Name: non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Vi er taknemmelige for finansiering fra NCI Ovarian Cancer SPORE Program P50CA228991, postdoktoralt træningsprogram 5T32OD011089 og Richard W. TeLinde Endowment, Johns Hopkins University. Projektet blev også delvist finansieret af tilskud til løbende udgifter til private højere læreanstalter fra Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan.

Alle procedurer og eksperimenter med mus blev udført i henhold til protokoller godkendt af Johns Hopkins Animal Care and Use Committee. Til alle procedurer blev der anvendt passende personlige værnemidler, herunder handsker og engangsisolationskitler. Der blev taget forholdsregler ved håndtering af skarpe genstande, som blev bortskaffet korrekt i beholdere med røde skarpe genstande umiddelbart efter brug. Se materialefortegnelsen for detaljer om alle materialer og udstyr, der anvendes i denne protoko...

<ol>
	<li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents:+an+update.">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5 (2020).</li><li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology.">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125 (2020).</li><li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk.">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research:+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging.">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238 (2012).</li><li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer.">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research:+A+review+of+examples,+options,+and+resources.">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li><li>Peterson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuing+education+course+#1:+Non-invasive+imaging+as+a+problem-solving+tool+and+translational+biomarker+strategy+in+toxicologic+pathology.">Continuing education course #1: Non-invasive imaging as a problem-solving tool and translational biomarker strategy in toxicologic pathology.</a> Toxicologic Pathology. 39 (1), 267-272 (2011).</li><li>Pfeifer, L. F., Adams, G. P., Pierson, R. A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy:+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals.">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li><li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis.">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li><li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106 (2009).</li><li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model.">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li><li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse.">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats.">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038 (2017).</li><li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming.">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717 (2020).</li><li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer:+Insights+from+a+new+mouse+model.">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144 (2021).</li></ol>

Denne protokol undersøger nytten af ultralyd til vurdering af livmodermorfologiske ændringer i progressionen af adenocarcinom i livmoderen hos mus. I denne undersøgelse, ved at følge induktionen af endometriecancer hos mus i længderetningen, viste de anatomiske detaljer detekteret ved ultralyd sig at være indikatorer for grov og histologisk patologi. Dette åbner døren for brugen af langsgående undersøgelser med mindre antal mus overvåget af ultralyd på flere tidspunkter for at følge udviklingen af livmoderkr...

