids and embryoid bodies.</a> Acta Biomateralia. 95, 357-370 (2019).</li><li>Absher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemocytometer+counting.">Hemocytometer counting.</a> Tissue Culture. , 395-397 (1973).</li><li>Roberge, C. L., Rudkouskaya, A., Barroso, M., Corr, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal,+label-free+assessment+of+cell+density+and+viability+in+multicellular+tumor+spheroids+via+optical+coherence+tomography.">Longitudinal, label-free assessment of cell density and viability in multicellular tumor spheroids via optical coherence tomography.</a> Summer Biomechanics, Bioengineering, and Biotransport Conference. , (2020).</li><li>Bellotti, C., Duchi, S., Bevilacqua, A., Lucarelli, E., Piccinini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+morphological+characterization+of+mesenchymal+stromal+cells+3D+spheroids+built+with+a+rapid+method+based+on+entry-level+equipment.">Long term morphological characterization of mesenchymal stromal cells 3D spheroids built with a rapid method based on entry-level equipment.</a> Cytotechnology. 68 (6), 2479-2490 (2016).</li><li>Noto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stearoyl-CoA+desaturase-1+is+a+key+factor+for+lung+cancer-initiating+cells.">Stearoyl-CoA desaturase-1 is a key factor for lung cancer-initiating cells.</a> Cell Death &amp; Disease. 4 (12), 947 (2013).</li><li>Riffle, S., Hegde, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+tumor+cell+adaptations+to+hypoxia+in+multicellular+tumor+spheroids.">Modeling tumor cell adaptations to hypoxia in multicellular tumor spheroids.</a> Journal of Experimental &amp; Clinical Cancer Research. 36, 102 (2017).</li><li>Wilson, W. R., Hay, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+hypoxia+in+cancer+therapy.">Targeting hypoxia in cancer therapy.</a> Nature Reviews Cancer. 11, 393-410 (2011).</li><li>Grimes, D. R., Kelly, C., Bloch, K., Partridge, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+estimating+the+oxygen+consumption+rate+in+multicellular+tumour+spheroids.">A method for estimating the oxygen consumption rate in multicellular tumour spheroids.</a> Journal of the Royal Society Interface. 11 (92), 20131124 (2014).</li><li>Nath, S., Devi, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+systems+in+cancer+research:+Focus+on+tumor+spheroid+model.">Three-dimensional culture systems in cancer research: Focus on tumor spheroid model.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 163, 94-108 (2016).</li><li>Pozzi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meet+me+halfway:+Are+in+vitro+3D+cancer+models+on+the+way+to+replace+in+vivo+models+for+nanomedicine+development.">Meet me halfway: Are in vitro 3D cancer models on the way to replace in vivo models for nanomedicine development.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 175, 113760 (2021).</li><li>. High throughput screening format identifies synthetic mimics of matrigel for tubulogenesis screening Available from: <a target="_blank" href="https://abstracts.biomaterials.org/data/papers/2015/abstracts/547.pdf">https://abstracts.biomaterials.org/data/papers/2015/abstracts/547.pdf</a> (2015)</li><li>Duchnowska, R., Szczylik, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+nervous+system+metastases+in+breast+cancer+patients+administered+trastuzumab.">Central nervous system metastases in breast cancer patients administered trastuzumab.</a> Cancer Treatment Reviews. 31 (4), 312-318 (2005).</li><li>Zazo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation,+characterization,+and+maintenance+of+trastuzumab-resistant+HER2++breast+cancer+cell+lines.">Generation, characterization, and maintenance of trastuzumab-resistant HER2+ breast cancer cell lines.</a> American Journal of Cancer Research. 6 (11), 2661-2678 (2016).</li></ol>

משמעות כדוריות גידול רב-תאיות (MCTSs) הן מודלים תלת-ממדיים חזקים במבחנה לחקר התקדמות הגידול ובדיקת תרופות 1,2,3. קידום התועלת של מודלים מצטברים פשוטים יחסית אלה מסתמך במידה רבה על אפיון התכונות העיקריות שלהם, כגון מורפולוגיה ו?...

