Name: non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Somos gratos pelo financiamento do NCI Ovarian Cancer SPORE Program P50CA228991, do programa de treinamento de pós-doutorado 5T32OD011089 e do Richard W. TeLinde Endowment, Johns Hopkins University. O projeto também foi parcialmente financiado pelos subsídios para despesas correntes para Instituições Privadas de Ensino Superior da Corporação de Promoção e Ajuda Mútua para Escolas Privadas do Japão.

Todos os procedimentos e experimentos envolvendo camundongos foram realizados de acordo com protocolos aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso Animal da Johns Hopkins. Para todos os procedimentos, foram utilizados EPIs adequados, incluindo luvas e aventais de isolamento descartáveis. Precauções foram tomadas ao manusear materiais perfurocortantes, que foram descartados corretamente em recipientes de caixa vermelha de materiais perfurocortantes imediatamente após o uso. Consulte a Tabela de Materiais </strong...

<ol>
	<li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents:+an+update.">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5 (2020).</li><li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology.">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125 (2020).</li><li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk.">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research:+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging.">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238 (2012).</li><li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer.">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research:+A+review+of+examples,+options,+and+resources.">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li><li>Peterson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuing+education+course+#1:+Non-invasive+imaging+as+a+problem-solving+tool+and+translational+biomarker+strategy+in+toxicologic+pathology.">Continuing education course #1: Non-invasive imaging as a problem-solving tool and translational biomarker strategy in toxicologic pathology.</a> Toxicologic Pathology. 39 (1), 267-272 (2011).</li><li>Pfeifer, L. F., Adams, G. P., Pierson, R. A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy:+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals.">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li><li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis.">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li><li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106 (2009).</li><li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model.">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li><li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse.">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats.">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038 (2017).</li><li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming.">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717 (2020).</li><li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer:+Insights+from+a+new+mouse+model.">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144 (2021).</li></ol>

Este protocolo examina a utilidade da ultrassonografia para avaliar alterações morfológicas uterinas na progressão do adenocarcinoma no útero em camundongos. Neste estudo, ao acompanhar a indução do câncer de endométrio em camundongos longitudinalmente, os detalhes anatômicos detectados pela ultrassonografia mostraram-se indicadores de patologia macroscópica e histológica. Isso abre a porta para o uso de estudos longitudinais com um número menor de camundongos monitorados por ultrassom em vários pontos de t...

