Name: non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

NCI 난소암 포자 프로그램 P50CA228991, 박사후 과정 교육 프로그램 5T32OD011089 및 존스 홉킨스 대학의 Richard W. TeLinde Endowment의 자금 지원에 감사드립니다. 이 프로젝트는 또한 일본 사립 학교 진흥 및 상호 원조 공사 (Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan)의 사립 고등 교육 기관에 대한 경상 지출에 대한 보조금으로 부분적으로 자금을 조달 받았다.

마우스를 포함하는 모든 절차 및 실험은 존스 홉킨스 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인된 프로토콜에 따라 수행되었다. 모든 절차에 대해 장갑과 일회용 격리 가운을 포함하여 적절한 PPE를 착용했습니다. 날카로운 물건을 취급할 때 예방 조치를 취했으며, 사용 직후 빨간색 상자 날카로운 물건 용기에 적절하게 폐기했습니다. 이 프로토콜에 사용된 모든 재료 및 장비에 대한 자세한 내용은 <s...

<ol>
	<li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents:+an+update.">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5 (2020).</li><li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology.">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125 (2020).</li><li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk.">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research:+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging.">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238 (2012).</li><li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer.">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research:+A+review+of+examples,+options,+and+resources.">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li><li>Peterson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuing+education+course+#1:+Non-invasive+imaging+as+a+problem-solving+tool+and+translational+biomarker+strategy+in+toxicologic+pathology.">Continuing education course #1: Non-invasive imaging as a problem-solving tool and translational biomarker strategy in toxicologic pathology.</a> Toxicologic Pathology. 39 (1), 267-272 (2011).</li><li>Pfeifer, L. F., Adams, G. P., Pierson, R. A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy:+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals.">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li><li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis.">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li><li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106 (2009).</li><li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model.">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li><li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse.">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats.">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038 (2017).</li><li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming.">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717 (2020).</li><li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer:+Insights+from+a+new+mouse+model.">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144 (2021).</li></ol>

이 프로토콜은 생쥐의 자궁 내 선암 진행에서 자궁 형태학적 변화를 평가하기 위한 초음파의 유용성을 조사합니다. 본 연구에서는 생쥐에서 자궁내막암의 유도를 종단으로 추적하여 초음파로 검출된 해부학적 세부 사항이 육안적 및 조직학적 병리의 지표임을 밝혀냈다. 이것은 생쥐에서 자궁암의 진행을 추적하기 위해 여러 시점에서 초음파로 모니터링되는 더 적은 수의 생쥐를 대상으로 종단 ?...

