Name: non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Vi er takknemlige for finansiering fra NCI Ovarian Cancer SPORE Program P50CA228991, postdoktorale opplæringsprogram 5T32OD011089, og Richard W. TeLinde Endowment, Johns Hopkins University. Prosjektet ble også delvis finansiert av tilskudd til løpende utgifter til private institusjoner for høyere utdanning fra Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan.

Alle prosedyrer og eksperimenter som involverte mus ble utført i henhold til protokoller godkjent av Johns Hopkins Animal Care and Use Committee. For alle prosedyrer ble passende PPE brukt, inkludert hansker og engangs isolasjonsfrakker. Forholdsregler ble tatt ved håndtering av skarpe gjenstander, som ble forsvarlig avhendet i røde boksbeholdere umiddelbart etter bruk. Se materialfortegnelsen for detaljer om alle materialer og utstyr som brukes i denne protokollen.
1...

<ol>
	<li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents:+an+update.">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5 (2020).</li><li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology.">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125 (2020).</li><li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk.">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research:+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging.">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238 (2012).</li><li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer.">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research:+A+review+of+examples,+options,+and+resources.">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li><li>Peterson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuing+education+course+#1:+Non-invasive+imaging+as+a+problem-solving+tool+and+translational+biomarker+strategy+in+toxicologic+pathology.">Continuing education course #1: Non-invasive imaging as a problem-solving tool and translational biomarker strategy in toxicologic pathology.</a> Toxicologic Pathology. 39 (1), 267-272 (2011).</li><li>Pfeifer, L. F., Adams, G. P., Pierson, R. A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy:+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals.">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li><li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis.">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li><li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106 (2009).</li><li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model.">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li><li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse.">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats.">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038 (2017).</li><li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming.">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717 (2020).</li><li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer:+Insights+from+a+new+mouse+model.">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144 (2021).</li></ol>

Denne protokollen undersøker nytten av ultralyd for å vurdere livmormorfologiske endringer i utviklingen av adenokarsinom i livmoren hos mus. I denne studien, ved å følge induksjon av endometriekreft hos mus langsgående, ble de anatomiske detaljene oppdaget ved ultralyd funnet å være indikatorer på brutto og histologisk patologi. Dette åpner døren for bruk av longitudinelle studier med mindre antall mus overvåket av ultralyd på flere tidspunkter for å følge utviklingen av livmorkreft hos mus. Denne langsgå...

