Name: non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice
Uploaded: 2023-02-17T13:45:00
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Agradecemos los fondos del Programa SPORE de Cáncer de Ovario del NCI P50CA228991, el programa de capacitación postdoctoral 5T32OD011089 y la Fundación Richard W. TeLinde, Universidad Johns Hopkins. El proyecto también fue financiado en parte por los subsidios para gastos corrientes a instituciones privadas de educación superior de la Corporación de Promoción y Ayuda Mutua para Escuelas Privadas de Japón.

Todos los procedimientos y experimentos con ratones se realizaron de acuerdo con los protocolos aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de Johns Hopkins. Para todos los procedimientos, se usó EPP apropiado, incluidos guantes y batas de aislamiento desechables. Se tomaron precauciones al manipular objetos punzantes, que se desecharon adecuadamente en contenedores de objetos punzantes de caja roja inmediatamente después de su uso. Consulte la Tabla de materiales para obtener detalles sobre ...

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	<li>Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staging+of+the+estrous+cycle+and+induction+of+estrus+in+experimental+rodents:+an+update.">Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update.</a> Fertility Research and Practice. 6, 5 (2020).</li><li>Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+closer+to+intrauterine+adhesive+pathology.">Animal models closer to intrauterine adhesive pathology.</a> Annals of Translational Medicine. 8 (18), 1125 (2020).</li><li>Shi, D., Vine, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+polycystic+ovary+syndrome:+a+focused+review+of+rodent+models+in+relationship+to+clinical+phenotypes+and+cardiometabolic+risk.">Animal models of polycystic ovary syndrome: a focused review of rodent models in relationship to clinical phenotypes and cardiometabolic risk.</a> Fertility and Sterility. 98 (1), 185-193 (2012).</li><li>Greco, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy+in+small+animal+research:+applications+in+molecular+and+preclinical+imaging.">Ultrasound biomicroscopy in small animal research: applications in molecular and preclinical imaging.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 519238 (2012).</li><li>Palsdottir, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interobserver+agreement+of+transvaginal+ultrasound+and+magnetic+resonance+imaging+in+local+staging+of+cervical+cancer.">Interobserver agreement of transvaginal ultrasound and magnetic resonance imaging in local staging of cervical cancer.</a> Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 58 (5), 773-779 (2021).</li><li>Gabrielson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+with+confirmation+by+histopathology+for+increased+rigor+and+reproducibility+in+translational+research:+A+review+of+examples,+options,+and+resources.">In vivo imaging with confirmation by histopathology for increased rigor and reproducibility in translational research: A review of examples, options, and resources.</a> ILAR Journal. 59 (1), 80-98 (2018).</li><li>Peterson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuing+education+course+#1:+Non-invasive+imaging+as+a+problem-solving+tool+and+translational+biomarker+strategy+in+toxicologic+pathology.">Continuing education course #1: Non-invasive imaging as a problem-solving tool and translational biomarker strategy in toxicologic pathology.</a> Toxicologic Pathology. 39 (1), 267-272 (2011).</li><li>Pfeifer, L. F., Adams, G. P., Pierson, R. A., Singh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+biomicroscopy:+A+non-invasive+approach+for+in+vivo+evaluation+of+oocytes+and+small+antral+follicles+in+mammals.">Ultrasound biomicroscopy: A non-invasive approach for in vivo evaluation of oocytes and small antral follicles in mammals.</a> Reproduction, Fertility and Development. 26 (1), 48-54 (2013).</li><li>Cheung, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+ultrasound+biomicroscopy+for+xenograft+growth+analysis.">Three-dimensional ultrasound biomicroscopy for xenograft growth analysis.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 31 (6), 865-870 (2005).</li><li>Snyder, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementarity+of+ultrasound+and+fluorescence+imaging+in+an+orthotopic+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Complementarity of ultrasound and fluorescence imaging in an orthotopic mouse model of pancreatic cancer.</a> BMC Cancer. 9, 106 (2009).</li><li>Wu, G., Wang, L., Yu, L., Wang, H., Xuan, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+three-dimensional+ultrasound+micro-imaging+to+monitor+prostate+tumor+development+in+a+transgenic+prostate+cancer+mouse+model.">The use of three-dimensional ultrasound micro-imaging to monitor prostate tumor development in a transgenic prostate cancer mouse model.</a> The Tohoku Journal of Experimental Medicine. 207 (3), 181-189 (2005).</li><li>Rinaldi, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+intrauterine+injection+of+lipopolysaccharide+as+a+novel+model+of+preterm+birth+in+the+mouse.">Ultrasound-guided intrauterine injection of lipopolysaccharide as a novel model of preterm birth in the mouse.</a> The American Journal of Pathology. 185 (5), 1201-1206 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonography+in+experimental+reproductive+investigations+on+rats.">Ultrasonography in experimental reproductive investigations on rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 130, e56038 (2017).</li><li>Suryo Rahmanto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+Arid1a+in+the+endometrium+is+associated+with+endometrioid+tumorigenesis+through+transcriptional+reprogramming.">Inactivation of Arid1a in the endometrium is associated with endometrioid tumorigenesis through transcriptional reprogramming.</a> Nature Communications. 11, 2717 (2020).</li><li>Pani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-existing+thyroiditis+ameliorates+papillary+thyroid+cancer:+Insights+from+a+new+mouse+model.">Pre-existing thyroiditis ameliorates papillary thyroid cancer: Insights from a new mouse model.</a> Endocrinology. 162 (10), bqab144 (2021).</li></ol>

