Name: non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

אנו אסירי תודה על המימון מתוכנית SPORE לסרטן השחלות של NCI P50CA228991, תוכנית הכשרה לפוסט-דוקטורט 5T32OD011089, וקרן ריצ'רד וו. TeLinde, אוניברסיטת ג'ונס הופקינס. הפרויקט מומן בחלקו גם על ידי סובסידיות להוצאות שוטפות למוסדות פרטיים להשכלה גבוהה מהתאגיד לקידום ועזרה הדדית לבתי ספר פרטיים של יפן.

כל ההליכים והניסויים בעכברים בוצעו על פי פרוטוקולים שאושרו על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של ג'ונס הופקינס. לכל ההליכים נלבש ציוד הגנה אישי מתאים, כולל כפפות וחלוקי בידוד חד פעמיים. ננקטו אמצעי זהירות בעת הטיפול בחדים, אשר הושלכו כראוי במיכלי חדים בקופסה אדומה מיד לאחר השימוש. עיין...

<ol>
	<li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents:+an+update.">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5 (2020).</li><li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology.">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125 (2020).</li><li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk.">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research:+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging.">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238 (2012).</li><li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer.">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research:+A+review+of+examples,+options,+and+resources.">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li><li>Peterson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuing+education+course+#1:+Non-invasive+imaging+as+a+problem-solving+tool+and+translational+biomarker+strategy+in+toxicologic+pathology.">Continuing education course #1: Non-invasive imaging as a problem-solving tool and translational biomarker strategy in toxicologic pathology.</a> Toxicologic Pathology. 39 (1), 267-272 (2011).</li><li>Pfeifer, L. F., Adams, G. P., Pierson, R. A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy:+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals.">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li><li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis.">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li><li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106 (2009).</li><li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model.">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li><li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse.">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats.">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038 (2017).</li><li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming.">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717 (2020).</li><li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer:+Insights+from+a+new+mouse+model.">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144 (2021).</li></ol>

פרוטוקול זה בוחן את התועלת של אולטרסאונד להערכת שינויים מורפולוגיים ברחם בהתקדמות אדנוקרצינומה ברחם בעכברים. במחקר זה, על ידי מעקב אחר השראת סרטן רירית הרחם בעכברים לאורך זמן, הפרטים האנטומיים שזוהו על ידי אולטרסאונד נמצאו כאינדיקטורים לפתולוגיה גסה והיסטולוגית. זה פותח את הדלת לשימוש ב...