חוקרים פנו במידה רבה למערכות במבחנה של תרבית תלת-ממדית כדי לחקור כמה מתכונות המפתח של התקדמות הגידול. חלק גדול ממחקר זה הובל על ידי הופעתם מחדש של כדוריות גידול רב-תאיות (MCTSs) ואורגנואידים מורכבים יותר 1,2. למרות שמודלים אלה הם avascular, הם מספקים כלי רב עוצמה לסיכום תהליכים פיזיולוגיים ופתולוגיים המתרחשים in vivo 3,4,5. בפרט, מודלים בינוניים (קוטר 300-500 מיקרומטר) יכולים לחקות תכונות גידול מרכזיות כגון מבנה תלת-ממדי, גרדיאנטים פתופיזיולוגיים ואיתות גרורתי עקב היפוקסיה בתוך הליבה. מתועד היטב כי מודלים אלה מציגים את השכבות הקונצנטריות האופייניות שנראו בגידולי in vivo וסקולריים, כלומר שכבה חיצונית של תאים מתרבים, שכבת מעבר של תאים סנסנטיים/קוויזנטיים, ותאים החווים היפוקסיה בליבת 3,6,7,8,9 . ניתן להפיק תובנות ייחודיות ממודלים אלה על ידי אפיון התנהגות התאים בתוך שכבות אלה, במהלך ההתפתחות ובתגובה לתרופה. עם זאת, גודל ה- MCTS הנדרש, הדרוש לפיתוח הדרגות שהופכות אותם למודלים חזקים כל כך במבחנה, מגביל באופן דרסטי את הכלים המשמשים להערכה לא הרסנית. ואכן, אחד האתגרים הגדולים ביותר בניתוח לא הרסני של MTCS הוא כימות פרטים בקנה מידה של תאים. מיקרוסקופיית שדה בהיר וניגודיות פאזה משמשת באופן שגרתי להערכת צמיחה והתפתחות של MCTS תלת-ממדיים באופן לא הרסני. עם זאת, אופנות אלה מוגבלות לתחזיות דו-ממדיות, וחסרות את היכולת לדמיין את המבנה התלת-ממדי החיוני של מודלים אלה 10,11,12,13. מידע על ציטוטוקסיות והתפשטות תאים נאסף בדרך כלל באמצעות הדמיה פלואורסצנטית (כלומר, מיקרוסקופיה של יריעות אור, מיקרוסקופיה קונפוקלית) או צביעה אימונוהיסטולוגית ex vivo 14,15,16. בעוד שגישות אלה מספקות מידע רב ערך ברזולוציה גבוהה על מבנה הרקמה, צפיפות התאים ותפקוד התאים, לעתים קרובות הן דורשות הכנת דגימות כגון ניקוי אופטי, תיקון/צביעה או הטבעה המונעת ניתוחים אורכיים.
טומוגרפיה של קוהרנטיות אופטית (OCT) היא שיטת הדמיה מבנית לא הרסנית שיש לה פוטנציאל להתגבר על כמה מהאתגרים שהוזכרו לעיל. הוא מתהדר ברזולוציה תאית ובשדה ראייה רחב מספיק (עד 10 מ"מ x 10 מ"מ) המסוגל לדמיין אגרגטים רב-תאיים שלמיםבגודל 17,18,19. חשוב לציין, בשל האופי הנראה של האור שבו נעשה שימוש, טכניקה זו היא לחלוטין לא הרסנית ונטולת תוויות17. כמו כן, ניתן לצלם דגימות באתרן ללא צורך בהכנת דגימה, כך שניתן לקחת דגימות היישר מהאינקובטור, לסרוק במהירות עם OCT (משך הסריקה ~ 5-10 דקות), ואז להחזיר לאינקובטור, מה שמאפשר אפיון אורכי. מחקרים רבים המבקשים להשתמש ב- OCT כדי לנתח התנהגות ספרואידית של גידולים צצו לאחרונה. באחת ההדגמות המרגשות ביותר, Huang et al. השתמשו ב-OCT כדי לזהות באופן לא הרסני ליבות נמקיות בתוך מודלים כדוריים גדולים של גידולים, וציינו כי באזורי תאים חיים ומתים יש הבדלים ניכרים בהנחתה אופטית, אשר עשויים לשמש לניטור כדאיות ללא תווית20. באופן דומה, Hari et al. ערכו מדידות של מקדם שבירה (RI) של כדוריות של סרטן המעי הגס האנושי (HCT116) שצולמו עם OCT כדי לחקור את נוכחותה של היפוקסיה בתוך הדגימות21. המדידות שלהם לא הספיקו להסקת מסקנות ישירות, אם כי הם כן צפו ב-RI נמוך יותר במיקומים שקושרו לאתר, אם כי לא לגודל, של ליבות נמקיות, שזוהו מאוחר יותר באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית. עבד אל-סאדק ואחרים השתמשו ב-OCT כדי לדמיין ולכמת את כדאיות הרקמות האזורית של מודלים של גידולי סרטן שד22. הם דיווחו על שתי שיטות מבוססות OCT להדמיית דינמיקה של רקמות והראו מתאם מתון בין הבדלים במדדים אלה לבין אזורים שזוהו על ידי מיקרוסקופיה של תאים חיים/מתים.
