Name: non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Siamo grati per il finanziamento del programma NCI Ovarian Cancer SPORE P50CA228991, del programma di formazione post-dottorato 5T32OD011089 e del Richard W. TeLinde Endowment, Johns Hopkins University. Il progetto è stato anche in parte finanziato dai sussidi per le spese correnti agli istituti privati di istruzione superiore della Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan.

Tutte le procedure e gli esperimenti che coinvolgono i topi sono stati eseguiti secondo i protocolli approvati dal Johns Hopkins Animal Care and Use Committee. Per tutte le procedure, sono stati indossati DPI appropriati, compresi guanti e camici isolanti monouso. Sono state prese precauzioni durante la manipolazione di oggetti taglienti, che sono stati smaltiti correttamente in contenitori di taglienti a scatola rossa immediatamente dopo l'uso. Vedere la tabella dei materiali per i dettagli su tutti i m...

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	<li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents:+an+update.">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5 (2020).</li><li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology.">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125 (2020).</li><li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk.">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research:+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging.">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238 (2012).</li><li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer.">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research:+A+review+of+examples,+options,+and+resources.">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li><li>Peterson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuing+education+course+#1:+Non-invasive+imaging+as+a+problem-solving+tool+and+translational+biomarker+strategy+in+toxicologic+pathology.">Continuing education course #1: Non-invasive imaging as a problem-solving tool and translational biomarker strategy in toxicologic pathology.</a> Toxicologic Pathology. 39 (1), 267-272 (2011).</li><li>Pfeifer, L. F., Adams, G. P., Pierson, R. A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy:+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals.">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li><li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis.">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li><li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106 (2009).</li><li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model.">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li><li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse.">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats.">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038 (2017).</li><li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming.">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717 (2020).</li><li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer:+Insights+from+a+new+mouse+model.">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144 (2021).</li></ol>

Questo protocollo esamina l'utilità degli ultrasuoni per valutare i cambiamenti morfologici uterini nella progressione dell'adenocarcinoma nell'utero nei topi. In questo studio, seguendo l'induzione del cancro dell'endometrio nei topi longitudinalmente, i dettagli anatomici rilevati dagli ultrasuoni sono risultati essere indicatori di patologia grossolana e istologica. Questo apre la porta all'uso di studi longitudinali con un numero minore di topi monitorati mediante ultrasuoni in più punti temporali per seguire la pr...