마우스는 생식 장애에 대한 가장 중요한 동물 모델 중 하나이다 1,2,3. 난소암과 자궁암의 여러 유전자 변형 또는 유도 설치류 모델이 있습니다. 이러한 연구는 일반적으로 형태학적 및 병리학적 변화의 종단적 경향을 포착하기 위해 서로 다른 시점에서 안락사된 여러 코호트에 의존합니다. 이것은 개별 마우스에서 암 발병에 대한 지속적인 데이터를 획득하는 능력을 방지합니다. 추가적으로, 개별 마우스의 질병 진행 상태를 알지 못하면, 개입 연구는 특정 동물에서 진행을 검출하기 위한 개별 역치보다는 미리 결정된 시점과 이전 코호트의 평균 소견을 기반으로 한다 4,5. 따라서 신약 또는 화합물 테스트를 위한 전임상 모델을 용이하게 하고 병리학에 대한 이해를 가속화하는 동시에 엄격함과 재현성을 높이기 위해 살아있는 동물에서 종단적 평가를 허용하는 이미징 접근법이 필요합니다6.
초음파 영상(US)은 다른 영상 방법에 비해 상대적으로 쉽고 저렴하며 수행하기 쉽고 놀라운 해상도를 가질 수 있기 때문에 마우스 자궁암 진행의 종단 모니터링에 매력적인 방법입니다 6,7. 이 비침습적 방식은 깨어 있는 생쥐 또는 5-10분 검사를 사용하여 짧은 진정 상태에서 생쥐에서 미크론 규모의 특징을 포착할 수 있습니다. 초음파 현미경은 마우스 난포 발달 8 및 이식 또는 유도된 신생물의 성장을 측정하는 방법으로 검증되었다 9,10,11. 고주파 US는 또한 경피적 자궁내 주사12 및 발정 주기13 동안 쥐의 자궁 변화 관찰에 사용되었다. 고주파 US는 표준화된 위치와 압력으로 고해상도 이미지를 캡처하기 위해 변환기/프로브를 고정하는 레일 시스템을 사용하여 특수 고정 플랫폼에 고정된 마우스와 함께 사용할 수 있습니다. 그러나 이 장비는 모든 기관에서 사용할 수 있는 것은 아닙니다. 휴대용 변환기 스캐닝 방법은 덜 전용 장비로 채택할 수 있으며 마우스의 임상 진단 및 연구 응용 프로그램 모두에 사용할 수 있습니다.
휴대용 고주파 프로브를 사용한 미국 이미징을 사용하여 여러 주에 걸쳐 자궁암 발병을 모니터링할 수 있는지 여부에 대한 의문이 남아 있습니다. 내장과 유사하게 설치류 자궁은 복부 내에서 매우 움직이고 여러 조직 깊이를 통해 인접해 있는 얇고 가느다란 구조로 신장과 같이 상대적으로 움직이지 않는 기관보다 이미징이 더 어렵습니다. 이 연구는 초음파로 관찰된 조직과 조직병리학 사이의 상관관계를 확립하고, 마우스 자궁을 찾기 위한 랜드마크를 정의하고, 자궁내막암의 종단적 평가의 타당성을 결정하고자 했습니다. 이 연구는 미국에 의해 이미지화된 자궁의 모양과 조직 병리학 사이의 질적 일치를 보여주는 데이터와 몇 주에 걸친 마우스의 연속 이미징을 보여줍니다. 이러한 결과는 휴대용 US가 마우스의 자궁내막암 발병을 모니터링하는 데 사용될 수 있음을 나타내며, 따라서 전용 장비 없이 자궁암을 연구하기 위해 개별 마우스 종단 데이터를 수집할 수 있는 기회를 제공합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Animal Care</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td>
			<td>Envigio</td>
			<td>TD.01306</td>
			<td>Mouse Feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL injectable 0.9% NaCl&#160;</td>
			<td>Hospira, Inc</td>
			<td>RL-7302</td>
			<td>Isotonic Fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Pad with Plastic Backing</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF8313</td>
			<td>Absorbant Pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Induction Chambers</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2029</td>
			<td>Induction Chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, &#38; adapters</td>
			<td>CWE, Inc</td>
			<td>13-20000</td>
			<td>Nose Cone and Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter)</td>
			<td>Parker Laboratoies</td>
			<td>08-03</td>
			<td>Ultrasound Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak 3 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309657</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/Air Scavenger Charcoal Canister</td>
			<td>OMNICON</td>
			<td>80120</td>
			<td>Scavenging System for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>502017</td>
			<td>Anesthesia Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>Scivena Scientific</td>
			<td>M1050</td>
			<td>Anestheic Vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>MX550S</td>
			<td>Ultrasound Transducer (Probe)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Aloe &#38; Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Depilliating Cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td>
			<td>Philips North America</td>
			<td>MG7750</td>
			<td>Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide 25 G 1&#34; Needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td>Lubricating Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Ultrasound Machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>Ultrasound Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15&#34;</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>731-500-000R</td>
			<td>Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wd Elements 2TB Basic Storage</td>
			<td>Western Digital Elements</td>
			<td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td>
			<td>Data Storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% w/v Formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td>Tissue Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U.</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>&#160;SP5035</td>
			<td>Antibody Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged Super Frost Plus Glass Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4831-703</td>
			<td>Tissue Mounting Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>&#160;C9999-1000ML</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal &#8211; 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td>Resin for Slide Sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Glass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3322</td>
			<td>Coverslide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Modified Hematoxylin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td>Counterstain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>13-247-30Q</td>
			<td>Oven to Melt Parraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP)</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td>Signal Development Substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>MP-7451</td>
			<td>Secondary IHC Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oster 5712 Digital Food Steamer</td>
			<td>Oster</td>
			<td>5712</td>
			<td>Vegetable Steamer for Epitope Retrival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-ARID1a</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab182560</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9559</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotts Tap Water Substitute</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>S5134-100ML</td>
			<td>&#34;Blueing&#34; Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path IV Cassette</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>22272416</td>
			<td>Tissue Fixation Cassette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trilogy Buffer</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>&#160;920P-10</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice

자궁암은 이러한 모델에서 취급 및 유전자 조작의 용이성으로 인해 생쥐에서 연구될 수 있습니다. 그러나 이러한 연구는 종종 다른 코호트에서 여러 시점에서 안락사된 동물의 사후 병리를 평가하는 것으로 제한되며, 이는 연구에 필요한 마우스의 수를 증가시킵니다. 종단 연구에서 이미징 마우스는 개별 동물의 질병 진행을 추적하여 필요한 마우스의 수를 줄일 수 있습니다. 초음파 기술의 발전으로 조직의 마이크로미터 수준의 변화를 감지할 수 있게 되었습니다. 초음파는 난소의 난포 성숙과 이종 이식 성장을 연구하는 데 사용되었지만 마우스 자궁의 형태학적 변화에는 적용되지 않았습니다. 이 프로토콜은 유도된 자궁내막암 마우스 모델에서 병리학과 생체 내 이미징 비교의 병치를 조사합니다. 초음파로 관찰된 특징은 육안적 병리학 및 조직학에서 볼 수 있는 변화의 정도와 일치했습니다. 초음파는 관찰 된 병리를 매우 예측하는 것으로 밝혀졌으며, 생쥐의 암과 같은 자궁 질환의 종단 연구에 초음파 검사의 통합을 지원합니다.

Pax8-Cre-Arid1a-Pten 이중 결실(iPAD) 형질전환 마우스는 이전에 기술된 바와 같이 혼합 유전적 배경(129S, BALB/C, C57BL/6)에서 유지되었다14. 마우스는 모두 Cre 재조합 효소를 유도하기 위해 2 주 동안 독시사이클린 사료를 공급 받았다. 우리 그룹의 이전 연구에서 독시사이클린은 위관 영양14에 의해 투여되었습니다. 그러나 이 현재 연구에서 독시사이클린 ?...

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Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

이 프로토콜은 전체 및 조직학적 변화와 상관관계가 있는 초음파 영상을 사용하여 자궁내막암의 유도성 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 형태학적 변화의 진행을 모니터링하는 방법을 설명합니다.