העבודה שלנו שפורסמה באמצעות OCT התבססה על ספרות קודמת זו כדי לבסס גישה כמותית ולא הרסנית למדידת המורפולוגיה התלת-ממדית וספירת התאים במודלים של סרטן השד MCTSs במהלך הפיתוח10,23. באמצעות תוכנת ניתוח תמונות לעיבוד תמונה בתלת-ממד של Imaris כדי לספור את מספר העצמים בגודל התא (כלומר, כתמים) שצולמו בתוך סריקות נפח OCT, ספירות התאים נמדדו באופן לא הרסני ב-MCTS שהיו דומים סטטיסטית לאלה שנקבעו באמצעות המוציטומטר בעת דיסוציאציה מצטברת. עם זאת, בשל האופי המבני של OCT, קרומי התאים שעדיין קיימים לאחר מוות תאי על ידי נמק עשויים להיספר בטעות כתאים חיים. יתר על כן, אפיון זה הורחב למעקב לא הרסני אחר כדאיות התאים בתוך אגרגטים בודדים הנתונים למשטר תרופות עם הצלחה מבטיחה10. חשוב לציין כי כדאיות דומה של תאים דווחה מגישת OCT-Imaris שלנו עם מה שנבחן בדגימות אלה לאחר הדיסוציאציה. גישה זו של תאים לא הרסניים ונטולי תוויות מאפשרת לספור את התאים בתוך מבנים תלת-ממדיים ואגרגטים צפופים לאורך מבלי להקריב את המבנה/מבנה הצבירה.
העבודה הנוכחית מדווחת על גישה משופרת לכימות ישיר של צפיפות התאים האזורית בתוך אגרגטים צפופים על ידי מינוף היכולת של OCT-Imaris למדוד הן את המורפולוגיה של הצבר התלת-ממדי והן את מספר התאים. התקדמות מתודולוגית זו מספקת תמונה מפורטת יותר של ההתפלגות המרחבית של התאים והתפשטותם בתוך השכבות הקונצנטריות האופייניות למודלים של MCTSs. במקום פשוט לחשב את צפיפות התאים המצטברת הממוצעת הכוללת, מדידות צפיפות מקומיות כאלה יכולות לחשוף גרדיאנטים של צפיפות תאים, כגון אלה הקשורים לדחיסה. הערכה אזורית זו מיושמת גם על אגרגטים שטופלו בכימותרפיה כדי להעריך את התגובה האזורית לתרופות, כפי שנמדדה על ידי שינויים בצפיפות התאים המקומית. שילוב זה של OCT ושיטות ניתוח הדמיה מתקדמות מספק כימות של כדאיות תאים אזורית, אשר ניתן להשתמש בה כדי לחקור את חדירת התרופות על סמך אילו אזורים חווים ירידה בצפיפות התאים. זהו הדו"ח הראשון שמכומת באופן לא הרסני את צפיפות התאים האזורית ואת הכדאיות שלהם בתגובה לתרופה בתוך רקמות תאיות צפופות ומודד אותה לאורך. אפיון כזה של צפיפות תאים תלת-ממדית והתפלגות מרחבית לאורך MCTS שלמים עשוי לסייע באופטימיזציה של אספקת תרופות בטיפול בסרטן ולשפר את ההבנה של התקדמות מודל הסרטן.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96 well plates</td>
			<td>Greiner Bio-One&#160;</td>
			<td>650970</td>
			<td>CellStar Cell-Repellent Surface, https://shop.gbo.com/en/usa/products/bioscience/cell-culture-products/cellstar-cell-repellent-surface/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% trypsin, 2.21 mM EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-053-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AU565 breast cancer cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI software</td>
			<td>open-source</td>
			<td>(Fiji Is Just) ImageJ v2.1/1.5.3j</td>
			<td>Downloaded from https://imagej.net/software/fiji/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>0267151B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris image analysis software</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td>Current version 9.8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-605E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231 breast cancer cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Z1 AxioVision</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin streptomycin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-0002CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI medium 1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875-085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectral Domain Optical Coherence Tomography</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>TEL220C1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 cell culture flasks</td>
			<td>Greiner Bio-One&#160;</td>
			<td>658175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trastuzumab</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Remnant clinical samples of Trastuzumab were used in this study, generously gifted by the Albany Medical College Pharmacy.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-destructive evaluation of regional cell density within tumor aggregates following drug treatment

