Name: non-destructive evaluation of regional cell density within tumor aggregates following drug treatment
Uploaded: 2022-06-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Destructive Evaluation of Regional Cell Density Within Tumor Aggregates Following Drug Treatment at JoVE.com

Bu çalışma NIH R01 BRG CA207725 (MB/DTC) ve NIH R01 CA233188 (MB) tarafından desteklenmiştir. Bu deneyler için sağlanan Trastuzumab için AMC Eczanesi'ne teşekkür ederiz.

Bu çalışmada AU565 (HER2+) ve MDA-MB-231 meme kanseri hücre hatları kullanılmıştır (bkz.
1. Tümör agregalarının hazırlanması
<ol><li>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 bazal ortam (+) kullanarak AU565 (HER2+) meme kanseri hücre büyüme ortamını,% 10 (v / v) fetal sığır serumu ve% 1 penisilin / streptomisin ile desteklenmiş L-glutamin kullanarak hazırlayın (bkz.</li>
	<li>MDA-MB-231 üçlü negatif meme kanse...

<ol>
	<li>Sutherland, R., JA, M., Inch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+multicell+spheroids+in+tissue+culture+as+a+model+of+nodular+carcinomas.">Growth of multicell spheroids in tissue culture as a model of nodular carcinomas.</a> Journal of the National Cancer Institute. 46 (1), 113-120 (1971).</li><li>Sachs, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+living+biobank+of+breast+cancer+organoids+captures+disease+heterogeneity.">A living biobank of breast cancer organoids captures disease heterogeneity.</a> Cell. 172 (1-2), 373-386 (2018).</li><li>Nagelkerke, A., Bussink, J., Sweep, F. C. G. J., Span, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+multicellular+tumor+spheroids+of+breast+cancer+cells:+How+to+go+three-dimensional.">Generation of multicellular tumor spheroids of breast cancer cells: How to go three-dimensional.</a> Analytical Biochemistry. 437 (1), 17-19 (2013).</li><li>Kunz-Schughart, L. A., Freyer, J. P., Hofstaedter, F., Ebner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+3-D+cultures+for+high-throughput+screening:+The+multicellular+spheroid+model.">The use of 3-D cultures for high-throughput screening: The multicellular spheroid model.</a> Journal of Biomolecular Screening. 9 (4), 273-285 (2004).</li><li>Hirschhaeuser, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+tumor+spheroids:+An+underestimated+tool+is+catching+up+again.">Multicellular tumor spheroids: An underestimated tool is catching up again.</a> Journal of Biotechnology. 148 (1), 3-15 (2010).</li><li>Jiang, Y., Pjesivac-Grbovic, J., Cantrell, C., Freyer, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multiscale+model+for+avascular+tumor+growth.">A multiscale model for avascular tumor growth.</a> Biophysical Journal. 89 (6), 3884-3894 (2005).</li><li>Freyei, J. P., Sutherland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+growth+saturation+and+development+of+necrosisin+EMT6/R0+multicellular+spheroids+by+the+glucose+and+oxygen+supply.">Regulation of growth saturation and development of necrosisin EMT6/R0 multicellular spheroids by the glucose and oxygen supply.</a> Cancer Research. 46 (7), 3504-3512 (1986).</li><li>Desoize, B., Jardillier, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+resistance:+a+paradigm+for+clinical+resistance.">Multicellular resistance: a paradigm for clinical resistance.</a> Critical Reviews in Oncology Hematology. 36 (2-3), 193-207 (2000).</li><li>Mellor, H. R., Ferguson, D. J. P., Callaghan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+quiescent+tumour+microregions+for+evaluating+multicellular+resistance+to+chemotherapeutic+drugs.">A model of quiescent tumour microregions for evaluating multicellular resistance to chemotherapeutic drugs.</a> British Journal of Cancer. 93 (3), 302-309 (2005).</li><li>Roberge, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-destructive+tumor+aggregate+morphology+and+viability+quantification+at+cellular+resolution,+during+development+and+in+response+to+drug.">Non-destructive tumor aggregate morphology and viability quantification at cellular resolution, during development and in response to drug.</a> Acta Biomaterialia. 117, 322-334 (2020).</li><li>Piccinini, F., Tesei, A., Bevilacqua, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-image+based+methods+used+for+non-invasive+volume+estimation+of+cancer+spheroids+a+practical+assessing+approach+based+on+entry-level+equipment.">Single-image based methods used for non-invasive volume estimation of cancer spheroids a practical assessing approach based on entry-level equipment.</a> Computer Methods and Programs in Biomedicine. 135, 51-60 (2016).</li><li>Imamura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+2D-+and+3D-culture+models+as+drug-testing+platforms+in+breast+cancer.">Comparison of 2D- and 3D-culture models as drug-testing platforms in breast cancer.</a> Oncology Reports. 33 (4), 1837-1843 (2015).</li><li>Song, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+multicellular+tumor+spheroids+towards+optimized+treatment+for+patients+with+hepatocellular+carcinoma.">Patient-derived multicellular tumor spheroids towards optimized treatment for patients with hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Experimental &amp; Clinical Cancer Research. 37 (1), 1-13 (2018).</li><li>LaBarbera, D. V., Reid, B. G., Yoo, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multicellular+tumor+spheroid+model+for+high-throughput+cancer+drug+discovery.">The multicellular tumor spheroid model for high-throughput cancer drug discovery.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 7 (9), 819-830 (2012).</li><li>Hakanson, M., Textor, M., Charnley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+3D+environments+to+elucidate+the+effect+of+environmental+parameters+on+drug+response+in+cancer.">Engineered 3D environments to elucidate the effect of environmental parameters on drug response in cancer.</a> Integrative Biology. 3 (1), 31-38 (2011).</li><li>Pickl, M., Ries, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+3D+and+2D+tumor+models+reveals+enhanced+HER2+activation+in+3D+associated+with+an+increased+response+to+trastuzumab.">Comparison of 3D and 2D tumor models reveals enhanced HER2 activation in 3D associated with an increased response to trastuzumab.