Name: non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

We zijn dankbaar voor de financiering van het NCI Ovarian Cancer SPORE Program P50CA228991, postdoctoraal trainingsprogramma 5T32OD011089 en de Richard W. TeLinde Endowment, Johns Hopkins University. Het project werd ook gedeeltelijk gefinancierd door de subsidies voor lopende uitgaven aan particuliere instellingen voor hoger onderwijs van de Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan.

Alle procedures en experimenten met muizen werden uitgevoerd volgens protocollen die zijn goedgekeurd door het Johns Hopkins Animal Care and Use Committee. Voor alle procedures werden geschikte PBM's gedragen, inclusief handschoenen en wegwerpisolatiejassen. Er werden voorzorgsmaatregelen genomen bij het hanteren van scherpe voorwerpen, die onmiddellijk na gebruik op de juiste manier werden weggegooid in rode doos scherpe containers. Zie de Materiaaltabel voor meer informatie over alle materialen en appa...

<ol>
	<li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents:+an+update.">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5 (2020).</li><li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology.">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125 (2020).</li><li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk.">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research:+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging.">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238 (2012).</li><li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer.">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research:+A+review+of+examples,+options,+and+resources.">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li><li>Peterson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuing+education+course+#1:+Non-invasive+imaging+as+a+problem-solving+tool+and+translational+biomarker+strategy+in+toxicologic+pathology.">Continuing education course #1: Non-invasive imaging as a problem-solving tool and translational biomarker strategy in toxicologic pathology.</a> Toxicologic Pathology. 39 (1), 267-272 (2011).</li><li>Pfeifer, L. F., Adams, G. P., Pierson, R. A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy:+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals.">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li><li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis.">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li><li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106 (2009).</li><li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model.">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li><li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse.">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats.">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038 (2017).</li><li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming.">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717 (2020).</li><li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer:+Insights+from+a+new+mouse+model.">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144 (2021).</li></ol>

Dit protocol onderzoekt het nut van echografie voor het beoordelen van baarmoedermorfologische veranderingen in de progressie van adenocarcinoom in de baarmoeder bij muizen. In deze studie, door de inductie van endometriumkanker bij muizen longitudinaal te volgen, bleken de anatomische details gedetecteerd door echografie indicatoren te zijn van grove en histologische pathologie. Dit opent de deur voor het gebruik van longitudinale studies met kleinere aantallen muizen die op meerdere tijdstippen door echografie worden g...