מודלים של ספרואידים של גידולים רב-תאיים (MCTSs) הדגימו תועלת גוברת למחקר במבחנה של התקדמות הסרטן וגילוי תרופות. המבנים האווסקולריים הפשוטים יחסית האלה מחקים היבטים מרכזיים של גידולי in vivo , כגון מבנה תלת-ממדי ושיפועים פתופיזיולוגיים. מודלים של MCTSs יכולים לספק תובנות על התנהגות תאי סרטן במהלך התפתחות הספרואידים ובתגובה לתרופות; עם זאת, גודלם הנדרש מגביל באופן דרסטי את הכלים המשמשים להערכה לא הרסנית. קוהרנטיות אופטית טומוגרפיה הדמיה מבנית ותוכנת ניתוח תלת-ממד של אימאריס נחקרות למדידה מהירה, לא הרסנית ונטולת תוויות של צפיפות תאים אזורית בתוך MCTSs. גישה זו משמשת להערכת MCTS במהלך תקופת התבגרות של 4 ימים ולאורך טיפול ממושך של 5 ימים עם Trastuzumab, תרופה רלוונטית מבחינה קלינית נגד HER2. בקצרה, MCTS של סרטן השד AU565 HER2+ נוצרו באמצעות שכבת-על נוזלית עם או בלי תוספת של Matrigel (מטריצת ממברנת מרתף) כדי לחקור אגרגטים של מורפולוגיות שונות (אגרגטים עבים יותר, דמויי דיסק 2.5D או אגרגטים דו-ממדיים שטוחים, בהתאמה). צפיפות התא בתוך האזור החיצוני, אזור המעבר והליבה הפנימית התאפיינה ב-MCTS שהבשילו, וחשפו שיפוע של צפיפות תאים עם צפיפות תאים גבוהה יותר באזורי הליבה בהשוואה לשכבות החיצוניות. תוספת המטריצה חילקה מחדש את צפיפות התאים ושיפרה את השיפוע הזה, תוך הפחתת צפיפות האזור החיצוני והגברת דחיסת התאים בליבות. צפיפות התאים כומתה לאחר טיפול תרופתי (0 שעות, 24 שעות, 5 ימים) בתוך אזורים עמוקים יותר ויותר של 100 מיקרומטר כדי להעריך הבדלים אזוריים פוטנציאליים בתגובה לתרופות. בנקודת הזמן האחרונה, נראה היה שכמעט כל מקרי המוות של התאים מוגבלים ל-200 מיקרומטר החיצוניים של כל צבירה, בעוד שתאים עמוקים יותר במצטבר נראו ברובם לא מושפעים, מה שממחיש הבדלים אזוריים בתגובה לתרופות, אולי בגלל מגבלות בחדירת הסמים. הפרוטוקול הנוכחי מספק טכניקה ייחודית לכימות לא הרסני של צפיפות התאים האזורית בתוך רקמות תאיות צפופות ולמדוד אותה לאורך.