</a> Oncogene. 28 (3), 461-468 (2009).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+HHS+public+access.">Optical coherence tomography HHS public access.</a> Science. 254 (5035), 1178-1181 (1991).</li><li>Zhong, H. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancement+of+permeability+of+glycerol+with+ultrasound+in+human+normal+and+cancer+breast+tissues+in+vitro+using+optical+coherence+tomography.">Enhancement of permeability of glycerol with ultrasound in human normal and cancer breast tissues in vitro using optical coherence tomography.</a> Laser Physics Letters. 7 (5), 388-395 (2010).</li><li>Fujimoto, J., Swanson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development,+commercialization,+and+impact+of+optical+coherence+tomography.">The development, commercialization, and impact of optical coherence tomography.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 57 (9), (2016).</li><li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+detects+necrotic+regions+and+volumetrically+quantifies+multicellular+tumor+spheroids.">Optical coherence tomography detects necrotic regions and volumetrically quantifies multicellular tumor spheroids.</a> Cancer Research. 77 (21), 6011-6020 (2017).</li><li>Hari, N., Patel, P., Ross, J., Hicks, K., Vanholsbeeck, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+complements+confocal+microscopy+for+investigation+of+multicellular+tumour+spheroids.">Optical coherence tomography complements confocal microscopy for investigation of multicellular tumour spheroids.</a> Scientific Reports. 9 (1), 1-11 (2019).</li><li>El-Sadek, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+dynamics+optical+coherence+tomography+for+tumor+spheroid+evaluation.">Three-dimensional dynamics optical coherence tomography for tumor spheroid evaluation.</a> Biomedical Optics Express. 12 (11), 6844 (2021).</li><li>Kingsley, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-based+3D+bioprinting+for+spatial+and+size+control+of+tumor+spheroids+and+embryoid+bodies.">Laser-based 3D bioprinting for spatial and size control of tumor spheroids and embryoid bodies.</a> Acta Biomateralia. 95, 357-370 (2019).</li><li>Absher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemocytometer+counting.">Hemocytometer counting.</a> Tissue Culture. , 395-397 (1973).</li><li>Roberge, C. L., Rudkouskaya, A., Barroso, M., Corr, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal,+label-free+assessment+of+cell+density+and+viability+in+multicellular+tumor+spheroids+via+optical+coherence+tomography.">Longitudinal, label-free assessment of cell density and viability in multicellular tumor spheroids via optical coherence tomography.</a> Summer Biomechanics, Bioengineering, and Biotransport Conference. , (2020).</li><li>Bellotti, C., Duchi, S., Bevilacqua, A., Lucarelli, E., Piccinini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+morphological+characterization+of+mesenchymal+stromal+cells+3D+spheroids+built+with+a+rapid+method+based+on+entry-level+equipment.">Long term morphological characterization of mesenchymal stromal cells 3D spheroids built with a rapid method based on entry-level equipment.</a> Cytotechnology. 68 (6), 2479-2490 (2016).</li><li>Noto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stearoyl-CoA+desaturase-1+is+a+key+factor+for+lung+cancer-initiating+cells.">Stearoyl-CoA desaturase-1 is a key factor for lung cancer-initiating cells.</a> Cell Death &amp; Disease. 4 (12), 947 (2013).</li><li>Riffle, S., Hegde, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+tumor+cell+adaptations+to+hypoxia+in+multicellular+tumor+spheroids.">Modeling tumor cell adaptations to hypoxia in multicellular tumor spheroids.</a> Journal of Experimental &amp; Clinical Cancer Research. 36, 102 (2017).</li><li>Wilson, W. R., Hay, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+hypoxia+in+cancer+therapy.">Targeting hypoxia in cancer therapy.</a> Nature Reviews Cancer. 11, 393-410 (2011).</li><li>Grimes, D. R., Kelly, C., Bloch, K., Partridge, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+estimating+the+oxygen+consumption+rate+in+multicellular+tumour+spheroids.">A method for estimating the oxygen consumption rate in multicellular tumour spheroids.</a> Journal of the Royal Society Interface. 11 (92), 20131124 (2014).</li><li>Nath, S., Devi, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+systems+in+cancer+research:+Focus+on+tumor+spheroid+model.">Three-dimensional culture systems in cancer research: Focus on tumor spheroid model.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 163, 94-108 (2016).</li><li>Pozzi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meet+me+halfway:+Are+in+vitro+3D+cancer+models+on+the+way+to+replace+in+vivo+models+for+nanomedicine+development.">Meet me halfway: Are in vitro 3D cancer models on the way to replace in vivo models for nanomedicine development.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 175, 113760 (2021).</li><li>. High throughput screening format identifies synthetic mimics of matrigel for tubulogenesis screening Available from: <a target="_blank" href="https://abstracts.biomaterials.org/data/papers/2015/abstracts/547.pdf">https://abstracts.biomaterials.org/data/papers/2015/abstracts/547.pdf</a> (2015)</li><li>Duchnowska, R., Szczylik, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+nervous+system+metastases+in+breast+cancer+patients+administered+trastuzumab.">Central nervous system metastases in breast cancer patients administered trastuzumab.</a> Cancer Treatment Reviews. 31 (4), 312-318 (2005).</li><li>Zazo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation,+characterization,+and+maintenance+of+trastuzumab-resistant+HER2++breast+cancer+cell+lines.">Generation, characterization, and maintenance of trastuzumab-resistant HER2+ breast cancer cell lines.</a> American Journal of Cancer Research. 6 (11), 2661-2678 (2016).</li></ol>