Mus er fortsatt en av de viktigste dyremodellene for reproduktive lidelser 1,2,3. Det finnes flere genetisk modifiserte eller induserte gnagermodeller av eggstokkreft og livmorkreft. Disse studiene er vanligvis avhengige av flere kohorter som avlives på forskjellige tidspunkter for å fange langsgående trender i morfologiske og patologiske endringer. Dette forhindrer muligheten til å skaffe kontinuerlige data om kreftutvikling i en individuell mus. I tillegg, uten å vite den individuelle mussykdomsprogresjonstilstanden, er intervensjonsstudier basert på forhåndsbestemte tidspunkter og gjennomsnittlige funn fra tidligere kohorter i stedet for individuelle terskler for påvisning av progresjon i et bestemt dyr 4,5. Derfor er det behov for bildebehandlingsmetoder som muliggjør longitudinell vurdering hos levende dyr for å legge til rette for prekliniske modeller for testing av nye stoffer eller forbindelser og akselerere forståelsen av patobiologi samtidig som det øker strengheten og reproduserbarheten6.
Ultralydavbildning (US) er en tiltalende metode for langsgående overvåking av progresjon av livmorkreft hos mus fordi den er relativt lett og billig sammenlignet med andre bildebehandlingsmetoder, er enkel å utføre og kan ha bemerkelsesverdig oppløsning 6,7. Denne ikke-invasive modaliteten kan fange funksjoner til mikronskalaen hos våkne mus eller med mus under kort sedasjon ved hjelp av en 5-10 minutters eksamen. Ultralydmikroskopi har blitt validert som en metode for å måle utvikling av eggstokkfollikkel hos mus 8 og veksten av implantert eller indusert neoplasi 9,10,11. Høyfrekvent USA har også blitt brukt til perkutane intrauterine injeksjoner12 og observere rotte livmor endring over østrus syklus13. Høyfrekvent USA kan brukes med mus holdt på spesialiserte stasjonære plattformer ved hjelp av et skinnesystem for å holde transduseren / sonden for å ta bilder med høy oppløsning med standardisert posisjon og trykk; Dette utstyret er imidlertid ikke tilgjengelig ved alle institusjoner. Håndholdte transduserskannemetoder kan tas i bruk med mindre dedikert utstyr og brukes til både klinisk diagnostikk og forskningsapplikasjoner på mus.
Spørsmålet er om amerikansk bildebehandling med håndholdte, høyfrekvente sonder kan brukes til å overvåke livmorkreftutviklingen over flere uker. I likhet med tarmene er gnagerlivmoren en tynnvegget, slank struktur som er veldig mobil i magen og er sammenhengende gjennom flere vevsdybder, noe som gjør avbildning mer utfordrende enn med relativt immobile organer som nyrene. Denne studien forsøkte å etablere sammenhengen mellom vev observert ved ultralyd og histopatologi, definere landemerker for lokalisering av musens livmor og bestemme muligheten for den langsgående vurderingen av endometrisk kreft. Denne studien presenterer data som viser en kvalitativ korrespondanse mellom utseendet til livmor avbildet av amerikansk og histopatologi, samt seriell avbildning av mus over flere uker. Disse resultatene indikerer at håndholdt USA kan brukes til å overvåke endometriekreftutvikling hos mus, og dermed skape en mulighet for å samle individuelle mus langsgående data for å studere livmorkreft uten behov for dedikert utstyr.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Animal Care</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td>
			<td>Envigio</td>
			<td>TD.01306</td>
			<td>Mouse Feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL injectable 0.9% NaCl&#160;</td>
			<td>Hospira, Inc</td>
			<td>RL-7302</td>
			<td>Isotonic Fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Pad with Plastic Backing</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF8313</td>
			<td>Absorbant Pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Induction Chambers</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2029</td>
			<td>Induction Chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, &#38; adapters</td>
			<td>CWE, Inc</td>
			<td>13-20000</td>
			<td>Nose Cone and Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter)</td>
			<td>Parker Laboratoies</td>
			<td>08-03</td>
			<td>Ultrasound Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak 3 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309657</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/Air Scavenger Charcoal Canister</td>
			<td>OMNICON</td>
			<td>80120</td>
			<td>Scavenging System for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>502017</td>
			<td>Anesthesia Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>Scivena Scientific</td>
			<td>M1050</td>
			<td>Anestheic Vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>MX550S</td>
			<td>Ultrasound Transducer (Probe)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Aloe &#38; Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Depilliating Cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td>
			<td>Philips North America</td>
			<td>MG7750</td>
			<td>Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide 25 G 1&#34; Needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td>Lubricating Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Ultrasound Machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>Ultrasound Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15&#34;</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>731-500-000R</td>
			<td>Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wd Elements 2TB Basic Storage</td>
			<td>Western Digital Elements</td>
			<td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td>
			<td>Data Storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% w/v Formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td>Tissue Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U.</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>&#160;SP5035</td>
			<td>Antibody Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged Super Frost Plus Glass Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4831-703</td>
			<td>Tissue Mounting Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>&#160;C9999-1000ML</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal &#8211; 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td>Resin for Slide Sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Glass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3322</td>
			<td>Coverslide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Modified Hematoxylin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td>Counterstain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>13-247-30Q</td>
			<td>Oven to Melt Parraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP)</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td>Signal Development Substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>MP-7451</td>
			<td>Secondary IHC Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oster 5712 Digital Food Steamer</td>
			<td>Oster</td>
			<td>5712</td>
			<td>Vegetable Steamer for Epitope Retrival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-ARID1a</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab182560</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9559</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotts Tap Water Substitute</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>S5134-100ML</td>
			<td>&#34;Blueing&#34; Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path IV Cassette</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>22272416</td>
			<td>Tissue Fixation Cassette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trilogy Buffer</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>&#160;920P-10</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice

Livmorkreft kan studeres hos mus på grunn av enkel håndtering og genetisk manipulering i disse modellene. Imidlertid er disse studiene ofte begrenset til å vurdere patologi post mortem hos dyr som er euthanisert på flere tidspunkter i forskjellige kohorter, noe som øker antall mus som trengs for en studie. Imaging mus i longitudinelle studier kan spore sykdomsprogresjonen hos enkelte dyr, og redusere antall mus som trengs. Fremskritt innen ultralydteknologi har gjort det mulig å oppdage endringer i mikrometernivå i vev. Ultralyd har blitt brukt til å studere follikkelmodning i eggstokkene og xenograftvekst, men har ikke blitt brukt på morfologiske endringer i musens livmor. Denne protokollen undersøker sammenstillingen av patologi med in vivo bildesammenligninger i en indusert musemodell for livmorkreft. Karakteristika observert ved ultralyd var forenlig med graden av endring sett ved brutto patologi og histologi. Ultralyd ble funnet å være svært prediktiv for den observerte patologien, og støttet inkorporering av ultralyd i langsgående studier av livmorsykdommer som kreft hos mus.