עכברים נותרו אחד המודלים החשובים ביותר של בעלי חיים להפרעות רבייה 1,2,3. ישנם מספר מודלים מהונדסים גנטית או מושרית מכרסמים של סרטן השחלות והרחם. מחקרים אלה מסתמכים בדרך כלל על קבוצות מרובות שהומתו בנקודות זמן שונות כדי ללכוד מגמות אורך בשינויים מורפולוגיים ופתולוגיים. זה מונע את היכולת לרכוש נתונים רציפים על התפתחות סרטן בעכבר בודד. בנוסף, מבלי לדעת את מצב התקדמות מחלת העכבר הבודד, מחקרי התערבות מבוססים על נקודות זמן קבועות מראש וממצאים ממוצעים של קבוצות קודמות ולא על סף בודד לזיהוי התקדמות בחיה ספציפית 4,5. לכן, יש צורך בגישות הדמיה המאפשרות הערכת אורך בבעלי חיים כדי להקל על מודלים פרה-קליניים לבדיקת תרופות או תרכובות חדשות ולהאיץ את הבנת הפתולוגיה תוך הגברת ההקפדה והשכפול6.
הדמיית אולטרסאונד (US) היא שיטה מושכת לניטור אורכי של התקדמות סרטן הרחם בעכבר מכיוון שהיא קלה יחסית וזולה בהשוואה לשיטות הדמיה אחרות, קלה לביצוע ויכולה להיות ברזולוציה יוצאת דופן 6,7. שיטה לא פולשנית זו יכולה ללכוד תכונות בקנה מידה מיקרוני בעכברים ערים או עם עכברים תחת טשטוש קצר באמצעות בדיקה של 5-10 דקות. מיקרוסקופ אולטרסאונד אומת כשיטה למדידת התפתחות זקיק השחלות של עכבר 8 וצמיחת ניאופלזיה מושתלת או מושרית 9,10,11. US בתדירות גבוהה שימש גם לזריקות תוך רחמיות מלעוריות12 ולצפייה בשינוי רחם חולדה במהלך מחזור הייחום13. ניתן להשתמש בארה"ב בתדר גבוה עם עכברים המוחזקים על פלטפורמות נייחות מיוחדות באמצעות מערכת מסילות להחזקת המתמר / הגשושית כדי לצלם תמונות ברזולוציה גבוהה עם מיקום ולחץ סטנדרטיים; עם זאת, ציוד זה אינו זמין בכל המוסדות. ניתן לאמץ שיטות סריקת מתמרים ידניות עם ציוד פחות ייעודי ולהשתמש בהן הן לאבחון קליני והן ליישומי מחקר בעכברים.
נשאלת השאלה האם ניתן להשתמש בהדמיה אמריקאית עם בדיקות ידניות בתדירות גבוהה כדי לעקוב אחר התפתחות סרטן הרחם במשך שבועות רבים. בדומה למעיים, הרחם המכרסם הוא מבנה דק ודק שהוא נייד מאוד בתוך הבטן והוא רציף דרך עומקי רקמות מרובים, מה שהופך את ההדמיה למאתגרת יותר מאשר עם איברים חסרי תנועה יחסית כמו הכליות. מחקר זה ביקש לקבוע את המתאם בין רקמות שנצפו על ידי אולטרסאונד והיסטופתולוגיה, להגדיר ציוני דרך לאיתור רחם העכבר ולקבוע את היתכנות ההערכה האורכית של סרטן רירית הרחם. מחקר זה מציג נתונים המראים התאמה איכותית בין הופעת הרחם שצולם על ידי US לבין היסטופתולוגיה, כמו גם הדמיה סדרתית של עכברים במשך מספר שבועות. תוצאות אלה מצביעות על כך שניתן להשתמש ב- US ידני כדי לעקוב אחר התפתחות סרטן רירית הרחם בעכברים, ובכך ליצור הזדמנות לאיסוף נתוני אורך של עכברים בודדים לחקר סרטן הרחם ללא צורך בציוד ייעודי.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Animal Care</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td>
			<td>Envigio</td>
			<td>TD.01306</td>
			<td>Mouse Feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL injectable 0.9% NaCl&#160;</td>
			<td>Hospira, Inc</td>
			<td>RL-7302</td>
			<td>Isotonic Fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Pad with Plastic Backing</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF8313</td>
			<td>Absorbant Pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Induction Chambers</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2029</td>
			<td>Induction Chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, &#38; adapters</td>
			<td>CWE, Inc</td>
			<td>13-20000</td>
			<td>Nose Cone and Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter)</td>
			<td>Parker Laboratoies</td>
			<td>08-03</td>
			<td>Ultrasound Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak 3 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309657</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/Air Scavenger Charcoal Canister</td>
			<td>OMNICON</td>
			<td>80120</td>
			<td>Scavenging System for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>502017</td>
			<td>Anesthesia Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>Scivena Scientific</td>
			<td>M1050</td>
			<td>Anestheic Vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>MX550S</td>
			<td>Ultrasound Transducer (Probe)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Aloe &#38; Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Depilliating Cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td>
			<td>Philips North America</td>
			<td>MG7750</td>
			<td>Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide 25 G 1&#34; Needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td>Lubricating Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Ultrasound Machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>Ultrasound Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15&#34;</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>731-500-000R</td>
			<td>Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wd Elements 2TB Basic Storage</td>
			<td>Western Digital Elements</td>
			<td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td>
			<td>Data Storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% w/v Formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td>Tissue Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U.</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>&#160;SP5035</td>
			<td>Antibody Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged Super Frost Plus Glass Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4831-703</td>
			<td>Tissue Mounting Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>&#160;C9999-1000ML</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal &#8211; 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td>Resin for Slide Sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Glass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3322</td>
			<td>Coverslide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Modified Hematoxylin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td>Counterstain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>13-247-30Q</td>
			<td>Oven to Melt Parraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP)</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td>Signal Development Substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>MP-7451</td>
			<td>Secondary IHC Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oster 5712 Digital Food Steamer</td>
			<td>Oster</td>
			<td>5712</td>
			<td>Vegetable Steamer for Epitope Retrival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-ARID1a</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab182560</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9559</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotts Tap Water Substitute</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>S5134-100ML</td>
			<td>&#34;Blueing&#34; Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path IV Cassette</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>22272416</td>
			<td>Tissue Fixation Cassette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trilogy Buffer</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>&#160;920P-10</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice

סרטן הרחם יכול להיחקר בעכברים בשל קלות הטיפול והמניפולציה הגנטית במודלים אלה. עם זאת, מחקרים אלה מוגבלים לעתים קרובות להערכת פתולוגיה לאחר המוות בבעלי חיים שהומתו בנקודות זמן מרובות בקבוצות שונות, מה שמגדיל את מספר העכברים הדרושים למחקר. הדמיה של עכברים במחקרי אורך יכולה לעקוב אחר התקדמות המחלה בבעלי חיים בודדים, ולהפחית את מספר העכברים הדרושים. ההתקדמות בטכנולוגיית האולטרסאונד אפשרה זיהוי של שינויים ברמת המיקרומטר ברקמות. אולטרסאונד שימש לחקר הבשלת זקיקים בשחלות וצמיחת קסנוגרפט, אך לא יושם על שינויים מורפולוגיים ברחם העכבר. פרוטוקול זה בוחן את הסמיכות של פתולוגיה עם השוואות הדמיה in vivo במודל עכבר סרטן רירית הרחם המושרה. המאפיינים שנצפו על ידי אולטרסאונד היו עקביים עם מידת השינוי שנצפתה על ידי פתולוגיה גסה והיסטולוגיה. אולטרסאונד נמצא כמנבא מאוד את הפתולוגיה הנצפית, ותומך בשילוב אולטרה-סאונד במחקרי אורך של מחלות רחם כגון סרטן בעכברים.

Pax8-Cre-Arid1a-Pten מחיקה כפולה (iPAD) עכברים טרנסגניים נשמרו על רקע גנטי מעורב (129S, BALB/C, C57BL/6), כפי שתואר קודם לכן14. כל העכברים קיבלו מזון דוקסיציקלין במשך שבועיים כדי לגרום ל-Cre recombinase. בעבודה קודמת של הקבוצה שלנו, דוקסיציקלין קיבל מינון על ידי gavage14; עם זאת, במחקר הנו?...

Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

פרוטוקול זה מתאר שיטה למעקב אחר התקדמות שינויים מורפולוגיים לאורך זמן ברחם במודל עכברי מושרה של סרטן רירית הרחם באמצעות הדמיית אולטרסאונד עם קורלציה לשינויים גסים והיסטולוגיים.

הערכת אולטרסאונד לא פולשנית של התקדמות סרטן רירית הרחם במחיקה מכוונת Pax8 של מדכאי הגידול Arid1a ו - Pten בעכברים