Este protocolo examina la utilidad del ultrasonido para evaluar los cambios morfológicos uterinos en la progresión del adenocarcinoma en el útero en ratones. En este estudio, al seguir longitudinalmente la inducción del cáncer de endometrio en ratones, se encontró que los detalles anatómicos detectados por ultrasonido eran indicadores de patología macroscópica e histológica. Esto abre la puerta para el uso de estudios longitudinales con un número menor de ratones monitoreados por ultrasonido en múltiples punt...

Los ratones siguen siendo uno de los modelos animales más importantes para los trastornos reproductivos 1,2,3. Hay varios modelos de roedores genéticamente modificados o inducidos de cáncer de ovario y útero. Estos estudios generalmente se basan en múltiples cohortes sacrificadas en diferentes puntos de tiempo para capturar tendencias longitudinales en cambios morfológicos y patológicos. Esto impide la capacidad de adquirir datos continuos sobre el desarrollo del cáncer en un ratón individual. Además, sin conocer el estado de progresión de la enfermedad individual en ratones, los estudios de intervención se basan en puntos de tiempo predeterminados y hallazgos promediados de cohortes anteriores en lugar de umbrales individuales para la detección de progresión en un animal específico 4,5. Por lo tanto, los enfoques de imagen que permiten la evaluación longitudinal en animales vivos son necesarios para facilitar los modelos preclínicos para probar nuevos fármacos o compuestos y acelerar la comprensión de la patobiología, al tiempo que aumentan el rigor y la reproducibilidad6.
La ecografía (ecografía) es un método atractivo para la monitorización longitudinal de la progresión del cáncer uterino de ratón porque es relativamente fácil y económico en comparación con otros métodos de imagen, es fácil de realizar y puede tener una resolución notable 6,7. Esta modalidad no invasiva puede capturar características a escala de micras en ratones despiertos o con ratones bajo sedación breve mediante un examen de 5-10 minutos. La microscopía ecográfica ha sido validada como un método para medir el desarrollo del folículo ovárico de ratón 8 y el crecimiento de neoplasia implantada o inducida 9,10,11. La ecografía de alta frecuencia también se ha utilizado para inyecciones intrauterinas percutáneas12 y para observar el cambio uterino de ratas durante el ciclo estral13. La US de alta frecuencia se puede utilizar con ratones sostenidos en plataformas estacionarias especializadas utilizando un sistema de rieles para sostener el transductor / sonda para capturar imágenes de alta resolución con posición y presión estandarizadas; Sin embargo, este equipo no está disponible en todas las instituciones. Los métodos de escaneo de transductores de mano se pueden adoptar con equipos menos dedicados y se pueden usar tanto para diagnósticos clínicos como para aplicaciones de investigación en ratones.
La pregunta sigue siendo si las imágenes estadounidenses con sondas portátiles de alta frecuencia podrían usarse para monitorear el desarrollo del cáncer uterino durante varias semanas. Similar a los intestinos, el útero de roedores es una estructura delgada y de paredes delgadas que es muy móvil dentro del abdomen y es contigua a través de múltiples profundidades de tejido, lo que hace que las imágenes sean más difíciles que con órganos relativamente inmóviles como los riñones. Este estudio buscó establecer la correlación entre los tejidos observados por ultrasonido e histopatología, definir puntos de referencia para localizar el útero de ratón y determinar la viabilidad de la evaluación longitudinal del cáncer de endometrio. Este estudio presenta datos que muestran una correspondencia cualitativa entre la aparición de úteros fotografiados por US y la histopatología, así como imágenes seriadas de ratones durante varias semanas. Estos resultados indican que la ecografía portátil se puede utilizar para monitorear el desarrollo del cáncer de endometrio en ratones, creando así una oportunidad para recopilar datos longitudinales individuales de ratón para estudiar el cáncer uterino sin la necesidad de equipos dedicados.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Animal Care</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Diet (2018, 625 Doxycycline)</td>
			<td>Envigio</td>
			<td>TD.01306</td>
			<td>Mouse Feed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Ultrasound Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL injectable 0.9% NaCl&#160;</td>
			<td>Hospira, Inc</td>
			<td>RL-7302</td>
			<td>Isotonic Fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Pad with Plastic Backing</td>
			<td>Daigger</td>
			<td>EF8313</td>
			<td>Absorbant Pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Induction Chambers</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2029</td>
			<td>Induction Chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic absorber kit with absorber canister, holder, tubing, &#38; adapters</td>
			<td>CWE, Inc</td>
			<td>13-20000</td>
			<td>Nose Cone and Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Gel (0.25 Liter)</td>