I topi rimangono uno dei modelli animali più importanti per i disturbi riproduttivi 1,2,3. Esistono diversi modelli di roditori geneticamente modificati o indotti di tumori ovarici e uterini. Questi studi in genere si basano su più coorti eutanasiche in diversi punti temporali per catturare le tendenze longitudinali nei cambiamenti morfologici e patologici. Ciò impedisce la capacità di acquisire dati continui sullo sviluppo del cancro in un singolo topo. Inoltre, senza conoscere lo stato di progressione della malattia del singolo topo, gli studi di intervento si basano su punti temporali predeterminati e risultati medi di coorti precedenti piuttosto che soglie individuali per il rilevamento della progressione in un animale specifico 4,5. Pertanto, sono necessari approcci di imaging che consentano la valutazione longitudinale negli animali vivi per facilitare i modelli preclinici per testare nuovi farmaci o composti e accelerare la comprensione della patobiologia, aumentando al contempo il rigore e la riproducibilità6.
L'ecografia (US) è un metodo interessante per il monitoraggio longitudinale della progressione del cancro uterino del topo perché è relativamente facile e poco costoso rispetto ad altri metodi di imaging, è facile da eseguire e può avere una notevole risoluzione 6,7. Questa modalità non invasiva può catturare caratteristiche su scala micron in topi svegli o con topi sotto breve sedazione utilizzando un esame di 5-10 minuti. La microscopia ecografica è stata validata come metodo per misurare lo sviluppo del follicolo ovarico di topo 8 e la crescita di neoplasie impiantate o indotte 9,10,11. L'US ad alta frequenza è stata utilizzata anche per iniezioni intrauterine percutanee12 e per osservare il cambiamento uterino del ratto durante il ciclo di estro13. Gli US ad alta frequenza possono essere utilizzati con mouse tenuti su piattaforme fisse specializzate utilizzando un sistema di binari per tenere il trasduttore / sonda per catturare immagini ad alta risoluzione con posizione e pressione standardizzate; Tuttavia, questa apparecchiatura non è disponibile in tutte le istituzioni. I metodi di scansione dei trasduttori portatili possono essere adottati con apparecchiature meno dedicate e utilizzati sia per la diagnostica clinica che per le applicazioni di ricerca nei topi.
Rimane la domanda se l'imaging statunitense con sonde portatili ad alta frequenza possa essere utilizzato per monitorare lo sviluppo del cancro uterino per più settimane. Simile all'intestino, l'utero del roditore è una struttura sottile e sottile che è molto mobile all'interno dell'addome ed è contigua attraverso più profondità di tessuto, rendendo l'imaging più difficile rispetto a organi relativamente immobili come i reni. Questo studio ha cercato di stabilire la correlazione tra i tessuti osservati dagli ultrasuoni e dall'istopatologia, definire i punti di riferimento per localizzare l'utero del topo e determinare la fattibilità della valutazione longitudinale del cancro dell'endometrio. Questo studio presenta dati che mostrano una corrispondenza qualitativa tra l'aspetto dell'utero ripreso da US e l'istopatologia, nonché l'imaging seriale dei topi per diverse settimane. Questi risultati indicano che gli US portatili possono essere utilizzati per monitorare lo sviluppo del cancro dell'endometrio nei topi, creando così un'opportunità per raccogliere dati longitudinali sui singoli topi per studiare il cancro uterino senza la necessità di attrezzature dedicate.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Animal Care</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td>
			<td>Envigio</td>
			<td>TD.01306</td>
			<td>Mouse Feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL injectable 0.9% NaCl&#160;</td>
			<td>Hospira, Inc</td>
			<td>RL-7302</td>
			<td>Isotonic Fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Pad with Plastic Backing</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF8313</td>
			<td>Absorbant Pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Induction Chambers</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2029</td>
			<td>Induction Chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, &#38; adapters</td>
			<td>CWE, Inc</td>
			<td>13-20000</td>
			<td>Nose Cone and Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter)</td>
			<td>Parker Laboratoies</td>
			<td>08-03</td>
			<td>Ultrasound Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak 3 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309657</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/Air Scavenger Charcoal Canister</td>
			<td>OMNICON</td>
			<td>80120</td>
			<td>Scavenging System for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>502017</td>
			<td>Anesthesia Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>Scivena Scientific</td>
			<td>M1050</td>
			<td>Anestheic Vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>MX550S</td>
			<td>Ultrasound Transducer (Probe)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Aloe &#38; Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Depilliating Cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td>
			<td>Philips North America</td>
			<td>MG7750</td>
			<td>Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide 25 G 1&#34; Needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td>Lubricating Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Ultrasound Machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>Ultrasound Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15&#34;</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>731-500-000R</td>
			<td>Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wd Elements 2TB Basic Storage</td>
			<td>Western Digital Elements</td>
			<td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td>
			<td>Data Storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% w/v Formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td>Tissue Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U.</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>&#160;SP5035</td>
			<td>Antibody Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged Super Frost Plus Glass Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4831-703</td>
			<td>Tissue Mounting Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>&#160;C9999-1000ML</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal &#8211; 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td>Resin for Slide Sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Glass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3322</td>
			<td>Coverslide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Modified Hematoxylin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td>Counterstain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>13-247-30Q</td>
			<td>Oven to Melt Parraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP)</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td>Signal Development Substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>MP-7451</td>
			<td>Secondary IHC Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oster 5712 Digital Food Steamer</td>
			<td>Oster</td>
			<td>5712</td>
			<td>Vegetable Steamer for Epitope Retrival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-ARID1a</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab182560</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9559</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotts Tap Water Substitute</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>S5134-100ML</td>
			<td>&#34;Blueing&#34; Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path IV Cassette</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>22272416</td>
			<td>Tissue Fixation Cassette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trilogy Buffer</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>&#160;920P-10</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice

I tumori uterini possono essere studiati nei topi a causa della facilità di manipolazione e manipolazione genetica in questi modelli. Tuttavia, questi studi sono spesso limitati a valutare la patologia post-mortem negli animali sottoposti a eutanasia in più punti temporali in diverse coorti, il che aumenta il numero di topi necessari per uno studio. L'imaging dei topi negli studi longitudinali può monitorare la progressione della malattia nei singoli animali, riducendo il numero di topi necessari. I progressi nella tecnologia a ultrasuoni hanno permesso di rilevare cambiamenti a livello micrometrico nei tessuti. L'ecografia è stata utilizzata per studiare la maturazione del follicolo nelle ovaie e la crescita dello xenotrapianto, ma non è stata applicata ai cambiamenti morfologici nell'utero del topo. Questo protocollo esamina la giustapposizione della patologia con confronti di imaging in vivo in un modello murino di cancro dell'endometrio indotto. Le caratteristiche osservate dagli ultrasuoni erano coerenti con il grado di cambiamento osservato dalla patologia grossolana e dall'istologia. L'ecografia è risultata altamente predittiva della patologia osservata, supportando l'incorporazione dell'ecografia negli studi longitudinali delle malattie uterine come il cancro nei topi.