Mus er fortsat en af de vigtigste dyremodeller for reproduktionsforstyrrelser 1,2,3. Der er flere genetisk modificerede eller inducerede gnavermodeller af kræft i æggestokkene og livmoderen. Disse undersøgelser er typisk afhængige af flere kohorter, der aflives på forskellige tidspunkter for at fange langsgående tendenser i morfologiske og patologiske ændringer. Dette forhindrer evnen til at erhverve kontinuerlige data om kræftudvikling i en individuel mus. Uden at kende den enkelte musesygdoms progressionstilstand er interventionsstudierne desuden baseret på forudbestemte tidspunkter og gennemsnitlige fund fra tidligere kohorter snarere end individuelle tærskler for påvisning af progression i et specifikt dyr 4,5. Derfor er der behov for billeddannelsesmetoder, der muliggør langsgående vurdering i levende dyr, for at lette prækliniske modeller til test af nye lægemidler eller forbindelser og fremskynde forståelsen af patobiologi og samtidig øge stringensen og reproducerbarheden6.
Ultralydsbilleddannelse (US) er en tiltalende metode til langsgående overvågning af muselivmoderkræftprogression, fordi den er relativt let og billig sammenlignet med andre billeddannelsesmetoder, er let at udføre og kan have bemærkelsesværdig opløsning 6,7. Denne ikke-invasive modalitet kan fange funktioner til mikronskalaen hos vågne mus eller med mus under kort sedation ved hjælp af en 5-10 minutters eksamen. Ultralydmikroskopi er blevet valideret som en metode til måling af musens ovariefollikeludvikling 8 og væksten af implanteret eller induceret neoplasi 9,10,11. Højfrekvent ULer også blevet anvendt til perkutane intrauterin injektioner12 og observation af rotteuterin ændring i løbet af østruscyklussen13. Højfrekvent US kan bruges med mus, der holdes på specialiserede stationære platforme ved hjælp af et skinnesystem til at holde transduceren / sonden for at optage billeder i høj opløsning med standardiseret position og tryk; Dette udstyr er dog ikke tilgængeligt på alle institutioner. Håndholdte transducerscanningsmetoder kan anvendes med mindre dedikeret udstyr og anvendes til både klinisk diagnostik og forskningsapplikationer i mus.
Spørgsmålet er stadig, om amerikansk billeddannelse med håndholdte, højfrekvente sonder kan bruges til at overvåge livmoderkræftudvikling over flere uger. I lighed med tarmene er gnaverlivmoderen en tyndvægget, slank struktur, der er meget mobil i maven og er sammenhængende gennem flere vævsdybder, hvilket gør billeddannelse mere udfordrende end med relativt immobile organer som nyrerne. Denne undersøgelse søgte at fastslå sammenhængen mellem væv observeret ved ultralyd og histopatologi, definere landemærker til lokalisering af muselivmoderen og bestemme gennemførligheden af den langsgående vurdering af endometriecancer. Denne undersøgelse præsenterer data, der viser en kvalitativ korrespondance mellem udseendet af uteri afbildet af US og histopatologi samt seriel billeddannelse af mus over flere uger. Disse resultater indikerer, at håndholdt ULkan bruges til at overvåge endometriecancerudvikling hos mus, hvilket skaber mulighed for at indsamle individuelle musens langsgående data for at studere livmoderkræft uden behov for dedikeret udstyr.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Animal Care</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td>
			<td>Envigio</td>
			<td>TD.01306</td>
			<td>Mouse Feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL injectable 0.9% NaCl&#160;</td>
			<td>Hospira, Inc</td>
			<td>RL-7302</td>
			<td>Isotonic Fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Pad with Plastic Backing</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF8313</td>
			<td>Absorbant Pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Induction Chambers</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2029</td>
			<td>Induction Chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, &#38; adapters</td>
			<td>CWE, Inc</td>
			<td>13-20000</td>
			<td>Nose Cone and Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter)</td>
			<td>Parker Laboratoies</td>
			<td>08-03</td>
			<td>Ultrasound Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak 3 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309657</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/Air Scavenger Charcoal Canister</td>
			<td>OMNICON</td>
			<td>80120</td>
			<td>Scavenging System for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>502017</td>
			<td>Anesthesia Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>Scivena Scientific</td>
			<td>M1050</td>
			<td>Anestheic Vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>MX550S</td>
			<td>Ultrasound Transducer (Probe)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Aloe &#38; Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Depilliating Cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td>
			<td>Philips North America</td>
			<td>MG7750</td>
			<td>Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide 25 G 1&#34; Needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td>Lubricating Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Ultrasound Machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>Ultrasound Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15&#34;</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>731-500-000R</td>
			<td>Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wd Elements 2TB Basic Storage</td>
			<td>Western Digital Elements</td>
			<td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td>
			<td>Data Storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% w/v Formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td>Tissue Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U.</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>&#160;SP5035</td>
			<td>Antibody Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged Super Frost Plus Glass Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4831-703</td>
			<td>Tissue Mounting Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>&#160;C9999-1000ML</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal &#8211; 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td>Resin for Slide Sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Glass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3322</td>
			<td>Coverslide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Modified Hematoxylin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td>Counterstain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>13-247-30Q</td>
			<td>Oven to Melt Parraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP)</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td>Signal Development Substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>MP-7451</td>
			<td>Secondary IHC Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oster 5712 Digital Food Steamer</td>
			<td>Oster</td>
			<td>5712</td>
			<td>Vegetable Steamer for Epitope Retrival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-ARID1a</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab182560</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9559</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotts Tap Water Substitute</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>S5134-100ML</td>
			<td>&#34;Blueing&#34; Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path IV Cassette</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>22272416</td>
			<td>Tissue Fixation Cassette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trilogy Buffer</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>&#160;920P-10</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice

Livmoderkræft kan undersøges hos mus på grund af den lette håndtering og genetiske manipulation i disse modeller. Imidlertid er disse undersøgelser ofte begrænset til at vurdere patologi post mortem hos dyr, der aflives på flere tidspunkter i forskellige kohorter, hvilket øger antallet af mus, der er nødvendige for en undersøgelse. Billeddannelse af mus i longitudinelle undersøgelser kan spore sygdomsudviklingen hos individuelle dyr, hvilket reducerer antallet af mus, der er nødvendige. Fremskridt inden for ultralydsteknologi har gjort det muligt at detektere ændringer på mikrometerniveau i væv. Ultralyd er blevet brugt til at studere follikelmodning i æggestokke og xenograftvækst, men er ikke blevet anvendt til morfologiske ændringer i muselivmoderen. Denne protokol undersøger sammenstillingen af patologi med in vivo billeddannelsessammenligninger i en induceret endometriecancermusemodel. De funktioner, der blev observeret ved ultralyd, var i overensstemmelse med graden af ændring set ved grov patologi og histologi. Ultralyd viste sig at være meget forudsigelig for den observerede patologi, hvilket understøtter inkorporeringen af ultralyd i langsgående undersøgelser af livmodersygdomme som kræft hos mus.