בפרסום קודם, נקבעה שיטה למדידה לא הרסנית של צפיפות התאים הגלובלית בתוך אגרגטים תאיים באמצעות OCT10. כאן, טכניקה זו מורחבת כדי להעריך את צפיפות התאים האזורית של אגרגטים מתפתחים של תאים. איור 1 מראה שרטוט של הרחבה זו, שבה ניתן להעריך את צפיפות התא בשכבות קונצנטריות ?...

Watch this Scientific Journal Video about Non-Destructive Evaluation of Regional Cell Density Within Tumor Aggregates Following Drug Treatment at JoVE.com

Non-Destructive Evaluation of Regional Cell Density Within Tumor Aggregates Following Drug Treatment

הפרוטוקול הנוכחי מפתח טכניקה מבוססת תמונה למדידת צפיפות תאים אזורית מהירה, לא הרסנית ונטולת תוויות בתוך אגרגטים של גידולים תלת-ממדיים. הממצאים חשפו שיפוע של צפיפות תאים, עם צפיפות תאים גבוהה יותר באזורי ליבה מאשר שכבות חיצוניות באגרגטים מתפתחים ומוות בעיקר של תאים היקפיים באגרגטים HER2+ שטופלו בטרסטוזומאב.

הערכה לא הרסנית של צפיפות תאים אזורית בתוך אגרגטים סרטניים בעקבות טיפול תרופתי

Multicellular tumor spheroid (MCTSs) models have demonstrated increasing utility for in vitro study of cancer progression and drug discovery. These ...