I topi transgenici a doppia delezione (iPAD) Pax8-Cre-Arid1a-Pten sono stati mantenuti su un background genetico misto (129S, BALB/C, C57BL/6), come descritto in precedenza14. I topi sono stati tutti alimentati con doxiciclina per 2 settimane per indurre Cre ricombinasi. In precedenti lavori del nostro gruppo, la doxiciclina è stata dosata con sonda gastrica14; Tuttavia, in questo studio, il metodo di induzione del mangime per doxiciclina ha funzionato in...

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Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

Questo protocollo descrive un metodo per monitorare la progressione dei cambiamenti morfologici nel tempo nell'utero in un modello murino inducibile di cancro dell'endometrio utilizzando l'imaging ad ultrasuoni con correlazione ai cambiamenti grossolani e istologici.

Valutazione ecografica non invasiva della progressione del cancro dell'endometrio nella delezione diretta da Pax8 dei soppressori tumorali Arid1a e Pten nei topi

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Questo studio dimostra che l'ecografia guidata manuale è adatta per monitorare lo sviluppo della patologia uterina in un modello murino indotto di cancro dell'endometrio. L'imaging ad ultrasuoni non è invasivo e quindi consente studi longitudinali di singoli topi per giorni e settimane. Ciò consente la cattura delle variazioni individuali e, in definitiva, un minor numero di animali da utilizzare per lo studio.Questo metodo può essere facilmente applicato per monitorare i cambiamenti patologici e altri modelli di mirroring, compresi quelli per neoplasie e malattie croniche del tratto urinario e digestivo. Iniziare a configurare la macchina ad ultrasuoni per l'imaging dell'utero o dell'ovaio selezionando un trasduttore o una sonda con un intervallo da 32 a 56 megahertz. Vai alla scheda Applicazioni dalla schermata principale e seleziona Mouse Small Abdomen Mode.Quindi fare clic su Scansione per tornare alla schermata iniziale e attendere che venga visualizzata un'immagine live. Quindi, selezionare Modalità B dalle opzioni sulla barra degli strumenti di sinistra prima di fare clic sull'opzione Altri controlli per visualizzare strumenti aggiuntivi per il perfezionamento dell'immagine, come il guadagno e la profondità dell'immagine o per regolare le impostazioni di acquisizione della clip, come il numero di fotogrammi al secondo. Una volta selezionate le impostazioni dell'immagine, tornare alla schermata iniziale facendo clic su Modalità B.Posizionare una siringa da tre a 10 millilitri riempita con una soluzione di liquido isotonico sterile tra una piastra riscaldante e una piastra assorbente per diversi minuti per preriscaldarla a 35-40 gradi Celsius. Se la macchina non ha uno scaldavivande, posizionare una bottiglia di gel per ultrasuoni sulla piastra riscaldante. Per iniettare da uno a due millilitri di soluzione nella cavità peritoneale di un topo, fissare il topo per la collottola in una mano, esponendo lo sventro.Quindi tenere il mouse con un angolo di circa 20 gradi con il naso puntato verso il pavimento. Inserire un ago da siringa per tubercolina calibro 25 attraverso la pelle e la parete addominale del quadrante caudale destro dell'addome. Per evitare l'iniezione nel sistema vascolare o nel tratto gastrointestinale, tirare indietro lo stantuffo della siringa con una pressione minima per cercare sangue.Posizionare il topo in posizione ventrale sdraiata sul tampone assorbente sopra una piastra riscaldante prima di posizionare saldamente un cono del naso del roditore sul naso e sul muso del topo. Posizionare una piccola quantità di gel abassiale ad ultrasuoni preriscaldato sulla colonna vertebrale su entrambi i lati del topo anestetizzato tra l'ultima costola e il bacino. Metti una piccola quantità di gel sulla sonda ad ultrasuoni.Quindi, posizionare la sonda parallelamente alle vertebre con la parte anteriore della sonda sul lato cranico. Con un topo in posizione sdraiata ventrale, scansionare lentamente l'area per il punto di riferimento del rene. Con il rene in vista, tirare la sonda caudale per trovare l'ovaio, che è una struttura ovale o rotonda leggermente iperecogena all'interno di un cuscinetto adiposo ovarico molto iperecogeno, delimitato cranialmente-ventralmente dal rene e dorsale-lateralmente dalla parete addominale dorsale.Migliora il contrasto dell'immagine regolando il guadagno del segnale utilizzando il cursore nella parte inferiore dello schermo di controllo. Per migliorare l'imaging del rene, applicare pressione sull'addome controlaterale usando un dito. Variare la pressione e l'angolo da parallelo alla colonna vertebrale a circa 20 gradi ventrale.Una volta che l'organo di interesse è in vista, cattura un video facendo clic su Salva clip o Avvia registrazione. Una volta fatto, fai clic su Interrompi registrazione per conservare le immagini a un numero preimpostato di fotogrammi. Tenere la sonda caudalmente fino a quando l'ovaio è nell'aspetto più cranico del campo visivo.Variare