Camundongos continuam sendo um dos modelos animais mais importantes para distúrbios reprodutivos 1,2,3. Existem vários modelos de roedores geneticamente modificados ou induzidos de câncer de ovário e útero. Esses estudos tipicamente se baseiam em múltiplas coortes eutanasiadas em diferentes momentos para capturar tendências longitudinais em alterações morfológicas e patológicas. Isso impede a capacidade de adquirir dados contínuos sobre o desenvolvimento do câncer em um camundongo individual. Além disso, sem conhecer o estado de progressão da doença individual em camundongos, os estudos de intervenção são baseados em pontos de tempo predeterminados e achados médios de coortes anteriores, em vez de limiares individuais para a detecção de progressão em um animalespecífico4,5. Portanto, abordagens de imagem que permitam a avaliação longitudinal em animais vivos são necessárias para facilitar modelos pré-clínicos para testar novos fármacos ou compostos e acelerar o entendimento da fisiopatologia, além de aumentar o rigor e a reprodutibilidade6.
A ultrassonografia (US) é um método atraente para o monitoramento longitudinal da progressão do câncer uterino de camundongos, pois é relativamente fácil e barato em comparação com outros métodos de imagem, é fácil de realizar e pode ter resolução notável 6,7. Esta modalidade não invasiva pode capturar características à escala de mícrons em camundongos acordados ou com camundongos sob sedação breve usando um exame de 5-10 minutos. A microscopia ultrassônica foi validada como método para medir o desenvolvimento de folículos ovarianos de camundongos 8 e o crescimento de neoplasias implantadas ou induzidas 9,10,11. A US de alta frequência também tem sido utilizada para injeções intrauterinas percutâneas12 e observação de alterações uterinas em ratas ao longo do ciclo estral13. O US de alta frequência pode ser usado com ratos mantidos em plataformas estacionárias especializadas usando um sistema de trilho para segurar o transdutor/sonda para capturar imagens de alta resolução com posição e pressão padronizadas; no entanto, esse equipamento não está disponível em todas as instituições. Os métodos de varredura por transdutor portátil podem ser adotados com equipamentos menos dedicados e usados tanto para diagnósticos clínicos quanto para aplicações de pesquisa em camundongos.
Resta saber se as imagens dos EUA com sondas portáteis de alta frequência poderiam ser usadas para monitorar o desenvolvimento do câncer uterino ao longo de várias semanas. Semelhante aos intestinos, o útero do roedor é uma estrutura de paredes finas e delgadas, que é muito móvel dentro do abdômen e é contígua através de múltiplas profundidades de tecido, tornando a imagem mais desafiadora do que com órgãos relativamente imóveis, como os rins. Este estudo buscou estabelecer a correlação entre os tecidos observados pela ultrassonografia e histopatologia, definir pontos de referência para a localização do útero de camundongos e determinar a viabilidade da avaliação longitudinal do câncer de endométrio. Este estudo apresenta dados que mostram uma correspondência qualitativa entre a aparência das imagens uterinas por US e a histopatologia, bem como imagens seriadas de camundongos ao longo de várias semanas. Esses resultados indicam que o US portátil pode ser usado para monitorar o desenvolvimento do câncer de endométrio em camundongos, criando assim uma oportunidade para coletar dados longitudinais individuais de camundongos para estudar o câncer uterino sem a necessidade de equipamentos dedicados.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Animal Care</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td>
			<td>Envigio</td>
			<td>TD.01306</td>
			<td>Mouse Feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL injectable 0.9% NaCl&#160;</td>
			<td>Hospira, Inc</td>
			<td>RL-7302</td>
			<td>Isotonic Fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Pad with Plastic Backing</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF8313</td>
			<td>Absorbant Pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Induction Chambers</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2029</td>
			<td>Induction Chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, &#38; adapters</td>
			<td>CWE, Inc</td>
			<td>13-20000</td>
			<td>Nose Cone and Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter)</td>
			<td>Parker Laboratoies</td>
			<td>08-03</td>
			<td>Ultrasound Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak 3 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309657</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/Air Scavenger Charcoal Canister</td>
			<td>OMNICON</td>
			<td>80120</td>
			<td>Scavenging System for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>502017</td>
			<td>Anesthesia Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>Scivena Scientific</td>
			<td>M1050</td>
			<td>Anestheic Vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>MX550S</td>
			<td>Ultrasound Transducer (Probe)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Aloe &#38; Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Depilliating Cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td>
			<td>Philips North America</td>
			<td>MG7750</td>
			<td>Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide 25 G 1&#34; Needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td>Lubricating Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Ultrasound Machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>Ultrasound Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15&#34;</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>731-500-000R</td>
			<td>Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wd Elements 2TB Basic Storage</td>
			<td>Western Digital Elements</td>
			<td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td>
			<td>Data Storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% w/v Formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td>Tissue Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U.</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>&#160;SP5035</td>
			<td>Antibody Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged Super Frost Plus Glass Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4831-703</td>
			<td>Tissue Mounting Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>&#160;C9999-1000ML</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal &#8211; 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td>Resin for Slide Sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Glass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3322</td>
			<td>Coverslide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Modified Hematoxylin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td>Counterstain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>13-247-30Q</td>
			<td>Oven to Melt Parraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP)</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td>Signal Development Substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>MP-7451</td>
			<td>Secondary IHC Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oster 5712 Digital Food Steamer</td>
			<td>Oster</td>
			<td>5712</td>
			<td>Vegetable Steamer for Epitope Retrival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-ARID1a</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab182560</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9559</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotts Tap Water Substitute</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>S5134-100ML</td>
			<td>&#34;Blueing&#34; Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path IV Cassette</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>22272416</td>
			<td>Tissue Fixation Cassette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trilogy Buffer</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>&#160;920P-10</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice

Os cânceres uterinos podem ser estudados em camundongos devido à facilidade de manuseio e manipulação genética nesses modelos. No entanto, esses estudos são frequentemente limitados a avaliar patologia post-mortem em animais eutanasiados em vários momentos em diferentes coortes, o que aumenta o número de camundongos necessários para um estudo. Imagens de camundongos em estudos longitudinais podem rastrear a progressão da doença em animais individuais, reduzindo o número de camundongos necessários. Os avanços na tecnologia de ultrassom têm permitido a detecção de alterações no nível micrométrico dos tecidos. A ultrassonografia tem sido usada para estudar a maturação dos folículos nos ovários e o crescimento do xenoenxerto, mas não tem sido aplicada às alterações morfológicas no útero de camundongos. Este protocolo examina a justaposição de patologia com comparações de imagens in vivo em um modelo de camundongo com câncer de endométrio induzido. As características observadas pela ultrassonografia foram consistentes com o grau de alteração observado pela patologia macroscópica e histologia. A ultrassonografia mostrou-se altamente preditiva da patologia observada, apoiando a incorporação da ultrassonografia em estudos longitudinais de doenças uterinas, como câncer em camundongos.