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

מחקר זה מראה כי אולטרסאונד מונחה ידני מתאים היטב למעקב אחר התפתחות פתולוגיה של הרחם במודל עכבר מושרה של סרטן רירית הרחם. הדמיית אולטרסאונד אינה פולשנית ולכן מאפשרת מחקרי אורך של עכברים בודדים על פני ימים ושבועות. זה מאפשר ללכוד וריאציות אינדיבידואליות ובסופו של דבר להשתמש בפחות בעלי חיים למחקר.שיטה זו יכולה להיות מיושמת בקלות כדי לפקח על שינויים פתולוגיים ומודלים שיקוף אחרים, כולל אלה עבור neoplasia ומחלות כרוניות של השתן ומערכת העיכול. התחל להגדיר את מכשיר האולטרסאונד להדמיית הרחם או השחלה על ידי בחירת מתמר או בדיקה עם טווח של 32 עד 56 מגה-הרץ. עבור אל יישומים הכרטיסייה ממסך הבית ובחר עכבר מצב בטן קטנה.לאחר מכן לחץ על סריקה כדי לחזור למסך הבית והמתן להצגת תמונה חיה. לאחר מכן, בחר מצב B מהאפשרויות בסרגל הכלים השמאלי לפני לחיצה על באפשרות פקדים נוספים כדי להציג כלים נוספים לעידון תמונה, כגון רווח ועומק תמונה או כדי להתאים את הגדרות רכישת הקליפ, כגון מספר המסגרות לשנייה. לאחר בחירת הגדרות התמונה, חזור למסך הבית על ידי לחיצה על מצב B.מניחים מזרק של שלושה עד 10 מיליליטר מלא בתמיסת נוזל איזוטוני סטרילי בין כרית חימום לפד סופג למשך מספר דקות כדי לחמם אותו ל 35 עד 40 מעלות צלזיוס. אם למכונה אין מחמם, הניחו בקבוק ג'ל אולטרסאונד על כרית החימום. כדי להזריק מיליליטר עד שני מיליליטר של תמיסה לתוך חלל הצפק של עכבר, לאבטח את העכבר על ידי קשקוש ביד אחת, חושף את הוונטרום.לאחר מכן החזק את העכבר בזווית של כ-20 מעלות כשהאף מופנה לרצפה. הכנס מחט מזרק שחפת 25 מד דרך העור ודופן הבטן של הרביע הימני הקאודלי של הבטן. כדי למנוע הזרקה לתוך כלי הדם או מערכת העיכול, למשוך בחזרה על הבוכנה מזרק עם לחץ מינימלי לחפש דם.מקם את העכבר בשכיבה גחונית על כרית הספיגה מעל כרית חימום לפני הנחת חרוט אף מכרסם בבטחה על אפו ולוע העכבר. הניחו כמות קטנה של ג'ל אולטרסאונד שחומם מראש על עמוד השדרה משני צדי העכבר המורדם בין הצלע האחרונה לאגן. שים כמות קטנה של ג'ל על הבדיקה אולטרסאונד.לאחר מכן, מקם את הבדיקה במקביל לחוליות עם החלק הקדמי של הבדיקה בצד הגולגולת. עם עכבר בשכיבה גחון, לסרוק לאט את האזור עבור ציון דרך הכליות. כאשר הכליה במבט, משוך את הגשושית כדי למצוא את השחלה, שהיא אליפסה מעט היפראקואית למבנה עגול בתוך כרית שומן שחלות היפראקואית מאוד, הגובלת גולגולתית-גחון על ידי הכליה וגבית-לטרלית על ידי דופן הבטן הגבית.שפר את ניגודיות התמונה על-ידי התאמת עוצמת האות באמצעות המחוון בתחתית מסך הבקרה. כדי לשפר את ההדמיה של הכליה, להפעיל לחץ על הבטן contra-lateral באמצעות אצבע. שנו את הלחץ והזווית ממקביל לעמוד השדרה לכ-20 מעלות גחון.ברגע שאיבר העניין נמצא בתצוגה, צלם סרטון על ידי לחיצה על שמור קליפ או התחל הקלטה. לאחר שתסיים, לחץ על הפסק הקלטה כדי לשמור תמונות במספר מוגדר מראש של מסגרות. החזק את הבדיקה באופן קאודלי עד שהשחלה נמצאת באספקט הגולגולתי ביותר של שדה הראייה.שנו את לחץ הבדיקה ואת הזווית כדי לראות ולצלם את הרחם. חזור על אוסף וידאו ומסגרות עבור כל איבר מעניין. מצא את הרחם רץ לאורך דופן הבטן הגבית עם שרירי הרגל הצידית בעין.עקוב אחר הרקמה לתנועה פריסטלטית כדי להבדיל בין לולאות המעי לבין הקרניים הנייחות של הרחם. הניחו את העכבר בשכיבה גבית כדי לאסוף את התמונות מגישה גחון. ודא שסיכוך העיניים מספיק והלוע מאובטח בחרוט האף.יש למרוח כמות קטנה של ג'ל אולטרסאונד שחומם מראש על בטן הגחון לפני החלת הבדיקה בקו האמצע והגולגולת של הערווה כדי לאתר את שלפוחית השתן כנקודת ציון היפואקואית. כדי למצוא את קרני הרחם, משוך את הבדיקה לרוחב שלפוחית השתן. הפעל לחץ דיגיטלי קל משני צדי העכבר או משני צדדיו.ברגע שקרני הרחם נמצאות בשדה הראייה, החזיקו את הגשושית בניצב לעכבר וסרקו את שני צידי הבטן כדי ללכוד מבט רוחבי של שתי הקרניים. סובב את הגשושית כדי ללכוד תצוגות קשת. לאחר האולטרסאונד, נגב את העכבר במגבת נייר לפני החזרתו לכלוב שלו כדי להתאושש.ברגע שהעכבר ער לחלוטין לאחר שתיים עד חמש דקות, החזירו את העכבר לחדר החיות. השוואת תמונת האולטרסאונד של חלל הבטן של העכבר לפני ואחרי הזרקת המלח הראתה הדמיה משופרת של איברי הבטן, כולל הרחם והשחלות לאחר הזרקת המלח. גישה גחונית שימשה לחקר חתכי הרוחב של קרני הרחם הסמוכות לשלפוחית השתן ההיפואקואית.אימונוהיסטוכימיה עם נוגדנים המכוונים נגד Arid1a ו- Pten שימשה לחקר אובדן חלבון מדכא גידול הולם שהושג בתאי אפיתל הרחם בהשוואה לרקמת הסטרומה השכנה. תמונות אולטרסאונד של רחם עכבר עם שינויים פתולוגיים מוקדמים זוהו לאחר שלושה שבועות של טיפול דוקסיציקלין, המראים את לומן hypoechoic ומורחב של הרחם. במחקר הפתולוגיה הגסה וההיסטופתולוגיה של אותו הרחם, נצפו רחם קטן יותר אך מורחב בעל דופן דקה והיפרפלזיה מוקדמת של רירית הרחם עם שימור הלומן המובהק בהתאמה.העכברים שהומתו בנקודות זמן מאוחרות יותר הראו רחם גדול יותר עם לומן קטן יותר ודופן מעובה. כאשר לומדים להשתמש במיקום ידני של בדיקות, לחץ מוגזם או תנועה מהירה יכולים להקשות על זיהוי איברים. השתמשו בתנועות עדינות ומכוונות והתמקדו בזיהוי האיברים המהווים ציוני דרך ראשונים.בנקודת הסיום של המחקר, עכברים מוקרבים ורקמות נאספות כדי לאשר את הפלת הגנים ולאפיין שינויים ברקמות. טכניקה זו מאפשרת לחוקרים לעקוב אחר נגעים תוך בטניים לאורך זמן. ובמקרה שלנו, השתמשנו בו כדי לעקוב אחר התקדמות סרטן הרחם במודל iPad, אשר לאחר מכן אישרנו על ידי היסטופתולוגיה.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

