Name: non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00
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Wir sind dankbar für die Förderung durch das NCI Ovarian Cancer SPORE Program P50CA228991, das Postdoktoranden-Trainingsprogramm 5T32OD011089 und die Richard W. TeLinde Endowment, Johns Hopkins University. Das Projekt wurde auch teilweise durch die Subventionen für laufende Ausgaben an private Hochschulen von der Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan finanziert.

Alle Verfahren und Experimente mit Mäusen wurden nach Protokollen durchgeführt, die vom Johns Hopkins Animal Care and Use Committee genehmigt wurden. Für alle Eingriffe wurde geeignete PSA getragen, einschließlich Handschuhen und Einweg-Isolationskitteln. Beim Umgang mit scharfen und scharfen Gegenständen wurden Vorsichtsmaßnahmen getroffen, die sofort nach Gebrauch ordnungsgemäß in Behältern für scharfe Gegenstände entsorgt wurden. In der Materialtabelle finden Sie Details zu allen Materialie...

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	<li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents:+an+update.">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5 (2020).</li><li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology.">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125 (2020).</li><li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk.">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research:+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging.">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238 (2012).</li><li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer.">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research:+A+review+of+examples,+options,+and+resources.">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li><li>Peterson, R. 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A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy:+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals.">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li><li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis.">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li><li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106 (2009).</li><li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model.">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li><li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse.">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats.">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038 (2017).</li><li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming.">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717 (2020).</li><li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer:+Insights+from+a+new+mouse+model.">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144 (2021).</li></ol>

Dieses Protokoll untersucht den Nutzen von Ultraschall zur Beurteilung der morphologischen Veränderungen der Gebärmutter bei der Progression eines Adenokarzinoms in der Gebärmutter bei Mäusen. In dieser Studie wurden durch die Verfolgung der Induktion von Endometriumkarzinomen bei Mäusen in Längsrichtung die durch Ultraschall erfassten anatomischen Details als Indikatoren für grobe und histologische Pathologie identifiziert. Dies öffnet die Tür für den Einsatz von Längsschnittstudien mit einer kleineren Anzahl...