Mana Çok hücreli tümör sferoidleri (MCTS'ler), tümör progresyonunu ve ilaç taramasını incelemek için güçlü 3D in vitro modellerdir 1,2,3. Bu nispeten basit agrega modellerinin faydasını ilerletmek, hem tümör modeli progresyonunu hem de terapötik yanıtı etkilediği bilinen morfoloji ve hücre yoğunluğu gibi temel özelliklerinin karakterizasyonuna büyük ölçüde dayanır. Bunu...

Araştırmacılar, tümör progresyonunun bazı temel özelliklerini incelemek için büyük ölçüde in vitro sistemlerde tezgah üstü 3D kültürüne yöneldiler. Bu araştırmanın çoğu, çok hücreli tümör sferoidlerinin (MCTS'ler) ve daha karmaşık organoidlerinyeniden ortaya çıkmasıyla yönlendirilmiştir 1,2. Bu modeller avasküler olmasına rağmen, in vivo 3,4,5 meydana gelen fizyolojik ve patolojik süreçleri özetlemek için güçlü bir araç sağlarlar. Özellikle, orta büyüklükteki modeller (300-500 μm çapında), 3D yapı, patofizyolojik gradyanlar ve çekirdek içindeki hipoksiye bağlı metastatik sinyalleme gibi temel tümör özelliklerini taklit edebilir. Bu modellerin vaskülarize in vivo tümörlerde görülen karakteristik konsantrik tabakaları, yani proliferatif hücrelerin dış tabakasını, yaşlı/sessiz hücrelerin bir geçiş tabakasını ve çekirdekte hipoksi yaşayan hücreleri gösterdiği iyi belgelenmiştir 3,6,7,8,9 . Bu modellerden, bu katmanlar içindeki hücre davranışını karakterize ederek, gelişim sırasında ve ilaca yanıt olarak benzersiz bir anlayış kazanılabilir. Bununla birlikte, onları in vitro modellerde bu kadar güçlü kılan gradyanları geliştirmek için gerekli olan gerekli MCTS boyutu, tahribatsız değerlendirme için kullanılan araçları büyük ölçüde sınırlar. Gerçekten de, MTCS'lerin tahribatsız analizi ile ilgili en büyük zorluklardan biri, hücre ölçeğindeki ayrıntıları ölçmektir. Parlak alan ve faz kontrastı mikroskopisi, 3D MCTS'lerin büyümesini ve gelişimini tahribatsız bir şekilde değerlendirmek için rutin olarak kullanılır. Bununla birlikte, bu modaliteler 2D projeksiyonlarla sınırlıdır ve bu modellerin10,11,12,13 gibi önemli 3D yapısını görselleştirme kapasitesinden yoksundur. Sitotoksisite ve hücre proliferasyonu ile ilgili bilgiler tipik olarak floresan görüntüleme (yani, ışık tabakası mikroskopisi, konfokal mikroskopi) veya ex vivo immünohistolojik boyama14,15,16 yoluyla toplanır. Bu yaklaşımlar doku yapısı, hücresel yoğunluk ve hücresel fonksiyon hakkında değerli, yüksek çözünürlüklü bilgiler sağlarken, genellikle optik temizleme, sabitleme / boyama veya uzunlamasına analizleri önleyen gömme gibi numune hazırlama gerektirir.
Optik Koherens Tomografi (OKT), yukarıda belirtilen bazı zorlukların üstesinden gelme potansiyeline sahip, tahribatsız bir yapısal görüntüleme yöntemidir. Hücresel çözünürlüğe ve tüm çok hücreli agregaları 17,18,19 görselleştirebilecek kadar geniş bir görüş alanına (10 mm x10 mm'ye kadar) sahiptir. Daha da önemlisi, kullanılan ışığın görünür doğası nedeniyle, bu teknik tamamen tahribatsız ve etiketsizdir17. Ayrıca, numuneler numune hazırlığı gerektirmeden yerinde görüntülenebilir, böylece numuneler doğrudan inkübatörden alınabilir, OCT ile hızlı bir şekilde taranabilir (tarama süresi ~ 5-10 dakika), daha sonra inkübatöre geri döndürülerek uzunlamasına karakterizasyon sağlanabilir. Tümör sferoid davranışını analiz etmek için OKT'yi kullanmayı amaçlayan birçok çalışma yakın zamanda ortaya çıkmıştır. En heyecan verici gösterilerden birinde, Huang ve ark. OCT'yi büyük tümör sferoid modellerindeki nekrotik çekirdekleri tahribatsız bir şekilde tespit etmek için kullandılar ve canlı ve ölü hücre bölgelerinin, etiketsiz canlılık izleme20 için kullanılabilecek optik zayıflamada fark edilebilir farklılıklara sahip olduğunu belirttiler. Benzer şekilde, Hari ve ark., örneklerde hipoksi varlığını incelemek için OCT ile görüntülenen insan kolon kanseri (HCT116) sferoidlerinin kırılma indisi (RI) ölçümlerini gerçekleştirdi21. Ölçümleri doğrudan çıkarımlar için yeterli değildi, ancak daha sonra konfokal mikroskopi ile tanımlanan nekrotik çekirdeklerin alanıyla ilişkili yerlerde, boyut olmasa da daha düşük RI gözlemlediler. Abd El-Sadek ve ark. meme kanseri tümör modellerinin bölgesel doku canlılığını görselleştirmek ve ölçmek için OCT'yi kullandılar22. Doku dinamiklerini görselleştirmek için iki OCT tabanlı yöntem bildirdiler ve bu metriklerdeki farklılıklar ile canlı / ölü hücrelerin mikroskopi ile tanımlanmış bölgeleri arasında ılımlı bir korelasyon gösterdiler.
