Name: non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Мы благодарны за финансирование со стороны программы SPORE рака яичников NCI P50CA228991, программы постдокторской подготовки 5T32OD011089 и Фонда Ричарда В. Телинде Университета Джона Хопкинса. Проект также частично финансировался за счет субсидий на текущие расходы частным высшим учебным заведениям от Корпорации содействия и взаимопомощи частным школам Японии.

Все процедуры и эксперименты с участием мышей проводились в соответствии с протоколами, утвержденными Комитетом по уходу за животными и их использованию Джонса Хопкинса. Для всех процедур надевались соответствующие СИЗ, включая перчатки и одноразовые изолирующие халаты. Были приняты...

<ol>
	<li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents:+an+update.">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5 (2020).</li><li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology.">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125 (2020).</li><li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk.">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research:+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging.">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238 (2012).</li><li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer.">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research:+A+review+of+examples,+options,+and+resources.">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li><li>Peterson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuing+education+course+#1:+Non-invasive+imaging+as+a+problem-solving+tool+and+translational+biomarker+strategy+in+toxicologic+pathology.">Continuing education course #1: Non-invasive imaging as a problem-solving tool and translational biomarker strategy in toxicologic pathology.</a> Toxicologic Pathology. 39 (1), 267-272 (2011).</li><li>Pfeifer, L. F., Adams, G. P., Pierson, R. A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy:+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals.">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li><li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis.">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li><li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106 (2009).</li><li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model.">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li><li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse.">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats.">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038 (2017).</li><li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming.">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717 (2020).</li><li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer:+Insights+from+a+new+mouse+model.">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144 (2021).</li></ol>

В этом протоколе исследуется полезность ультразвука для оценки морфологических изменений матки при прогрессировании аденокарциномы в матке у мышей. В этом исследовании, проследив за индукцией рака эндометрия у мышей в продольном направлении, анатомические детали, обнаруженные с пом?...

