Name: non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

NCI卵巣がん胞子プログラムP50CA228991、ポスドク研修プログラム5T32OD011089、ジョンズ・ホプキンス大学のリチャード・W・テリンデ基金からの資金提供に感謝している。また、私立学校振興・共済機構の私立高等教育機関への経常支出補助金も一部賄いました。

マウスを含むすべての手順および実験は、ジョンズホプキンス動物管理および使用委員会によって承認されたプロトコルに従って実施されました。すべての手順で、手袋や使い捨ての隔離ガウンなど、適切なPPEを着用しました。使用直後に赤い箱の鋭利物の容器に適切に廃棄された鋭利物を取り扱う際には注意が払われました。このプロトコルで使用されるすべての材料と機器の詳細につい?...

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	<li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents:+an+update.">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5 (2020).</li><li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology.">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125 (2020).</li><li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk.">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research:+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging.">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238 (2012).</li><li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer.">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research:+A+review+of+examples,+options,+and+resources.">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li><li>Peterson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuing+education+course+#1:+Non-invasive+imaging+as+a+problem-solving+tool+and+translational+biomarker+strategy+in+toxicologic+pathology.">Continuing education course #1: Non-invasive imaging as a problem-solving tool and translational biomarker strategy in toxicologic pathology.</a> Toxicologic Pathology. 39 (1), 267-272 (2011).</li><li>Pfeifer, L. F., Adams, G. P., Pierson, R. A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy:+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals.">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li><li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis.">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li><li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106 (2009).</li><li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model.">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li><li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse.">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats.">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038 (2017).</li><li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming.">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717 (2020).</li><li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer:+Insights+from+a+new+mouse+model.">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144 (2021).</li></ol>

このプロトコルは、マウスの子宮内の腺癌の進行における子宮形態学的変化を評価するための超音波の有用性を調べます。本研究では、マウスの子宮内膜がんの誘導を縦断的に追跡することにより、超音波によって検出された解剖学的詳細が肉眼的および組織学的病理の指標となることが判明した。これにより、マウスの子宮がんの進行を追跡するために、複数の時点で超音波によって監視?...

マウスは、生殖障害の最も重要な動物モデルの1つであり続けています1,2,3。卵巣がんおよび子宮がんの遺伝子組み換えまたは誘発されたげっ歯類モデルがいくつかあります。これらの研究は通常、形態学的および病理学的変化の縦断的傾向を把握するために、異なる時点で安楽死させた複数のコホートに依存しています。これにより、個々のマウスにおける癌発生に関する継続的なデータを取得する能力が妨げられる。さらに、個々のマウス疾患進行状態を知らなくても、介入研究は、特定の動物における進行を検出するための個々の閾値ではなく、所定の時点および以前のコホートの平均所見に基づいている4,5。したがって、新薬や化合物を試験するための前臨床モデルを促進し、病理生物学の理解を加速すると同時に、厳密さと再現性を高めるために、生きた動物での縦断的評価を可能にするイメージングアプローチが必要です6。
超音波イメージング(米国)は、他のイメージング方法と比較して比較的簡単で安価であり、実行が容易であり、驚くべき解像度を持つことができるため、マウス子宮がんの進行の縦断的モニタリングにとって魅力的な方法です6,7。この非侵襲的モダリティは、覚醒マウスまたは5〜10分の検査を使用して短時間の鎮静下にあるマウスでミクロンスケールの特徴をキャプチャできます。超音波顕微鏡は、マウス卵巣卵胞の発達8および移植または誘発された腫瘍の成長を測定する方法として検証されています9、10、11。高周波USはまた、経皮的子宮内注射12および発情周期13にわたるラット子宮変化の観察にも使用されている。高周波USは、レールシステムを使用してトランスデューサ/プローブを保持し、標準化された位置と圧力で高解像度の画像をキャプチャする特殊な固定プラットフォームにマウスを保持します。ただし、この機器はすべての機関で利用できるわけではありません。ハンドヘルドトランスデューサースキャン法は、より少ない専用機器で採用でき、マウスの臨床診断と研究アプリケーションの両方に使用できます。
ハンドヘルド高周波プローブを使用した米国のイメージングを使用して、数週間にわたって子宮がんの発生を監視できるかどうかという疑問が残ります。腸と同様に、げっ歯類の子宮は薄壁の細い構造であり、腹部内で非常に可動性があり、複数の組織の深さに隣接しているため、腎臓などの比較的動かない臓器よりもイメージングが困難です。この研究は、超音波によって観察された組織と組織病理学の間の相関を確立し、マウスの子宮を見つけるためのランドマークを定義し、 子宮内膜がんの縦断的評価の実現可能性。この研究は、米国によって画像化された子宮の出現と組織病理学との間の定性的対応を示すデータを提示し、数週間にわたるマウスの連続画像も提示します。これらの結果は、ハンドヘルドUSを使用してマウスの子宮内膜がんの発生をモニタリングできるため、専用の機器を必要とせずに個々のマウス縦断データを収集して子宮がんを研究する機会が生まれることを示しています。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Animal Care</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td>
			<td>Envigio</td>
			<td>TD.01306</td>
			<td>Mouse Feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL injectable 0.9% NaCl&#160;</td>
			<td>Hospira, Inc</td>
			<td>RL-7302</td>
			<td>Isotonic Fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Pad with Plastic Backing</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF8313</td>
			<td>Absorbant Pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Induction Chambers</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2029</td>
			<td>Induction Chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, &#38; adapters</td>
			<td>CWE, Inc</td>
			<td>13-20000</td>
			<td>Nose Cone and Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter)</td>
			<td>Parker Laboratoies</td>
			<td>08-03</td>
			<td>Ultrasound Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak 3 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309657</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/Air Scavenger Charcoal Canister</td>
			<td>OMNICON</td>
			<td>80120</td>
			<td>Scavenging System for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>502017</td>
			<td>Anesthesia Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>Scivena Scientific</td>
			<td>M1050</td>
			<td>Anestheic Vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>MX550S</td>
			<td>Ultrasound Transducer (Probe)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Aloe &#38; Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Depilliating Cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td>
			<td>Philips North America</td>
			<td>MG7750</td>
			<td>Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide 25 G 1&#34; Needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td>Lubricating Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Ultrasound Machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>Ultrasound Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15&#34;</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>731-500-000R</td>
			<td>Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wd Elements 2TB Basic Storage</td>
			<td>Western Digital Elements</td>
			<td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td>
			<td>Data Storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% w/v Formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td>Tissue Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U.</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>&#160;SP5035</td>
			<td>Antibody Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged Super Frost Plus Glass Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4831-703</td>
			<td>Tissue Mounting Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>&#160;C9999-1000ML</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal &#8211; 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td>Resin for Slide Sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Glass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3322</td>
			<td>Coverslide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Modified Hematoxylin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td>Counterstain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>13-247-30Q</td>
			<td>Oven to Melt Parraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP)</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td>Signal Development Substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>MP-7451</td>
			<td>Secondary IHC Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oster 5712 Digital Food Steamer</td>
			<td>Oster</td>
			<td>5712</td>
			<td>Vegetable Steamer for Epitope Retrival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-ARID1a</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab182560</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9559</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotts Tap Water Substitute</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>S5134-100ML</td>
			<td>&#34;Blueing&#34; Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path IV Cassette</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>22272416</td>
			<td>Tissue Fixation Cassette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trilogy Buffer</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>&#160;920P-10</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice

子宮がんは、これらのモデルでの取り扱いと遺伝子操作の容易さのためにマウスで研究することができます。ただし、これらの研究は、異なるコホートの複数の時点で安楽死させた動物の死後の病理の評価に限定されることが多く、研究に必要なマウスの数が増加します。縦断的研究でマウスをイメージングすると、個々の動物の病気の進行を追跡できるため、必要なマウスの数を減らすことができます。超音波技術の進歩により、組織のマイクロメートルレベルの変化を検出できるようになりました。超音波は、卵巣の卵胞成熟および異種移植片の成長を研究するために使用されてきましたが、マウスの子宮の形態学的変化には適用されていません。このプロトコルは、誘発された子宮内膜がんマウスモデルにおける in vivo イメージング比較と病理学の並置を調べます。超音波によって観察された特徴は、肉眼的病理学および組織学によって見られる変化の程度と一致していた。超音波は観察された病状を高度に予測することがわかり、マウスの癌などの子宮疾患の縦断的研究への超音波検査の組み込みを支持しました。

Pax8-Cre-Arid1a-Pten二重欠失(iPAD)トランスジェニックマウスは、前述のように、混合遺伝的背景(129S、BALB/C、C57BL/6)で維持された14。マウス全員にドキシサイクリン飼料を2週間与えて、Creリコンビナーゼを誘導した。私たちのグループによる以前の研究では、ドキシサイクリンは経管投与14によって投与されました。しかし、この現在の研究では、?...

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Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

このプロトコルは、肉眼的および組織学的変化との相関を有する超音波画像を用いて、子宮内膜癌の誘導性マウスモデルにおける子宮内の形態学的変化の経時的な進行をモニターするための方法を記載する。