פרוטוקול זה מספק מידע על התקדמות מודל הגידול באופן לא הרסני. הוא גם נותן אינדיקציות לתגובה טיפולית באמצעות משטרי תרופות שלמים בתוך אגרגטים יחידים במקום להסתמך על דגימות התאמת גיל. שיטות קונבנציונליות להשגת צפיפות תאים וכדאיות בתוך אגרגטים דורשות קיבוע וחיתוך של דגימות, בעוד שלנו מספקת נתונים באופן לא הרסני.לכן, ניתן לעקוב אחר שינויים בתוך צבירה אחת לאורך זמן. טכניקה זו צפויה לשפר את הבנתנו את התגובה לתרופות באזורים דיסקרטיים של מודלים מצטברים, עם השלכות על מידת ההשפעה של מודלים אלה על תגובות in vivo ויישומי סינון תרופות. כדי להתחיל, להכין 70 עד 90% תרביות תאים מפגש של קווי התא הרצויים בתנאים סטנדרטיים.ניתק את חד-שכבתי התאים מבקבוקי התרבית שלהם בהתאם לשיטת הטריפסיניזציה הסטנדרטית והוסיף את תרחיף התא לצינור צנטריפוגה. הוסיפו 10 מיקרוליטרים של תרחיף התא להמוציטומטר וספרו באמצעות מיקרוסקופיה כדי לקבוע את מספר התאים בהשעיה. תאי גלולה באמצעות צנטריפוגה ותאי החייאה במדיה בריכוז הרצוי של 2.5 פעמים 10 לתאים החמישיים למיליליטר.עבור מתלים שהוכנו עם מטריצת קרום המרתף, הסירו את בקבוקון המטריצה מאחסון מינוס 20 מעלות צלזיוס והניחו במקרר כדי להפשיר למשך הלילה. מכינים מיכל עם מדיית גדילה ומכניסים למקרר למשך 10 דקות לקירור. שימוש בקצה פיפטה קפוא מוסיפים את המטריצה למדיה מצוננת כך שהריכוז הסופי של תמיסה זו הוא 5%הוסף 50 מיקרוליטרים של מדיה זו לכל באר של צלחת תחתית עגולה, שאינה דבקה ב-96 בארות, כך שהריכוז הסופי של המטריצה בבארות אלה יהיה 2.5% לאחר הוספת תרחיף התא.עבור מתלים שהוכנו ללא מטריצה, הוסיפו 50 מיקרוליטרים של מדיית גדילה רגילה לכל באר. מחלקים 50 מיקרוליטרים של תרחיף תאים לכל באר. צנטריפוגה של הלוחות ב-123 גרם למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר מיד לאחר הזריעה כדי להבטיח איסוף של כדור תא בתחתית כל באר.השתמש במערכת OCT להדמיה מבנית. הגדר את קצב הסריקה של A ל- 5.5 קילוהרץ לאיסוף תמונות ברזולוציה גבוהה. הגדר את מדד השבירה ל- 1.33 עבור דגימות במדיום נוזלי.בחלון הפרמטרים של התמונה בצד ימין של המסך, הגדר את שדה הראייה על-ידי הזנת ערכי X, Y ו- Z כך שהמדגם יכלול בתוך אזור עניין זה. לחץ על מצב רכישה בתלת-ממד ולאחר מכן לחץ על רשומה כדי לאסוף את סריקת אמצעי האחסון התלת-ממדית של המדגם. כדי ליצור שחזור נפח, פתחו את Imaris ונווטו לקובץ ה-TIF שהומר בתוך הזירה שלהם.עבור לעריכה ולאחר מכן לחץ על מאפייני תמונה והזן את גודל הווקסל מתמונת OCT לתיבות XYZ המתאימות. לאחר מכן, לחץ על אישור. לחץ על הוסף משטחים חדשים מעל עץ האובייקטים. בתפריט שמתחת לעץ, לחץ על דלג על יצירה אוטומטית וערוך באופן ידני.בתוך חלון כוונון התצוגה, החליקו ידנית את החצים האדומים והשחורים כדי לשפר את הניגודיות בין הדגימה לרקע ולשפר את ההדמיה לדוגמה. התאם את מיקום הפרוסה לפרוסה בקצה אחד של הדגימה. השתמש במקש הבריחה כדי לשנות את העכבר ממצב הניווט למצב הבחירה ולאחר מכן לחץ על ציור.עקוב באופן ידני אחר קווי המתאר של האזור המציג את האות. קדם את מיקום הפרוסה על-ידי הזנת המיקום הבא בתיבת הקלט. המיקום הבא צריך להיות פחות או שווה ל-100 פרוסות יותר לתוך המדגם מאשר הקודם.עקוב באופן ידני אחר האזור המציג את האות. חזור על שלב זה דרך עובי הדגימה עד שיגיע לקצה הנגדי של הדגימה. לאחר מכן לחץ על צור משטח והשאר את התפריט כדי לתפור פרוסות אלה יחד.לבסוף, לחץ על ערוך ולאחר מכן לחץ על בחירת מסיכה ולאחר מכן לחץ על אישור כדי להשלים את שחזור אמצעי האחסון. כדי לקבל את צפיפות התא הכוללת של הדגימה, בחר הוסף נקודות חדשות. בתפריט הגדרות האלגוריתם, בטל את הבחירה בכל התיבות.לחץ על החץ הכחול כדי לעבור למסך ערוץ המקור. מהתפריט הנפתח שמופיע, בחר את הערוץ במסכה. הזן את קוטר התא הממוצע עבור הדגימה בתיבה בקוטר XY.ודא שחיסור הרקע נבדק. לחץ על החץ הכחול כדי לעבור למסך של נקודת הסיווג. בגרף שבתחתית התפריט, לחץ וגרור את הקצה השמאלי של הסף הצהוב לקצה השמאלי של הגרף כך שכל העצמים ייכללו בסף ההצללה הצהוב.לאחר מכן לחץ על החץ הירוק כדי להשלים את יצירת הנקודה. השג את מספר האובייקטים שזוהו על ידי לחיצה על סטטיסטיקה. לאחר מכן לחץ על כללי ולבסוף לחץ על המספר הכולל של נקודות.