OCT'yi kullanarak yayınladığımız çalışmamız, gelişim sırasında MCTS'lerin meme kanseri modellerinde 3D morfolojiyi ve hücre sayısını ölçmek için kantitatif, tahribatsız bir yaklaşım oluşturmak için bu önceki literatüre dayanmaktadır10,23. OCT hacim taramalarında görüntülenen hücre boyutundaki nesnelerin (yani lekelerin) sayısını saymak için Imaris 3D render görüntü analiz yazılımı kullanılarak, hücre sayımları, agrega ayrışması üzerine hemositometre ile belirlenenlere istatistiksel olarak benzeyen MCTS'lerde tahribatsız olarak ölçülmüştür. Bununla birlikte, OKT'nin yapısal doğası nedeniyle, nekroz nedeniyle hücre ölümünden sonra hala mevcut olan hücre zarları yanlışlıkla canlı hücreler olarak sayılabilir. Ayrıca, bu karakterizasyon, umut verici bir başarı ile bir ilaç rejimine tabi tutulan bireysel agregalar içindeki hücre canlılığını tahribatsız bir şekilde izlemeye genişletildi10. Önemli olarak, OCT-Imaris yaklaşımımızdan, ayrışma üzerine bu örneklerde karşılaştırılanlarla benzer hücre canlılığının bildirildiği belirtildi. Bu tahribatsız ve etiketsiz hücre yaklaşımı, hücrelerin 3B yapılar içinde ve yoğun agregalar içinde yapı/agrega yapısından ödün vermeden uzunlamasına sayılmasını sağlar.
Bu çalışma, OCT-Imaris'in hem 3D agrega morfolojisini hem de hücre sayısını ölçme yeteneğinden yararlanarak yoğun agregalar içindeki bölgesel hücre yoğunluğunu doğrudan ölçmek için geliştirilmiş bir yaklaşım bildirmektedir. Bu metodolojik ilerleme, MCTS modellerinin karakteristik eşmerkezli katmanları içinde hücrelerin uzamsal dağılımının ve proliferasyonunun daha ayrıntılı bir resmini sağlar. Genel bir ortalama toplam hücre yoğunluğunu hesaplamak yerine, bu tür yerel yoğunluk ölçümleri, sıkıştırma ile ilişkili olanlar gibi hücre yoğunluğu gradyanlarını ortaya çıkarabilir. Bu bölgesel değerlendirme, lokal hücre yoğunluğundaki değişikliklerle ölçüldüğü gibi, bölgesel ilaç yanıtını değerlendirmek için kemoterapötik ile tedavi edilen agregalara da uygulanır. OCT ve gelişmiş görüntüleme analiz yöntemlerinin bu kombinasyonu, hangi bölgelerin hücre yoğunluğunda azalma yaşadığına bağlı olarak ilaç penetrasyonunu araştırmak için kullanılabilecek bölgesel hücre canlılığının ölçülmesini sağlar. Bu, yoğun hücresel dokulardaki ilaca yanıt olarak bölgesel hücre yoğunluğunu ve canlılığını tahribatsız bir şekilde ölçen ve uzunlamasına ölçen ilk rapordur. Üç boyutlu hücre yoğunluğunun ve tüm MCTS'ler boyunca uzamsal dağılımın bu şekilde karakterize edilmesi, kanser tedavisinde ilaç dağıtımını optimize etmeye ve kanser modelinin ilerlemesinin anlaşılmasını geliştirmeye yardımcı olabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96 well plates</td>
			<td>Greiner Bio-One&#160;</td>
			<td>650970</td>
			<td>CellStar Cell-Repellent Surface, https://shop.gbo.com/en/usa/products/bioscience/cell-culture-products/cellstar-cell-repellent-surface/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% trypsin, 2.21 mM EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-053-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AU565 breast cancer cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI software</td>
			<td>open-source</td>
			<td>(Fiji Is Just) ImageJ v2.1/1.5.3j</td>
			<td>Downloaded from https://imagej.net/software/fiji/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>0267151B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris image analysis software</td>
			<td>Bitplane</td>
			<td></td>
			<td>Current version 9.8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-605E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231 breast cancer cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Z1 AxioVision</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin streptomycin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-0002CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI medium 1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875-085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectral Domain Optical Coherence Tomography</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>TEL220C1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 cell culture flasks</td>
			<td>Greiner Bio-One&#160;</td>
			<td>658175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trastuzumab</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Remnant clinical samples of Trastuzumab were used in this study, generously gifted by the Albany Medical College Pharmacy.&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-destructive evaluation of regional cell density within tumor aggregates following drug treatment