Мыши остаются одной из наиболее важных животных моделей репродуктивных расстройств 1,2,3. Существует несколько генетически модифицированных или индуцированных моделей рака яичников и матки у грызунов. Эти исследования обычно опираются на несколько когорт, подвергшихся эвтаназии в разные моменты времени, чтобы зафиксировать продольные тенденции морфологических и патологических изменений. Это препятствует получению непрерывных данных о развитии рака у отдельной мыши. Кроме того, не зная отдельного состояния прогрессирования заболевания мыши, интервенционные исследования основаны на заранее определенных временных точках и усредненных результатах предыдущих когорт, а не на отдельных пороговых значениях для обнаружения прогрессирования у конкретного животного 4,5. Таким образом, подходы к визуализации, которые позволяют проводить продольную оценку на живых животных, необходимы для облегчения доклинических моделей для тестирования новых лекарств или соединений и ускорения понимания патобиологии, а также повышения строгости и воспроизводимости6.
Ультразвуковая визуализация (УЗИ) является привлекательным методом для продольного мониторинга прогрессирования рака матки мышей, поскольку она относительно проста и недорога по сравнению с другими методами визуализации, проста в выполнении и может иметь замечательное разрешение 6,7. Этот неинвазивный метод может фиксировать особенности в микронном масштабе у бодрствующих мышей или у мышей, находящихся под кратковременной седацией, с использованием 5-10-минутного исследования. Ультразвуковая микроскопия была валидирована как метод измерения развития фолликулов яичников мыши 8 и роста имплантированной или индуцированной неоплазии 9,10,11. Высокочастотное УЗИ также использовалось для чрескожных внутриматочных инъекций12 и наблюдения за изменениями матки у крыс в течение циклатечки 13. Высокочастотный УЗИ можно использовать с мышами, удерживаемыми на специализированных стационарных платформах с использованием рельсовой системы для удержания преобразователя/зонда для захвата изображений с высоким разрешением со стандартизированным положением и давлением; Однако это оборудование доступно не во всех учреждениях. Методы сканирования с помощью ручного датчика могут быть приняты с менее специализированным оборудованием и использоваться как для клинической диагностики, так и для исследований на мышах.
Остается открытым вопрос о том, можно ли использовать визуализацию УЗИ с помощью портативных высокочастотных зондов для мониторинга развития рака матки в течение нескольких недель. Подобно кишечнику, матка грызунов представляет собой тонкостенную тонкую структуру, которая очень подвижна в брюшной полости и непрерывна через несколько глубин тканей, что делает визуализацию более сложной, чем с относительно неподвижными органами, такими как почки. Это исследование было направлено на установление корреляции между тканями, наблюдаемыми с помощью ультразвука, и гистопатологией, определение ориентиров для определения местоположения матки мыши и определение возможности продольной оценки рака эндометрия. В этом исследовании представлены данные, показывающие качественное соответствие между внешним видом матки, сфотографированной с помощью УЗИ, и гистопатологией, а также серийной визуализацией мышей в течение нескольких недель. Эти результаты показывают, что портативный УЗИ можно использовать для мониторинга развития рака эндометрия у мышей, тем самым создавая возможность для сбора индивидуальных продольных данных мыши для изучения рака матки без необходимости использования специального оборудования.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Animal Care</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td>
			<td>Envigio</td>
			<td>TD.01306</td>
			<td>Mouse Feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL injectable 0.9% NaCl&#160;</td>
			<td>Hospira, Inc</td>
			<td>RL-7302</td>
			<td>Isotonic Fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Pad with Plastic Backing</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF8313</td>
			<td>Absorbant Pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Induction Chambers</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2029</td>
			<td>Induction Chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, &#38; adapters</td>
			<td>CWE, Inc</td>
			<td>13-20000</td>
			<td>Nose Cone and Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter)</td>
			<td>Parker Laboratoies</td>
			<td>08-03</td>
			<td>Ultrasound Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak 3 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309657</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/Air Scavenger Charcoal Canister</td>
			<td>OMNICON</td>
			<td>80120</td>
			<td>Scavenging System for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>502017</td>
			<td>Anesthesia Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>Scivena Scientific</td>
			<td>M1050</td>
			<td>Anestheic Vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>MX550S</td>
			<td>Ultrasound Transducer (Probe)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Aloe &#38; Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Depilliating Cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td>
			<td>Philips North America</td>
			<td>MG7750</td>
			<td>Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide 25 G 1&#34; Needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td>Lubricating Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Ultrasound Machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>Ultrasound Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15&#34;</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>731-500-000R</td>
			<td>Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wd Elements 2TB Basic Storage</td>
			<td>Western Digital Elements</td>
			<td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td>
			<td>Data Storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% w/v Formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td>Tissue Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U.</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>&#160;SP5035</td>
			<td>Antibody Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged Super Frost Plus Glass Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4831-703</td>
			<td>Tissue Mounting Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>&#160;C9999-1000ML</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal &#8211; 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td>Resin for Slide Sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Glass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3322</td>
			<td>Coverslide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Modified Hematoxylin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td>Counterstain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>13-247-30Q</td>
			<td>Oven to Melt Parraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP)</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td>Signal Development Substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>MP-7451</td>
			<td>Secondary IHC Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oster 5712 Digital Food Steamer</td>
			<td>Oster</td>
			<td>5712</td>
			<td>Vegetable Steamer for Epitope Retrival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-ARID1a</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab182560</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9559</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotts Tap Water Substitute</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>S5134-100ML</td>
			<td>&#34;Blueing&#34; Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path IV Cassette</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>22272416</td>
			<td>Tissue Fixation Cassette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trilogy Buffer</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>&#160;920P-10</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice

Рак матки может быть изучен на мышах из-за простоты обращения и генетических манипуляций в этих моделях. Тем не менее, эти исследования часто ограничиваются оценкой патологии посмертно у животных, усыпленных в несколько моментов времени в разных когортах, что увеличивает количество мышей, необходимых для исследования. Визуализация мышей в лонгитюдных исследованиях может отслеживать прогрессирование заболевания у отдельных животных, уменьшая количество необходимых мышей. Достижения в области ультразвуковой технологии позволили обнаружить изменения в тканях на микрометровом уровне. Ультразвук использовался для изучения созревания фолликулов в яичниках и роста ксенотрансплантата, но не применялся к морфологическим изменениям в матке мыши. В этом протоколе исследуется сопоставление патологии со сравнением изображений in vivo в мышиной модели с индуцированным раком эндометрия. Признаки, наблюдаемые при УЗИ, соответствовали степени изменения, наблюдаемым при грубой патологии и гистологии. Было обнаружено, что ультразвук обладает высокой степенью прогнозирования наблюдаемой патологии, поддерживая включение ультразвукового исследования в лонгитюдные исследования заболеваний матки, таких как рак у мышей.