Pax8-Cre-Arid1a-Pten double deletion (iPAD) transgene mus ble opprettholdt på en blandet genetisk bakgrunn (129S, BALB/C, C57BL/6), som tidligere beskrevet14. Musene ble alle fôret med et doksysyklinfôr i 2 uker for å indusere Cre recombinase. I tidligere arbeid av vår gruppe ble doxycyklin dosert av gavage14; Men i denne nåværende studien fungerte doxycyklinfôrinduksjonsmetoden effektivt og reduserte stresset av gavage for musene. Det er viktig å...

Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

Denne protokollen beskriver en metode for å overvåke progresjonen av morfologiske forandringer over tid i livmoren i en induserbar musemodell av endometriekreft ved hjelp av ultralydavbildning med korrelasjon til brutto og histologiske forandringer.

Ikke-invasiv ultralydvurdering av endometriekreftprogresjon ved Pax8-rettet delesjon av tumordemperne arid1a og pten hos mus

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Denne studien viser at manuell veiledet ultralyd er velegnet til å overvåke utviklingen av livmorpatologi i en indusert musemodell av livmorkreft. Ultralydavbildning er ikke-invasiv og muliggjør dermed longitudinelle studier av individuelle mus over dager og uker. Dette gjør det mulig å fange opp individuell variasjon og til slutt for færre dyr som skal brukes til studier.Denne metoden kan lett brukes til å overvåke patologiske endringer og andre speilmodeller, inkludert de for neoplasi og kronisk sykdom i urin- og fordøyelseskanalen. Begynn å sette opp ultralydmaskinen for avbildning av livmor eller eggstokk ved å velge en transduser eller sonde med et område på 32 til 56 megahertz. Gå til kategorien Programmer fra startskjermen og velg Mus liten magemodus.Klikk deretter på Skann for å gå tilbake til startskjermen og vent på at et levende bilde skal vises. Deretter velger du B-modus fra alternativene på venstre verktøylinje før du klikker på Flere kontroller alternativet for å vise flere verktøy for bilderaffinement, for eksempel bildeforsterkning og dybde eller for å justere klippoppkjøpsinnstillingene, for eksempel antall bilder per sekund. Når bildeinnstillingene er valgt, går du tilbake til startskjermen ved å klikke på B-modus.Plasser en tre til 10 milliliter sprøyte fylt med en steril isotonisk væskeløsning mellom en varmepute og en absorberende pute i flere minutter for å forvarme den til 35 til 40 grader Celsius. Hvis maskinen ikke har en varmere, plasser en flaske ultralydgel på varmeputen. For å injisere en til to milliliter løsning i bukhulen i en mus, fest musen ved skrubben i den ene hånden, og utsett ventrum.Hold deretter musen i omtrent 20 graders vinkel med nesen pekende mot gulvet. Sett inn en 25-gauge tuberkulin sprøyte nål gjennom huden og bukveggen i caudal høyre kvadrant av magen. For å unngå injeksjon i vaskulaturen eller GI-kanalen, trekk tilbake sprøytestempelet med minimalt trykk for å lete etter blod.Plasser musen i ventral liggetid på absorberende pute over en varmepute før du trygt plasserer en gnagernesekjegle over musens nese og snute. Plasser en liten mengde forvarmet ultralydgel abaxial til ryggraden på hver side av den bedøvede musen mellom den siste ribben og bekkenet. Sett en liten mengde gel på ultralydssonden.Deretter plasserer sonden parallelt med ryggvirvlene med fronten av sonden på kranialsiden. Med en mus i ventral recumbency, sakte skanne området for nyre landemerke. Med nyrene i sikte, trekk sonden caudal for å finne eggstokken, som er en litt hyperechoic oval til rund struktur i en veldig hyperechoic ovariefettpute, avgrenset kranial-ventralt av nyrene og dorsal-lateralt av den dorsale bukveggen.Forbedre bildekontrasten ved å justere signalforsterkningen ved hjelp av glidebryteren nederst på kontrollskjermen. For å forbedre avbildningen av nyrene, legg press på det kontralaterale underlivet ved hjelp av en finger. Varier trykk og vinkel fra parallell til ryggraden til ca. 20 grader ventral.Når organet av interesse er i sikte, ta en video ved å klikke på Lagre klipp eller Start opptak. Når du er ferdig, klikker du på Stop Recording for å beholde bilder med et forhåndsinnstilt antall rammer. Hold sonden kaudalt til eggstokken er i det mest