Çok hücreli tümör sferoidi (MCTS) modelleri, kanser progresyonu ve ilaç keşfinin in vitro çalışması için artan yararlılık göstermiştir. Bu nispeten basit avasküler yapılar, 3D yapı ve patofizyolojik gradyanlar gibi in vivo tümörlerin kilit yönlerini taklit eder. MCTS modelleri, küresel gelişim sırasında ve ilaçlara yanıt olarak kanser hücresi davranışı hakkında fikir verebilir; ancak, gerekli boyutları, tahribatsız değerlendirme için kullanılan araçları büyük ölçüde sınırlar. Optik Koherens Tomografi yapısal görüntüleme ve Imaris 3D analiz yazılımı, MCTS'lerde bölgesel hücre yoğunluğunun hızlı, tahribatsız ve etiketsiz ölçümü için araştırılmıştır. Bu yaklaşım, MCTS'leri 4 günlük bir olgunlaşma süresi boyunca ve klinik olarak ilgili bir anti-HER2 ilacı olan Trastuzumab ile genişletilmiş 5 günlük bir tedavi boyunca değerlendirmek için kullanılır. Kısaca, AU565 HER2 + meme kanseri MCTS'leri, farklı morfolojilerin agregalarını (sırasıyla daha kalın, disk benzeri 2.5D agregaları veya düz 2D agregaları) keşfetmek için Matrigel (bir bazal membran matrisi) ilavesi olsun veya olmasın sıvı kaplama yoluyla oluşturuldu. Dış bölge, geçiş bölgesi ve iç çekirdek içindeki hücre yoğunluğu, olgunlaşmış MCTS'lerde karakterize edildi ve çekirdek bölgelerde dış katmanlara kıyasla daha yüksek hücre yoğunluklarına sahip bir hücre yoğunluğu gradyanı ortaya çıkardı. Matris ilavesi hücre yoğunluğunu yeniden dağıttı ve bu gradyanı geliştirdi, dış bölge yoğunluğunu azalttı ve çekirdeklerdeki hücre sıkıştırmasını artırdı. İlaç yanıtındaki potansiyel bölgesel farklılıkları değerlendirmek için giderek daha derin 100 μm bölgelerinde ilaç tedavisini takiben hücre yoğunluğu (0 saat, 24 saat, 5 gün) ölçüldü. Son zaman noktasında, neredeyse tüm hücre ölümünün her bir agreganın dış 200 μm'si ile sınırlı olduğu görülürken, agreganın derinliklerindeki hücreler büyük ölçüde etkilenmemiş görünüyordu ve muhtemelen ilaç penetrasyonundaki sınırlamalar nedeniyle ilaç yanıtındaki bölgesel farklılıkları gösteriyordu. Mevcut protokol, yoğun hücresel dokulardaki bölgesel hücre yoğunluğunu tahribatsız bir şekilde ölçmek ve uzunlamasına ölçmek için benzersiz bir teknik sağlar.

Önceki bir yayında,10 Ekim kullanılarak hücresel agregalar içindeki küresel hücre yoğunluğunun tahribatsız ölçümü için bir yöntem oluşturulmuştur. Burada, bu teknik, gelişmekte olan hücre agregalarının bölgesel hücre yoğunluğunu değerlendirmek için genişletilmiştir. Şekil 1, hücre yoğunluğunun, Şekil 1B, C'deki sarı dairelerle gösterilen küçük (100 μm çapında) küresel tıkaçlar...

Watch this Scientific Journal Video about Non-Destructive Evaluation of Regional Cell Density Within Tumor Aggregates Following Drug Treatment at JoVE.com

Non-Destructive Evaluation of Regional Cell Density Within Tumor Aggregates Following Drug Treatment

Mevcut protokol, 3D tümör agregalarında hızlı, tahribatsız ve etiketsiz bölgesel hücre yoğunluğu ve canlılık ölçümü için görüntü tabanlı bir teknik geliştirmektedir. Bulgular, çekirdek bölgelerde agregaların geliştirilmesinde dış katmanlardan daha yüksek hücre yoğunluklarına ve Trastuzumab ile tedavi edilen HER2 + agregalarında ağırlıklı olarak periferik hücre ölümüne sahip bir hücre yoğunluğu gradyanı ortaya koymuştur.