Mäuse sind nach wie vor eines der wichtigsten Tiermodelle für Fortpflanzungsstörungen 1,2,3. Es gibt mehrere genetisch veränderte oder induzierte Nagetiermodelle für Eierstock- und Gebärmutterkrebs. Diese Studien stützen sich in der Regel auf mehrere Kohorten, die zu unterschiedlichen Zeitpunkten euthanasiert wurden, um longitudinale Trends in morphologischen und pathologischen Veränderungen zu erfassen. Dadurch wird verhindert, dass kontinuierlich Daten über die Krebsentwicklung einer einzelnen Maus gewonnen werden können. Darüber hinaus basieren Interventionsstudien ohne Kenntnis des individuellen Krankheitsverlaufs der Maus auf vorgegebenen Zeitpunkten und gemittelten Ergebnissen früherer Kohorten und nicht auf individuellen Schwellenwerten für den Nachweis der Progression bei einem bestimmten Tier 4,5. Daher sind bildgebende Ansätze erforderlich, die eine longitudinale Beurteilung in lebenden Tieren ermöglichen, um präklinische Modelle für die Erprobung neuer Medikamente oder Wirkstoffe zu erleichtern und das Verständnis der Pathobiologie zu beschleunigen und gleichzeitig die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit zu erhöhen6.
Die Ultraschallbildgebung (US) ist eine attraktive Methode für die longitudinale Überwachung der Progression von Gebärmutterkrebs bei Mäusen, da sie im Vergleich zu anderen bildgebenden Verfahren relativ einfach und kostengünstig ist, einfach durchzuführen ist und eine bemerkenswerte Auflösung aufweisen kann 6,7. Diese nicht-invasive Modalität kann Merkmale im Mikrometerbereich bei wachen Mäusen oder bei Mäusen unter kurzer Sedierung mit einer 5-10-minütigen Untersuchung erfassen. Die Ultraschallmikroskopie wurde als Methode zur Messung der Entwicklung der Ovarialfollikel der Maus 8 und des Wachstums von implantierten oder induzierten Neoplasienvalidiert 9,10,11. Hochfrequenz-US wurde auch für perkutane intrauterine Injektionen12 und die Beobachtung der Uterusveränderung von Ratten während des Brunstzyklus13 verwendet. Hochfrequenz-US kann mit Mäusen verwendet werden, die auf speziellen stationären Plattformen gehalten werden, wobei ein Schienensystem verwendet wird, um den Wandler/die Sonde zu halten, um hochauflösende Bilder mit standardisierter Position und Druck aufzunehmen. Diese Geräte sind jedoch nicht an allen Einrichtungen verfügbar. Tragbare Schallkopf-Scanmethoden können mit weniger speziellen Geräten übernommen und sowohl für die klinische Diagnostik als auch für Forschungsanwendungen an Mäusen verwendet werden.
Es bleibt die Frage, ob die US-Bildgebung mit tragbaren Hochfrequenzsonden verwendet werden könnte, um die Entwicklung von Gebärmutterkrebs über mehrere Wochen zu überwachen. Ähnlich wie der Darm ist der Uterus von Nagetieren eine dünnwandige, schlanke Struktur, die innerhalb des Bauches sehr beweglich ist und durch mehrere Gewebetiefen angrenzt, was die Bildgebung schwieriger macht als bei relativ unbeweglichen Organen wie den Nieren. Ziel dieser Studie war es, die Korrelation zwischen dem mittels Ultraschall beobachteten Gewebe und der Histopathologie herzustellen, Orientierungspunkte für die Lokalisierung des Uterus der Maus zu definieren und die Durchführbarkeit der longitudinalen Beurteilung von Endometriumkarzinomen zu bestimmen. In dieser Studie werden Daten präsentiert, die eine qualitative Übereinstimmung zwischen dem Erscheinungsbild der Uteri in den USA und der Histopathologie sowie der seriellen Bildgebung von Mäusen über mehrere Wochen zeigen. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass tragbare US zur Überwachung der Entwicklung von Endometriumkrebs bei Mäusen verwendet werden kann, wodurch die Möglichkeit geschaffen wird, individuelle Längsschnittdaten von Mäusen zu sammeln, um Gebärmutterkrebs zu untersuchen, ohne dass spezielle Geräte erforderlich sind.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Animal Care</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td>
			<td>Envigio</td>
			<td>TD.01306</td>
			<td>Mouse Feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL injectable 0.9% NaCl&#160;</td>
			<td>Hospira, Inc</td>
			<td>RL-7302</td>
			<td>Isotonic Fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Pad with Plastic Backing</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF8313</td>
			<td>Absorbant Pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Induction Chambers</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2029</td>
			<td>Induction Chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, &#38; adapters</td>
			<td>CWE, Inc</td>
			<td>13-20000</td>
			<td>Nose Cone and Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter)</td>
			<td>Parker Laboratoies</td>
			<td>08-03</td>
			<td>Ultrasound Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak 3 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309657</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/Air Scavenger Charcoal Canister</td>
			<td>OMNICON</td>
			<td>80120</td>
			<td>Scavenging System for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>502017</td>
			<td>Anesthesia Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>Scivena Scientific</td>
			<td>M1050</td>
			<td>Anestheic Vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>MX550S</td>
			<td>Ultrasound Transducer (Probe)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Aloe &#38; Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Depilliating Cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td>
			<td>Philips North America</td>
			<td>MG7750</td>
			<td>Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide 25 G 1&#34; Needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td>Lubricating Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Ultrasound Machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>Ultrasound Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15&#34;</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>731-500-000R</td>
			<td>Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wd Elements 2TB Basic Storage</td>
			<td>Western Digital Elements</td>
			<td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td>
			<td>Data Storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% w/v Formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td>Tissue Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U.</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>&#160;SP5035</td>
			<td>Antibody Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged Super Frost Plus Glass Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4831-703</td>
			<td>Tissue Mounting Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>&#160;C9999-1000ML</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal &#8211; 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td>Resin for Slide Sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Glass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3322</td>
			<td>Coverslide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Modified Hematoxylin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td>Counterstain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>13-247-30Q</td>
			<td>Oven to Melt Parraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP)</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td>Signal Development Substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>MP-7451</td>
			<td>Secondary IHC Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oster 5712 Digital Food Steamer</td>
			<td>Oster</td>
			<td>5712</td>
			<td>Vegetable Steamer for Epitope Retrival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-ARID1a</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab182560</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9559</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotts Tap Water Substitute</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>S5134-100ML</td>
			<td>&#34;Blueing&#34; Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path IV Cassette</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>22272416</td>
			<td>Tissue Fixation Cassette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trilogy Buffer</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>&#160;920P-10</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice

Gebärmutterkrebs kann aufgrund der einfachen Handhabung und genetischen Manipulation in diesen Modellen an Mäusen untersucht werden. Diese Studien beschränken sich jedoch oft auf die postmortale Beurteilung der Pathologie bei Tieren, die zu mehreren Zeitpunkten in verschiedenen Kohorten eingeschläfert wurden, was die Anzahl der für eine Studie benötigten Mäuse erhöht. Die Bildgebung von Mäusen in Längsschnittstudien kann das Fortschreiten der Krankheit bei einzelnen Tieren verfolgen und so die Anzahl der benötigten Mäuse reduzieren. Fortschritte in der Ultraschalltechnologie haben es ermöglicht, Veränderungen im Mikrometerbereich in Geweben zu erkennen. Ultraschall wurde verwendet, um die Follikelreifung in den Eierstöcken und das Wachstum von Xenotransplantaten zu untersuchen, aber nicht auf morphologische Veränderungen in der Gebärmutter der Maus. Dieses Protokoll untersucht die Gegenüberstellung von Pathologie und In-vivo-Bildgebungsvergleichen in einem Mausmodell für induziertes Endometriumkarzinom. Die im Ultraschall beobachteten Merkmale stimmten mit dem Grad der Veränderung überein, der in der groben Pathologie und Histologie beobachtet wurde. Es wurde festgestellt, dass Ultraschall die beobachtete Pathologie in hohem Maße prädiktiv darstellt und die Einbeziehung der Ultraschalluntersuchung in Längsschnittstudien von Gebärmuttererkrankungen wie Krebs bei Mäusen unterstützt.

Pax8-Cre-Arid1a-Pten double deletion (iPAD) transgene Mäuse wurden auf einem gemischten genetischen Hintergrund (129S, BALB/C, C57BL/6) gehalten, wie zuvor beschrieben14. Die Mäuse wurden alle 2 Wochen lang mit einem Doxycyclin-Futter gefüttert, um die Cre-Rekombinase zu induzieren. In früheren Arbeiten unserer Gruppe wurde Doxycyclin durch Sonde14 dosiert; In dieser aktuellen Studie funktionierte die Doxycyclin-Futterinduktionsmethode jedoch effizient...

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Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Beobachtung des Fortschreitens morphologischer Veränderungen im Laufe der Zeit im Uterus in einem induzierbaren Mausmodell des Endometriumkarzinoms mittels Ultraschallbildgebung mit Korrelation zu groben und histologischen Veränderungen.

Nicht-invasive Ultraschalluntersuchung der Progression des Endometriumkarzinoms bei Pax8-gerichteter Deletion der Tumorsuppressoren Arid1a und Pten in Mäusen