Muizen blijven een van de belangrijkste diermodellen voor voortplantingsstoornissen 1,2,3. Er zijn verschillende genetisch gemodificeerde of geïnduceerde knaagdiermodellen van eierstok- en baarmoederkanker. Deze studies zijn meestal afhankelijk van meerdere cohorten die op verschillende tijdstippen worden geëuthanaseerd om longitudinale trends in morfologische en pathologische veranderingen vast te leggen. Dit voorkomt de mogelijkheid om continue gegevens over de ontwikkeling van kanker in een individuele muis te verkrijgen. Bovendien, zonder de individuele ziekteprogressietoestand van de muis te kennen, zijn interventiestudies gebaseerd op vooraf bepaalde tijdstippen en gemiddelde bevindingen van eerdere cohorten in plaats van individuele drempels voor de detectie van progressie bij een specifiek dier 4,5. Daarom zijn beeldvormingsbenaderingen nodig die longitudinale beoordeling bij levende dieren mogelijk maken om preklinische modellen voor het testen van nieuwe geneesmiddelen of verbindingen te vergemakkelijken en het begrip van pathobiologie te versnellen en tegelijkertijd de striktheid en reproduceerbaarheid te vergroten6.
Echografie (VS) is een aantrekkelijke methode voor de longitudinale monitoring van de progressie van baarmoederkanker bij muizen omdat het relatief gemakkelijk en goedkoop is in vergelijking met andere beeldvormingsmethoden, gemakkelijk uit te voeren is en een opmerkelijke resolutie 6,7 kan hebben. Deze niet-invasieve modaliteit kan kenmerken op micronschaal vastleggen bij wakkere muizen of bij muizen onder korte sedatie met behulp van een examen van 5-10 minuten. Ultrasone microscopie is gevalideerd als een methode om de ontwikkeling van de ovariële follikel bij muizen te meten 8 en de groei van geïmplanteerde of geïnduceerde neoplasie 9,10,11. Hoogfrequente US is ook gebruikt voor percutane intra-uteriene injecties12 en het observeren van de baarmoederverandering van ratten gedurende de oestruscyclus13. Hoogfrequente US kan worden gebruikt met muizen die op gespecialiseerde stationaire platforms worden gehouden met behulp van een railsysteem om de transducer / sonde vast te houden om beelden met een hoge resolutie vast te leggen met gestandaardiseerde positie en druk; Deze apparatuur is echter niet bij alle instellingen beschikbaar. Hand-held transducer scanmethoden kunnen worden toegepast met minder speciale apparatuur en worden gebruikt voor zowel klinische diagnostiek als onderzoekstoepassingen bij muizen.
De vraag blijft of Amerikaanse beeldvorming met handbediende, hoogfrequente sondes kan worden gebruikt om de ontwikkeling van baarmoederkanker gedurende meerdere weken te volgen. Net als de darmen is de baarmoeder van knaagdieren een dunwandige, slanke structuur die zeer mobiel is in de buik en aaneengesloten is door meerdere weefseldiepten, waardoor beeldvorming uitdagender is dan bij relatief onbeweeglijke organen zoals de nieren. Deze studie probeerde de correlatie vast te stellen tussen weefsels waargenomen door echografie en histopathologie, oriëntatiepunten te definiëren voor het lokaliseren van de baarmoeder van de muis en de haalbaarheid van de longitudinale beoordeling van endometriumkanker te bepalen. Deze studie presenteert gegevens die een kwalitatieve overeenkomst laten zien tussen het uiterlijk van uteri in beeld gebracht door de VS en histopathologie, evenals seriële beeldvorming van muizen gedurende meerdere weken. Deze resultaten geven aan dat hand-held US kan worden gebruikt om de ontwikkeling van endometriumkanker bij muizen te volgen, waardoor een mogelijkheid ontstaat voor het verzamelen van individuele longitudinale gegevens van muizen om baarmoederkanker te bestuderen zonder de noodzaak van speciale apparatuur.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Animal Care</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td>
			<td>Envigio</td>
			<td>TD.01306</td>
			<td>Mouse Feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL injectable 0.9% NaCl&#160;</td>
			<td>Hospira, Inc</td>
			<td>RL-7302</td>
			<td>Isotonic Fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Pad with Plastic Backing</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF8313</td>
			<td>Absorbant Pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Induction Chambers</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2029</td>
			<td>Induction Chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, &#38; adapters</td>
			<td>CWE, Inc</td>
			<td>13-20000</td>
			<td>Nose Cone and Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter)</td>
			<td>Parker Laboratoies</td>
			<td>08-03</td>
			<td>Ultrasound Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak 3 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309657</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/Air Scavenger Charcoal Canister</td>
			<td>OMNICON</td>
			<td>80120</td>
			<td>Scavenging System for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>502017</td>
			<td>Anesthesia Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>Scivena Scientific</td>
			<td>M1050</td>
			<td>Anestheic Vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>MX550S</td>
			<td>Ultrasound Transducer (Probe)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Aloe &#38; Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Depilliating Cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td>
			<td>Philips North America</td>
			<td>MG7750</td>
			<td>Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide 25 G 1&#34; Needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td>Lubricating Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Ultrasound Machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>Ultrasound Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15&#34;</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>731-500-000R</td>
			<td>Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wd Elements 2TB Basic Storage</td>
			<td>Western Digital Elements</td>
			<td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td>
			<td>Data Storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% w/v Formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td>Tissue Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U.</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>&#160;SP5035</td>
			<td>Antibody Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged Super Frost Plus Glass Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4831-703</td>
			<td>Tissue Mounting Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>&#160;C9999-1000ML</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal &#8211; 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td>Resin for Slide Sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Glass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3322</td>
			<td>Coverslide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Modified Hematoxylin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td>Counterstain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>13-247-30Q</td>
			<td>Oven to Melt Parraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP)</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td>Signal Development Substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>MP-7451</td>
			<td>Secondary IHC Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oster 5712 Digital Food Steamer</td>
			<td>Oster</td>
			<td>5712</td>
			<td>Vegetable Steamer for Epitope Retrival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-ARID1a</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab182560</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9559</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotts Tap Water Substitute</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>S5134-100ML</td>
			<td>&#34;Blueing&#34; Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path IV Cassette</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>22272416</td>
			<td>Tissue Fixation Cassette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trilogy Buffer</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>&#160;920P-10</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice

Baarmoederkanker kan worden bestudeerd bij muizen vanwege het gemak van hantering en genetische manipulatie in deze modellen. Deze studies zijn echter vaak beperkt tot het beoordelen van pathologie post-mortem bij dieren die op meerdere tijdstippen in verschillende cohorten zijn geëuthanaseerd, waardoor het aantal muizen dat nodig is voor een studie toeneemt. Beeldvormende muizen in longitudinale studies kunnen de progressie van de ziekte bij individuele dieren volgen, waardoor het aantal benodigde muizen wordt verminderd. Vooruitgang in ultrasone technologie heeft de detectie van veranderingen op micrometerniveau in weefsels mogelijk gemaakt. Echografie is gebruikt om follikelrijping in eierstokken en xenograftgroei te bestuderen, maar is niet toegepast op morfologische veranderingen in de baarmoeder van de muis. Dit protocol onderzoekt de juxtapositie van pathologie met in vivo beeldvormingsvergelijkingen in een geïnduceerd endometriumkankermuismodel. De kenmerken waargenomen door echografie waren consistent met de mate van verandering waargenomen door grove pathologie en histologie. Echografie bleek zeer voorspellend te zijn voor de waargenomen pathologie en ondersteunde de opname van echografie in longitudinale studies van baarmoederziekten zoals kanker bij muizen.

Pax8-Cre-Arid1a-Pten double deletion (iPAD) transgene muizen werden gehandhaafd op een gemengde genetische achtergrond (129S, BALB/C, C57BL/6), zoals eerder beschreven14. De muizen kregen allemaal een doxycyclinevoer gedurende 2 weken om Cre-recombinase te induceren. In eerder werk van onze groep werd doxycycline gedoseerd door gavage14; In deze huidige studie werkte de doxycycline-voedingsinductiemethode echter efficiënt en verminderde de stress van de m...

Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

Dit protocol beschrijft een methode voor het monitoren van de progressie van morfologische veranderingen in de loop van de tijd in de baarmoeder in een induceerbaar muismodel van endometriumkanker met behulp van echografie met correlatie met grove en histologische veranderingen.

Niet-invasieve echografie van endometriumkankerprogressie bij Pax8-gerichte deletie van de tumoronderdrukkers Arid1a en Pten bij muizen