마우스에서 종양 억제인자 Arid1a 및 Pten 의 Pax8 지시 결실에서 자궁내막암 진행의 비침습적 초음파 평가

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

이 연구는 수동 유도 초음파가 자궁내막암의 유도 마우스 모델에서 자궁 병리의 발달을 모니터링하는 데 매우 적합하다는 것을 보여줍니다. 초음파 영상은 비침습적이므로 며칠과 몇 주에 걸쳐 개별 마우스에 대한 종단 연구가 가능합니다. 이를 통해 개인차를 포착할 수 있고 궁극적으로 연구에 사용할 동물 수를 줄일 수 있습니다.이 방법은 병리학적 변화 및 비뇨기 및 소화관의 신생물 및 만성 질환에 대한 것을 포함한 기타 미러링 모델을 모니터링하는 데 쉽게 적용할 수 있습니다. 32-56 메가 헤르츠 범위의 변환기 또는 프로브를 선택하여 자궁 또는 난소 이미징을위한 초음파 기계 설정을 시작하십시오. 홈 화면에서 Applications(응용 프로그램) 탭으로 이동하여 Mouse Small Abdomen Mode(마우스 작은 복부 모드)를 선택합니다.그런 다음 스캔을 클릭하여 홈 화면으로 돌아가 라이브 이미지가 표시될 때까지 기다립니다. 그런 다음 추가 컨트롤 옵션을 클릭하기 전에 왼쪽 도구 모음의 옵션에서 B 모드를 선택하여 이미지 게인 및 깊이와 같은 이미지 미세 조정을 위한 추가 도구를 보거나 초당 프레임 수와 같은 클립 획득 설정을 조정합니다. 이미지 설정이 선택되면 B 모드를 클릭하여 홈 화면으로 돌아갑니다.가열 패드와 흡수 패드 사이에 멸균 등장 유체 용액으로 채워진 3-10 밀리리터 주사기를 몇 분 동안 놓고 섭씨 35-40 도로 예열합니다. 기계에 워머가 없으면 가열 패드에 초음파 젤 한 병을 놓습니다. 마우스의 복강에 1-2 밀리리터의 용액을 주입하려면 한 손으로 스크러프를 잡고 복부를 노출시킵니다.그런 다음 코가 바닥을 향하도록 마우스를 약 20도 각도로 잡습니다. 복부의 꼬리 오른쪽 사분면의 피부와 복벽을 통해 25게이지 투베르쿨린 주사기 바늘을 삽입합니다. 맥관 구조나 위장관으로의 주입을 피하려면 혈액을 찾기 위해 최소한의 압력으로 주사기 플런저를 뒤로 당깁니다.마우스의 코와 위에 설치류 노즈 콘을 단단히 놓기 전에 가열 패드 위의 흡수 패드에 마우스를 복부 누운 상태로 놓습니다. 마지막 갈비뼈와 골반 사이에 마취된 마우스의 양쪽에 있는 척추에 소량의 예열 초음파 젤을 축으로 놓습니다. 초음파 프로브에 소량의 젤을 넣으십시오.다음으로, 프로브의 전면이 두개골 쪽에 오도록 프로브를 척추와 평행하게 놓습니다. 복부 누운 상태에서 마우스를 사용하여 신장 랜드마크를 찾기 위해 해당 부위를 천천히 스캔합니다. 신장이 보이는 상태에서 탐침 꼬리를 당겨 난소를 찾습니다.이 난소는 매우 고 에코 성 난소 지방 패드 내에서 약간 고 에코 타원형에서 둥근 구조로, 신장에 의해 두개골-복부로, 등쪽 복벽에 의해 등쪽-측면으로 경계를 이룹니다.제어 화면 하단의 슬라이더를 사용하여 신호 게인을 조정하여 이미지 대비를 개선합니다. 신장의 영상을 개선하려면 손가락을 사용하여 반대쪽 복부에 압력을 가하십시오. 압력과 각도를 척추와 평행한 것에서 복부 약 20도까지 변경합니다.관심 기관이 보이면 클립 저장 또는 녹화 시작을 클릭하여 비디오를 캡처합니다. 완료되면 기록 중지 미리 설정된 프레임 수로 이미지를 유지합니다. 난소가 시야의 가장 두개골 측면에 올 때까지 프로브를 꼬리쪽으로 잡습니다.프로브 압력과 각도를 변경하여 자궁을 보고 이미지화합니다. 관심 있는 각 기관에 대해 비디오 및 프레임 수집을 반복합니다. 옆다리 근육이 보이는 상태에서 등쪽 복벽을 따라 세로로 달리는 자궁을 찾으십시오.장 루프와 자궁 고정 뿔을 구별하기 위해 연동 운동에 대해 조직을 모니터링합니다. 마우스를 등쪽 누운 자세로 놓아 복부 접근에서 이미지를 수집합니다. 눈 윤활이 충분하고 주둥이가 코 콘에 고정되어 있는지 확인하십시오.치골의 정중선과 두개골에 프로브를 적용하기 전에 소량의 예열 초음파 젤을 복부 복부에 바르고 방광을 저에코 랜드마크로 찾습니다. 자궁 뿔을 찾으려면 탐침을 방광 옆으로 당깁니다. 마우스의 한쪽 또는 양쪽에서 가벼운 디지털 압력을 적용합니다.자궁 뿔이 시야에 들어오면 프로브를 마우스에 수직으로 잡고 복부의 양쪽을 스캔하여 양쪽 뿔의 가로 모습을 캡처합니다. 프로브를 돌려 시상 뷰를 캡처합니다. 초음파 검사 후 종이 타월로 마우스를 닦은 후 케이지로 돌려 보내 회복하십시오.마우스가 2-5 분 후에 완전히 깨어 나면 마우스를 동물 방으로 되돌려 보냅니다. 식염수 주입 전후의 마우스 복강의 초음파 영상 비교는 식염수 주사 후 자궁과 난소를 포함한 복부 장기의 향상된 시각화를 보여주었습니다. 복부 접근법은 저 에코 방광에 인접한 자궁 뿔의 단면을 연구하는 데 사용되었습니다.Arid1a 및 Pten에 대한 항체를 사용한 면역조직화학을 사용하여 인접한 기질 조직과 비교하여 자궁 상피 세포에서 달성된 적절한 종양 억제 단백질 손실을 연구했습니다. 초기 병리학 적 변화가있는 마우스 자궁의 초음파 이미지는 독시사이클린 치료 3 주 후에 검출되어 자궁의 저 에코 및 확장 된 내강을 보여줍니다. 동일한 자궁에 대한 육안적 병리학 및 조직병리학 연구에서, 더 작지만 확장된 얇은 벽 자궁과 뚜렷한 내강의 보존을 갖는 초기 자궁내막 증식이 각각 관찰되었다.나중에 안락사된 마우스는 더 작은 내강과 두꺼워진 벽을 가진 더 큰 자궁을 보여주었습니다. 프로브를 수동으로 배치하는 방법을 배울 때 과도한 압력이나 빠른 움직임으로 인해 장기 식별이 어려울 수 있습니다. 부드럽고 신중한 동작을 사용하고 먼저 랜드 마크 인 기관을 식별하는 데 집중하십시오.연구 종점에서, 마우스를 희생시키고 조직을 수집하여 유전자 녹다운을 확인하고 조직 변화를 특성화합니다. 이 기술을 통해 조사관은 시간 경과에 따른 복강 내 병변을 모니터링할 수 있습니다. 그리고 우리의 경우 iPad 모델에서 자궁암 진행을 모니터링하는 데 사용했으며, 조직 병리학으로 확인했습니다.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