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Diese Studie zeigt, dass der manuell geführte Ultraschall gut geeignet ist, um die Entwicklung der Uteruspathologie in einem induzierten Mausmodell des Endometriumkarzinoms zu überwachen. Die Ultraschallbildgebung ist nicht-invasiv und ermöglicht somit Längsschnittstudien einzelner Mäuse über Tage und Wochen hinweg. Dies ermöglicht es, individuelle Variationen zu erfassen und letztendlich weniger Tiere für die Untersuchung zu verwenden.Diese Methode kann leicht zur Überwachung pathologischer Veränderungen und anderer Spiegelungsmodelle angewendet werden, einschließlich solcher für Neoplasien und chronische Erkrankungen des Harn- und Verdauungstrakts. Beginnen Sie mit der Einrichtung des Ultraschallgeräts für die Bildgebung der Gebärmutter oder des Eierstocks, indem Sie einen Schallkopf oder eine Sonde mit einem Bereich von 32 bis 56 Megahertz auswählen. Gehen Sie auf dem Startbildschirm zur Registerkarte Anwendungen und wählen Sie Mausmodus für kleinen Bauch.Klicken Sie dann auf Scannen, um zum Startbildschirm zurückzukehren, und warten Sie, bis ein Live-Bild angezeigt wird. Wählen Sie als Nächstes den B-Modus aus den Optionen in der linken Symbolleiste, bevor Sie auf die Option Weitere Steuerelemente klicken, um zusätzliche Werkzeuge für die Bildverfeinerung anzuzeigen, z. B. Bildverstärkung und -tiefe, oder um die Einstellungen für die Clip-Aufnahme anzupassen, z. B. die Anzahl der Bilder pro Sekunde. Sobald Sie die Bildeinstellungen ausgewählt haben, kehren Sie zum Startbildschirm zurück, indem Sie auf B-Modus klicken.Legen Sie eine drei bis 10 Milliliter große Spritze, die mit einer sterilen isotonischen Flüssigkeitslösung gefüllt ist, für einige Minuten zwischen ein Heizkissen und ein saugfähiges Pad, um es auf 35 bis 40 Grad Celsius vorzuheizen. Wenn das Gerät keinen Stövchen hat, legen Sie eine Flasche Ultraschallgel auf das Heizkissen. Um ein bis zwei Milliliter Lösung in die Bauchhöhle einer Maus zu injizieren, befestigen Sie die Maus mit einer Hand am Genick und legen Sie das Ventrum frei.Halten Sie die Maus dann in einem Winkel von etwa 20 Grad, wobei die Nase zum Boden zeigt. Führen Sie eine 25-Gauge-Tuberkulin-Spritzennadel durch die Haut und die Bauchdecke des kaudalen rechten Quadranten des Abdomens ein. Um eine Injektion in das Gefäßsystem oder den Magen-Darm-Trakt zu vermeiden, ziehen Sie den Spritzenkolben mit minimalem Druck zurück, um nach Blut zu suchen.Positionieren Sie die Maus in ventraler Liegeposition auf dem saugfähigen Pad über einem Heizkissen, bevor Sie einen Nagetiernasenkegel sicher über die Nase und die Schnauze der Maus legen. Platzieren Sie eine kleine Menge des vorgewärmten Ultraschallgels abaxial zur Wirbelsäule auf beiden Seiten der anästhesierten Maus zwischen der letzten Rippe und dem Becken. Geben Sie eine kleine Menge Gel auf die Ultraschallsonde.Als nächstes platzieren Sie die Sonde parallel zu den Wirbeln, wobei sich die Vorderseite der Sonde auf der kranialen Seite befindet. Scannen Sie mit einer Maus in Bauchlage langsam den Bereich nach dem Orientierungspunkt der Niere. Mit Blick auf die Niere ziehen Sie die Sonde kaudal, um den Eierstock zu finden, der eine leicht echoarme ovale bis runde Struktur innerhalb eines sehr echoarmen ovariellen Fettpolsters ist, das kranial-ventral von der Niere und dorsal-lateral von der dorsalen Bauchwand begrenzt wird.Verbessern Sie den Bildkontrast, indem Sie die Signalverstärkung mit dem Schieberegler am unteren Rand des Steuerungsbildschirms anpassen. Um die Darstellung der Niere zu verbessern, üben Sie mit einem Finger Druck auf den kontralateralen Bauch aus. Variieren Sie den Druck und den Winkel von parallel zur Wirbelsäule bis etwa 20 Grad ventral.Sobald das gewünschte Organ sichtbar ist, nehmen Sie ein Video auf, indem Sie auf Clip speichern oder Aufnahme starten klicken. Wenn Sie fertig sind, klicken Sie auf Aufnahme beenden, um Bilder bei einer voreingestellten Anzahl von Bildern beizubehalten. Halten Sie die Sonde kaudal, bis sich der Eierstock im kranialsten Aspekt des Gesichtsfeldes befindet.Variieren Sie den Druck und den Winkel der Sonde, um die Gebärmutter zu betrachten und abzubilden. Wiederholen Sie die Video- und Bildsammlung für jedes Organ von Interesse. Finde die Gebärmutter, die in Längsrichtung entlang der dorsalen Bauchdecke verläuft, mit Blick auf die seitliche Beinmuskulatur.