לחץ על המשטח שנוצר ונווט לכרטיסיית האיכות בסגנון משטחים. שנה את הבחירה ל-Center Point ושנה את רוחב הפיקסלים לפחות משווה ל-20 לקבלת התצוגה הטובה ביותר. נווט אל סטטיסטיקה.לאחר מכן לחץ על מפורט, ואחריו מיקום והקלט את המיקום במיקום המרכזי. בחר הוסף מסגרת הפניה חדשה מהתפריט שמעל עץ האובייקטים. סמן את התיבות הגלויות והקבועות לצד X, Y בתפריט.לחץ וגרור את מרכז סמל מסגרת ההפניה כך שהוא יתאים לנקודה המרכזית. בטל את הבחירה בתיבות XY גלויות ותקן ובחר אותן עבור XZ. שוב, לחץ וגרור את מרכז סמל מסגרת ההפניה כך שהוא יתאים לנקודה המרכזית. לבסוף, חזור על כך עבור מישור YZ, לסירוגין בין שלושת המישורים הקבועים הללו עד שמסגרת הייחוס תתיישר באופן מושלם עם הנקודה המרכזית.לחץ פעמיים על מסגרת ההפניה בעץ האובייקטים ושנה את שמה למרכז או דומה. לחץ על הנקודות שנוצרו ונווט אל סטטיסטיקה. לאחר מכן לחץ על מפורט, ואחריו על מסגרת הפניה למיקום.לחץ על מסגרת הייחוס של מיקום X עד שהיא תמיין מהערך הגבוה ביותר לערך הנמוך ביותר. רשום את הערך הגבוה ביותר כדי לקבל את רדיוס האגרגטים. בצע חישובים ידניים כדי לקבוע מיקומים נוספים של עניין.לשם כך, הוסף 100 מיקרומטרים לערך מרכז X ולאחר מכן השתמש בערכי Y ו- Z של נקודת המרכז כדי להגדיר את המיקום הראשון לאורך ציר המרכז. בחר הוסף נקודות חדשות. לאחר מכן בחר דלג על עריכת יצירה אוטומטית באופן ידני.החזק את לחצן Shift במקלדת ולחץ במקום כלשהו על המסך כדי למקם נקודה חדשה. הזן את ערכי המיקום של XYZ עבור המיקום הראשון שמעניין. לאחר מכן בחר הוסף מסגרת הפניה חדשה ויישר אותה מעל המקום.הוסף 100 מיקרומטר לכל מיקום X רציף. מקם את מסגרת הייחוס האחרונה במרחק של פחות מ-50 מיקרומטרים מהרדיוס החיצוני של הדגימה. לחץ על הנקודות שנוצרו ונווט אל סטטיסטיקה.בפינה השמאלית התחתונה של התפריט, לחץ על ייצוא כל הנתונים הסטטיסטיים כדי לקובץ ושמור נתונים בגיליון אלקטרוני. פתח את הגיליון האלקטרוני. נווט אל המרחק מכרטיסיית מסגרת הפניה של המקור.השתמש בפונקציית mod כדי להקצות באופן מספרי כל מרחק למסגרת הייחוס המתאימה לו. סנן את הערכים בעמודה זו כדי לעבוד עם המרחקים בכל מסגרת הפניה. עבור כל אחת ממסגרות הייחוס, חשב את מספר האובייקטים בטווח של 50 מיקרומטר של המסגרת באמצעות הפונקציה COUNTIF.הערך המתקבל מתאים למספר התאים בתקע אזורי זה. חלק ערך זה בנפח של תקע 100 מיקרומטר כדי לקבל את צפיפות התא. בדיקת T של התלמיד גילתה צפיפות תאים גבוהה משמעותית בליבת הספרואידים מאשר בשכבות המעבר והחיצוניות עבור מודלים ספרואידיים MDA-MB-231.התוצאה מצביעה על דחיסה בליבה ספרואידית זו לאחר ארבעה ימים. הן במודלים המצטברים AU565 והן במודלים של MDA-MB-231, נראה כי הוספת המטריצה אינה משפיעה על הנפח או על ספירת התאים, ולכן נראה שיש לה השפעה זניחה על התפשטות התאים. במקום זאת, נראה כי הוספת מטריצה מתפצת מחדש את צפיפות התאים ומקדמת דחיסת ליבה משמעותית ומפחיתה את צפיפות התאים בשכבות החיצוניות.ממצאים אלה מספקים תובנה רבת ערך לגבי המנגנונים הפיזיקליים שבאמצעותם המטריצה מאפשרת צבירה של תאים בקווים שונים של תאי סרטן השד. בהסתכלות הבאה על גידולי AU565 ספרואידים שהוכנו עם מטריצה, אגרגטים בוגרים טופלו בטרסטוזומאב וצפיפות התאים האזורית הוערכה באמצעות משטר תרופות של חמישה ימים. התקעים הוצבו כל 100 מיקרומטר לאורך כל עובי האגרגטים.תנודות קלות בצפיפות התא נצפו לאורך זמן בתוך 500 המיקרומטרים הפנימיים של כל צבירה, מה שמעיד על מוות תאי מינימלי. ההדמיה של מוות תאי כתגובה תרופתית מעידה בעיקר בשכבות החיצוניות של ספרואידים סרטניים עולה בקנה אחד עם בעיות חדירת סמים של טרסטוזומאב. כעת אנו יכולים למדוד באופן לא הרסני את הכדאיות של התאים באגרגטים מבלי להקריב את המבנה.זה מאפשר הערכה של תגובת תרופות אורכיות באגרגטים של גידולים יחידים כדי לזהות תכונות טמפורליות וחדירה של תרופות אנטי-סרטניות מועמדות.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Sample Extraction and Simultaneous Chromatographic Quantitation of Doxorubicin and Mitomycin C Following Drug Combination Delivery in Nanoparticles to Tumor-bearing Mice