			<td>Parker Laboratoies</td>
			<td>08-03</td>
			<td>Ultrasound Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Plastipak 3 mL Syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309657</td>
			<td>Syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F/Air Scavenger Charcoal Canister</td>
			<td>OMNICON</td>
			<td>80120</td>
			<td>Scavenging System for Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane, USP</td>
			<td>Vet One</td>
			<td>502017</td>
			<td>Anesthesia Agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M1050 Non-Rebreathing Mobile Anesthesia Machine</td>
			<td>Scivena Scientific</td>
			<td>M1050</td>
			<td>Anestheic Vaporizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S, 25-55 MHz Transducer, 15mm, Linear</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>MX550S</td>
			<td>Ultrasound Transducer (Probe)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Aloe &#38; Lanolin Hair Removal Lotion - 9.0 oz</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Depilliating Cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Philips Norelco Multigroomer All-in-One Trimmer Series 7000</td>
			<td>Philips North America</td>
			<td>MG7750</td>
			<td>Clippers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide 25 G 1&#34; Needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305125</td>
			<td>Needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Ophthalmic Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td>Lubricating Eye Drops</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Ultrasound Machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>VisualSonics</td>
			<td>Vevo LAB 5.6.1</td>
			<td>Ultrasound Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinyl Heating Pad with cover, 12 x 15&#34;</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>731-500-000R</td>
			<td>Heating Pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wd Elements 2TB Basic Storage</td>
			<td>Western Digital Elements</td>
			<td>WDBU6Y0020BBK-WESN</td>
			<td>Data Storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Equipment Used for Immunohistochemistry</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% w/v Formalin</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td>Tissue Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Blocker and Diluent, R.T.U.</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>&#160;SP5035</td>
			<td>Antibody Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged Super Frost Plus Glass Slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>4831-703</td>
			<td>Tissue Mounting Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate Buffer</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>&#160;C9999-1000ML</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (pTEN)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal &#8211; 60</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>8310-4</td>
			<td>Resin for Slide Sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Glass</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3322</td>
			<td>Coverslide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Modified Hematoxylin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>HHS32-1L</td>
			<td>Counterstain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hybridization Incubator (Dual Chamber)</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>13-247-30Q</td>
			<td>Oven to Melt Parraffin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPACT DAB Substrate, Peroxidase (HRP)</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td>Signal Development Substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmPRESS HRP Goat Anti-Rabbit IgG Polymer Detection Kit, Peroxidase</td>
			<td>Vector Laboratories Inc.</td>
			<td>MP-7451</td>
			<td>Secondary IHC Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oster 5712 Digital Food Steamer</td>
			<td>Oster</td>
			<td>5712</td>
			<td>Vegetable Steamer for Epitope Retrival</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-ARID1a</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab182560</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:1,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rabbit mAB anti-PTEN</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9559</td>
			<td>Primary IHC Antibody (1:100)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scotts Tap Water Substitute</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>S5134-100ML</td>
			<td>&#34;Blueing&#34; Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path IV Cassette</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>22272416</td>
			<td>Tissue Fixation Cassette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trilogy Buffer</td>
			<td>Cell Marque</td>
			<td>&#160;920P-10</td>
			<td>Epitope Retrival Buffer (ARID1a)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive ultrasound assessment of endometrial cancer progression in pax8-directed deletion of the tumor suppressors arid1a and pten in mice