Pax8-Cre-Arid1a-Pten transgene mus med dobbelt deletion (iPAD) blev opretholdt på en blandet genetisk baggrund (129S, BALB/C, C57BL/6), som tidligere beskrevet14. Musene blev alle fodret med et doxycyclinfoder i 2 uger for at inducere Cre-rekombinase. I tidligere arbejde fra vores gruppe blev doxycyclin doseret med sonde14; I denne aktuelle undersøgelse fungerede doxycyclinfødeinduktionsmetoden imidlertid effektivt og reducerede stresset af sonde for mu...

Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

Denne protokol beskriver en metode til overvågning af progressionen af morfologiske ændringer over tid i livmoderen i en inducerbar musemodel af endometriecancer ved hjælp af ultralydsbilleddannelse med korrelation til grove og histologiske ændringer.

Ikke-invasiv ultralydsvurdering af endometriecancerprogression i Pax8-rettet deletion af tumorsuppressorerne Arid1a og Pten hos mus

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Denne undersøgelse viser, at manuel guidet ultralyd er velegnet til at overvåge udviklingen af livmoderpatologi i en induceret musemodel af endometriecancer. Ultralydsbilleddannelse er ikke-invasiv og giver således mulighed for langsgående undersøgelser af individuelle mus på tværs af dage og uger. Dette giver mulighed for at fange individuel variation og i sidste ende for færre dyr, der skal bruges til undersøgelse.Denne metode kan let anvendes til at overvåge patologiske ændringer og andre spejlingsmodeller, herunder dem til neoplasi og kronisk sygdom i urinvejen og fordøjelseskanalen. Begynd at oprette ultralydsmaskinen til billeddannelse af livmoderen eller æggestokken ved at vælge en transducer eller sonde med en rækkevidde på 32 til 56 megahertz. Gå til fanen Applikationer fra startskærmen, og vælg Mouse Small Abdomen Mode.Klik derefter på Scan for at vende tilbage til startskærmen og vente på, at et levende billede vises. Vælg derefter B-tilstand fra indstillingerne i venstre værktøjslinje, før du klikker på Flere kontroller mulighed for at se yderligere værktøjer til billedforfining, såsom billedforstærkning og dybde eller for at justere indstillingerne for klipoptagelse, såsom antallet af billeder pr. Sekund. Når billedindstillingerne er valgt, skal du vende tilbage til startskærmen ved at klikke på B-tilstand.Placer en sprøjte på tre til 10 ml fyldt med en steril isotonisk væskeopløsning mellem en varmepude og en absorberende pude i flere minutter for at forvarme den til 35 til 40 grader Celsius. Hvis maskinen ikke har en varmere, skal du placere en flaske ultralydsgel på varmepuden. For at injicere en til to ml opløsning i musens peritoneale hulrum skal du sikre musen ved skrubben i den ene hånd og udsætte ventrummet.Hold derefter musen i en vinkel på ca. 20 grader med næsen pegende mod gulvet. Indsæt en 25-gauge tuberkulin sprøjtenål gennem huden og abdominalvæggen i den kaudale højre kvadrant i maven. For at undgå injektion i vaskulaturen eller mavetarmkanalen skal du trække sprøjtestemplet tilbage med minimalt tryk for at lede efter blod.Placer musen i ventral liggende stilling på den absorberende pude over en varmepude, før du sikkert placerer en gnavernæsekegle over musens næse og næseparti. Placer en lille mængde forvarmet ultralydsgel abaxial til rygsøjlen på hver side af den bedøvede mus mellem det sidste ribben og bækkenet. Sæt en lille mængde gel på ultralydssonden.Placer derefter sonden parallelt med ryghvirvlerne med forsiden af sonden på kraniesiden. Med en mus i ventral liggende skal du langsomt scanne området for nyrens vartegn. Med nyren i betragtning skal du trække sonden kaudal for at finde æggestokken, som er en let hyperechoisk oval til rund struktur i en meget hyperechoisk ovariefedtpude, omgivet af kranial-ventralt ved nyrerne og dorsal-lateralt ved den dorsale abdominalvæg.Forbedre billedkontrasten ved at justere signalforstærkningen ved hjælp af skyderen nederst på kontrolskærmen. For at forbedre billeddannelsen af nyrerne skal du lægge pres på den kontralaterale mave ved hjælp af en finger. Varier trykket og vinklen fra parallelt med rygsøjlen til ca. 20 grader ventral.Når interesseorganet er synligt, skal du optage en video ved at klikke på Gem klip eller Start optagelse. Når du er færdig, skal du klikke på Stop optagelse for at bevare billeder med et forudindstillet antal rammer. Hold sonden kausalt, indtil æggestokken er i