la pressione e l'angolo della sonda per visualizzare e visualizzare l'utero. Ripeti la raccolta di video e fotogrammi per ogni organo di interesse. Trova l'utero che corre longitudinalmente lungo la parete addominale dorsale con la muscolatura laterale della gamba in vista.Monitorare il tessuto per un movimento peristaltico per differenziare le anse intestinali dalle corna stazionarie uterine. Posizionare il mouse in posizione dorsale sdraiata per raccogliere le immagini da un approccio ventrale. Assicurarsi che la lubrificazione degli occhi sia sufficiente e che la museruola sia fissata nel cono del naso.Applicare una piccola quantità di gel ecografico preriscaldato sull'addome ventrale prima di applicare la sonda sulla linea mediana e cranica del pube per individuare la vescica come punto di riferimento ipoecogeno. Per trovare le corna uterine, tirare la sonda lateralmente alla vescica. Applicare una leggera pressione digitale da uno o entrambi i lati del mouse.Una volta che le corna uterine sono nel campo visivo, tenere la sonda perpendicolare al mouse e scansionare entrambi i lati dell'addome per catturare le viste trasversali di entrambe le corna. Ruotare la sonda per acquisire viste sagittali. Dopo l'ecografia, pulire il mouse con un tovagliolo di carta prima di rimetterlo nella sua gabbia per recuperare.Una volta che il topo è completamente sveglio dopo due-cinque minuti, riporta il topo nella stanza degli animali. Il confronto delle immagini ecografiche della cavità addominale del topo prima e dopo l'iniezione salina ha mostrato una migliore visualizzazione degli organi addominali, compresi l'utero e le ovaie dopo l'iniezione salina. Un approccio ventrale è stato utilizzato per studiare le sezioni trasversali delle corna uterine adiacenti alla vescica ipoecogena.L'immunoistochimica con anticorpi diretti contro Arid1a e Pten è stata utilizzata per studiare l'adeguata perdita di proteine oncosoppressori compiuta nelle cellule epiteliali uterine rispetto al tessuto stromale vicino. Le immagini ecografiche di un utero di topo con alterazioni patologiche precoci sono state rilevate dopo tre settimane di trattamento con doxiciclina, mostrando il lume ipoecogeno e dilatato dell'utero. Nello studio di patologia grossolana e istopatologia dello stesso utero, sono stati osservati rispettivamente un utero a parete sottile più piccolo ma dilatato e un'iperplasia endometriale precoce con la conservazione del lume distinto.I topi eutanasizzati, in momenti successivi, hanno mostrato un utero più grande con un lume più piccolo e una parete ispessita. Quando si impara a utilizzare il posizionamento manuale delle sonde, una pressione eccessiva o un movimento rapido possono rendere difficile l'identificazione degli organi. Usa movimenti delicati e deliberati e concentrati sull'identificazione degli organi che sono punti di riferimento per primi.All'endpoint dello studio, i topi vengono sacrificati e il tessuto viene raccolto per confermare il knockdown genico e caratterizzare i cambiamenti tissutali. Questa tecnica consente ai ricercatori di monitorare le lesioni intraaddominali nel tempo. E nel nostro caso, lo abbiamo usato per monitorare la progressione del cancro uterino nel modello iPad, che abbiamo poi confermato dall'istopatologia.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

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Il<em&gt; Drosophila</em&gt; Immaginale Disc tumore Modello: visualizzazione e la quantificazione di espressione genica e di Tumor invasività Utilizzando genetica Mosaici

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

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This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

Del radionuclide-fluorescenza Reporter Gene Imaging per monitorare la progressione del tumore nei modelli del roditore del tumore

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

L'utilizzo degli ultrasuoni guidati l'impianto cellulare diretto del tessuto per l'istituzione degli xenotrapianti del tumore metastatico biologicamente rilevanti

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Arricchimento e caratterizzazione dei tumore immuni e Non immuni microambienti in tumori murini sottocutanei stabiliti

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Reazione a catena della polimerasi digitale per la variazione genetica in un paziente di poliposi adenomatosa familiare sporadica utilizzando il formato di Chip-in-a-tubo

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Intramucosa inoculazione delle cellule di Carcinoma di cellule Squamous nei topi per profilatura Immune tumore e valutazione della risposta di trattamento

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

In vivivo Inibizione del MicroRNA per diminuire la crescita tumorale nei topi

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Rilevamento della progressione del tumore del polmone nei topi mediante Ultrasound Imaging

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...