Los cánceres uterinos se pueden estudiar en ratones debido a la facilidad de manejo y manipulación genética en estos modelos. Sin embargo, estos estudios a menudo se limitan a evaluar la patología post mortem en animales sacrificados en múltiples puntos de tiempo en diferentes cohortes, lo que aumenta el número de ratones necesarios para un estudio. Las imágenes de ratones en estudios longitudinales pueden rastrear la progresión de la enfermedad en animales individuales, reduciendo el número de ratones necesarios. Los avances en la tecnología de ultrasonido han permitido la detección de cambios a nivel micrométrico en los tejidos. El ultrasonido se ha utilizado para estudiar la maduración del folículo en los ovarios y el crecimiento del xenoinjerto, pero no se ha aplicado a los cambios morfológicos en el útero del ratón. Este protocolo examina la yuxtaposición de la patología con comparaciones de imágenes in vivo en un modelo de ratón con cáncer de endometrio inducido. Las características observadas por ultrasonido fueron consistentes con el grado de cambio observado por patología macroscópica e histología. Se encontró que el ultrasonido era altamente predictivo de la patología observada, apoyando la incorporación de la ecografía en estudios longitudinales de enfermedades uterinas como el cáncer en ratones.

Los ratones transgénicos de doble deleción Pax8-Cre-Arid1a-Pten (iPAD) se mantuvieron en un fondo genético mixto (129S, BALB/C, C57BL/6), como se describió anteriormente14. Todos los ratones fueron alimentados con un alimento con doxiciclina durante 2 semanas para inducir Cre recombinasa. En trabajos previos de nuestro grupo, la doxiciclina fue dosificada por sonda14; Sin embargo, en este estudio actual, el método de inducción de alimentación de dox...

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Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

Este protocolo describe un método para monitorear la progresión de los cambios morfológicos a lo largo del tiempo en el útero en un modelo de ratón inducible de cáncer de endometrio utilizando imágenes de ultrasonido con correlación con cambios macroscópicos e histológicos.

Evaluación ecográfica no invasiva de la progresión del cáncer de endometrio en la deleción dirigida por Pax8 de los supresores tumorales Arid1a y Pten en ratones

Uterine cancers can be studied in mice due to the ease of handling and genetic manipulation in these models. However, these studies are often limited to ...