Überwachen Sie das Gewebe auf eine peristaltische Bewegung, um die Darmschlingen von den stationären Hörnern der Gebärmutter zu unterscheiden. Platzieren Sie die Maus in dorsaler Lage, um die Bilder aus einem ventralen Zugang zu sammeln. Stellen Sie sicher, dass die Augenbefeuchtung ausreichend ist und die Schnauze im Nasenkonus befestigt ist.Tragen Sie eine kleine Menge des vorgewärmten Ultraschallgels auf den ventralen Abdomen auf, bevor Sie die Sonde an der Mittellinie und am Schädel des Schambeins anbringen, um die Blase als echoarmen Orientierungspunkt zu lokalisieren. Um die Gebärmutterhörner zu finden, ziehen Sie die Sonde seitlich zur Blase. Üben Sie leichten digitalen Druck von einer oder beiden Seiten der Maus aus.Sobald sich die Uterushörner im Sichtfeld befinden, halten Sie die Sonde senkrecht zur Maus und scannen Sie beide Seiten des Abdomens, um Queransichten beider Hörner zu erfassen. Drehen Sie die Sonde, um sagittale Ansichten aufzunehmen. Wischen Sie die Maus nach dem Ultraschall mit einem Papiertuch ab, bevor Sie sie zur Erholung in ihren Käfig zurücklegen.Sobald die Maus nach zwei bis fünf Minuten vollständig wach ist, bringen Sie die Maus in den Tierraum zurück. Der Ultraschallbildvergleich der Bauchhöhle der Maus vor und nach der Kochsalzinjektion zeigte die verbesserte Darstellung der Bauchorgane, einschließlich der Gebärmutter und der Eierstöcke nach der Kochsalzinjektion. Ein ventraler Zugang wurde verwendet, um die Querschnitte der Uterushörner neben der echoarmen Blase zu untersuchen.Immunhistochemie mit Antikörpern, die gegen Arid1a und Pten gerichtet sind, wurde verwendet, um den adäquaten Verlust von Tumorsuppressorproteinen in den Epithelzellen der Gebärmutter im Vergleich zum benachbarten Stromagewebe zu untersuchen. Nach dreiwöchiger Doxycyclin-Behandlung wurden Ultraschallbilder eines Mausuterus mit frühen pathologischen Veränderungen entdeckt, die das echoarme und erweiterte Lumen des Uterus zeigten. In der grobpathologischen und histopathologischen Studie desselben Uterus wurden ein kleinerer, aber erweiterter dünnwandiger Uterus bzw. eine frühe Endometriumhyperplasie unter Beibehaltung des unterschiedlichen Lumens beobachtet.Die Mäuse, die zu späteren Zeitpunkten eingeschläfert wurden, zeigten einen größeren Uterus mit einem kleineren Lumen und einer verdickten Wand. Beim Erlernen der manuellen Platzierung von Sonden können übermäßiger Druck oder schnelle Bewegungen die Organidentifizierung erschweren. Verwenden Sie sanfte, bewusste Bewegungen und konzentrieren Sie sich darauf, zuerst die Organe zu identifizieren, die Orientierungspunkte sind.Am Ende der Studie werden Mäuse geopfert und Gewebe entnommen, um den Gen-Knockdown zu bestätigen und Gewebeveränderungen zu charakterisieren. Diese Technik ermöglicht es den Forschern, intraabdominelle Läsionen im Laufe der Zeit zu überwachen. Und in unserem Fall haben wir damit das Fortschreiten des Gebärmutterkrebses im iPad-Modell überwacht, was wir dann histopathologisch bestätigt haben.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

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The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

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Das<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginalscheibe Tumormodell: Visualisierung und Quantifizierung von Genexpression und Tumorinvasivität mit Genetischen Mosaiken

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Forschung

Krebsforschung

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Radionuklid-Fluoreszenz-Reporter-Gen Imaging zu Tumorprogression in Nagetier Tumormodellen verfolgen

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Nutzung von Ultraschall geführte Gewebe gerichtet zellulären Implantation für die Einrichtung der biologisch relevanten metastasiertem Tumor Xenografts

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Bereicherung und Charakterisierung von dem Tumor immun und nicht-immunen Mikroumgebungen in etablierte subkutane murinen Tumoren

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Digitalen Polymerase-Kettenreaktion-Assay für die genetische Variation bei einem sporadischen familiäre adenomatöse Polyposis Patienten mit dem Chip-in-Rohr-Format

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Intramucosal Impfung des Plattenepithelkarzinom Zellen in Mäusen für Tumor immun Profilierung und Behandlung Antwort Bewertung

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

In Vivo Hemmung von MicroRNA zur Verringerung des Tumorwachstums bei Mäusen

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Nachweis der Lungentumorprogression bei Mäusen durch Ultraschall-Bildgebung

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...