İlaç Tedavisini Takiben Tümör Agregaları İçindeki Bölgesel Hücre Yoğunluğunun Tahribatsız Değerlendirilmesi

Multicellular tumor spheroid (MCTSs) models have demonstrated increasing utility for in vitro study of cancer progression and drug discovery. These ...

Bu protokol, tümör modeli progresyonu hakkında tahribatsız bir şekilde bilgi sağlar. Ayrıca, yaş eşleşmesi örneklerine güvenmek yerine, tekil agregalar içindeki tüm ilaç rejimleri boyunca terapötik yanıtın göstergelerini verir. Agregalar içinde hücre yoğunluğu ve canlılık elde etmek için kullanılan geleneksel yöntemler, numune fiksasyonu ve kesitleme gerektirirken, bizimki verileri tahribatsız bir şekilde sağlar.Böylece, değişiklikler zaman içinde tek bir toplama içinde izlenebilir. Bu tekniğin, agrega modellerinin gizli bölgelerinde ilaç yanıtı hakkındaki anlayışımızı geliştirmesi ve bu modellerin in vivo yanıtları ve ilaç tarama uygulamalarını ne kadar iyi yansıttığına dair etkileri olması beklenmektedir. Başlamak için, standart koşullarda istenen hücre hatlarının% 70 ila% 90 birleşimli hücre kültürlerini hazırlayın.Standart tripsinizasyon yöntemini izleyerek kültür şişelerinden ayrılan hücre monokatmanları, hücre süspansiyonunu bir santrifüj tüpüne ekler. Bir hemositometreye hücre süspansiyonunun 10 mikrolitresini ekleyin ve süspansiyondaki hücre sayısını belirlemek için mikroskopi yoluyla sayın. Pelet hücreleri santrifüjleme yoluyla ve ortamdaki hücreleri mililitre başına 2,5 kat 10 ila beşinci hücreler arasında istenen konsantrasyonda yeniden askıya alır.Bodrum membran matrisi ile hazırlanan süspansiyonlar için, matris şişesini eksi 20 santigrat derece depodan çıkarın ve gece boyunca çözülmesi için buzdolabına yerleştirin. Büyüme ortamı içeren bir kap hazırlayın ve soğutmak için 10 dakika soğutun. Dondurulmuş bir pipet ucu kullanarak, matrisi soğutulmuş ortama ekleyin, böylece bu çözeltinin son konsantrasyonu% 5 olacaktır Bu ortamın 50 mikrolitresini, yuvarlak tabanlı, yapışmaz 96 delikli bir plakanın her bir kuyucuğuna ekleyin, böylece bu kuyucuklardaki matrisin son konsantrasyonu, hücre süspansiyonunun eklenmesini takiben% 2,5 olacaktır.Matrissiz hazırlanan süspansiyonlar için, her bir kuyucuğa 50 mikrolitre düz büyüme ortamı ekleyin. Her bir kuyucuğa 50 mikrolitre hücre süspansiyonu dağıtın. Her bir kuyucuğun dibinde bir hücre peletinin toplanmasını sağlamak için tohumlamanın hemen ardından oda sıcaklığında 10 dakika boyunca plakaları 123 G'de santrifüj yapın.Yapısal görüntüleme için bir OCT sistemi kullanın. Yüksek çözünürlüklü görüntü toplama için A tarama hızını 5,5 kilohertz olarak ayarlayın. Sıvı ortamdaki numuneler için kırılma indeksini 1,33'e ayarlayın.Ekranın sağ tarafındaki görüntü parametreleri penceresinde, X, Y ve Z değerlerini girerek görüş alanını, örneğin bu ilgi alanı içinde kapsanacak şekilde ayarlayın. 3D Alma Modu'na tıklayın ve ardından örneğin 3D hacim taramasını toplamak için Kaydet'e tıklayın. Birim yeniden yapılandırması oluşturmak için Imaris'i açın ve arenalarındaki dönüştürülmüş TIF dosyasına gidin.Düzenlemeye gidin, ardından Görüntü Özellikleri'ne tıklayın ve OCT görüntüsündeki voksel boyutunu ilgili XYZ kutularına girin. Ardından, Tamam'a tıklayın. Nesneler ağacının üstündeki Yeni Yüzeyler Ekle'ye tıklayın. Ağacın altındaki menüde, Otomatik Oluşturmayı Atla üzerine tıklayın ve manuel olarak düzenleyin.Ekran ayarlama penceresinde, örnek ile arka plan arasındaki kontrastı artırmak ve örnek görselleştirmeyi geliştirmek için kırmızı ve siyah okları manuel olarak kaydırın. Dilim konumunu, numunenin bir kenarındaki dilime ayarlayın. Fareyi gezinme modundan seçim moduna değiştirmek için escape tuşunu kullanın ve ardından Draw'a tıklayın.Sinyali görüntüleyen bölgenin anahattını manuel olarak izleyin. Giriş kutusuna bir sonraki konumu girerek dilim konumunu ilerletin. Bu sonraki pozisyon, numunede bir öncekinden daha fazla 100 dilime eşit veya daha az olmalıdır.Sinyali görüntüleyen bölgeyi manuel olarak izleyin. Bu adımı, numunenin karşı kenarına ulaşılana kadar numunenin kalınlığı boyunca tekrarlayın. Ardından, bu dilimleri bir araya getirmek için Yüzey Oluştur'a ve sol menüye tıklayın.Son olarak, Düzenle'ye tıklayın, ardından Maske Seçimi'ne tıklayın, ardından ses yeniden yapılandırmasını tamamlamak için Tamam'a tıklayın. Örneğin, toplam hücre yoğunluğunu elde etmek için Yeni Noktalar Ekle'yi seçin. Algoritma ayarları menüsünde tüm kutuların seçimini kaldırın.Kaynak kanal ekranına gitmek için mavi oka tıklayın. Görüntülenen açılır menüden Maskelenmiş Kanal'ı seçin. XY çap kutusuna numunenin ortalama hücre çapını girin.Arka plan çıkarma işleminin işaretli olduğundan emin olun. Sınıflandırma noktasının ekranına gitmek için mavi oka tıklayın. Menünün altındaki grafikte, sarı eşiğin sol kenarını tıklayıp grafiğin sol kenarına sürükleyerek tüm nesnelerin sarı gölgeli