Camundongos transgênicos Pax8-Cre-Arid1a-Pten de dupla deleção (iPAD) foram mantidos em um background genético misto (129S, BALB/C, C57BL/6), como descrito anteriormente14. Todos os camundongos foram alimentados com uma ração de doxiciclina por 2 semanas para induzir Cre recombinase. Em trabalhos anteriores de nosso grupo, a doxiciclina foi dosada por gavagem14; No entanto, neste estudo, o método de indução alimentar com doxiciclina funcionou efic...

Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

Este protocolo descreve um método para monitorar a progressão das alterações morfológicas ao longo do tempo no útero em um modelo induzível de câncer de endométrio em camundongos usando imagens ultrassonográficas com correlação com alterações macroscópicas e histológicas.

Avaliação Ultrassonográfica Não Invasiva da Progressão do Câncer de Endométrio na Deleção Dirigida por Pax8 dos Supressores Tumorais Arid1a e Pten em Camundongos

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Este estudo mostra que a ultrassonografia guiada manualmente é adequada para monitorar o desenvolvimento de patologia uterina em um modelo induzido de câncer de endométrio em camundongos. A imagem de ultrassom não é invasiva e, portanto, permite estudos longitudinais de camundongos individuais ao longo de dias e semanas. Isso permite a captura da variação individual e, finalmente, que menos animais sejam usados para estudo.Este método pode ser prontamente aplicado para monitorar alterações patológicas e outros modelos de espelhamento, incluindo aqueles para neoplasias e doenças crônicas do trato urinário e digestivo. Comece a configurar o aparelho de ultrassom para obter imagens do útero ou ovário selecionando um transdutor ou sonda com um intervalo de 32 a 56 mega-hertz. Vá para a guia Aplicativos na tela inicial e selecione Modo de abdômen pequeno do mouse.Em seguida, clique em Digitalizar para retornar à tela inicial e aguarde até que uma imagem ao vivo seja exibida. Em seguida, selecione Modo B nas opções na barra de ferramentas esquerda antes de clicar na opção Mais controles para exibir ferramentas adicionais para refinamento de imagem, como ganho e profundidade de imagem, ou para ajustar as configurações de aquisição de clipe, como o número de quadros por segundo. Quando as configurações de imagem estiverem selecionadas, retorne à tela inicial clicando em Modo B.Coloque uma seringa de três a 10 mililitros preenchida com uma solução de fluido isotônico estéril entre uma almofada de aquecimento e uma almofada absorvente por vários minutos para pré-aquecê-la a 35 a 40 graus Celsius. Se a máquina não tiver um aquecedor, coloque um frasco de gel de ultrassom na almofada de aquecimento. Para injetar um a dois mililitros de solução na cavidade peritoneal de um rato, prenda o rato pelo scruff numa mão, expondo o ventrum.Em seguida, segure o mouse em um ângulo de aproximadamente 20 graus com o nariz apontado para o chão. Insira uma agulha de seringa tuberculínica de calibre 25 através da pele e da parede abdominal do quadrante direito caudal do abdome. Para evitar a injeção na vasculatura ou no trato gastrointestinal, puxe o êmbolo da seringa com pressão mínima para procurar sangue.Posicione o rato em decúbito ventral sobre a almofada absorvente sobre uma almofada de aquecimento antes de colocar com segurança um cone nasal de roedor sobre o nariz e o focinho do rato. Coloque uma pequena quantidade de gel de ultrassom pré-aquecido abaxial na coluna vertebral de cada lado do camundongo anestesiado entre a última costela e a pelve. Coloque uma pequena quantidade de gel na sonda de ultrassom.Em seguida, coloque a sonda paralela às vértebras com a frente da sonda no lado cranial. Com um rato em decúbito ventral, escaneie lentamente a área em busca do ponto de referência renal. Com o rim em vista, puxe a sonda caudal para encontrar o ovário, que é uma estrutura oval a redonda levemente hiperecoica dentro de um coxim adiposo ovariano muito hiperecoico, limitado crânio-ventralmente pelo rim e dorsolateralmente pela parede abdominal dorsal.Melhore o contraste da imagem ajustando o ganho de sinal usando o controle deslizante na parte inferior da tela de controle. Para melhorar a imagem do rim, aplique pressão no abdome contralateral usando um dedo. Varie a pressão e o ângulo de paralelo à coluna vertebral para aproximadamente 20 graus ventrais.Quando o órgão de interesse estiver à vista, capture um vídeo clicando em Salvar Clipe ou Iniciar Gravação. Uma vez feito, clique em Parar gravação para reter imagens em um número predefinido de quadros. Segure a sonda caudalmente até que o ovário esteja no aspecto mais cranial do campo de visão.Varie a pressão e o ângulo da sonda para visualizar e fotografar