Трансгенные мыши Pax8-Cre-Arid1a-Pten с двойной делецией (iPAD) поддерживались на смешанном генетическом фоне (129S, BALB/C, C57BL/6), как описано ранее14. Всех мышей кормили доксициклином в течение 2 недель, чтобы индуцировать Cre рекомбиназу. В предыдущей работе нашей группы доксицикли...

Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice at JoVE.com

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

В этом протоколе описывается метод мониторинга прогрессирования морфологических изменений с течением времени в матке в индуцируемой мышиной модели рака эндометрия с использованием ультразвуковой визуализации с корреляцией с грубыми и гистологическими изменениями.

Неинвазивная ультразвуковая оценка прогрессирования рака эндометрия при Pax8-направленной делеции опухолевых супрессоров Arid1a и Pten у мышей

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Это исследование показывает, что ультразвуковое исследование под ручным контролем хорошо подходит для мониторинга развития патологии матки в индуцированной мышиной модели рака эндометрия. Ультразвуковая визуализация является неинвазивной и, таким образом, позволяет проводить лонгитюдные исследования отдельных мышей в течение нескольких дней и недель. Это позволяет фиксировать индивидуальные вариации и, в конечном итоге, использовать меньшее количество животных для изучения.Этот метод может быть легко применен для мониторинга патологических изменений и других зеркальных моделей, в том числе для неоплазии и хронических заболеваний мочевыводящего и пищеварительного тракта. Начните настройку ультразвукового аппарата для визуализации матки или яичника, выбрав датчик или зонд с диапазоном от 32 до 56 мегагерц. Перейдите на вкладку «Приложения» на главном экране и выберите «Режим маленького живота мыши».Затем нажмите «Сканировать», чтобы вернуться на главный экран, и дождитесь отображения живого изображения. Затем выберите «Режим B» из параметров на левой панели инструментов, прежде чем нажать «Дополнительные элементы управления», чтобы просмотреть дополнительные инструменты для уточнения изображения, такие как усиление и глубина изображения, или настроить параметры захвата клипа, такие как количество кадров в секунду. После выбора настроек изображения вернитесь на главный экран, нажав «Режим B».Поместите шприц объемом от трех до 10 миллилитров, наполненный стерильным раствором изотонической жидкости, между грелкой и абсорбирующей прокладкой на несколько минут, чтобы предварительно нагреть его до 35-40 градусов по Цельсию. Если в аппарате нет грелки, поместите флакон с ультразвуковым гелем на грелку. Чтобы ввести один-два миллилитра раствора в брюшную полость мыши, закрепите мышь за загривок в одной руке, обнажив брюшное отверстие.Затем держите мышь под углом примерно 20 градусов носом в пол. Введите иглу туберкулинового шприца 25-го калибра через кожу и брюшную стенку каудального правого квадранта брюшной полости. Чтобы избежать инъекции в сосудистую сеть или желудочно-кишечный тракт, потяните поршень шприца с минимальным давлением для поиска крови.Расположите мышь в брюшном положении лежа на впитывающей прокладке над грелкой, а затем надежно поместите носовой конус грызуна на нос и морду мыши. Поместите небольшое количество предварительно нагретого ультразвукового геля абаксиально к позвоночнику по обе стороны от анестезированной мыши между последним ребром и тазом. Нанесите небольшое количество геля на ультразвуковой датчик.Затем поместите зонд параллельно позвонкам передней частью зонда на краниальной стороне. С мышью, находящейся в вентральном лежачем положении, медленно просканируйте область на наличие ориентира для почек. Имея в поле зрения почку, потяните зонд каудально, чтобы найти яичник, который представляет собой слегка гиперэхогенную овальную или круглую структуру в очень гиперэхогенном жировом пакете яичников, граничащий с краниально-вентрально почкой и дорсально-латерально с дорсальной брюшной стенкой.Повысьте контрастность изображения, отрегулировав усиление сигнала с помощью ползунка в нижней части экрана управления. Чтобы улучшить визуализацию почки, надавите пальцем на контралатеральную часть живота. Варьируйте давление и угол от параллели к позвоночнику примерно до 20 градусов вентрально.Как только интересующий вас орган окажется в поле зрения, захватите видео, нажав «Сохранить клип» или «Начать запись». После этого нажмите «Остановить запись», чтобы сохранить изображения с заданным количеством кадров. Держите зонд каудально до тех пор, пока яичник не окажется в самом краниальном аспекте поля зрения.Варьируйте давление зонда и угол наклона, чтобы увидеть и визуализировать матку. Повторите сбор видео и кадров для каждого интересующего органа. Найдите матку, идущую продольно вдоль дорсальной брюшной стенки с боковой мускулатурой ног.Следите за перистальтическим движением ткани, чтобы дифференцировать петли кишечника от неподвижных рогов матки. Поместите мышь в спинное лежачее положение, чтобы собрать изображения с вентрального подхода. Убедитесь, что смазка для глаз достаточна, а морда закреплена в носовом конусе.Нанесите небольшое количество предварительно подогретого ультразвукового геля на брюшную полость живота, прежде чем наносить зонд на среднюю линию и череп лобка, чтобы определить местонахождение мочевого пузыря в качестве гипоэхогенного ориентира. Чтобы найти рога матки, потяните зонд сбоку к мочевому пузырю. Приложите легкое цифровое давление с одной или обеих сторон мыши.Как только рога матки окажутся в поле зрения, держите зонд перпендикулярно мыши и сканируйте обе стороны живота, чтобы получить поперечные виды обоих рогов. Поверните зонд, чтобы захватить сагиттальные виды. После УЗИ протрите мышь бумажным полотенцем, прежде чем вернуть ее в клетку для восстановления.Как только мышь полностью проснется через две-пять минут, верните мышь в комнату для животных. Сравнение ультразвуковых изображений брюшной полости мыши до и после инъекции физиологического раствора показало улучшенную визуализацию органов брюшной полости, включая матку и яичники после инъекции физиологического раствора. Вентральный доступ был использован для исследования поперечных срезов рогов матки, прилегающих к гипоэхогенному мочевому пузырю.Иммуногистохимия с антителами, направленными против Arid1a и Pten, была использована для изучения адекватной потери белка-супрессора опухоли, достигнутой в эпителиальных клетках матки по сравнению с соседней стромальной тканью. Ультразвуковые изображения матки мыши с ранними патологическими изменениями были обнаружены после трех недель лечения доксициклином, показывая гипоэхогенный и расширенный просвет матки. При грубой патологии и гистопатологическом исследовании одной и той же матки наблюдались меньшая, но расширенная тонкостенная матка и ранняя гиперплазия эндометрия с сохранением отчетливого просвета соответственно.Мыши, подвергшиеся эвтаназии в более поздние моменты времени, показали более крупную матку с меньшим просветом и утолщенной стенкой. При обучении ручному размещению зондов чрезмерное давление или быстрое движение могут затруднить идентификацию органов. Используйте мягкие, преднамеренные движения и сосредоточьтесь на определении органов, которые являются ориентирами в первую очередь.На конечной точке исследования мышей приносят в жертву и собирают ткань, чтобы подтвердить нокдаун гена и охарактеризовать изменения тканей. Этот метод позволяет исследователям контролировать внутрибрюшные поражения с течением времени. И в нашем случае мы использовали его для мониторинга прогрессирования рака матки в модели iPad, что мы затем подтвердили гистопатологией.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