חילוץ מדגם, כימות כרומטוגרפי סימולטני של דוקסורוביצין, מיטומיצין C שלאחר משלוח סמים בשילוב של חלקיקים נושאות לעכברים

Combination chemotherapy is frequently used in the clinic for cancer treatment; however, associated adverse effects to normal tissue may limit its ...

Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

מהדור בתפוקה גבוהה תלת מימדי הגידול Spheroids להקרנה סמים

Cancer cells have routinely been cultured in two dimensions (2D) on a plastic surface. This technique, however, lacks the true environment a tumor mass is ...

Evaluation of the Feasibility, Safety, and Accuracy of an Intraoperative High-intensity Focused Ultrasound Device for Treating Liver Metastases

הערכה של כדאיות, בטיחות, דיוק בעצימות גבוהה פוסט מרוכז מכשיר אולטרסאונד לטיפול גרורות בכבד

Today, the only potentially curative option in patients with colorectal liver metastases is surgery. However, liver resection is feasible in less than 20% ...

Neutrophil Extracellular Traps Generated by Low Density Neutrophils Obtained from Peritoneal Lavage Fluid Mediate Tumor Cell Growth and Attachment

נויטרופילים מלכודות חוץ-תאי שנוצר על ידי נויטרופילים בצפיפות נמוכה המתקבל נוזל שטיפת הצפק התחלקות התא הגידול וקובץ מצורף

Activated neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which can capture and destroy microbes. Recent studies suggest that NETs are involved ...

Paramyxoviruses for Tumor-targeted Immunomodulation: Design and Evaluation Ex Vivo

Paramyxoviruses עבור Immunomodulation, ממוקדות הגידול: הערכה לשעבר Vivo ועיצוב

Successful cancer immunotherapy has the potential to achieve long-term tumor control. Despite recent clinical successes, there remains an urgent need for ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

חיסון intramucosal של תאי קרצינומה של תאים קשקשיים עכברים עבור פרופיל החיסונית הגידול והערכת התגובה לטיפול

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vitro Tumor Cell Rechallenge For Predictive Evaluation of Chimeric Antigen Receptor T Cell Antitumor Function

ב- Rechallenge תא הגידול חוץ גופית להערכה חזוי של Chimeric אנטיגן קולטן תא T פונקציה Antitumor

The field of chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy is rapidly advancing with improvements in CAR design, gene-engineering approaches and ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

הקרנת התרופה של החולה העיקרי הנגזר גידול Xenografts ב Zebrafish

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

ניתוח פתולוגי של גרורות ריאות בעקבות הזרקת וריד זנב לרוחב של תאים סרטניים

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

בידוד והערכה תפקודית של תאי גזע מסרטן השד האנושי מדגימות תאים ורקמות

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...