マウスにおける腫瘍抑制因子 Arid1a および Pten のPax8指向性欠失における子宮内膜癌進行の非侵襲的超音波評価

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

この研究は、手動ガイド超音波が子宮内膜癌の誘発マウスモデルにおける子宮病理の発症を監視するのに適していることを示しています。超音波イメージングは非侵襲的であるため、数日から数週間にわたる個々のマウスの縦断的研究が可能です。これにより、個体差を捉えることができ、最終的には研究に使用する動物を減らすことができます。この方法は、病理学的変化および尿路および消化管の新生物および慢性疾患のためのものを含む他のミラーリングモデルのモニタリングに容易に適用することができる。32〜56メガヘルツの範囲のトランスデューサーまたはプローブを選択して、子宮または卵巣をイメージングするための超音波装置のセットアップを開始します。ホーム画面から[アプリケーション]タブに移動し、[マウス小腹部モード]を選択します。次に、[スキャン]をクリックしてホーム画面に戻り、ライブ画像が表示されるのを待ちます。次に、左側のツールバーのオプションからBモードを選択してから、[その他のコントロール]オプションをクリックして、画像のゲインや深度などの画像調整の追加ツールを表示したり、毎秒のフレーム数などのクリップ取得設定を調整したりします。画像設定を選択したら、Bモードをクリックしてホーム画面に戻ります。滅菌等張液で満たされた3〜10ミリリットルのシリンジを加熱パッドと吸収パッドの間に数分間置き、摂氏35〜40度に予熱します。機械にウォーマーがない場合は、超音波ジェルのボトルを加熱パッドに置きます。マウスの腹腔に1〜2ミリリットルの溶液を注入するには、片手で首筋でマウスを固定し、腹側を露出させます。次に、鼻を床に向けてマウスを約20度の角度で保持します。25ゲージのツベルクリン注射針を腹部の尾側右象限の皮膚と腹壁に挿入します。血管系または消化管への注射を避けるために、最小限の圧力でシリンジプランジャーを引き戻し、血液を探します。マウスの鼻と銃口の上にげっ歯類のノーズコーンをしっかりと置く前に、加熱パッドの上の吸収パッドにマウスを腹側横臥状態にします。麻酔をかけたマウスの両側の最後の肋骨と骨盤の間の脊椎に、少量の予熱した超音波ゲルをアブ軸方向に置きます。超音波プローブに少量のゲルを置きます。次に、プローブを椎骨と平行に配置し、プローブの前面を頭蓋側に配置します。マウスを腹側横臥状態にして、腎臓のランドマークがないかその領域をゆっくりとスキャンします。腎臓が見える状態で、プローブの尾を引いて、非常に高エコーの卵巣脂肪パッド内のわずかに高エコーの楕円形から丸い構造である卵巣を見つけ、腎臓によって頭蓋腹側と背側側壁に隣接しています。コントロール画面の下部にあるスライダーを使用して信号ゲインを調整することにより、画像のコントラストを改善します。腎臓の画像を改善するには、指を使用して反対側の腹部に圧力をかけます。圧力と角度を背骨に平行から腹側約20度まで変化させます。目的の臓器が表示されたら、[クリップの保存]または[録画の開始]をクリックしてビデオをキャプチャします。完了したら、[記録の停止]をクリックして、事前設定されたフレーム数で画像を保持します。卵巣が視野の最も頭蓋的な側面になるまで、プローブを尾側に保持します。プローブの圧力と角度を変えて、子宮を表示および画像化します。関心のある臓器ごとにビデオとフレームの収集を繰り返します。外側の脚の筋肉組織を視野に入れて、背側腹壁に沿って縦方向に走っている子宮を見つけます。腸ループを子宮静止角と区別するために、蠕動運動について組織を監視します。マウスを背側横臥状態にして、腹側アプローチから画像を収集します。目の潤滑が十分であり、銃口がノーズコーンに固定されていることを確認してください。恥骨の正中線と頭蓋にプローブを適用して、膀胱を低エコーのランドマークとして位置付ける前に、少量の予熱した超音波ゲルを腹腹部に適用します。子宮角を見つけるには、プローブを膀胱の外側に引きます。マウスの片側または両側から軽いデジタル圧力をかけます。子宮角が視野に入ったら、プローブをマウスに対して垂直に持ち、腹部の両側をスキャンして、両方の角の横方向のビューをキャプチャします。プローブを回転させて矢状ビューをキャプチャします。超音波検査の後、マウスをペーパータオルで拭いてからケージに戻して回復させます。2〜5分後にマウスが完全に目覚めたら、マウスを動物室に戻します。生理食塩水注射前後のマウス腹腔の超音波画像比較は、生理食塩水注射後の子宮および卵巣を含む腹部器官の改善された視覚化を示した。腹側アプローチを使用して、低エコー性膀胱に隣接する子宮角の断面を研究しました。Arid1aおよびPtenに対する抗体を用いた免疫組織化学を用いて、隣接する間質組織と比較して子宮上皮細胞で達成される適切な腫瘍抑制タンパク質損失を研究した。初期の病理学的変化を有するマウス子宮の超音波画像は、ドキシサイクリン治療の3週間後に検出され、子宮の低エコーおよび拡張した内腔を示した。同じ子宮の肉眼病理学および組織病理学研究では、より小さいが拡張した薄壁子宮および明確な内腔の保存を伴う早期子宮内膜増殖症がそれぞれ観察された。後の時点で安楽死させたマウスは、より小さな内腔と厚い壁を有するより大きな子宮を示した。プローブの手動配置の使用を学ぶとき、過度の圧力または急速な動きは臓器の識別を困難にする可能性があります。穏やかで意図的な動きを使用し、最初にランドマークである臓器を特定することに集中します。研究のエンドポイントでは、マウスを屠殺し、組織を採取して遺伝子ノックダウンを確認し、組織の変化を特徴付けます。この技術により、研究者は腹腔内病変を経時的に監視できます。そして私たちの場合、iPadモデルで子宮がんの進行を監視するために使用し、組織病理学によって確認しました。

Research

JoVE Journal

Cancer Research

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Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

超音波画像によるマウスにおける肺腫瘍の進行の検出

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...