Este estudio muestra que el ultrasonido guiado manual es adecuado para monitorear el desarrollo de la patología uterina en un modelo de ratón inducido de cáncer de endometrio. Las imágenes de ultrasonido no son invasivas y, por lo tanto, permiten estudios longitudinales de ratones individuales a lo largo de días y semanas. Esto permite la captura de la variación individual y, en última instancia, que se utilicen menos animales para el estudio.Este método se puede aplicar fácilmente para monitorear los cambios patológicos y otros modelos de reflejo, incluidos los de neoplasia y enfermedad crónica del tracto urinario y digestivo. Comience a configurar la máquina de ultrasonido para obtener imágenes del útero o el ovario seleccionando un transductor o sonda con un rango de 32 a 56 megahercios. Vaya a la pestaña Aplicaciones de la pantalla de inicio y seleccione Modo de abdomen pequeño del mouse.Luego haga clic en Escanear para volver a la pantalla de inicio y espere a que se muestre una imagen en vivo. A continuación, seleccione Modo B de las opciones de la barra de herramientas izquierda antes de hacer clic en la opción Más controles para ver herramientas adicionales para el refinamiento de la imagen, como la ganancia y profundidad de la imagen o para ajustar la configuración de adquisición de clips, como el número de fotogramas por segundo. Una vez seleccionada la configuración de la imagen, vuelva a la pantalla de inicio haciendo clic en Modo B.Coloque una jeringa de tres a 10 mililitros llena de una solución fluida isotónica estéril entre una almohadilla térmica y una almohadilla absorbente durante varios minutos para precalentarla a 35 a 40 grados centígrados. Si la máquina no tiene un calentador, coloque una botella de gel de ultrasonido en la almohadilla térmica. Para inyectar de uno a dos mililitros de solución en la cavidad peritoneal de un ratón, asegure el ratón con el scruff en una mano, exponiendo el ventrum.Luego sostenga el mouse en un ángulo de aproximadamente 20 grados con la nariz apuntando al piso. Inserte una aguja de jeringa de tuberculina de calibre 25 a través de la piel y la pared abdominal del cuadrante caudal derecho del abdomen. Para evitar la inyección en la vasculatura o el tracto gastrointestinal, tire hacia atrás del émbolo de la jeringa con una presión mínima para buscar sangre.Coloque el ratón en recostado ventral sobre la almohadilla absorbente sobre una almohadilla térmica antes de colocar de forma segura un cono de nariz de roedor sobre la nariz y el hocico del ratón. Coloque una pequeña cantidad de gel de ultrasonido abaxial precalentado en la columna vertebral a cada lado del ratón anestesiado entre la última costilla y la pelvis. Ponga una pequeña cantidad de gel en la sonda de ultrasonido.A continuación, coloque la sonda paralela a las vértebras con la parte frontal de la sonda en el lado craneal. Con un ratón en decúbito ventral, escanee lentamente el área en busca del punto de referencia renal. Con el riñón a la vista, tire de la sonda caudal para encontrar el ovario, que es una estructura ovalada a redonda ligeramente hiperecoica dentro de una almohadilla de grasa ovárica muy hiperecoica, bordeada cráneo-ventralmente por el riñón y dorsal-lateralmente por la pared abdominal dorsal.Mejore el contraste de la imagen ajustando la ganancia de señal utilizando el control deslizante en la parte inferior de la pantalla de control. Para mejorar la obtención de imágenes del riñón, aplique presión en el abdomen contralateral con un dedo. Varíe la presión y el ángulo de paralelo a la columna vertebral a aproximadamente 20 grados ventral.Una vez que el órgano de interés esté a la vista, capture un video haciendo clic en Guardar clip o Iniciar grabación. Una vez hecho esto, haga clic en Detener grabación para conservar las imágenes en un número preestablecido de fotogramas. Sostenga la sonda caudalmente hasta que el ovario esté en el aspecto más craneal del campo de visión.Varíe la presión y el ángulo de la sonda para ver y obtener imágenes del útero. Repita la colección de vídeo y fotogramas para cada órgano de interés. Encuentra el útero corriendo longitudinalmente a lo largo de la pared abdominal dorsal con la musculatura lateral de la pierna a la vista.Controle el tejido para un movimiento peristáltico para diferenciar los asas intestinales de los cuernos estacionarios uterinos. Coloque el ratón en reclinación dorsal para recoger las imágenes de un enfoque ventral. Asegúrese de que la lubricación