ה<em&gt; תסיסנית</em&gt; דגם גידול דיסק דמותי: ויזואליזציה וכימות של ביטוי גנים סרטניים הפולשנות שימוש פסיפסים גנטי

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

אין ויוו הערכת EPR pH, pO2, מצב חמצון-חיזור, ואת ריכוזים של פוספט גלוטתיון ב Microenvironment הגידול

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

רדיונוקלידים-זריחה מדווח הדמיה כדי לעקוב אחר התקדמות הגידול במודלים הגידול מכרסמים

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

ניצול של אולטרסאונד מודרכת מכוון רקמות השרשה הסלולר להקמתה של גידול גרורתי רלוונטי מבחינה ביולוגית Xenografts

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

העשרה ואפיון של Microenvironments המערכת החיסונית והחיסון של הגידול הוקמה גידולים מאתר תת עורית

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

פולימראז דיגיטלי Assay תגובת שרשרת עבור הווריאציה גנטי לחולה סדיר פוליפוזיס באמצעות התבנית שבב-ב--שפופרת

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

חיסון intramucosal של תאי קרצינומה של תאים קשקשיים עכברים עבור פרופיל החיסונית הגידול והערכת התגובה לטיפול

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

ב Vivo עיכוב של מיקרואורנה כדי להקטין את צמיחת הגידול בעכברים

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

זיהוי של התקדמות הגידול ריאה בעכברים על ידי הדמיה אולטרסאונד

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...