<em&gt; Drosophila</em&gt; Имаджинальное Disc Опухоль Модель: Визуализация и Количественная экспрессии генов и опухолевой инвазии с использованием генетических Мозаики

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

В естественных условиях ЭПР Оценка рН, pO2, окислительно-восстановительного состояния и концентрации фосфатов и глутатиона в микроокружения опухоли

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Radionuclide-fluorescence Reporter Gene Imaging to Track Tumor Progression in Rodent Tumor Models

Радионуклида флуоресценции Репортер ген Imaging для отслеживания опухолевой прогрессии в моделях грызунов опухоли

Metastasis is responsible for most cancer deaths. Despite extensive research, the mechanistic understanding of the complex processes governing metastasis ...

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Использование УЗИ руководствоваться ткани направленных сотовой имплантации для создания ксенотрасплантатов биологически соответствующих метастатические опухоли

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Обогащение и характеристика опухоли иммунной и неиммунизированных микросреды в установленных подкожной мышиных опухоли

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Assay цифровой полимеразной цепной реакции для генетической вариации в спорадических семейное аденоматозное Polyposis пациента, используя формат чип в трубе

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Intramucosal прививки плоскоклеточный рак клеток мышей для опухоли иммунной профилирования и оценки реакции лечение

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

В Vivo ингибирование микроРНК для уменьшения роста опухоли у мышей

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Обнаружение прогрессирования опухоли легких у мышей с помощью ультразвуковой визуализации

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...