ocular sea suficiente y que el hocico esté asegurado en el cono de la nariz.Aplique una pequeña cantidad de gel de ultrasonido precalentado en el abdomen ventral antes de aplicar la sonda en la línea media y craneal del pubis para localizar la vejiga como un punto de referencia hipoecoico. Para encontrar los cuernos uterinos, tire de la sonda lateral a la vejiga. Aplique una ligera presión digital desde uno o ambos lados del ratón.Una vez que los cuernos uterinos estén en el campo de visión, sostenga la sonda perpendicular al ratón y escanee ambos lados del abdomen para capturar vistas transversales de ambos cuernos. Gire la sonda para capturar vistas sagitales. Después de la ecografía, limpie el ratón con una toalla de papel antes de devolverlo a su jaula para recuperarse.Una vez que el ratón esté completamente despierto después de dos a cinco minutos, devuelva el ratón a la habitación del animal. La comparación de imágenes de ultrasonido de la cavidad abdominal del ratón antes y después de la inyección de solución salina mostró la visualización mejorada de los órganos abdominales, incluidos el útero y los ovarios después de la inyección de solución salina. Se utilizó un enfoque ventral para estudiar las secciones transversales de los cuernos uterinos adyacentes a la vejiga hipoecoica.Se utilizó inmunohistoquímica con anticuerpos dirigidos contra Arid1a y Pten para estudiar la pérdida adecuada de proteínas supresoras de tumores lograda en las células epiteliales uterinas en comparación con el tejido estromal vecino. Las imágenes de ultrasonido de un útero de ratón con cambios patológicos tempranos se detectaron después de tres semanas de tratamiento con doxiciclina, mostrando la luz hipoecoica y dilatada del útero. En el estudio de patología macroscópica e histopatología del mismo útero, se observó un útero de paredes delgadas más pequeño pero dilatado e hiperplasia endometrial temprana con la preservación de la luz distinta, respectivamente.Los ratones sacrificados en puntos de tiempo posteriores mostraron útero más grande con una luz más pequeña y una pared engrosada. Al aprender a usar la colocación manual de sondas, la presión excesiva o el movimiento rápido pueden dificultar la identificación de órganos. Use movimientos suaves y deliberados y concéntrese en identificar primero los órganos que son puntos de referencia.Al final del estudio, los ratones se sacrifican y se recolecta tejido para confirmar la eliminación de genes y caracterizar los cambios en los tejidos. Esta técnica permite a los investigadores monitorear las lesiones intraabdominales a lo largo del tiempo. Y en nuestro caso, lo usamos para monitorear la progresión del cáncer uterino en el modelo iPad, que luego confirmamos mediante histopatología.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Non-Invasive Ultrasound Assessment of Endometrial Cancer Progression in Pax8-Directed Deletion of the Tumor Suppressors Arid1a and Pten in Mice

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

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los<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal modelo de tumor de disco: visualización y cuantificación de la expresión génica y la invasividad tumoral Uso Genético Mosaicos

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Investigación

Investigación sobre el cáncer

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En Vivo EPR evaluación de pH, pO2, estado Redox y concentraciones de fosfato y glutatión en el microambiente tumoral

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Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

Enriquecimiento y caracterización de los microambientes Tumor inmunes y no inmunes en tumores murinos subcutáneos establecidos

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

Digital de la reacción en cadena de polimerasa para la variación genética en un paciente de la poliposis adenomatosa familiar esporádico con el formato de Chip en tubo

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Intramucosal inoculación de células escamosas células en ratones para perfilar inmune del Tumor y tratamiento evaluación de respuesta

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

En Vivo inhibición de MicroRNA para disminuir el crecimiento tumoral en ratones

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Detección de la progresión del tumor pulmonar en ratones por imágenes por ultrasonido

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...