kraniale aspektet av synsfeltet.Varier sondens trykk og vinkel for å se og avbilde livmoren. Gjenta video- og rammesamlingen for hvert organ av interesse. Finn livmoren som går i lengderetningen langs den dorsale bukveggen med lateral benmuskulatur i sikte.Overvåk vevet for en peristaltisk bevegelse for å skille tarmsløyfene fra livmorens stasjonære horn. Plasser musen i dorsale liggende for å samle bildene fra en ventral tilnærming. Sørg for at øyesmøringen er tilstrekkelig og at snuten er festet i nesekeglen.Påfør en liten mengde forvarmet ultralydgel til ventral abdomen før du bruker sonden på midtlinjen og kranialen av pubis for å lokalisere blæren som et hypoekkoisk landemerke. For å finne livmorhornene, trekk sonden lateral til blæren. Påfør lett digitalt trykk fra en eller begge sider av musen.Når livmorhornene er i synsfeltet, hold sonden vinkelrett på musen og skann begge sider av magen for å fange tverrgående utsikt over begge hornene. Roter sonden for å fange sagittale visninger. Etter ultralyden, tørk musen med et papirhåndkle før du returnerer det til buret for å gjenopprette.Når musen er helt våken etter to til fem minutter, returner musen til dyrerommet. Ultralydbildesammenligningen av bukhulen før og etter saltvannsinjeksjonen viste forbedret visualisering av bukorganene, inkludert livmor og eggstokkene etter saltvannsinjeksjonen. En ventral tilnærming ble brukt til å studere tverrsnittene av livmorhornene ved siden av den hypoekkoiske blæren.Immunhistokjemi med antistoffer rettet mot Arid1a og Pten ble brukt til å studere adekvat tumorsuppressorproteintap oppnådd i livmorepitelcellene sammenlignet med nærliggende stromalvev. Etter tre ukers doksysyklinbehandling ble det påvist ultralydbilder av mus med tidlige patologiforandringer som viste hypoekkoisk og dilatert lumen i uterus. I den grove patologi- og histopatologistudien av samme uterus ble det observert henholdsvis en mindre, men dilatert tynnvegget uterus og tidlig endometriehyperplasi med bevaring av det distinkte lumen.Musene som ble avlivet på senere tidspunkter viste større livmor med mindre lumen og en fortykket vegg. Når du lærer å bruke manuell plassering av sonder, kan overdreven trykk eller rask bevegelse gjøre organidentifikasjon vanskelig. Bruk milde, bevisste bevegelser og fokuser på å identifisere organene som er landemerker først.Ved studieendepunktet ofres mus og vev samles for å bekrefte genknockdown og karakterisere vevsendringer. Denne teknikken tillater etterforskere å overvåke intraabdominale lesjoner over tid. Og i vårt tilfelle brukte vi den til å overvåke livmorkreftprogresjonen i iPad-modellen, som vi deretter bekreftet av histopatologi.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Tumor Model: Visualisering og Kvantifisering av genekspresjon og Tumor Invasivitet Bruke Genetic Mosaikk

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

I Vivo EPR vurdering av pH, pO2, Redox Status, og konsentrasjoner av fosfat og glutation i svulst Microenvironment

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

Radionuklidenes-fluorescens Reporter genet å spore svulst progresjon i gnager svulst modeller

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Utnyttelse av ultralyd guidet vev-rettet mobilnettet implantasjon for etablering av biologisk relevante metastatisk svulst Xenografts

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Berikelse og karakterisering av svulst immun og ikke-immune Microenvironments i etablerte subkutan Murine svulster

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Digital Polymerase kjedereaksjon analysen for den genetisk variasjonen i en sporadisk familiær adenomatøse polypose pasient i Chip-i-en-t-format

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Intramucosal vaksinasjon av Squamous celle Carcinoma celler i mus for svulst immun profilering og behandling respons vurdering

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

In vivo hemming av MicroRNA å redusere tumor vekst i mus

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Påvisning av lungetumorprogresjon hos mus ved ultralydavbildning

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...