그만큼<em&gt; 초파리</em&gt; 가상적인 디스크 종양 모델 : 유전 모자이크를 사용하여 유전자 발현 및 종양 침윤의 시각화 및 정량화

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

연구

암 연구학

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

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Vivo에서 PH, pO2, 산화 환 원 상태, 고 농도의 인산 염 및 종양 Microenvironment에 티의 EPR 평가

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

방사성 핵 종 형광 취재 원 유전자 설치류 종양 모델에서 종양의 진행을 추적 하기 위해 이미징

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

초음파의 이용 가이드 생물학 관련 전이성 종양 Xenografts의 설립을 위한 세포 이식 조직 감독

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

농축 및 설립된 피하 Murine 종양에서 종양 면역 및 비 면역 Microenvironments의 특성

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

튜브에 칩 형식을 사용 하 여 산발적 인 가족 용 대 환자에 있는 유전 변이 대 한 디지털 중 합 효소 연쇄 반응 분석 결과

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

종양 면역 프로 파일링에 대 한 쥐 및 치료 반응 평가에 편평 세포 암 종 세포의 intramucosal 접종

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

쥐에서 종양 성장을 감소 하는 MicroRNA의 생체 내 억제

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

초음파 화상 진찰에 의하여 마우스에 있는 폐 종양 진행의 탐지

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...