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Deze studie toont aan dat handmatig geleide echografie zeer geschikt is om de ontwikkeling van baarmoederpathologie te volgen in een geïnduceerd muismodel van endometriumkanker. Echografie is niet-invasief en maakt dus longitudinale studies van individuele muizen gedurende dagen en weken mogelijk. Hierdoor kan individuele variatie worden vastgelegd en kunnen uiteindelijk minder dieren worden gebruikt voor onderzoek.Deze methode kan gemakkelijk worden toegepast om pathologische veranderingen en andere spiegelmodellen te volgen, waaronder die voor neoplasie en chronische ziekte van het urine- en spijsverteringskanaal. Begin met het instellen van het echografieapparaat voor het in beeld brengen van de baarmoeder of eierstok door een transducer of sonde te selecteren met een bereik van 32 tot 56 megahertz. Ga naar het tabblad Toepassingen in het startscherm en selecteer Muismodus voor kleine buik.Klik vervolgens op Scannen om terug te keren naar het startscherm en wacht tot een live afbeelding wordt weergegeven. Selecteer vervolgens B-modus in de opties op de linkerwerkbalk voordat u op de optie Meer besturingselementen klikt om extra hulpmiddelen voor beeldverfijning weer te geven, zoals beeldversterking en -diepte of om de clipacquisitie-instellingen aan te passen, zoals het aantal frames per seconde. Zodra de afbeeldingsinstellingen zijn geselecteerd, keert u terug naar het startscherm door op B-modus te klikken.Plaats een spuit van drie tot 10 milliliter gevuld met een steriele isotone vloeistofoplossing gedurende enkele minuten tussen een verwarmingskussen en een absorberende pad om deze voor te verwarmen tot 35 tot 40 graden Celsius. Als het apparaat geen warmer heeft, plaatst u een fles ultrasone gel op het verwarmingskussen. Om één tot twee milliliter oplossing in de peritoneale holte van een muis te injecteren, zet u de muis vast bij het nekvel in één hand, waardoor het ventrum wordt blootgesteld.Houd de muis vervolgens in een hoek van ongeveer 20 graden met de neus naar de vloer gericht. Steek een 25-gauge tuberculine spuitnaald door de huid en buikwand van het caudale rechter kwadrant van de buik. Om injectie in de vasculatuur of het maagdarmkanaal te voorkomen, trekt u de zuiger van de spuit met minimale druk terug om naar bloed te zoeken.Plaats de muis in ventrale lighouding op de absorberende pad over een verwarmingskussen voordat u een knaagdierneuskegel veilig over de neus en snuit van de muis plaatst. Plaats een kleine hoeveelheid voorverwarmde ultrasone gel abaxiaal op de wervelkolom aan weerszijden van de verdoofde muis tussen de laatste rib en het bekken. Doe een kleine hoeveelheid gel op de ultrasone sonde.Plaats vervolgens de sonde parallel aan de wervels met de voorkant van de sonde aan de schedelzijde. Met een muis in ventrale lighouding scant u langzaam het gebied voor het nieroriëntatiepunt. Met de nier in het zicht, trek je de sonde caudaal om de eierstok te vinden, een enigszins hyperechoïsche ovale tot ronde structuur binnen een zeer hyperechoïsch ovaal vetkussen, begrensd craniaal-ventraal door de nier en dorsaal-lateraal door de dorsale buikwand.Verbeter het beeldcontrast door de signaalversterking aan te passen met de schuifregelaar onder aan het bedieningsscherm. Om de beeldvorming van de nier te verbeteren, oefent u druk uit op de contra-laterale buik met behulp van een vinger. Varieer de druk en hoek van evenwijdig aan de wervelkolom tot ongeveer 20 graden ventraal.Zodra het orgel van belang in beeld is, legt u een video vast door op Clip opslaan of Opname starten te klikken. Als u klaar bent, klikt u op Opname stoppen om afbeeldingen op een vooraf ingesteld aantal frames te behouden. Houd de sonde caudaal vast totdat de eierstok zich in het meest craniale aspect van het gezichtsveld bevindt.Varieer de druk en hoek van de sonde om de baarmoeder te bekijken en in beeld te brengen. Herhaal video- en frameverzameling voor elk interessant orgaan. Zoek de baarmoeder die in de lengterichting langs de dorsale buikwand loopt met de laterale beenmusculatuur in het zicht.Controleer het weefsel op een peristaltische beweging om de darmlussen te onderscheiden van de stationaire hoorns van de baarmoeder. Plaats de muis in dorsale lighouding om de beelden van een ventrale benadering te verzamelen. Zorg ervoor