eşiğe dahil edilmesini sağlayın.Ardından spot oluşturmayı tamamlamak için yeşil oka tıklayın. İstatistikler'e tıklayarak tanımlanan nesnelerin sayısını elde edin. Ardından Genel'e tıklayın ve son olarak Toplam Nokta Sayısı'na tıklayın.Oluşturulan yüzeye tıklayın ve yüzeyler stil kalitesi sekmesine gidin. En iyi görünürlük için seçimi Merkez Noktası olarak değiştirin ve piksel genişliğini 20'ye eşit olacak şekilde değiştirin. İstatistikler'e gidin.Ardından Ayrıntılı'yı ve ardından Konum'u tıklayın ve konumu orta noktaya kaydedin. Nesne ağacının üstündeki menüden Yeni Referans Çerçevesi Ekle'yi seçin. Menüdeki X, Y işaretinin yanındaki görünür ve sabit kutuları işaretleyin.Referans çerçevesi simgesinin ortasını, orta noktayla aynı hizada olacak şekilde tıklatın ve sürükleyin. Görünür XY ve düzeltme kutularının seçimini kaldırın ve XZ için seçin. Bir kez daha, referans çerçevesi simgesinin merkezini tıklayın ve merkez noktasıyla aynı hizada olacak şekilde sürükleyin. Son olarak, referans çerçevesi merkez noktasıyla mükemmel bir şekilde hizalanana kadar bu üç sabit düzlem arasında geçiş yaparak YZ düzlemi için bunu tekrarlayın.Nesne ağacındaki referans çerçevesine çift tıklayın ve ortasını veya benzerini yeniden adlandırın. Oluşturulan noktalara tıklayın ve İstatistikler'e gidin. Ardından Ayrıntılı'yı ve ardından Konum Referans Çerçevesi'ni tıklayın.En yüksek değerden en düşük değere doğru sıralanana kadar X pozisyonu referans çerçevesine tıklayın. Agregaların yarıçapını elde etmek için en yüksek değeri kaydedin. İlgilenilen ek yerleri belirlemek için el ile hesaplamalar yapın.Bunu yapmak için, X merkez değerine 100 mikrometre ekleyin ve ardından merkez eksen boyunca ilk konumu tanımlamak için merkez noktasının Y ve Z değerlerini kullanın. Yeni Noktalar Ekle'yi seçin. Ardından Otomatik Oluşturma Düzenlemesini El İle Atla'yı seçin.Klavyedeki shift düğmesini basılı tutun ve yeni bir nokta yerleştirmek için ekranda herhangi bir yeri tıklatın. İlgilenilen ilk konum için XYZ pozisyon değerlerini girin. Ardından Yeni Referans Çerçevesi Ekle'yi seçin ve noktanın üzerine hizalayın.Her sıralı X konumuna 100 mikrometre ekleyin. Son referans çerçevesini, numunenin dış yarıçapından 50 mikrometreye eşit olandan daha az bir mesafeye yerleştirin. Oluşturulan noktalara tıklayın ve İstatistikler'e gidin.Menünün sağ alt köşesinde, Tüm İstatistikleri Dosyaya Aktar'ı tıklayın ve verileri bir e-tabloya kaydedin. E-tabloyu açın. Kaynak referans çerçevesinden uzaklık sekmesine gidin.Her mesafeyi karşılık gelen referans çerçevesine sayısal olarak atamak için mod işlevini kullanın. Her referans çerçevesindeki mesafelerle çalışmak için bu sütundaki değerleri filtreleyin. Referans çerçevelerinin her biri için, COUNTIF işlevini kullanarak çerçevenin 50 mikrometre içindeki nesnelerin sayısını hesaplayın.Elde edilen değer, bu bölgesel fişteki hücre sayısına karşılık gelir. Hücre yoğunluğunu elde etmek için bu değeri 100 mikrometre fişinin hacmine bölün. Student's T testi, sferoid çekirdekte MDA-MB-231 sferoid modelleri için geçiş ve dış katmanlardan önemli ölçüde daha yüksek hücre yoğunluğu ortaya koymuştur.Sonuç, dört gün sonra bu küresel çekirdekte sıkışmayı gösterir. Hem AU565 hem de MDA-MB-231 agrega modellerinde, matrisin eklenmesi hacmi veya hücre sayısını etkilemiyor gibi görünmektedir ve bu nedenle hücre proliferasyonu üzerinde ihmal edilebilir bir etkiye sahip gibi görünmektedir. Daha ziyade, matris ilavesi, hücre yoğunluğunu yeniden dağıtarak önemli çekirdek sıkıştırmasını teşvik ediyor ve dış katmanlardaki hücre yoğunluğunu azaltıyor gibi görünmektedir.Bu bulgular, matrisin farklı meme kanseri hücre hatlarında hücre agregasyonunu sağladığı fiziksel mekanizmalar hakkında değerli bilgiler sağlar. Daha sonra matriks ile hazırlanan AU565 tümörleri sferoidine bakıldığında, olgunlaşmış agregalar trastuzumab ile tedavi edildi ve bölgesel hücre yoğunluğu beş günlük bir ilaç rejimi ile değerlendirildi. Tapalar, agregaların kalınlığı boyunca her 100 mikrometrede bir ayarlandı.Hücre yoğunluğundaki küçük dalgalanmalar, her bir agreganın iç 500 mikrometresinde zaman içinde minimal hücre ölümünü gösteren küçük dalgalanmalar gözlendi. Hücre ölümünün çoğunlukla tümör sferoidlerinin dış katmanlarında gösterge ilaç yanıtı olarak görselleştirilmesi, trastuzumabın ilaç penetrasyon sorunları ile tutarlıdır. Artık yapıdan ödün vermeden agregalardaki hücre canlılığını tahribatsız bir şekilde ölçebiliyoruz.Bu, aday anti-kanser ilaçlarının temporal ve penetrasyon niteliklerini tanımlamak için tekil tümör agregalarında uzunlamasına ilaç yanıtının değerlendirilmesini sağlar.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Sample Extraction and Simultaneous Chromatographic Quantitation of Doxorubicin and Mitomycin C Following Drug Combination Delivery in Nanoparticles to Tumor-bearing Mice