det mest kraniale aspekt af synsfeltet.Varier sondens tryk og vinkel for at se og afbilde livmoderen. Gentag video- og rammesamling for hvert organ af interesse. Find livmoderen, der løber i længderetningen langs den dorsale abdominalvæg med sidebenmuskulaturen i udsigt.Overvåg vævet for en peristaltisk bevægelse for at differentiere tarmsløjferne fra livmoderens stationære horn. Placer musen i dorsal liggende for at samle billederne fra en ventral tilgang. Sørg for, at øjensmøringen er tilstrækkelig, og at næsepartiet er fastgjort i næsekeglen.Påfør en lille mængde forvarmet ultralydgel på den ventrale mave, inden sonden påføres ved pubis midterlinje og kranial for at lokalisere blæren som et hypoechoisk vartegn. For at finde livmoderhornene skal du trække sonden lateralt til blæren. Påfør let digitalt tryk fra den ene eller begge sider af musen.Når livmoderhornene er i synsfeltet, skal du holde sonden vinkelret på musen og scanne begge sider af maven for at fange tværgående billeder af begge horn. Drej sonden for at fange sagittale synspunkter. Efter ultralydet skal du tørre musen med et papirhåndklæde, før du returnerer det til buret for at komme sig.Når musen er helt vågen efter to til fem minutter, skal du returnere musen til dyrerummet. Ultralydsbilledsammenligningen af musens bughule før og efter saltvandsinjektionen viste den forbedrede visualisering af abdominale organer, herunder livmoderen og æggestokkene efter saltvandsinjektionen. En ventral tilgang blev brugt til at studere tværsnittene af livmoderhornene ved siden af den hypoechoiske blære.Immunhistokemi med antistoffer rettet mod Arid1a og Pten blev brugt til at studere det tilstrækkelige tumorsuppressorproteintab opnået i livmoderepitelcellerne sammenlignet med det nærliggende stromale væv. Ultralydbilleder af en muselivmoder med tidlige patologiske ændringer blev påvist efter tre ugers doxycyclinbehandling, der viser livmoderens hypoechoiske og dilaterede lumen. I den grove patologi og histopatologiske undersøgelse af den samme livmoder blev der observeret henholdsvis en mindre, men udvidet tyndvægget livmoder og tidlig endometriehyperplasi med bevarelse af det særskilte lumen.Musene, der blev aflivet på senere tidspunkter, viste større livmoder med et mindre lumen og en fortykket væg. Når man lærer at bruge manuel placering af sonder, kan overdreven tryk eller hurtig bevægelse gøre organidentifikation vanskelig. Brug blide, bevidste bevægelser og fokuser først på at identificere de organer, der er vartegn.Ved undersøgelsens endepunkt ofres mus, og væv indsamles for at bekræfte genknockdown og karakterisere vævsændringer. Denne teknik gør det muligt for efterforskere at overvåge intraabdominale læsioner over tid. Og i vores tilfælde brugte vi det til at overvåge livmoderkræftprogressionen i iPad-modellen, som vi derefter bekræftede ved histopatologi.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

Det<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginære Disc Tumor Model: Visualisering og Kvantificering af genekspression og tumorindtrængen Brug Genetic Mosaics

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR vurdering af pH, pO2, Redox Status, og koncentrationen af fosfat og glutathion i Tumor mikromiljø

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

Radionukleid-fluorescens Reporter gen Imaging for at spore Tumor Progression i gnavere Tumor modeller

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Udnyttelse af ultralyd guidede væv-instrueret cellulære Implantation for etablering af biologisk relevante metastatisk Tumor Xenografts

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Berigelse og karakterisering af Tumor immun- og ikke-immune Microenvironments i etablerede subkutane Murine tumorer

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for den genetiske Variation i en sporadisk familiær adenomatøs polypose Patient med formatet Chip i rør

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Intramucosal podning af pladecellekræft celler i mus til Tumor immun profilering og behandling svar vurdering

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

In vivo hæmning af MicroRNA at mindske tumor vækst i mus

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Påvisning af lungetumorprogression hos mus ved ultralydsscanning

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...