o útero. Repita a coleta de vídeos e quadros para cada órgão de interesse. Encontre o útero correndo longitudinalmente ao longo da parede abdominal dorsal com a musculatura lateral da perna em vista.Monitorar o tecido para um movimento peristáltico para diferenciar as alças intestinais dos cornos estacionários uterinos. Coloque o mouse em decúbito dorsal para coletar as imagens a partir de uma abordagem ventral. Certifique-se de que a lubrificação ocular é suficiente e que o focinho está preso no cone do nariz.Aplicar uma pequena quantidade de gel de ultrassom pré-aquecido no abdome ventral antes de aplicar a sonda na linha média e cranial do púbis para localizar a bexiga como um marco hipoecoico. Para encontrar os cornos uterinos, puxe a sonda lateralmente para a bexiga. Aplique uma leve pressão digital de um ou ambos os lados do mouse.Uma vez que os cornos uterinos estão no campo de visão, segure a sonda perpendicularmente ao mouse e escaneie ambos os lados do abdômen para capturar vistas transversais de ambos os cornos. Gire a sonda para capturar visualizações sagitais. Após o ultrassom, limpe o mouse com um papel toalha antes de devolvê-lo à sua gaiola para se recuperar.Quando o rato estiver totalmente acordado após dois a cinco minutos, regresse o rato à sala dos animais. A comparação de imagens ultrassonográficas da cavidade abdominal de camundongos antes e após a injeção de solução salina mostrou melhor visualização dos órgãos abdominais, incluindo útero e ovários, após a injeção de soro fisiológico. Uma abordagem ventral foi usada para estudar os cortes transversais dos cornos uterinos adjacentes à bexiga hipoecoica.A imuno-histoquímica com anticorpos direcionados contra Arid1a e Pten foi utilizada para estudar a adequada perda proteica supressora tumoral realizada nas células epiteliais uterinas em comparação com o tecido estromal vizinho. Imagens de ultrassom de útero de camundongo com alterações patológicas precoces foram detectadas após três semanas de tratamento com doxiciclina, mostrando o lúmen hipoecoico e dilatado do útero. No estudo anatomopatológico e histopatológico do mesmo útero, observou-se útero de paredes finas, menor, mas dilatado, e hiperplasia endometrial precoce, com preservação da luz distinta, respectivamente.Os camundongos eutanasiados em momentos posteriores mostraram útero maior, com lúmen menor e parede espessada. Ao aprender a usar a colocação manual de sondas, a pressão excessiva ou a movimentação rápida podem dificultar a identificação do órgão. Use movimentos suaves e deliberados e concentre-se em identificar os órgãos que são marcos primeiro.Ao final do estudo, camundongos são sacrificados e tecido é coletado para confirmar o knockdown genético e caracterizar as alterações teciduais. Essa técnica permite que os investigadores monitorem as lesões intra-abdominais ao longo do tempo. E, no nosso caso, usamos para monitorar a progressão do câncer uterino no modelo iPad, o que confirmamos por histopatologia.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

o<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Modelo Disc Tumor: visualização e quantificação da expressão gênica e invasão tumoral Usando Mosaicos Genéticos

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Pesquisa do câncer

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

Na Vivo Avaliação de EPR de pH, pO2, Status Redox e as concentrações de fosfato e glutationa no microambiente do Tumor

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

Radionuclídeo-fluorescência Gene do repórter de imagem para controlar a progressão do Tumor em modelos de roedores Tumor

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Utilização do ultra-som guiado implantação celular tecido-dirigido para o estabelecimento de Xenografts biologicamente relevantes Tumor metastático

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Enriquecimento e caracterização do microambiente que imune e não imune Tumor em tumores murino subcutâneos estabelecidas

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Ensaio de reação em cadeia de polimerase digital para a variação genética em paciente esporádicos polipose adenomatosa familiar usando o formato de microplaqueta-em-um-tubo

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Intramucosal inoculação de células de Carcinoma de células escamosas em ratos para perfil imune de Tumor e tratamento avaliação de resposta

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

In vivo inibição de MicroRNA para diminuir o crescimento tumoral em camundongos

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Detecção de Progressão do Tumor Pulmonar em Camundongos por ultrassom

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...