Örnek çıkarma ve eşzamanlı Kromatografik Nefelometri doksorubisin ve ilaç kombinasyonu dağıtımında nano tanecikleri tümörü taşıyan fareler takip Mitomycin C

Combination chemotherapy is frequently used in the clinic for cancer treatment; however, associated adverse effects to normal tissue may limit its ...

Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

Yüksek işlem hacmi üç boyutlu tümör pulcuklarının nesil uyuşturucu taraması

Cancer cells have routinely been cultured in two dimensions (2D) on a plastic surface. This technique, however, lacks the true environment a tumor mass is ...

Evaluation of the Feasibility, Safety, and Accuracy of an Intraoperative High-intensity Focused Ultrasound Device for Treating Liver Metastases

Fizibilite, Emanet ve intraoperatif bir yoğun doğruluğunu karaciğer metastaz tedavisi için ultrason cihazı odaklı

Today, the only potentially curative option in patients with colorectal liver metastases is surgery. However, liver resection is feasible in less than 20% ...

Neutrophil Extracellular Traps Generated by Low Density Neutrophils Obtained from Peritoneal Lavage Fluid Mediate Tumor Cell Growth and Attachment

Düşük yoğunluklu nötrofil tarafından oluşturulan nötrofil hücre dışı tuzakları Peritoneal lavaj sıvı aracılık tümör hücre büyümesini ve eki elde

Activated neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which can capture and destroy microbes. Recent studies suggest that NETs are involved ...

Paramyxoviruses for Tumor-targeted Immunomodulation: Design and Evaluation Ex Vivo

Paramyxovirusler Immunomodulation tümör hedefli için: tasarım ve değerlendirme Ex Vivo

Successful cancer immunotherapy has the potential to achieve long-term tumor control. Despite recent clinical successes, there remains an urgent need for ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Skuamöz Hücre Karsinomu Hücre Tümörü bağışıklık profil oluşturma için fareler ve tedaviye yanıt değerlendirme intramucosal aşı

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vitro Tumor Cell Rechallenge For Predictive Evaluation of Chimeric Antigen Receptor T Cell Antitumor Function

Vitro tümör hücre Rechallenge içinde akıllı Chimeric antijen reseptör T hücre antitümör işlevi değerlendirilmesi için

The field of chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy is rapidly advancing with improvements in CAR design, gene-engineering approaches and ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Zebrabalığında Primer Hasta Kaynaklı Tümör Xenograftların İlaç Taraması

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

İnsan Meme Kanseri Kök Hücrelerinin Hücre ve Doku Örneklerinden İzolasyonu ve Fonksiyonel Değerlendirmesi

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...