dat de oogbevochtiging voldoende is en dat de snuit vastzit in de neuskegel.Breng een kleine hoeveelheid voorverwarmde ultrasone gel aan op de ventrale buik voordat u de sonde op de middellijn en het craniaal van de schaamstreek aanbrengt om de blaas als een hypoechoïsch oriëntatiepunt te lokaliseren. Om de baarmoederhoorns te vinden, trekt u de sonde lateraal naar de blaas. Oefen lichte digitale druk uit vanaf een of beide zijden van de muis.Zodra de baarmoederhoorns zich in het gezichtsveld bevinden, houdt u de sonde loodrecht op de muis en scant u beide zijden van de buik om dwarse weergaven van beide hoorns vast te leggen. Draai de sonde om sagittale weergaven vast te leggen. Veeg na de echografie de muis af met een papieren handdoek voordat u deze terugbrengt naar zijn kooi om te herstellen.Zodra de muis na twee tot vijf minuten volledig wakker is, brengt u de muis terug naar de dierenkamer. De echografische beeldvergelijking van de buikholte van de muis voor en na de zoutoplossinginjectie toonde de verbeterde visualisatie van de buikorganen, inclusief de baarmoeder en eierstokken na de zoutoplossinginjectie. Een ventrale benadering werd gebruikt om de doorsneden van de baarmoederhoorns naast de hypoechoïsche blaas te bestuderen.Immunohistochemie met antilichamen gericht tegen Arid1a en Pten werd gebruikt om het adequate tumorsuppressoreiwitverlies te bestuderen dat werd bereikt in de baarmoederepitheelcellen in vergelijking met het naburige stromale weefsel. Echografiebeelden van een baarmoeder van een muis met vroege pathologieveranderingen werden gedetecteerd na drie weken behandeling met doxycycline, waarbij het hypoechoïsche en verwijde lumen van de baarmoeder werd getoond. In de grove pathologie en histopathologiestudie van dezelfde baarmoeder werden respectievelijk een kleinere maar verwijde dunwandige baarmoeder en vroege endometriumhyperplasie met behoud van het afzonderlijke lumen waargenomen.De muizen die op latere tijdstippen werden geëuthanaseerd, vertoonden een grotere baarmoeder met een kleiner lumen en een verdikte wand. Bij het leren gebruiken van handmatige plaatsing van sondes, kan overmatige druk of snelle beweging orgaanidentificatie moeilijk maken. Gebruik zachte, opzettelijke bewegingen en concentreer je eerst op het identificeren van de organen die oriëntatiepunten zijn.Op het eindpunt van de studie worden muizen opgeofferd en wordt weefsel verzameld om gen knockdown te bevestigen en weefselveranderingen te karakteriseren. Met deze techniek kunnen onderzoekers intraabdominale laesies in de loop van de tijd volgen. En in ons geval gebruikten we het om de progressie van baarmoederkanker in het iPad-model te volgen, wat we vervolgens bevestigden door histopathologie.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Tumor Model: visualisatie en kwantificering van genexpressie en Tumor Invasiviteit met behulp van genetische Mozaïeken

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR beoordeling van pH, pO2, Redox Status, en concentraties van fosfaat en glutathion in de communicatie van de Tumor

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

Radionuclide-fluorescentie Reporter Gene Imaging als u wilt bijhouden van de Tumor progressie in knaagdier Tumor modellen

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Gebruik van echografie begeleide weefsel geleide cellulaire implantatie voor de oprichting van biologisch relevante uitgezaaide Tumor Xenografts

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Verrijking en karakterisering van de Tumor immuun en niet-immune Microenvironments in gevestigde subcutane lymfkliertest tumoren

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Digitale Polymerase Chain Reaction Assay voor de genetische variatie in een sporadische familiale adenomateuze Polyposis patiënt met behulp van de Chip-in-a-tube-indeling

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Intramucosal enten van plaveiselcelcarcinoom cellen in muizen voor Tumor immuun profileren en evaluatie van de reactie van de behandeling

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

In vivo remming van MicroRNA te verminderen tumor groei bij muizen

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Detectie van longtumorprogressie bij muizen door echografie

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...